水液缺乏型干眼模型小鼠睑板腺的变化

doi:10.12307/2024.273

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (11): 1666-1671.doi: 10.12307/2024.273

• 组织构建实验造模 experimental modeling in tissue construction • 上一篇下一篇

水液缺乏型干眼模型小鼠睑板腺的变化

周紫莹1，2，欧尚坤1，2，黄超1，2，蒋浩1，2，张丽颖1，2，谷浩1，2

1贵州医科大学，贵州省贵阳市 550000；2贵州医科大学附属医院眼科，贵州省贵阳市 550000

收稿日期:2023-02-15 接受日期:2023-03-29 出版日期:2024-04-18 发布日期:2023-07-26
通讯作者: 谷浩，硕士，主任医师，贵州医科大学，贵州省贵阳市 550000；贵州医科大学附属医院眼科，贵州省贵阳市 550000
作者简介:周紫莹，1996年生，江西省抚州市人，汉族，2023年贵州医科大学毕业，硕士，医师，主要从事屈光及眼表疾病方面的研究。

Changes of the meibomian gland in a mouse model of aqueous deficient dry eye

Zhou Ziying1, 2, Ou Shangkun1, 2, Huang Chao1, 2, Jiang Hao1, 2, Zhang Liying1, 2, Gu Hao1, 2

1Guizhou Medical University, Guiyang 550000, Guizhou Province, China; 2Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, Guiyang 550000, Guizhou Province, China

Received:2023-02-15 Accepted:2023-03-29 Online:2024-04-18 Published:2023-07-26
Contact: Gu Hao, Master, Chief physician, Guizhou Medical University, Guiyang 550000, Guizhou Province, China; Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, Guiyang 550000, Guizhou Province, China
About author:Zhou Ziying, Master, Physician, Guizhou Medical University, Guiyang 550000, Guizhou Province, China; Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, Guiyang 550000, Guizhou Province, China

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

水液缺乏型干眼：当水液性泪液生成不足和(或)质的异常时，如原发性或继发性干燥综合征、泪腺缺失、泪腺导管阻塞、衰老、神经支配异常导致的基础泪液分泌及反射性泪液分泌减少、全身用药引起的泪液分泌减少等，便出现水液缺乏型干眼。
睑板腺功能障碍：是一种慢性、弥漫性睑板腺病变，以睑板腺终末导管的阻塞和/或睑酯分泌的质或量改变为主要病理基础，临床上可引起泪膜异常、眼部刺激症状、炎症反应，严重时会导致眼表损伤。

背景：近年来，越来越多的研究关注于睑板腺中腺泡细胞的增殖异常分化，认为这一过程与干眼症的发生和发展密切相关。睑板腺管腔阻塞和腺泡萎缩等结构和功能异常，可引起或加重干眼。因此，研究干眼中睑板腺变化对于深入理解干眼症的发病机制、寻找治疗和预防干眼症的新靶点具有重要的意义。

目的：探究水液缺乏型干眼模型小鼠中睑板腺的变化。
方法：选取6-8周雌性C57/B6小鼠32只，随机将其分成2组，每组16只。实验组小鼠采用同时切除眶外和眶内的泪腺的方法建造水液缺乏型干眼小鼠模型，对照组不做手术处理。正常饲养2周后于裂隙灯下观察两组小鼠角膜的改变，同时检测泪液分泌量。麻醉后脱颈处死两组小鼠后取睑板腺，观察睑板腺大体形态的变化，制成冰冻切片，苏木精-伊红染色观察睑板腺的结构，油红染色评价睑板腺的功能，免疫荧光染色和RT-qPCR观察两组小鼠睑板腺中祖细胞角蛋白14、细胞核增殖相关抗原(Ki67)以及异常分化的小脯氨酸丰富蛋白1B的表达情况。

结果与结论：①造模2周后，实验组小鼠角膜可见片状缺损，角膜缘新生血管生成且侵入角膜中央；②实验组小鼠泪液分泌量较对照组明显减少(P < 0.05)；③显微镜照相显示，实验组睑板腺导管中断萎缩，排列紊乱；④苏木精-伊红结果显示，实验组小鼠睑板腺中的脂质空泡较对照组明显增多；⑤油红染色中可见实验组小鼠脂质沉积；⑥免疫荧光和RT-qPCR结果显示，实验组小鼠睑板腺中祖细胞角蛋白14、Ki67、小脯氨酸丰富蛋白1B的表达较对照组明显增多(P < 0.05)；⑦提示水液缺乏型干眼可导致睑板腺的代偿性肥大、增殖增加、脂质代谢异常，同时可发生睑板腺异常分化。

https://orcid.org/0009-0001-1183-6167(周紫莹)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 水液缺乏型干眼症, 睑板腺功能障碍, 睑板腺, 干眼模型, 动物模型

