不同软组织替代物在比格犬尖牙唇侧区域移植后附着龈的厚度和组织学变化

doi:10.12307/2024.222

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (11): 1660-1665.doi: 10.12307/2024.222

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不同软组织替代物在比格犬尖牙唇侧区域移植后附着龈的厚度和组织学变化

张红霞，栗兴超，高玺鑫，张晓，梅双，马寒夕，张天

河北医科大学口腔医学院·口腔医院，口腔颌面外科，河北省口腔医学重点实验室，河北省口腔疾病临床医学研究中心，河北省石家庄市 050017

收稿日期:2023-01-16 接受日期:2023-03-02 出版日期:2024-04-18 发布日期:2023-07-26
通讯作者: 栗兴超，博士，主任医师，河北医科大学口腔医学院·口腔医院，口腔颌面外科，河北省口腔医学重点实验室，河北省口腔疾病临床医学研究中心，河北省石家庄市 050017
作者简介:张红霞，女，1996年生，安徽省淮南市人，汉族，河北医科大学在读硕士，医师，主要从事口腔种植研究。
基金资助:
河北省政府资助临床医学优秀人才培养和基础课题研究项目[361029(MXZB00267)]项目负责人：栗兴超

The histological and thickness changes of attached gingiva following grafting with different soft tissue substitutes in the labial region of the cuspids in Beagles

Zhang Hongxia, Li Xingchao, Gao Xixin, Zhang Xiao, Mei Shuang, Ma Hanxi, Zhang Tian

Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Hebei Key Laboratory of Stomatology, Hebei Clinical Research Center for Oral Diseases, School and Hospital of Stomatology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province, China

Received:2023-01-16 Accepted:2023-03-02 Online:2024-04-18 Published:2023-07-26
Contact: Li Xingchao, MD, Chief physician, Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Hebei Key Laboratory of Stomatology, Hebei Clinical Research Center for Oral Diseases, School and Hospital of Stomatology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province, China
About author:Zhang Hongxia, Master candidate, Physician, Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Hebei Key Laboratory of Stomatology, Hebei Clinical Research Center for Oral Diseases, School and Hospital of Stomatology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province, China
Supported by:
Hebei Provincial Government-funded Clinical Medicine Talent Training and Basic Research Project, No. 361029(MXZB00267) (to LXC)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

异体脱细胞真皮基质：来源于人体尸体皮肤组织，去除了表皮和真皮层中的细胞成分，具有2个不同的面：基底膜面和真皮面。真皮面有利于移植后脱细胞真皮基质的快速血管化，基底膜面有利于快速上皮化。
异种脱细胞真皮基质：来源于小牛皮肤组织，保留了天然胶原纤维的空间结构，有2个不同的面：致密面(up)和疏松面。
胶原蛋白海绵：是从牛跟腱中提取的一种海绵状高纯度胶原冻干产品，其降解期为两三周，该材料具有良好的生物相容性，并允许细胞的黏附和扩散。
浓缩生长因子：是通过不间断差速离心静脉血制备的第3代自体血小板浓缩制品，较前两代含有更多生长因子，促组织再生能力更强。

背景：上皮下结缔组织移植被认为是软组织增量术的金标准，然而，自体移植需要开辟第二术区，延长手术时间，增加患者的疼痛感，这也使得软组织替代物成为研究热点。

目的：比较不同软组织替代物在比格犬尖牙唇侧区域移植后移植区附着龈厚度和组织学变化。
方法：在3只比格犬尖牙唇侧附着龈区域，分别用双层同种异体脱细胞真皮基质膜(allograft acellular dermal matrix，AADM)、牛源性脱细胞真皮基质(bovine acellular dermal matrix，BADM)联合浓缩生长因子膜以及BADM联合胶原蛋白海绵进行附着龈增厚。分别在术前和术后1，2，3，4个月测量附着龈厚度，术后4个月进行组织学观察。

