增强miR-185-5p表达可减轻小鼠实验性牙周炎的炎症反应

doi:10.12307/2023.892

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (35): 5676-5680.doi: 10.12307/2023.892

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增强miR-185-5p表达可减轻小鼠实验性牙周炎的炎症反应

李昊1，2，叶枝茂1，2，罗诒财1，2，李孔梅1，2，麦昱颖1，2，王琪3

1广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔修复科，广西壮族自治区南宁市 530021；2广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室，广西壮族自治区南宁市 530021；3四川大学华西口腔医学院口腔修复科，四川省成都市 610041

收稿日期:2022-10-19 接受日期:2022-12-13 出版日期:2023-12-18 发布日期:2023-06-05
通讯作者: 李昊，博士，主任医师，广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔修复科，广西壮族自治区南宁市 530021；广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室，广西壮族自治区南宁市 530021
作者简介:李昊，女，1984年生，湖北省武汉市人，满族，2014年四川大学华西口腔医学院毕业，博士，主任医师，主要从事口腔颌面部骨疾病方面的研究叶枝茂，男，1997年生，浙江省温州市人，汉族，广西医科大学在读硕士，主要从事口腔颌面部骨疾病方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(82060195)，项目负责人：李昊；广西医疗卫生适宜技术开发与推广应用项目(S2022118)，项目负责人：李昊

Enhanced miR-185-5p expression attenuates inflammatory responses in a mouse model of experimental periodontitis

Li Hao1, 2, Ye Zhimao1, 2, Luo Yicai1, 2, Li Kongmei1, 2, Mai Yuying1, 2, Wang Qi3

1Department of Prosthodontics, College of Stomatology, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; 2Guangxi Key Laboratory of Oral and Maxillofacial Restoration and Reconstruction, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; 3Department of Prosthodontics, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China

Received:2022-10-19 Accepted:2022-12-13 Online:2023-12-18 Published:2023-06-05
Contact: Li Hao, Department of Prosthodontics, College of Stomatology, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; Guangxi Key Laboratory of Oral and Maxillofacial Restoration and Reconstruction, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
About author:Li Hao, MD, Chief physician, Department of Prosthodontics, College of Stomatology, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; Guangxi Key Laboratory of Oral and Maxillofacial Restoration and Reconstruction, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China Ye Zhimao, Master candidate, Department of Prosthodontics, College of Stomatology, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; Guangxi Key Laboratory of Oral and Maxillofacial Restoration and Reconstruction, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 82060195 (to LH); Guangxi Medical and Health Appropriate Technology Development and Application Project, No. S2022118 (to LH)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

miR-185-5p：是一种微小RNA(microRNA)，位于人染色体 22q11.2，可调节靶基因的转录、转录后及翻译过程。研究表明miR-185-5p在免疫调节、血管生成、细胞迁移等方面起到调节作用，并在多种疾病中表现出抗炎作用，通过调节miR-185-5p的表达治疗炎症性疾病是近年来的研究热点之一。

背景：目前牙周炎的发生发展机制仍不十分明确，治疗靶点有待探讨。近年研究发现，miR-185-5p在多种疾病中表现出抗炎作用，其在牙周炎中的作用尚不清楚。
目的：探讨调节miR-185-5p表达对小鼠实验性牙周炎炎症反应的影响。
方法：C57B/6J小鼠24只随机分为正常对照组、牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组、牙周炎miR-mimics组，每组6只。除正常对照组外，其余组均构建实验性牙周炎模型。造模4周后，在牙周炎miR-mimics组小鼠双侧下颌第二磨牙近远中牙龈乳头注射100 μL含0.5 mmol/L miR-185-5p mimics的生理盐水，在牙周炎miR-NC组注射100 μL 含0.5 mmol/L阴性对照miR-NC的生理盐水，在正常对照组、牙周炎对照组注射等量生理盐水。给药8周后处死小鼠，Micro-CT检测左下颌骨，qRT-PCR检测左下颌牙龈miR-185-5p、MZB1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6基因表达，免疫组织化学染色检测小鼠右下颌牙龈MZB1、磷酸化p65 核因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6蛋白表达。

结果与结论：①Micro-CT检测显示，与牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的牙槽骨丧失减少(P < 0.05)；②qRT-PCR结果显示，牙周炎miR-mimics组的miR-185-5p表达高于正常对照组、牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组(P < 0.05)；与牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的MZB1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的mRNA表达降低(P < 0.05)；③免疫组织化学染色结果显示，与牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的MZB1、磷酸化p65核因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6蛋白表达减少(P < 0.05)；④提示增强miR-185-5p表达能抑制牙周炎炎症反应，抑制牙槽骨吸收，该作用可能与下调牙龈组织中MZB1、核因子κB通路有关。

https://orcid.org/0000-0002-4633-8256(李昊)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 牙周炎, miR-185-5p, 炎症反应, MZB1, 牙槽骨, 核因子κB