Abstract: BACKGROUND: In recent years, increasing studies have focused on the abnormal proliferation and differentiation of acinous cells in the meibomian gland, suggesting that this process is closely related to the occurrence and development of dry eye. Structural and functional abnormalities such as blockage of the lumen of the meibomian gland and atrophy of the glands can cause or exacerbate dry eye. Therefore, the study of changes in the meibomian glands in dry eyes is important for understanding the pathogenesis of dry eyes in depth and finding new targets for the treatment and prevention of dry eyes.
OBJECTIVE: To investigate the changes of the meibomian gland in a mouse model of aqueous deficient dry eyes.
METHODS: Thirty-two female C57/B6 mice at 6-8 weeks were selected and randomly divided into experimental and control groups with 16 mice in each group. The mice in the experimental group were constructed by removing both the extra-orbital and intra-orbital lacrimal glands, while those in the control group were not treated. After 2 weeks of normal feeding, the corneal changes of both groups were observed under a slit lamp, and the tear secretion of both groups was measured. The meibomian glands of the two groups of mice were removed after decapitation. The changes in the gross morphology of the meibomian glands were observed and the meibomian glands were made into frozen sections. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the structure of the meibomian glands, oil red staining was used to evaluate the function of the meibomian glands, and immunofluorescence staining and RT-qPCR were used to observe the expression of cytokeratin 14, Ki67 and abnormally differentiated small proline-rich protein 1B in the meibomian glands of mice.
RESULTS AND CONCLUSION: Two weeks after modeling, lamellar defects were seen in the corneas of the experimental mice, and neovascularization of the limbal corneal was generated and invaded the central cornea. (2) Tear secretion volume was significantly reduced in the experimental group compared with the control group (P < 0.05). Microscopic findings showed that the ducts of the meibomian glands in the experimental group were interrupted and atrophied, and their arrangement was disorganized. Hematoxylin-eosin staining results showed a significant increase in lipid vacuoles in the meibomian glands of the experimental mice compared with the control group. Lipid deposition was seen in oil red staining in the experimental group. Immunofluorescence and RT-qPCR results showed a significant increase in the expression of cytokeratin 14, Ki67 and small proline-rich protein 1B in the meibomian glands of mice in the experimental group compared with the control group (P < 0.05). To conclude, aqueous deficient dry eye can lead to compensatory hypertrophy, increased proliferation, and abnormal lipid metabolism in the meibomian gland, as well as abnormal differentiation of the meibomian gland.

Key words: aqueous deficient dry eye, meibomian gland dysfunction, meibomian gland, dry eye model, animal model

中图分类号:

周紫莹, 欧尚坤, 黄超, 蒋浩, 张丽颖, 谷浩. 水液缺乏型干眼模型小鼠睑板腺的变化[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(11): 1666-1671.

Zhou Ziying, Ou Shangkun, Huang Chao, Jiang Hao, Zhang Liying, Gu Hao. Changes of the meibomian gland in a mouse model of aqueous deficient dry eye[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(11): 1666-1671.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析 C57/B6小鼠32只随机分为2组，实验组和对照组各16只，全部进入结果分析，实验过程中无脱失。
2.2 小鼠干眼模型的构建此次研究切除小鼠眶内、眶外泪腺，构建了水液缺乏型干眼模型。术后2周实验组小鼠角膜及结膜干燥粗糙，结膜严重充血，角膜中央可见直径2 mm左右的片状角膜上皮缺损，角膜缘新生血管侵入角膜中央。荧光素钠染色结果显示，实验组小鼠角膜表面染色阳性，对照组染色阴性(图1A)。SchirmerⅠ泪液分泌实验显示，实验组小鼠泪液分泌量较对照组明显减少，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图1B。结果显示，构建的模型为水液缺乏型干眼动物模型。