结果与结论：①术后第1-4个月，双层AADM组附着龈厚度及附着龈厚度增量均值高于其他2组(均P < 0.05)；②术后1个月3组附着龈厚度显著增加，而后呈下降趋势；术后3个月，BADM联合胶原蛋白海绵组与BADM联合浓缩生长因子组移植区附着龈厚度变化较术前差异无显著性意义(P > 0.05)；术后4个月，双层AADM组附着龈厚度均值较术前仍显著增加(P < 0.05)；第1-4个月双层AADM组附着龈厚度值最高，其次为BADM联合胶原蛋白海绵组，BADM联合浓缩生长因子组最低；③双层AADM组真皮基质与宿主牙龈组织良好的结合在一起，并可见新生纤维结缔组织和成纤维细胞长入基质内，另外两组移植物已经完全吸收，增量区域改建成与周围宿主组织一致的结构；④结果说明，AADM在牙龈增厚方面优于BADM联合浓缩生长因子膜和BADM联合胶原蛋白海绵。

https://orcid.org/0000-0002-2526-1800(张红霞)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 脱细胞真皮基质, 浓缩生长因子, 胶原蛋白海绵, 牙龈增厚

Abstract: BACKGROUND: Subepithelial connective tissue grafts are generally considered as the gold standard for soft tissue augmentation. However, it needs a second surgical site, which will prolong the surgical time and increase patients’ pain.
OBJECTIVE: To compare the histological and thickness changes of attached gingiva following grafting with different soft tissue substitutes in the labial region of the cuspids.
METHODS: In three Beagle dogs, attached gingival augmentation was performed with double-layer allogeneic acellular dermal matrix membrane (AADM), bovine-derived acellular dermal matrices (BADM) combined with concentrated growth factor membrane or BADM combined with collagen sponge. Thickness of attached gingiva was measured before augmentation, and 1, 2, 3, and 4 months after augmentation. Histological analyses were performed after 4 months.
RESULTS AND CONCLUSION: The mean values of attached gingival thickness and attached gingival thickness augmentation were higher in the double-layer AADM group than in the other two groups (all P < 0.05) from the 1st to 4th month after surgery. At 1 month after surgery, the attached gingival thickness of the three groups increased significantly and then decreased. At 3 months after surgery, the BADM combined with collagen sponge group and the BADM combined with concentrated growth factor membrane group showed no significant difference in the attached gingival thickness of the graft area compared with that before surgery (P > 0.05). At 4 months after surgery, the mean value of attached gingival thickness in the double-layer AADM group was still significantly increased compared with that before surgery (P < 0.05). The value of attached gingival thickness was highest in the double-layer AADM group, followed by the BADM combined with collagen sponge group, and the lowest in the BADM combined with concentrated growth factor membrane group at 1-4 months after surgery. Histological analyses revealed that AADM was well integrated with the host gingival tissue, and new fibrous connective tissue and fibroblasts grew into the AADM. But the grafts in the other two groups were absorbed and the augmentation area was remodeled into a structure consistent with the surrounding host tissue. To conclude, AADM is superior to BADM combined with concentrated growth factor and BADM combined with collagen sponge with regard to gingival augmentation.

Key words: acellular dermal matrix, concentrated growth factor, collagen sponge, gingival augmentation

中图分类号:

张红霞, 栗兴超, 高玺鑫, 张晓, 梅双, 马寒夕, 张天. 不同软组织替代物在比格犬尖牙唇侧区域移植后附着龈的厚度和组织学变化[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(11): 1660-1665.

Zhang Hongxia, Li Xingchao, Gao Xixin, Zhang Xiao, Mei Shuang, Ma Hanxi, Zhang Tian. The histological and thickness changes of attached gingiva following grafting with different soft tissue substitutes in the labial region of the cuspids in Beagles[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(11): 1660-1665.