Abstract: BACKGROUND: The pathogenesis of periodontitis is still unclear, and its therapeutic target remains to be explored. Recent studies have showed that miR-185-5p has anti-inflammatory effects in many diseases. However, it is unclear whether miR-185-5p can influence the inflammatory response in periodontitis.
OBJECTIVE: To investigate the effect of regulating miR-185-5p expression on inflammatory response in experimental periodontitis in mice.
METHODS: Twenty-four C57B/6J mice were randomly divided into normal control group, periodontitis control group, periodontitis miR-NC group and periodontitis miR-mimics group (n=6 per group). Except for the normal control group, other groups were induced into experimental periodontitis. Four weeks after modeling, in the periodontitis miR-mimics group, 100 μL of normal saline containing 0.5 mmol/L miR-185-5p mimics was injected into the proximal and distal gingival papillae of bilateral mandibular second molars of mice. In the periodontitis miR-NC group, 100 μL of normal saline containing 0.5 mmol/L negative control miR-NC was injected. In the normal control group and the periodontitis control group, the same amount of normal saline was injected. After 8 weeks of administration, all mice were sacrificed. Micro-CT was used to detect the left mandibles, and qRT-PCR was used to detect the gene expression of miR-185-5p, marginal zone B and B-1 cell-specific protein (MZB1), tumor necrosis factor α (TNF-α) and interleukin 6 (IL-6) in the gingiva of left mandibles. Immunohistochemical staining was used to detect the protein expression of MZB1, phospho-p65 NF-κB (pp65), TNF-α and IL-6 in the gingiva of right mandibles.
RESULTS AND CONCLUSION: Micro-CT examination results showed that compared with the periodontitis control group and periodontitis miR-NC group, alveolar bone loss in the periodontitis miR-mimics group was decreased (P < 0.05). qRT-PCR results showed that the expression of miR-185-5p in the periodontitis miR-mimics group was higher than that in the normal control group, periodontitis control group, and periodontitis miR-NC group (P < 0.05). Compared with the periodontitis control group and periodontitis miR-NC group, the mRNA expression of MZB1, TNF-α, and IL-6 was decreased in the periodontitis miR-mimics group (P < 0.05). Immunohistochemical staining results showed that compared with the periodontitis control group and periodontitis miR-NC group, the protein expression of MZB1, pp65, TNF-α and IL-6 was decreased in the periodontitis miR-mimics group (P < 0.05). Therefore, increasing the expression of miR-185-5p can inhibit the inflammatory response in periodontitis and the resorption of alveolar bone, which may be associated with the suppression of MZB1 and nuclear fctor-κB pathway in the gingival tissue.

Key words: periodontitis, miR-185-5p, inflammatory response, MZB1, alveolar bone, nuclear factor-κB

中图分类号:

李昊, 叶枝茂, 罗诒财, 李孔梅, 麦昱颖, 王琪. 增强miR-185-5p表达可减轻小鼠实验性牙周炎的炎症反应[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(35): 5676-5680.

Li Hao, Ye Zhimao, Luo Yicai, Li Kongmei, Mai Yuying, Wang Qi. Enhanced miR-185-5p expression attenuates inflammatory responses in a mouse model of experimental periodontitis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(35): 5676-5680.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析实验选用6周龄雄性C57B/6J野生型小鼠24只，随机分成4组，每组6只，实验过程无脱失，全部进入结果分析。
2.2 各组小鼠的牙周情况造模后4周，牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组、牙周炎miR-mimics组小鼠双侧下颌第二磨牙出现牙龈充血水肿，牙周探诊出血及牙周袋形成等典型牙周炎症状。正常对照组牙周组织未出现以上症状。
2.3 左侧下颌第二磨牙周围骨组织Micro-CT检测结果 Micro-CT结果显示，与正常对照组相比，牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组和牙周炎miR-mimics组的牙槽骨丧失量较多(P < 0.05)；与牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的牙槽骨丧失量较少(P < 0.05)，牙周炎对照组与牙周炎miR-NC组之间无统计学差异(P > 0.05)。见图1。

