人永生化角质形成细胞系扩增至第3代，形如铺路石，免疫荧光染色显示胞质中细胞角蛋白阳性表达，呈FITC的绿色荧光，胞核呈DAPI的蓝色荧光，见图2。



2.2   接种细胞前后纤维蛋白膜的形态观察   将从3分层血液样品中获得的淡黄色的胶冻样CGF凝块压制成CGF纤维蛋白膜，见图3。接种细胞前的苏木精-伊红与Masson染色显示，CGF膜纤维蛋白与CGF+rhEGF复合纤维蛋白膜均无细胞成分存在，呈疏松多孔的纤维网状结构，见图4。

接种细胞后的苏木精-伊红、免疫组化及免疫荧光染色显示，两种细胞在CGF纤维蛋白膜和CGF+rhEGF复合纤维蛋白膜上生长良好，其中细胞在CGF+rhEGF复合纤维蛋白膜上的细胞量均明显多于CGF纤维蛋白膜，见图5。



2.3   动物实验结果    
2.3.1   实验动物术后情况及创面大体观察情况   术后第2天，各组创面处缝线固定在位，大部分创面周围皮肤稍红，但未见异常分泌物；饮食量及昼夜活动量均较A组少。除A组外，其余3组观察到明显的动物聚集现象，伴精神稍差。术后第7天，部分缝线脱落，脱落部位的创面遗留粉色宽线状未闭合区，4组裸鼠的饮食量及昼夜活动量趋近，精神恢复同术前。术后第14天，大部分缝线已完全脱落，术区皮肤颜色由粉色转变为与周围皮肤颜色接近的淡粉白色，伴局部皮肤轻度皱缩，未闭合区的面积均较前1周缩小，剩余未闭合区面积大小在整体上呈现出B组>C组>D组的规律。术后第21天，缝线均脱落，创面完全闭合，遗留线状肉色瘢痕，见图6。整个实验过程中，各组均未观察到明显的植入物排异反应。




2.3.2   各组创面愈合组织形态学观察   见图7。

苏木精-伊红染色显示，A组皮肤组织层次完整，基底膜连续，胶原纤维与基底膜紧密相连，不同细胞及皮肤附属器丰富而排列规律；B组表皮层基本愈合，棘细胞层的厚度减低，胶原纤维量少而排列不连续，皮下组织层少量皮脂腺、毛囊及脂肪细胞存在；C组角细胞层、棘细胞层、基底细胞层出现不同程度的增厚，上皮钉突减少，胶原纤维粗大密集，包绕新生血管；D组表现似 C组，但胶原纤维、成纤维细胞及新生血管的数目明显增加。

Masson染色显示，A、B组表皮层细胞及毛囊均呈现透明度较高的红色，胶原纤维呈蓝染状态，皮脂腺腺泡细胞的胞质呈淡粉白色、胞核红染固缩而偏向边缘，血管中的红细胞呈橘黄色；C、D组皮肤附属器明显丧失，大量蓝染胶原纤维排列紧密，仍可见少量橘黄色的血管内红细胞。蓝染的胶原纤维在数量、排列密集程度及连续性等方面呈D组>C组>A组>B组的趋势。A组含皮肤附属器的数量最多，B、D、C组均较A组减少，该3组间差别不明显。
2.3.3   各组创面胶原纤维半定量分析结果   A-D组创面胶原纤维容积分数分别为(40.74±3.61)%，(36.29±3.82)%，(61.74±2.66)%，(68.64±2.81)%，见图8。

方差齐性检验结果显示，各组的总体方差齐(Levene Statistics=0.584，P=0.630)。后续的方差分析结果显示，4组间的胶原纤维容积分数比较差异有显著性意义(F=186.808，P < 0.001)；LSD检验结果显示，4组间两两比较差异均有显著性意义(P < 0.05或P < 0.01)。
2.3.4   各组愈合组织生物力学测定结果   各组拉应力-时间图及拉应力-应变图，见图9，拉应力峰值均值由大到小呈A组>D组>C组>B组，达到最大拉应力时产生的组织应变量均值由大到小呈B组>C组>D组>A组。

A-D组创面愈合组织拉应力峰值均值分别为(0.061±0.003)，(0.044±0.005)，(0.051±0.003)，(0.056±0.002) MPa，见图10。