图/表（结果） 6

2.1 临床大体观察整个实验期间3条比格犬状况良好，饮食、排便等活动正常，无明显不适，伤口缝线无脱落，无红肿、感染、排斥等反应发生。
2.2 附着龈厚度变化见图5，表 1，2。

组间比较：术后第1，2，3，4个月，双层AADM组附着龈厚度及附着龈厚度增量均值高于BADM联合浓缩生长因子膜组与BADM联合胶原蛋白海绵组(均P < 0.05)，BADM联合胶原蛋白海绵组与BADM联合浓缩生长因子组各个测量时间点比较差异均无显著性意义(P > 0.05)。
组内比较：3组术前附着龈厚度比较差异无显著性意义 (P > 0.05)，术后1个月附着龈厚度显著增加(P < 0.05或P < 0.01)，而后呈下降趋势。术后3个月，BADM联合胶原蛋白海绵组与BADM联合浓缩生长因子组移植区附着龈厚度值逐渐接近，变化趋于平稳，较术前差异均无显著性意义(P > 0.05)；双层AADM组附着龈厚度变化速率也有所下降。术后4个月，双层AADM组附着龈厚度均值较术前仍显著增加(P < 0.05)。第1，2，3，4个月双层AADM组附着龈厚度值最高，其次为BADM联合胶原蛋白海绵组，BADM联合浓缩生长因子组最低。
2.3 描述性组织学结果组织学分析显示，双层AADM组真皮基质与宿主牙龈组织良好的结合在一起，AADM胶原纤维结构完整，纤维排列致密整齐，新生纤维组织和成纤维细胞长入AADM内，真皮基质内可见新生血管和红细胞，见图6。BADM联合胶原蛋白海绵组和BADM联合浓缩生长因子组移植处被覆复层鳞状上皮，固有层有大量纤维结缔组织，显示出典型的解剖学特征，增量区域成熟的结缔组织富含血管和细胞，主要是胶原结构中散布的成纤维细胞，几乎没有炎症迹象，移植物完全降解，未见植入材料残留物，移植区域改建成与周围宿主组织一致的结构，见图7，8。