2.4 miR-185-5p、MZB1、TNF-α、IL-6基因相对表达量检测结果 qRT-PCR检测结果显示，与正常对照组相比，牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组miR-185-5p基因表达水平降低(P < 0.05)，牙周炎miR-mimics组的miR-185-5p基因表达水平明显高于正常对照组、牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组(P < 0.05)；与正常对照组相比，牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组和牙周炎miR-mimics组的MZB1、TNF-α及IL-6基因表达水平较高(P < 0.05)；与牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的MZB1、TNF-α及IL-6基因表达水平降低(P < 0.05)，牙周炎对照组与牙周炎miR-NC组之间无统计学差异(P > 0.05)。见图2。

2.5 MZB1、pp65、TNF-α、IL-6免疫组织化学染色各组小鼠免疫组织化学染色结果见图3。MZB1、pp65、TNF-α、IL-6免疫组织化学染色平均吸光度值见图4。结果显示，与正常对照组相比，牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组和牙周炎miR-mimics组的MZB1、pp65、TNF-α及IL-6的蛋白表达量增加(P < 0.05)；与牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的MZB1、pp65、TNF-α及IL-6蛋白表达量降低(P < 0.05)；牙周炎对照组与牙周炎miR-NC组之间无统计学差异(P > 0.05)。

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引言

牙周炎是一种以细菌为始动因子的慢性感染性疾病，其临床特征为牙周袋形成、牙槽骨吸收、牙齿松动等，是失牙的主要原因[1]。目前牙周炎的治疗手段有牙周基础治疗、药物治疗、手术治疗等，但某些严重的牙周炎仅通过基础治疗或者手术治疗往往无法获得良好效果，因此，治疗牙周炎的新方法及潜在治疗靶点有待进一步研究。
微小RNA(microRNA，miRNA)是大小为19-25个核苷酸的内源性非编码短RNA分子，可调节靶基因的转录、转录后及翻译过程。miR-185-5p位于人染色体 22q11.2[2]，其在多种疾病中表现出抗炎作用，如神经病理性疼痛[3]、动脉粥样硬化等[4]，近年生物信息学研究发现，miR-185-5p可能与牙周炎进展相关，但其具体作用与机制有待探究[5-6]。边缘区B和B-1细胞特异性蛋白(marginal zone B and B-1 cell-specific protein，MZB1)，又名浆细胞诱导的常驻内质网蛋白，属于CNPY家族，2009年发现其为一种18 kD的B细胞特异性内质网定位蛋
白[7-8]。MZB1与免疫功能息息相关，是体液免疫反应期间分泌的免疫球蛋白和其他蛋白质正确折叠所必需的蛋白质[9]。近年来研究发现，在牙周炎患者的牙龈组织中，MZB1的表达在差异基因中上调最明显[10-13]，且MZB1可抑制人牙周膜细胞的迁移，与多种炎症因子表达有关，并加重牙槽骨的丧失[13]。而MZB1上存在miR-185-5p的结合位点[14-15]。这些研究提示，调节miR-185-5p的表达可能调节MZB1及其下游信号通路，有望成为牙周炎治疗的新切入点。
核因子κB是细胞中的重要转录调节因子，其家族由p50、p52、p65、c-Rel和RelB五种相关转录因子组成，在牙周炎的炎症反应中也具有重要调节作用，核因子κB进入细胞核可启动牙周组织中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)、白细胞介素6(interleukin 6，IL-6)等多种促炎细胞因子的表达，引起牙槽骨吸收破坏等[16]。
此次实验通过对小鼠口腔涂布牙龈卟啉单胞菌构建实验性牙周炎模型，并特异性调节miR-185-5p的表达，并检测牙槽骨丧失量及牙龈MZB1、核因子κB通路及下游炎症因子等变化，探讨miR-185-5p对牙周炎的影响，为探讨治疗牙周炎的新方法提供参考。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，多组间数据比较采用成组设计方差分析，组间比较采用SNK-q检验。
1.2 时间及地点实验于2020年1月至2021年6月在广西重点实验室口腔颌面修复与重建研究实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 6周龄雄性C57B/6J野生型小鼠24只，体质量16-18 g，购自广西医科大学动物实验中心，许可证号：SCXK桂2019-0023。所有实验方案均经过广西医科大学动物实验伦理委员会批准，批准号为2019-0136。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。
1.3.2 实验材料、试剂及仪器牙龈卟啉单胞菌ATCC33277(深圳子科生物科技有限公司，中国)；miR-185-5p mimics、阴性对照miR-NC(百奥迈科生物技术有限公司，中国)；TRizol裂解液及qRT-PCR检测试剂盒(TAKARA公司，中国)；兔抗多克隆抗体MZB1(proteintech，美国)；鼠抗单克隆抗体磷酸化p65核因子κB(Phospho-p65 NF-κB，pp65)、TNF-α、IL-6(Santa Cruz，美国)；通用型二抗(Santa Cruz，美国)；Micro-CT(Bioscan，美国)；光学显微镜(Leica，德国)。
1.4 实验方法
1.4.1 构建动物模型经1周适应性喂养后，将小鼠用随机数字表法随机分为正常对照组、牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组、牙周炎miR-mimics组。牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组、牙周炎miR-mimics组于7周龄接种细菌。以含109集落形成单位牙龈卟啉单胞菌(ATCC33277)活菌及2%羟甲基纤维素的100 μL PBS，对小鼠口腔涂抹接种，在5 d内隔日进行，共3次。正常对照小鼠接种含2%羟甲基纤维素的100 μL PBS。