方差齐性检验结果显示，各组拉应力峰值的总体方差齐。方差分析结果显示，4组间的拉应力峰值比较差异有显著性意义(F=55.329，P < 0.001)；LSD检验结果显示，4组间拉应力峰值两两比较差异均有显著性意义(P < 0.05或P < 0.01)。
2.4   复合纤维蛋白膜的生物相容性   由体外细胞接种实验与动物体内实验结果可知，CGF+rhEGF复合纤维蛋白膜具有良好的细胞相容性与组织相容性。

口腔黏膜损伤是口腔各分支疾病的常见临床表现或术后并发症[1]。近年来，富自体浓缩生长因子(concentrated growth factor，CGF)与重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor，rhEGF)已然成为机体软组织损伤再生与修复领域中的两大研究热点[2-6]。TIAN等[7]观察到CGF可以促进牙髓细胞的增殖和矿化，促进牙髓再生。张诗韵等[8]通过动物实验发现，CGF与血凝块诱导根管内组织再生的能力类似，其或可为牙髓再生治疗提供新思路。田巍等[9]报道在美容清创缝合基础上加rhEGF治疗口腔颌面部外伤患者的疗效更佳，创口修复质量显著提高，术后瘢痕形成减少。奉水华等[10]的研究发现，在肌皮瓣修复深度电击烧伤创面中应用rhEGF凝胶可明显缩短清创至肌皮瓣修复的时间，减少二次清创及术前创面感染的发生，并可加快创面愈合速度，减少术后瘢痕形成。龚博林等[11]比较主要成分为rhEGF的金因肽喷雾与CGF纤维蛋白凝胶对于口腔溃疡愈合的效果，结果提示相比rhEGF，CGF纤维蛋白凝胶能在更短的时间内减轻口腔溃疡导致的疼痛，促进溃疡面愈合。关于CGF对口腔黏膜损伤修复价值的探究，学者们大多进行临床试验，但相关基础实验数据较为缺乏，且几乎没有学者关注CGF及rhEGF这两种生长因子对于组织创伤修复再生的联合应用价值。

软组织损伤修复包括止血、炎症、细胞增殖、迁移和组织重塑、成熟等过程[12]。CGF的组成成分在软组织损伤修复的各个阶段发挥重要作用：血小板衍生生长因子引导炎症细胞和成纤维细胞进入伤口部位，并促进细胞外基质及胶原的合成、干细胞增殖，通过激活和交联胶原蛋白触发伤口重塑；血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子均参与促进内皮细胞的迁移、增殖，最终分化形成新血管；转化生长因子β可促进血管生成、胶原合成和胶原酶分泌[13]。同时，CGF的三维立体纤维蛋白网络结构为损伤修复过程中的细胞迁移提供了适宜的强度支撑，并为细胞增殖提供空间。表皮生长因子与受体结合后调控受体二聚体化和酪氨酸残基磷酸化，从而发挥促细胞增殖、迁移，促组织损伤修复，创面上皮再形成的功能[14-15]。随年龄的增长，自体可产生的表皮生长因子含量及活性逐渐降低，目前临床上多使用通过基因工程提取而来的rhEGF。基于此，课题组设计了分别在CGF纤维蛋白膜及CGF纤维蛋白膜与rhEGF活性蛋白多肽复合物上培养人牙龈成纤维细胞和人永生化角质形成细胞的体外实验，并以BALB/c-裸鼠为生物反应器，利用裸鼠背部皮肤构建口腔黏膜等效损伤模型，进行CGF纤维蛋白膜与CGF+rhEGF复合纤维蛋白膜的体内修复实验，探讨CGF纤维蛋白膜与rhEGF活性蛋白多肽复合物对于口腔黏膜等效损伤的修复价值，以期为口腔黏膜的上皮、固有层及黏膜下层损伤修复提供实验数据参考。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