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引言

牙周或种植体周软组织增量手术可分为两类：产生或加宽角化黏膜以及增加软组织体积或厚度，软组织增厚通常是为了保存牙槽嵴以及矫正种植体周围的软组织轮廓凹陷[1]。近年来，牙周或种植体周软组织的质量和数量的重要性得到了重视，尤其是角化黏膜。角化龈缺乏不仅会导致美学区游离龈萎缩，还会导致牙齿周围菌斑堆积[2]，而适量的附着龈可以减少菌斑和牙龈指数，提高种植体周边缘骨水平的稳定性[3]。上皮下结缔组织移植一直被认为是软组织增量的金标准[4]，然而自体移植需要开辟第二术区，延长手术时间，增加患者的疼痛感[5]，这也使得软组织替代物成为研究的热点。
目前，同种异体脱细胞真皮基质(allograft acellular dermal matrix，AADM)在软组织增量手术中已被用作上皮下结缔组织移植的替代品，AADM(AlloDerm®，BioHorizon，Birmingham，AL，USA)是一种从人皮肤中获得的非交联型真皮基质，去除了上皮和细胞成分，保留了细胞外基质，作为支架，促进周围宿主牙龈组织的细胞迁移和血运重建[6]，AlloDerm在牙周科被用于角化龈增量以及根面覆盖[7]。然而，为了避免使用人类供体组织，引入了异种来源(猪或牛)的脱细胞材料PADM(PADM，mucoderm®，botiss biomaterials GmbH，Zossen，Germany)是一种从猪真皮中提取的脱细胞基质，PADM作为牙釉质基质衍生物的载体，用于治疗局部牙龈萎缩[8]，该材料还被用于治疗软组织缺损，增加牙齿和种植体部位的牙龈厚度[6]。在SCHMITT等[9]的一项随机对照临床研究中，上皮下结缔组织移植并未表现出明显优于PADM的软组织增厚效果，由此可见，PADM在增加种植体周软组织厚度方面有一定的优势。牛源性脱细胞真皮基质(bovine acellular dermal matrix，BADM)是由牛供体皮肤加工而成的，富含Ⅰ型和Ⅲ型胶原，可维持其超微结构完整性，不会引起宿主组织的炎症反应，也不会因免疫原性而引起免疫排斥反
应[10]。BADM多在种植手术中作为屏障膜引导骨再生[11]，也可以用于皮肤以及口腔黏膜缺损修复[12-14]。到目前为止，使用BADM增加角化牙龈组织厚度的报道还很少，仅HAN
等[15]利用BADM成功地增加了种植体周围附着龈。另一种软组织替代物是血小板浓缩物，它是通过离心静脉血获得，可以在手术中用作可吸收膜，浓缩生长因子(concentrated growth factor，CGF)是第3代血小板浓缩物，它可以通过释放大量生长因子促进软组织再生，加速创面愈合[16]，相比于第2代富血小板纤维蛋白，浓缩生长因子含有更多生长因子，因此，其促组织再生能力更强[17]。浓缩生长因子可用于牙龈缺损修复[18]，也可促进颌骨缺损区的新骨形成[19]，虽然先前有研究也表明浓缩生长因子可以增加牙龈厚度[20]，但浓缩生长因子用于牙龈软组织增厚的研究非常少，目前在牙龈软组织增厚领域对血小板浓缩物的研究大多仍集中在富血小板纤维蛋白。
在该研究中，使用BADM分别联合浓缩生长因子和胶原蛋白海绵组成复合膜增加附着龈厚度，目前尚未见到相关文献报道。胶原蛋白海绵是从牛跟腱中提取的一种海绵状高纯度胶原冻干产品，其降解期为两三周[21]，该材料具有良好的生物相容性，并允许细胞的黏附和扩散，胶原蛋白海绵有利于软组织的形成和愈合[22]，临床上胶原蛋白海绵广泛应用于止血、修复损伤组织以及促进牙龈创面愈合等[21，23]，先前有研究报道了鱼源性胶原蛋白海绵可增加腭部黏膜厚度[24]。作者的研究中使用的另一种材料是交联型AADM，其在临床中用于修复皮肤、黏膜软组织缺损有明显疗效[25-26]，但用于角化龈厚度增量的研究缺乏。因此，该研究欲通过动物实验观察交联型AADM在增加附着龈厚度方面的有效性，并对比其与BADM联合浓缩生长因子以及BADM联合胶原蛋白海绵的附着龈增厚效果差异，以期寻找最合适的软组织替代物，并为临床上脱细胞真皮基质的使用提供参考。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，组间比较进行t检验。
1.2 时间及地点实验于2022年5-12月在河北医科大学动物实验中心和河北省口腔医学重点实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 1 周岁雌性比格犬3只，体质量10-12 kg，牙列完整，牙周组织健康，购于北京芳元缘养殖场，实验动物质量合格许可证号：SCXK(京)2020-0001。该研究获得河北医科大学口腔医院伦理委员会批准(批准文号：2020012)。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2 主要仪器与试剂盐酸塞拉嗪注射液(吉林省华牧动物保健食品有限公司)；BADM(烟台正海生物技术有限公司)；异体脱细胞真皮基质膜(AADM，北京桀亚莱福生物技术有限责任公司)；可即邦医用胶原蛋白海绵(无锡贝迪生物工程股份有限公司)；兽用青霉素钠 (山东聖旺药业股份有限公司)；40 g/L多聚甲醛(华瑞制药有限公司)；苏木精-伊红染色试剂(珠海贝索生物技术有限公司)；Masson三色染色试剂(北京雷根生物技术有限公司)；游标卡尺(哈尔滨量具刃具集团有限责任公司)。
1.4 实验方法

1.4.1 浓缩生长因子膜的制备比格犬取仰卧位，并将四肢固定于操作台，备皮，消毒后自后肢小隐静脉采血9 mL，将无菌采血管立即置入Medifuge离心机，启动浓缩生长因子制备程序，离心15 min后，可见采血管中血液分为3层，最上层淡黄色为血清层，中间层为浓缩生长因子纤维蛋白层，底层为红细胞层，上层血清倒出，无菌眼科剪将中间层与底层剪开，将浓缩生长因子凝胶置于双层BADM内侧，然后用专用工具将浓缩生长因子凝胶压制成膜状手术待用，见图1。