2.3 睑板腺结构功能的变化为了进一步明确水液缺乏型干眼中睑板腺的变化，造模后2周取小鼠的眼睑，用立体显微镜观察睑板腺的大体结构，正常睑板腺的排列比较规则，呈葡萄样的改变[11]。而实验组小鼠的睑板腺体积明显增加，排列拥挤，睑板腺与睑板腺之间的间隔消失(图2A蓝色箭头)。油红染色结果表明，实验组小鼠睑板腺腺泡中被染成红色的脂质成分较对照组更多，可以观察到脂质的富积(图2B黄色箭头)。睑板腺切片苏木精-伊红染色结果显示，实验组小鼠睑板腺中腺泡代偿性增大，炎症细胞增多(图2C黑色箭头)，而且有空泡形成(图2C 红色箭头)。总的来说，发现在眶内外泪腺切除后引起的水液缺乏型干眼中，睑板腺可以代偿性的肥大，脂质分泌异常。

2.4 睑板腺增殖的变化见图3。

为了判断在这个过程中睑板腺增殖的变化，用增殖相关的标记物Ki67对睑板腺进行染色。Ki67是细胞核增殖相关标记物，是细胞在有丝分裂进行过程中染色体外围的一个组分，其表达水平与细胞有丝分裂有关，可以作为细胞增殖活性的重要标记物[12]。正常的睑板腺中，Ki67的睑板腺主要散在表达在睑板腺腺管以及腺泡的基底部。而在实验组小鼠中，可以在睑板腺腺泡和腺管中看到大量Ki67阳性的细胞(图3B)。K14是上皮祖细胞的标记物，在正常的睑板腺中，主要表达在睑板腺腺泡机腺管的基底部中[13]。而在实验组小鼠中，可以看到K14在睑板腺的腺泡及腺管中大量表达，甚至在基底细胞以外都可以见到K14阳性的细胞(图3A)。RT-qPCR的结果也显示，实验组小鼠的睑板腺中Ki67和K14的基因表达也显著增加(图3D，E)。结合睑板腺Ki67及K14的结果表明，在眶内外切除的水液缺乏型干眼中睑板腺细胞的增殖明显增加。
2.5 睑板腺在水液缺乏型干眼中发生异常分化前面验证了水液缺乏型干眼可以导致睑板腺细胞增殖能力增加，作者还发现细胞的前体细胞数量增加。细胞的正常增殖对组织的自我更新及分化起着重要的作用，异常的增殖可能导致异常分化。为了进一步分析在水液缺乏型干眼中睑板腺的分化情况，检测了Sprr1b 在睑板腺的表达。Sprr1b是上皮细胞鳞状化生的标记物，它的表达升高说明干眼发生过程中复杂的炎症反应，可以诱导腺泡上皮细胞发生鳞状化生。当睑板腺上皮角化过度时，腺体导管将会萎缩、堵塞甚至中断，从而导致睑板腺功能障碍[14]。在正常的睑板腺中，只可以看见睑板腺腺管有少量的Sprr1b表达，而在实验组小鼠中可以看到Sprr1b的表达量明显增加(图3C)；RT-qPCR的结果显示，Sprr1b的基因表达也显著增加(图3F)，表明在水液缺乏型干眼模型中，睑板腺异常分化增加。