1.1   设计   体外细胞观察实验与体内动物观察实验，组间比较进行SNK-q检验。
1.2   时间及地点   细胞实验部分于2019年3月至2020年12月在口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室内完成，动物实验部分于2020年12月至2021年2月在西南医科大学SPF级动物暂养室及口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室完成。
1.3   材料   切取西南医科大学附属口腔医院口腔颌面外科20-30岁拔除下颌智齿患者的拔牙创缘牙龈组织，患者无拔牙禁忌证、牙周黏膜疾患或传染性疾病；近期未接受可能影响实验结果的治疗或特殊药物(如抗凝血及激素类药物)。患者对实验知情同意。实验已通过西南医科大学附属口腔医院伦理委员会审查批准(审批号：20181008001)。人永生化角质形成细胞购于上海中乔新舟公司(货号：ZQ0044)。
1.3.1   主要仪器及试剂   Medifuge离心机(Silfradent公司，意大利)；红色VACUETTE真空采血管(北京优尼康生物科技有限公司)；电子万能实验机(济南一诺世纪试验仪器有限公司)；DMEM基础培养基、胎牛血清、0.25% Trypsin-EDTA(GIBCO公司，美国)；rhEGF溶解稀释液套装(杭州联科生物技术股份有限公司)；波形蛋白Vimentin(鼠单抗)、细胞角蛋白CK(广谱)、FITC、DAPI、DAB及免疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。
1.3.2   实验动物   4周龄雌性BALB/c-裸鼠24只，体质量13-15 g，购于四川成都达硕实验动物有限公司，许可证：SCXK(川)2015-030。随机分为A、B、C、D组，每组6只。动物实验已通过西南医科大学动物伦理委员会审查批准(审批号：20210015)。
1.4   实验方法   
1.4.1   细胞的培养与鉴定   采用组织块培养法分离培养人牙龈成纤维细胞[16]。切取志愿者拔牙创缘牙龈组织，常规消化离心，制作细胞爬片，细胞浓度约为1×109 L-1，培养1周后，采用免疫细胞化学法、免疫荧光法检测波形蛋白、细胞角蛋白表达。采用免疫荧光法检测人永生化角质形成细胞的细胞角蛋白表达。
1.4.2   纤维蛋白膜的制备   利用红色VACUETTE真空采血管采集健康志愿者肘窝静脉血4支，每支采血量9 mL。Medifuge离心机经UV反射光循环消毒(1 000 r/min×5 min)，配平采血管后，按离心机自带的CGF程序(2 600 r/min×2 min→2 300 r/min×4 min→2 600 r/min×4 min→2 850 r/min×3 min)进行差速离心。取3分层血液样品的中间层压血液样品的中间层压膜，得CGF纤维蛋白膜。将CGF纤维蛋白膜浸没于10 µg/L rhEGF活性蛋白多肽液中24 h，得到CGF+rhEGF复合纤维蛋白膜。

采用苏木精-伊红染色与Masson染色观察两种纤维蛋白膜的形态。
1.4.3   体外细胞实验   取第3代的人牙龈成纤维细胞与人永生化角质形成细胞，常规消化，分别加入含体积分数10%胎牛血清的DMEM基础培养基100 μL，吹匀，细胞浓度约为1×109 L-1，将两种细胞分别滴加于CGF纤维蛋白膜与复合纤维蛋白膜上，置于37 ℃、体积分数CO2培养箱中。培养1周后，40 g/L多聚甲醛固定24 h，包埋切片，切片厚度4 μm，分别进行苏木精-伊红染色、SP免疫组化染色与免疫荧光染色。

SP免疫组化染色：检测人牙龈成纤维细胞的波形蛋白表达情况，检测人永生化角质形成细胞的细胞角蛋白表达。染色前烤片30 min，脱蜡至水，柠檬酸钠沸水浴30 min，冷至室温后水洗，过氧化氢酶作用10 min，轻洗；封闭血清处理15 min，吸干，将1×PBS与一抗(波形蛋白，细胞角蛋白)的稀释液(1∶400)浸没切片上的组织，湿盒中4 ℃冰箱过夜，水洗；山羊抗鼠/兔IgG聚合物处理15 min，冲洗；辣根酶标记物处理15 min，增强型DAB染液处理1 min，荡洗，浸泡苏木精5 min，水洗2 s，过酸乙醇1 s，水洗2 s，浸泡1%氨水1 min，水洗2 s，梯度乙醇脱水，浸泡二甲苯10 min，封固。