1.4.2 BADM的准备修剪BADM至合适大小，无菌黏膜针头制备孔洞8-10个，置于生理盐水中备用。见图1。

1.4.3 AADM的准备修剪AADM至合适大小，无菌黏膜针头制备孔洞8-10个，置于生理盐水中备用，见图2。

1.4.4 实验分组根据移植材料不同，将3只犬双侧上下颌尖牙唇侧的12个实验术区随机分为3组：双层AADM、BADM联合浓缩生长因子组、BADM联合胶原蛋白海绵组，植入物大小：15 mm×10 mm×(1.6-2.0) mm(长×宽×高)。

1.4.5 手术过程术前12 h禁食、禁饮，称量比格犬体质量计算麻醉剂量，于臀大肌注射盐酸赛拉嗪注射液(剂量1 mL/kg)，待麻药显效后，将比格犬固定于手术台上取侧卧位，0.5%碘伏消毒口周皮肤及口腔黏膜，铺无菌巾。术区局部浸润麻醉，自尖牙近中唇侧附着龈区向膜龈联合根方向做切口，用骨膜分离器由尖牙近中向远中进行分离，形成骨膜下隧道，近远中约15 mm，冠根向约10 mm，此空间确保移植物可以稳定植入，而不需要任何进一步的固定。双层AADM组，将AADM折叠成双层，真皮面朝向龈瓣和骨面，基底膜面放置在内侧，植入骨膜下隧道，采用间断缝合的方法将近中垂直切口用4-0可吸收缝线缝合，植入物被严密缝合于受区，见图3。BADM联合浓缩生长因子组，将BADM置于浓缩生长因子凝胶两侧，见图1C，使用专用工具将浓缩生长因子凝胶压制成膜状，形成BADM-CGF-BADM“三明治”复合膜，按上述手术方法植入骨膜下隧道后严密缝合。BADM联合胶原蛋白海绵组，将BADM置于胶原蛋白海绵两侧，形成BADM-胶原蛋白海绵-BADM“三明治”复合膜，按上述方法植入后严密缝合。

1.4.6 术后护理手术结束后，观察生命体征平稳，比格犬苏醒后分笼饲养，术后臀部肌注青霉素160万单位，1次/d，连用3 d，术后流质饮食，并每日用生理盐水常规冲洗口腔，维持术区清洁。
1.5 主要观察指标
1.5.1 大体观察观察实验动物术后饮食、精神状况，术区伤口缝线有无脱落，有无红肿、感染、排斥等情况发生。

1.5.2 附着龈厚度术前及术后1，2，3，4个月测量移植区附着龈厚度。方法：沿犬齿中央纵轴测量牙尖距根方19 mm处附着龈厚度，利用带止动片的必兰局麻针垂直穿透附着龈表面，轻压入软组织，直至硬组织表面，然后将止动片拨动至与附着龈表面轻轻接触，在仔细取出必兰局麻针头后，用0.02 mm分辨率的游标卡尺测量穿透深度，即测量针尖至止动片的距离，此为附着龈厚度，整个测量过程由同一个检查者对附着龈厚度重复进行3次测量，取其平均值作为测量的附着龈厚度，见图4。

1.5.3 组织学观察术后4个月，在麻醉状态下，切取受植区牙龈组织，深度至骨膜，40 g/L多聚甲醛固定24 h，石蜡包埋切片，行苏木精-伊红和Masson染色，光镜下观察。
1.6 统计学分析使用spss 21.0软件进行统计分析，计量资料以x±s表示，Shapiro-Wilk检验进行正态性分析，如果数据呈正态分布，采用t检验评价手术前后角化龈厚度变化量，3组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，如果数据呈非正态分布，采用秩和检验，所有统计均采用双侧检验，P < 0.05为差异有显著性意义。图形处理使用GraphPad Prism 9.0软件。文章的统计学方法已由河北医科大学统计学专家审核。