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引言

睑板腺位于上下眼睑的睑板内，开口于睑缘，是最大的皮脂腺，睑板腺的分泌物为透明的睑酯，在正常眼睑温度下睑酯为透明液态，瞬目时Riolan肌和眼轮匝肌收缩，压迫睑板腺排出睑酯。随着眼睛的睁开，脸酯被拉伸涂布在泪膜最表层形成脂质层，防止泪膜水分的蒸发，维持泪膜的稳定[1-2]。睑板腺功能障碍则是公认的蒸发过强型干眼症的主要原因之一[3]，睑板腺分泌油脂的质与量发生改变、睑板腺终末导管的堵塞等原因导致眼表泪膜脂质层的破坏，从而导致干眼症状的出现[4]。
眼表是一个整体，包括睑板腺、泪腺、角膜、结膜、神经、泪膜等，每种成分的改变都可引起其他组分的改变[5]。干眼(Dry eye)是指由于泪液量或质的异常引起的泪膜不稳定和眼表的损害，从而导致眼不适症状的一类疾病；其主要特征是泪膜失平衡合并眼部的多种症状[6]。干眼主要有水液缺乏型干眼、蒸发过强型干眼、黏蛋白缺乏型干眼以及泪液动力学异常型干眼。水液缺乏型干眼是仅次于蒸发过强型干眼的干眼类型，主要由干燥综合征、泪液分泌不足、泪腺导管阻塞等引起。有报道表明，在干眼的发展过程中，会伴随着睑板腺功能的异常[7-8]，最近有学者发现在原发性或继发性的干燥综合征患者中，睑板腺萎缩，功能减退[9-10]，也就是说水液缺乏型干眼的病变过程中也可以引起睑板腺的功能变化，进一步加重干眼的进展。但在改变过程中，睑板腺的病理、生理目前没有深入研究。
基于此，通过切除小鼠眶内、眶外的泪腺，构建水液缺乏型干眼，并观察水液缺乏型干眼中睑板腺的形态及功能的变化。希望通过此次研究，能从眼表微环境的角度认识干眼及睑板腺功能障碍，为临床上水液缺乏型干眼的治疗提供新的思路。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，两样本均数比较用t检验。
1.2 时间及地点实验于2022年10月至2023年1月在贵州医科大学完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物选取6-8周雌性C57/B6小鼠32只，体质量20-25 g，小鼠购于贵州医科大学实验动物管理中心，许可证号：SCXK(黔)2018-0001。饲养条件：通风、清洁，温度：20-26 ℃，湿度：60%-77%，混合饲料喂养，实验前于裂隙灯下排除小鼠眼睛创伤、白内障等所有疾病。采用随机数字法将其随机分成实验组与对照组，每组16只，实验组小鼠采用同时切除眶外和眶内的泪腺的方法建造干眼模型，对照组小鼠不做手术处理。实验方案经贵州医科大学动物实验伦理委员会批准，批准号：2304584。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。
1.3.2 试剂 K14、Ki67、Sprr1b抗体来自于美国Abcam公司；Alexa fluor 594驴抗兔二抗来自于美国Invitrogen 公司；DAPI即用型试剂、苏木精-伊红染色试剂盒、油红染色试剂盒来自北京索莱宝公司；RNA反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒来自于上海Yeasen公司；显微镜来自于德国蔡司公司；反转录PCR及qPCR检测仪来自于美国伯乐(Bio-Rad)公司。
1.4 方法

1.4.1 动物干眼模型的构建实验组小鼠腹腔注射1.25%阿佛丁0.3 mL麻醉，于眼颞侧备皮，充分暴露皮肤，消毒铺巾，于右耳下方约1 cm处沿皮纹做横行切口，充分暴露皮下，可见一微黄色圆形腺体即眶外泪腺，分离周边包膜并将其完整摘除，无菌生理盐水冲洗局部血水后，用4-0丝线皮针缝合皮肤切口。眼外侧1 cm 处做纵行切口充分暴露皮下，可见一白色质硬膜，切开见下方一三角形腺体即眶内泪腺，将其完整摘除。无菌生理盐水冲洗局部血水后，用4-0丝线皮针缝合皮肤切口。切口局部碘伏消毒，表面涂红霉素眼膏预防感染。