免疫荧光染色：孵一抗过夜前的步骤与IHC免疫组化染色一致。孵一抗(波形蛋白，细胞角蛋白)过夜后，冲去抗体，吸干，于暗室内分别调配1×PBS与荧光二抗FITC及胞核染料DAPI的稀释液(均为1∶100)，FITC稀释液浸没组织30 min 后水洗，DAPI稀释液处理15 min 后水洗，吸干，甘油封固，避光，30 min内于倒置荧光显微镜下采图。 
1.4.4   动物实验   除A组外，其余3组小鼠均腹腔注射1%戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉，于左背部制造大小约1 cm×1 cm×0.5 cm的创面，制造创口的深度均保持在肌层之上。B组造创后直接缝合，C组覆盖CGF膜后对位缝合，D组覆盖复合纤维蛋白膜后对位缝合。为避免缝合后张力过大而造成创口崩裂，C、D组裸鼠背部创口的生物膜均在植入前被修剪至0.8 cm×0.8 cm×0.1 cm大小。术后第3周末，在术区范围外约1 cm切取各组创面修复组织，部分组织包埋切片，进行苏木精-伊红染色及Masson染色；部分组织保存于4 ℃生理盐水中，进行生物力学测定。

正置显微镜下，以双盲法对4组Masson染色石蜡切片以原创面为中轴，随机采图8个视野，利用ImageJ医学图像测量系统对各组的8张图片进行胶原纤维面积和总测量面积的测定，并计算相应的胶原纤维容积分数。重复3次，记录平均值。将各组取得的组织块进一步三等分为每块约0.5 cm×0.5 cm×0.1 cm的大小，生理盐水润湿。万能实验机参数设为载荷量500 g、初始拉伸长度2 cm、拉伸应变率20 mm/min，等距钳夹组织块，拉伸模式下每2 s记录一次，直至组织断裂，记录曲线上每个点的横纵坐标值，绘制拉应力-时间、拉应力-应变曲线。 
1.5   主要观察指标   两种纤维蛋白膜上的细胞增殖量与修复创面的效果。
1.6   统计学分析   应用SPSS 22.0软件行统计学分析，以x±s表示统计数据，进行方差齐性检验，选择SNK-q检验(α=0.05)分析各组间的统计数据，P < 0.05为差异有显著性意义。该文统计学方法已经四川大学生物统计学专家审核。

在胚胎发育过程中，皮肤的表皮与口腔黏膜中绝大部分的上皮组织(除口底及舌根黏膜来自于内胚层)都来自于外胚层，虽然皮肤与口腔黏膜在机体所处的位置不同，但它们的基本组织学结构层次具有极大的相似性：一方面，皮肤的角质层同角化型口腔黏膜的角化层一样，都是由大量的角质形成细胞构成；另一方面，在皮肤的真皮层与口腔黏膜的固有层中都富含纤维结缔组织，而成纤维细胞是其中最重要的构成细胞之一[17]。口腔黏膜与皮肤的损伤修复机制也基本相似，都需经过再上皮化、基质改建、胶原合成及血氧微循环重建等过程[18-19]。研究表明，人牙龈成纤维细胞可以通过刺激巨噬细胞表型极化调节肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及白细胞介素10等细胞因子表达，进而抑制创面内炎症反应，刺激肉芽组织和血管形成，促进损伤愈合[20]。人永生化角质形成细胞是一种来源于人皮肤组织而具有无限分化潜能的上皮细胞系，同人角质形成细胞(HKC)一样可分化成皮肤表皮组织，是皮肤生物科学的重要研究细胞[21]。研发或寻找能促进人牙龈成纤维细胞和人永生化角质形成细胞增殖的新药物或调控通路，是目前口腔黏膜与皮肤损伤修复领域的研究思路之一。