讨论

研究比较了双层AADM以及BADM分别联合胶原蛋白海绵和浓缩生长因子的附着龈增厚效果差异，结果表明，双层AADM组在术后4个月的附着龈增量值(1.88±0.28) mm大于BADM联合胶原蛋白海绵组(0.1±0.11) mm以及BADM联合浓缩生长因子组(0.27±0.19) mm。AADM已被广泛应用于整形和重建手术，在牙周科的应用已被确定为天然胶原的一种安全和可行的替代品[27]，有研究证明AADM在牙根覆盖过程中相当于自体结缔组织移植[28]。在整个过程中，AADM充当支架的作用，血凝块稳定后，早期血管化便发生在AADM的真皮侧，因为该侧与宿主组织直接接触，直接接触可确保血液快速渗透移植物，并促进血运重建和随后的愈合[29]。ZANG等[30]在最新一项使用AADM增加种植体垂直方向牙龈厚度的研究中指出，AADM折叠可能会增强软组织增量效果，但可能也会带来潜在的术后愈合并发症。此次研究将骨膜下隧道技术用于附着龈厚度增量，该技术是一种微创手术方法，保留了牙龈乳头完整性，与冠向复位瓣技术(CAF)相比愈合更快，增加了血液供应，提供了移植物更好的营养以及术后美学效果[31]。从研究结果来看，脱细胞支架的整合、降解、再生过程顺利，并未发生任何并发症，组织学可见AADM与宿主牙龈组织良好的结合在一起，这表明AADM具有良好的生物相容性且与宿主组织有充分的整合过程，充分的整合是保证血管化和组织重塑过程顺利进行的前提[32]，整合部位还可见新生的纤维结缔组织和血管长入基质内，说明AADM被部分重塑并与周围宿主组织建立起了细胞外基质的动态平衡。PUISYS等[29]使用双层非交联型AADM(AlloDerm，BioHorizons，Birmingham，USA)增加牙槽嵴顶区牙龈厚度，术后3个月厚度增加2.21 mm，高于此次研究术后3个月附着龈增厚值1.97 mm，这可能是由于植入物厚度不同造成的，PUISYS等植入的AADM厚度为2.0-
3.0 mm，此次研究中使用的材料厚度为1.6-2.0 mm；与PUISYS等使用的非交联型AADM不同，此次研究使用的是交联型AADM。有研究指出，交联型ADM抵抗胶原酶降解的能力更强，延缓了组织重塑过程，促组织重塑效应更持久[33-34]，
这应该有利于促进结缔组织的形成，然而交联更容易引发炎症反应，导致较差的临床结果和伤口愈合并发症[35]。从研究结果来看，双层AADM组并未出现愈合并发症，提示交联型AADM用于软组织增量的可行性。结果显示，双层AADM组术后1个月附着龈厚度增加至(3.61±0.11) mm，而后附着龈厚度呈下降趋势，4个月后减少至(3.24±0.22) mm，这表明软组织增量区域发生了收缩。到目前为止，就AADM为什么会收缩的问题也并没有学者给出明确的解释，由于还不完全清楚AADM在附着龈厚度增量中由组织整合和降解到完全转化为宿主组织的整个动态生物学过程，了解该过程或许能更好地解释在愈合过程中导致AADM收缩、增量部位厚度减少的原因。
此次研究将BADM分别与胶原蛋白海绵和浓缩生长因子膜联合制成复合膜，两组移植区附着龈厚度在术后1个月时显著增加[BADM联合浓缩生长因子膜组(2.05±0.33) mm，BADM联合胶原蛋白海绵组(2.36±0.48) mm]，而后附着龈厚度均值呈递减趋势，术后3个月又逐渐趋于平稳，术后三四个月附着龈厚度仅发生微小的变化，这一结果与之前的临床前研究相似。SCHMITT等[35]使用猪脱细胞真皮基质(PADM，mucoderm®，botiss biomaterials GmbH，Zossen，Germany)进行软组织增厚，并报告在牙龈增量术后的前3个月内出现了巨大的体积损失，这种增量部位厚度或体积减少的原因可能与组织的快速周转以及移植物的吸收有关[36]，由于此次研究在早期愈合阶段没有进行多个时间点组织学评估，因此不能从生物学上解释移植物整合以及可能导致增量术后体积损失的具体情况，可以假设术后4个月两组附着龈厚度不会再出现明显变化，这也是在组织学上可以证实的，术后4个月的组织学显示移植物完全吸收，增量区域已改建成与周围宿主组织一致的结构。