4周后，体视显微镜下观察牙周炎各组小鼠牙龈充血、水肿、牙周探诊出血和牙周袋形成等情况，确定牙周炎形成，并在牙周炎mimics组小鼠双侧下颌第二磨牙近远中牙龈乳头缓慢注射100 μL 含0.5 mmol/L miR-185-5p mimics的生理盐水，牙周炎NC组小鼠在相同部位缓慢注射100 μL 含0.5 mmol/L miR-NC的生理盐水，正常对照组和牙周炎对照组在相同部位注射等量生理盐水，每周注射1次。小鼠的牙龈注射均在腹腔注射缩酮胺 (100 mg/kg) 和赛拉嗪 (5 mg/kg) 诱导的全身麻醉下进行。牙周注射治疗8周后，经吸入CO2对小鼠实施安乐死。

1.4.2 Micro-CT分析牙槽骨丧失量钝性分离每只小鼠左下颌第二磨牙周围牙龈，-80 ℃冻存备用，获取左下颌骨，用Micro-CT进行扫描、分析。所有样本均在70 kV、114 μA电流以及6 mm各向同性体素分辨率下进行检测。扫描后，利用重建的骨表面图像进行相同密度的三维组织形态计量学分析，测量左下颌第二磨牙周围牙骨质-牙釉质结合部和牙槽骨嵴顶之间的距离，作为骨丧失量。

1.4.3 qRT-PCR检测相关基因表达取小鼠左下颌牙龈置于冰上裂解匀浆，12 000×g离心40 min，取上清液常规提取总RNA后，用qRT-PCR检测miR-185-5p及MZB1、TNF-α、IL-6的基因表达，所有实验操作按照试剂盒说明进行，内参为β-actin。反应条件：95 ℃预变性 5 min (95 ℃变性 15 s，60 ℃退火 20 s，72 ℃延伸 45 s) ×40 个循环，72 ℃延伸 7 min。采用 2-ΔΔCT 法计算各目的基因表达量。各基因引物序列见表1。

1.4.4 免疫组织化学检测相关蛋白质表达处死小鼠后收集右侧下颌，将其在10%EDTA溶液中脱钙2周并用石蜡包埋。以5 μm厚度切片，脱蜡，水化，并用免疫组织化学染色实验检测蛋白表达。一抗MZB1(1∶200)、pp65(1∶200)、TNF-α(1∶100)、IL-6(1∶200)，二抗(1∶2 000)。染色强度用 IMAGE-PRO PLUS 6.0 软件(美国 Silver Spring 公司)统计并用平均吸光度值表示。
1.5 主要观察指标 ①小鼠左侧下颌第二磨牙骨丧失量；②小鼠左侧下颌第二磨牙周围牙龈组织miR-185-5p、MZB1、TNF-α、IL-6的基因表达；③小鼠右侧下颌第二磨牙周围牙龈组织MZB1、pp65、TNF-α、IL-6蛋白表达。
1.6 统计学分析使用 Graphpad Prism8 软件进行统计分析，多组间数据比较采用成组设计方差分析，组间比较采用SNK-q 检验，检验水准α=0.05。文章统计学方法已经广西医科大学生物统计学专家审核。