研究表明，在一定条件下，口腔黏膜的组织缺损可以由机体皮瓣转移修复[22-23]。ZHOU等[24]也通过组织工程技术成功在裸鼠皮肤内构建出血管化口腔黏膜样组织，提示口腔黏膜与皮肤之间具有相互转化的能力。裸鼠因胸腺先天发育障碍而细胞免疫缺乏，可以降低如SD大鼠、兔和犬等其他常用实验动物带来的免疫排斥反应[25]，但因裸鼠口腔环境相对狭小，若对其直接构建口腔黏膜损伤模型进行大体观察和切取修复组织时操作困难且误差较大，易影响实验结果。基于口腔黏膜与皮肤组织在病理生理上表现出来的天然转化潜力以及裸鼠自身的生物学特性，此次实验以BALB/c-裸鼠作为生物反应器，并以其背部皮肤构建口腔黏膜等效损伤模型，在从动物建模、CGF纤维蛋白膜与CGF+rhEGF复合纤维蛋白膜植入到切取愈合组织的整个实验过程中，仅观察到创面周围组织轻微的缝线炎症反应而无明显的免疫排斥反应。

目前，CGF对于软组织损伤的修复作用已得到学术界的广泛研究和肯定[26-27]。CGF富含的多种生长因子能促进细胞增殖、基质重塑、血管生成，从而调节软组织修复进程[28-31]。许多学者报道了临床在冠向复位瓣手术或种植术中联合使用CGF膜能促进牙龈组织愈合，增加术后牙龈厚度，但关于CGF修复的损伤组织自身机械强度的研究却少有报道[32-34]。虽然最理想的修复材料也无法完全恢复损伤组织的机械强度，但这一项重要指标的研究缺失在一定程度上会影响对CGF修复软组织损伤价值的客观评价。有学者对比了CGF与其前一代血小板浓缩物——富血小板纤维蛋白所制备的纤维蛋白膜的抗拉伸强度，并通过ELISA法检测CGF与富血小板纤维蛋白在纤维蛋白凝块和纤维蛋白液这两种不同性状下所释放的血小板衍生生长因子、转化生长因子β1和表皮生长因子等生长因子的含量，结果发现CGF膜组的抗拉伸强度显著大于富血小板纤维蛋白膜组，而无论是在CGF与富血小板纤维蛋白凝块组，还是在CGF与富血小板纤维蛋白液态组的生长因子含量对比实验中，只有表皮生长因子水平表现出了统计学差异[35-36]。这提示CGF纤维蛋白膜的抗拉伸强度可能部分与其中所释放的表皮生长因子有关，也与研究报道的表皮生长因子能增强如大鼠、猫和兔等实验动物皮肤、角膜切口的拉伸强度的结果相符[37-38]。

但因CGF可释放的表皮生长因子量很少，提纯困难，所以目前临床上大多使用的是rhEGF，它是20世纪80年代以来基因工程领域的研究硕果，解决了表皮生长因子提纯困难的窘境，为实验室和临床相关研究带来了福音[39-41]。研究表明rhEGF优点众多，包括但不限于：具有高效性，只需要极微量就能够促进表皮细胞、成纤维细胞及内皮细胞等胞膜上含有表皮生长因子受体的细胞增殖；具有优良的生物安全性，目前几乎未在人体或动物实验中表现出不良反应；多种化学、物理及生物活性分析方法均表明rhEGF冻干粉具有长期稳定性，并且与其粉液比(rhEGF蛋白浓度)呈现正相关关系；在其研究贮藏条件下进行长期保存后，无论是冻干粉本身还是以不同浓度复配后的稀释液，均未检测到物理、化学及生物变化[42-45]。

而CGF纤维蛋白膜不仅同其他性状的CGF一样，可持续性释放血小板源性生长因子、转化生长因子β1、胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子等多种生长因子，同时兼具较为致密的三维纤维网状结构，正好可以作为各种细胞、活性蛋白或者生长因子的良好载体[46-47]。

胡亚暖等[48]报道10 µg/L为表皮生长因子诱导脂肪干细胞分化为表皮细胞的最佳诱导质量浓度，WEI 等[49]报道相较于0，1，5，100 µg/L，10 µg/L的表皮生长因子能最大程度地促进人永生化角质形成细胞的增殖和迁移。故此次实验以 10 µg/L作为成品 rhEGF溶解稀释液的实验质量浓度，使之与CGF纤维蛋白膜作用 24 h，得到CGF纤维蛋白膜联合 rhEGF 活性蛋白多肽复合物。
体外细胞培养实验结果示，人牙龈成纤维细胞和人永生化角质形成细胞在CGF+rhEGF复合纤维蛋白膜上的增殖量明显较在CGF纤维蛋白膜上的增殖量多；口腔黏膜等效损伤模型的体内修复实验结果示，与CGF纤维蛋白膜组相比，CGF+ rhEGF复合纤维蛋白膜组创面单位面积内的胶原纤维增量更大，愈合组织的抗拉伸强度更接近裸鼠正常皮肤组织。  