胶原基生物材料常被用作组织工程支架，理想的细胞生长支架不仅需要具有良好的生物相容性，而且要保持结构的长期稳定性，以便让细胞有足够的时间进入支架并构建新的软组织，胶原蛋白及其生物材料已广泛应用于快速止血、组织工程、创面敷料等领域，并成功的增加了腭黏膜厚度[24，37-38]。结果显示，术后4个月BADM联合胶原蛋白海绵组的附着龈厚度值(1.54±0.15) mm以及BADM联合浓缩生长因子组的附着龈厚度值(1.50±0.07) mm均远低于双层AADM组(3.24±0.22) mm，这首先可能与两组移植物的降解速度较双层AADM组快有关，BADM降解周期在3个月左右，而胶原蛋白海绵在两三周便会发生降解，浓缩生长因子在体内完全降解也仅需2周[39]，但从术后4个月的组织学可以发现，AADM在术后4个月时降解仍不显著，还能保持其总体结构完整性，且在MA等[40]最新一项比较了7种常用脱细胞真皮基质的热物理稳定性和生物降解性的研究中发现，此次研究中使用的BADM降解速度最快，而AADM却是降解最慢的一种真皮基质，因此，在术后4个月时，AADM仍能充当支架的作用，促进周围宿主牙龈组织的细胞迁移和血运重建。另外，BADM联合胶原蛋白海绵组移植物的力学性能也较差，这会导致在空间不足或缝合张力过大的情况下，由于不能维持空间结构，该组移植物的总体厚度会下降，而与双层AADM组相比，AADM能更好地抵抗机械载荷，细胞外基质重塑缓慢，这保证了AADM的长期结构完整性。
浓缩生长因子是第3代血小板浓缩物，富含生长因子，主要由纤维蛋白组成，QI等[20]在牙周加速成骨正畸治疗(PAOO)中使用浓缩生长因子增加牙龈厚度，随访6个月增加0.34 mm。然而，到目前为止，浓缩生长因子在附着龈厚度增量方面的研究却很少，其介导的牙龈再生的潜在机制也尚不清楚。浓缩生长因子在成分、结构、性能、临床应用等方面与富血小板纤维蛋白相似，但生长因子含量高于富血小板纤维蛋白，促组织再生的能力更强[19]。AROCA等[41]认为富血小板纤维蛋白增加牙龈厚度的原因，可能是牙龈和牙周韧带成纤维细胞增殖的结果，而这反过来可能是由于富血小板纤维蛋白释放的生长因子发挥作用或富血小板纤维蛋白膜的间隔效应，对于浓缩生长因子在牙龈增厚中的作用机制是否与富血小板纤维蛋白相同，仍有待进一步研究。考虑到术后4个月两组的附着龈增量值[BADM联合浓缩生长因子(0.27±0.19) mm，BADM联合胶原蛋白海绵(0.10±0.11) mm]，可以得出结论，复合膜仅实现了几百微米的厚度增加，产生的结缔组织量几乎与手术前相同，推测这很可能是因为大部分移植物简单降解，只有少数导致新的结缔组织形成。
目前脱细胞真皮基质已被广泛应用于医学各个领域，这项研究的结果肯定更有助于了解脱细胞真皮基质，并为其作为自体组织替代物的使用提供参考，进一步的研究可侧重于异体脱细胞真皮基质与其他软组织替代材料的比较。对于胶原蛋白海绵可通过再进一步优化制备工艺，从而提高力学性能和延长降解时间，扩大其在厚度增量领域的研究，浓缩生长因子膜的附着龈增厚作用仍然需要更多研究来证实。此次研究的一些局限性包括样本量小，观察时间短等，未来需要更大样本量和更长随访时间的研究，同时对于软组织增量手术应该建立标准化的研究方案，以便对不同的研究进行比较。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

不同软组织替代物在比格犬尖牙唇侧区域移植后附着龈的厚度和组织学变化

The histological and thickness changes of attached gingiva following grafting with different soft tissue substitutes in the labial region of the cuspids in Beagles

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