1.4.2 裂隙灯评估和荧光素染色术后2周后在裂隙灯显微镜下拍摄角膜上皮的照片，用0.25%的荧光素钠点眼，观察小鼠角膜上皮的着色情况及缺损面积。
1.4.3 SchirmerⅠ泪液分泌实验将酚红棉线置于小鼠下睑鼻内侧1/3结膜囊内，其余部分悬垂于其皮肤表面，使其闭眼，5 min后测量酚红棉线被渗湿的长度。
1.4.4 体式显微镜检查麻醉后脱颈处死小鼠，取侧卧位，用显微剪把C57/B6小鼠睑板腺完整剪下，用滤纸把标本表面的一些血渍及水吸干。在手术显微镜下使用镊子和角膜剪将睑板腺从动物上分离。之后使用体式显微镜评估睑板腺面积大小，并使用数码相机成像。
1.4.5 冰冻切片的制备把睑板腺放入预先标记并加入OCT包埋剂的包埋盒中，用200 μL移液器吸出包埋盒中的气泡，缓慢放入液氮中，使OCT冷冻，于冰冻切片机中先粗修标本至可以看到睑板腺组织，再将切片的厚度调整为6 μm，进行连续切片，把完整的睑板腺的切片贴敷于预先准备好的载玻片上，用铅笔在黏附破片上标记好组织的名称、取材及切片时间、保存在超低温冰箱中备用。
1.4.6 苏木精-伊红染色根据试剂说明书，用苏木精-伊红染色试剂盒对小鼠睑板腺组织的冷冻切片进行染色。每只小鼠取3个切片，每张切片3个样本，经过干燥、40 g/L多聚甲醛固定、漂洗后常温下用苏木精染液浸泡标本1 min，0.1%盐酸乙醇分化1 s，伊红染液染色1 min，乙醇梯度脱水后二甲苯中透明2 min，结束后封固晾干，用配备数码相机的显微镜检查并拍照。
1.4.7 油红染色每只小鼠取3个切片，每张切片3个样本，经过干燥、40 g/L多聚甲醛固定、漂洗后常温下油红工作液染色15 min，60%异丙醇漂洗后苏木精染液浸泡标本1 min，漂洗后晾干封固。
1.4.8 免疫荧光染色免疫荧光染色以检测和统计两组小鼠睑板腺中K14、Ki67、Sprr1b的阳性表达情况。每只小鼠取3个切片，每张切片3个样本，经过干燥、40 g/L多聚甲醛固定、漂洗后常温下使用0.2%TritonX-100透膜20 min，清洗透膜液后用体积分数10%山羊血清封闭1 h，使用兔抗小鼠K14抗体(1∶200)、兔抗小鼠Ki67抗体(1∶200)和兔抗小鼠Sprr1b抗体(1∶200)对切片进行孵育过夜，清洗一抗后用Alexa fluor 594驴抗兔二抗孵育1 h，清洗二抗后用DAPI覆盖标本5 min，随后清洗封固，于激光共聚焦显微镜下拍照评估阳性结果。每次染色均同步设有阳性对照和阴性对照，阳性对照为小鼠皮肤组织，阴性对照为PBS代替一抗。
1.4.9 RNA的提取使用电动组织研磨器将小鼠睑板腺组织磨碎，向其中加入1 mL RNA提取试剂裂解组织，静置5 min后加入200 μL氯仿，使用漩涡振荡器剧烈震荡摇匀，4 ℃低温离心，12 000 r/min，共10 min。取上清加入等量的冰上预冷的异丙醇，上下颠倒离心管，使液体混匀，将标本放入-80 ℃超低温冰箱中20-30 min，使RNA析出，4 ℃低温离心，12 000 r/min，共10 min。可以看见离心管底有少量的白色沉淀，弃去上清。每管加入预冷无水乙醇500 μL。4 ℃低温离心，12 000 r/min，共10 min；重复此步骤2次。将沉淀晾干后加入适量的无菌无酶水使样本溶解，使用超微量分光光度计进行RNA浓度的测量，放入超低温冰箱保存，或者马上进行反转录PCR。
1.4.10 反转录PCR及RT-qPCR：

(1)引物序列：均为上海生物工程公司设计合成，见表1。

(2)反转录PCR：①gDNA消化：于冰上配制以下反应体系，用漩涡震荡混匀，瞬时离心后在普通PCR仪内42 ℃孵育2 min。见表2。②反转录PCR：于冰上配制以下反应体系，用漩涡震荡混匀，瞬时离心后在普通PCR仪内按25 ℃孵育5 min，55 ℃孵育15 min，85 ℃孵育5 min的程序操作。见表3。

(3)RT-qPCR：于冰上在八连管中配制以下体系，荧光定量PCR仪中进行下列扩增程序，完成程序后导出数据计算2-ΔΔCt值，分析各基因表达量，见表4，5。

1.5 主要观察指标造模成功后，体式显微镜、苏木精-伊红染色、油红染色观察小鼠睑板腺大体形态的变化，免疫荧光、RT-qPCR观察小鼠睑板腺中K14、Ki67、Sprr1b的变化。
1.6 统计学分析数据采用x±s表示，两样本均数比较用t检验，采用SPSS 13.0软件进行数据的统计学分析，以P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经贵州医科大学生物统计学专家审核。