讨论

牙周炎的病理学特点是牙周支持组织的破坏，包括结合上皮、牙周膜、牙槽骨的破坏[17]，某些严重的牙周炎仅通过基础治疗或者手术治疗往往无法获得良好效果，治疗牙周炎的新方法和治疗靶点有待探究。如何减轻牙周炎患者的局部炎症和牙槽骨丧失是牙周领域关注的热点问题之一。
此次实验以小鼠左侧下颌第二磨牙周围牙骨质-牙釉质结合部和牙槽骨嵴之间的距离为观察指标，研究了miR-185-5p在牙周炎中对牙槽骨丧失的影响，结果发现，与正常对照组相比，牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组的龈组织miR-185-5p表达降低，且骨丧失量高，而对牙周炎miR-mimics组使用miR-185-5p mimics提高龈组织miR-185-5p表达后，骨丧失量降低，提示miR-185-5p低表达在牙周炎牙槽骨吸收中具有重要作用，增加其表达可抑制牙槽骨丧失。miRNA是近年来研究的热点问题之一，既往研究显示某些miRNA对牙周炎有调节作用[18]。有研究表明，miR-185-5p在动脉粥样硬化等疾病中发挥抗炎作用[3-4]，且其在炎症反应时能调节破骨细胞的激活和骨吸收[19]。近年生物信息学研究发现，miR-185-5p可能与牙周炎进展相关，在牙周炎状态下，miR-185-5p表达下调[5-6]，但miR-185-5p对牙周炎的影响及机制还有待探究。
为进一步研究miR-185-5p对实验性牙周炎的作用，此次实验还检测了MZB1基因和蛋白的表达，结果显示，与正常对照组相比，牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组的龈组织MZB1表达增加，与牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的MZB1表达降低，提示MZB1对牙周炎具有促进作用，而miR-185-5p可抑制MZB1表达，抑制牙周炎症反应。既往研究显示，MZB1与一些炎症疾病有关，如类风湿性关节炎[20]、脊椎关节炎[20]、青少年特发性关节炎相关葡萄膜炎[21]、新冠肺炎等[22]。近年来MZB1与牙周炎的关系也有报道，但绝大多数仅局限于生物信息学分析，某些基因组学、转录组学、蛋白质组学、单细胞RNA测序分析等研究显示MZB1的高表达与牙周炎加剧有关[10-13]。还有研究显示，MZB1上存在miR-185-5p的结合位点，提示miR-185-5p可靶向调节MZB1，进而调节牙周炎等炎症反应[14-15]。
此次实验观察到，与正常对照组相比，牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组的龈组织中pp65蛋白表达量增加，而与牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的pp65表达降低，提示增强miR-185-5p表达可降低牙龈组织中核因子κB磷酸化水平。核因子κB的激活可导致多种细胞因子产生，参与炎症反应的发生发展[23-24]。核因子κB通路在牙周炎的炎症反应中也具有重要调节作用，核因子κB进入细胞核可启动牙周组织中TNF-α、IL-6等促炎细胞因子产生，促进组织破坏，并抑制组织再生修复[16]。最新研究显示，抑制miR-185-5p表达可增强核因子κB信号通路激活，从而抑制牙周膜细胞迁移，加重牙周炎的炎症反应[13]。
此次实验还发现，与正常对照组相比，牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组的龈组织中TNF-α、IL-6表达增加，而与牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组相比，牙周炎miR-mimics组的TNF-α、IL-6表达量降低，提示升高miR-185-5p的表达水平能抑制IL-6、TNF-α的产生，从而抑制牙周炎的炎症反应。TNF-α、IL-6作为促炎因子，在牙周炎牙周组织中常过度表达[25]。
作为核因子κB通路调节的炎症因子，核因子κB的激活可导致TNF-α与IL-6表达增加[16]。既往研究显示，TNF-α、IL-6的表达增加与miR-185-5p的表达降低有关[26]；作为miR-185-5p的靶基因，MZB1可调节核因子κB信号通路的激活，敲除MZB1后，p65核因子κB的磷酸化受到抑制[13]，提示miR-185-5p可能通过MZB1、核因子κB通路调节炎症因子表达，发挥抑制炎症的作用。然而，MZB1与核因子κB的相互作用机制尚不明确。
综上所述，增强miR-185-5p表达可抑制牙周炎炎症反应，抑制骨吸收，该作用可能与抑制牙龈组织MZB1、核因子κB通路有关。这项研究提示，特异性调节miR-185-5p在牙周炎治疗方面具有潜在的应用价值，并可为进一步研究其机制提供依据。然而需要进一步实验研究，如构建敲除MZB1的牙周炎模型，并调节miR-185-5p的表达，检测MZB1、核因子κB通路等，进一步探究miR-185-5p在牙周炎中的作用机制。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

增强miR-185-5p表达可减轻小鼠实验性牙周炎的炎症反应

Enhanced miR-185-5p expression attenuates inflammatory responses in a mouse model of experimental periodontitis

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