 以上结果可能是因为rhEGF与CGF发挥协同作用，一方面，由于外源性 rhEGF补偿了CGF纤维蛋白膜中所释放的表皮生长因子水平，直接增加了局部表皮生长因子浓度；另一方面，有报道称在损伤修复过程中，表皮生长因子可以加速肉芽组织中蛋白质及胶原等的合成，这与此次实验报道的联合应用 rhEGF及CGF组愈合组织单位面积内的胶原纤维增量更大相符[14]。有学者认为rhEGF可促进机体提高其他内源性生长因子的合成量，如转化生长因子α、血管内皮生长因子等。在损伤修复过程中rhEGF与CGF协同作用，促进细胞增殖、血管新生、胶原合成，而更多的胶原纤维生成量也进一步增加了愈合组织的抗拉伸强度。

综上所述，抽取自体静脉血后经特定程序离心，取3分层血液样品的中间层压膜，得CGF 纤维蛋白膜；将rhEGF溶解稀释液套装溶解稀释至10 µg/L，得 rhEGF活性蛋白多肽液；将CGF膜完全浸没于10  µg/L rhEGF活性蛋白多肽液中作用24 h，得到CGF纤维蛋白膜联合rhEGF 活性蛋白多肽复合物，该复合物不仅可以结合CGF纤维蛋白膜的三维纤维网状结构与rhEGF增强软组织抗拉伸强度的优点，而且易获取、操作简单、椅旁时间少、患者接受度较高，可作为临床上对于口腔黏膜上皮、固有层及黏膜下层损伤修复的潜在生物材料，也在相关组织工程支架及种子细胞的培养方面展现出良好的发展前景。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

文题释义：

富自体浓缩生长因子纤维蛋白膜：通过红色VACUETTE真空采血管采集人体肘窝静脉血，锐性分离经Medifuge离心机富自体浓缩生长因子程序差速离心后得到的3分层血液样本，可得中间层的富自体浓缩生长因子纤维蛋白，进一步使用金属压膜器，可获取具有良好三维纤维网状结构的富自体浓缩生长因子纤维蛋白膜。

口腔黏膜等效损伤：口腔黏膜中绝大部分的上皮组织与皮肤表皮都来自于外胚层，虽然两者在机体所处的位置不同，但在基本组织学结构层次上具有极大的相似性。在一定条件下，口腔黏膜的组织缺损可以由机体皮瓣转移修复。裸鼠作为一种常用的实验动物，存在口腔环境相对狭小的缺点，如果直接对其构建口腔黏膜损伤模型，在进行大体观察和切取愈合组织时操作困难且误差较大。基于口腔黏膜与皮肤的天然转化潜力以及裸鼠自身的生物学特性，此次实验把裸鼠作为生物反应器，以其背部皮肤创面构建口腔黏膜等效损伤模型。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

富自体浓缩生长因子对于软组织损伤的修复作用已得到学术界的广泛研究和肯定，但鲜有关于富自体浓缩生长因子修复组织自身机械强度的报道。重组人表皮生长因子具有一定的美白、抗皱及抗衰作用，其问世解决了内源性表皮生长因子含量少、提纯困难的窘境。基于鲜有探讨富自体浓缩生长因子与重组人表皮生长因子在组织创伤修复领域中联合应用价值的研究报道，课题组设计了分别在富自体浓缩生长因子膜与富自体浓缩生长因子+重组人表皮生长因子膜上培养人牙龈成纤维细胞和人永生化角质形成细胞HaCaT的体外实验，并以BALB/c-裸鼠为生物反应器，利用裸鼠背部皮肤构建口腔黏膜等效损伤模型,进行富自体浓缩生长因子膜与富自体浓缩生长因子+重组人表皮生长因子膜的体内修复实验。通过将实验结果进行组织形态学、免疫学及生物力学等多维度对比，探讨富自体浓缩生长因子纤维蛋白膜与重组人表皮生长因子活性蛋白多肽复合物对于口腔黏膜等效损伤的修复价值。

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