讨论

干眼是一种以泪膜的不稳定为特征，引起各种眼部不适症状或视力损害，同时还可能伴有眼表损害的多因素疾病[15]。泪膜的稳定性与睑板腺功能息息相关，睑板腺功能障碍的发生导致睑酯分泌的障碍，泪膜稳定性破坏，最终导致干眼的发生[4]，已经有许多学者注意到干眼患者睑板腺中脂质成分和腺泡结构有改变[16-17]。但是在水液缺乏型的干眼中，睑板腺的变化如何，目前研究较少。在此次研究中，通过切除小鼠眶内和眶外泪腺的方式构建水液缺乏型干眼动物模型，通过体视显微镜、苏木精-伊红染色发现水液缺乏型干眼中睑板腺增大、肥厚；苏木精-伊红染色可以发现在水液缺乏性干眼中炎症细胞的浸润；同时发现睑板腺上皮细胞增殖、鳞状上皮化生增加，而且出现脂质积聚的现象。
目前有多种干眼模型，如MRL/lpr小鼠、非肥胖型糖尿病小鼠等自发性的干眼模型，东莨菪碱、苯扎氯铵等药物诱导的干眼模型，以及去势动物干眼模型等[18]，这些模型往往直接影响泪腺和睑板腺功能的同时变化，是混合型的干眼症。在此文中，采用切除小鼠眶内和眶外泪腺的方式构建典型的水液缺乏干眼模型。在这个模型中，泪液的分泌量明显减少，而且有如干燥综合征、斯蒂文森综合征等重度干眼的眼表表现，如持续性的角膜上皮缺损、新生血管长入等，但却没有直接影响睑板腺的结构。总的来说，构建了一个典型的单纯水液缺乏型干眼动物模型。
干眼是炎症反应的综合结果，干眼中白细胞介素6[19]、肿瘤坏死因子α[20]、白细胞介素1β、白细胞介素18[21]、趋化因子3、趋化因子4、趋化因子5及血管内皮生长因子等炎症因子水平的升高[22]，与干眼的发展过程密切相关。另一方面，角膜及睑板腺有大量的感觉神经、交感神经和副交感神经纤维分布[23]。作者推测，眼部的干燥环境以及炎症因子刺激角膜、睑板腺相关神经，激活睑板腺腺泡上皮细胞中神经-体液调节代偿机制，促使腺泡上皮干细胞增殖分化，产生更多睑酯涂布于眼表从而减轻干燥环境带来的影响，但具体机制需要进一步的研究。
在睑板腺最初的发育、形成时，其周围的黏膜细胞、表皮细胞也表达K14[24]。K14和Ki67主要表达在睑板腺腺泡及腺管的基底层，与睑板腺腺泡上皮细胞的增殖呈正比[25]。此次实验的免疫荧光和PCR结果也提示，水液缺乏型干眼的睑板腺中细胞增殖明显增加。在水液缺乏型的干眼中可以看到炎症细胞的浸润，持续的炎症因子刺激诱导基底腺泡细胞进入细胞周期[26-27]，使得细胞过度增殖，甚至发生鳞状上皮化生。在此次研究中，发现睑板腺的Sprr1b表达增高，提示腺泡上皮细胞的鳞状上皮化生增强，这是睑板腺上皮异常增生所引起的。有研究表明在睑板腺功能障碍患者睑脂中K14浓度过高也可能影响睑酯的流动性，破坏睑板脂膜的正常结
构[28-29]；在此次研究中发现水液缺乏型的干眼中有脂栓形成，也证明了这个观点，睑板腺腺泡细胞增殖异常分化可以导致睑板腺管道的角化过度，导致腺泡的萎缩和腺体脱落[30]、睑板腺阻塞和炎症，脂质分泌异常[31]，进而导致泪膜质量下降，使眼部表面变得干燥、刺痛和易受感染。因此，研究睑板腺腺泡细胞的异常增殖和分化有助于理解干眼症的发病机制，并有望为干眼症治疗提供新的靶点。
综上所述，睑板腺在干眼的发生发展过程中会产生一定的代偿反应，此次实验也进行了对睑板腺代偿作用机制的探索，由于此次实验的局限性尚未对睑板腺腺泡中神经-体液调节做出进一步研究。眼表是一个整体，当发生干眼的时候，常常关注泪腺本身以及泪液分泌，而忽视了对睑板腺的治疗，这导致了睑板腺的功能障碍反而加重了干眼。提示在干眼的治疗过程中，需要同时关注泪腺的功能以及睑板腺的功能。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

水液缺乏型干眼模型小鼠睑板腺的变化

Changes of the meibomian gland in a mouse model of aqueous deficient dry eye

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