阿尔茨海默病发病机制相关基因生物信息学分析及实验验证

doi:10.12307/2023.855

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (35): 5653-5658.doi: 10.12307/2023.855

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阿尔茨海默病发病机制相关基因生物信息学分析及实验验证

李欣儒1，2，柴世凡1，2，李蔚然1，2，蔡红艳3，叶育采1，2，李硕4，侯萌4，王昭君1，2

1山西医科大学，山西省太原市 030000；2山西医科大学生理学系；细胞生理学教育部重点实验室；山西省细胞生理学重点实验室，山西省太原市 030000；3 山西医科大学基础医学院微生物与免疫教研室，山西省太原市 030000；4山西医科大学附属第二医院，山西省太原市 030001

收稿日期:2022-10-21 接受日期:2022-12-09 出版日期:2023-12-18 发布日期:2023-06-02
通讯作者: 王昭君，博士，副教授，山西医科大学，山西省太原市 030000；山西医科大学生理学系；细胞生理学教育部重点实验室；山西省细胞生理学重点实验室，山西省太原市 030000
作者简介:李欣儒，男，1997年生，辽宁省沈阳市人，汉族，山西医科大学在读硕士，主要从事阿尔茨海默病等神经退行性疾病的机制研究。
基金资助:
国家自然科学基金委员会面上项目(82171428)，项目负责人：蔡红艳；山西省科技厅山西省基础研究自然科学研究面上项目(20210302123306)，项目负责人：王昭君；山西省“四个一批”科技兴医创新计划-重点攻关专项(2021XM33)，项目负责人：蔡红艳

Bioinformatics analysis and experimental validation of genes related to the pathogenesis of Alzheimer's disease

Li Xinru1, 2, Chai Shifan1, 2, Li Weiran1, 2, Cai Hongyan3, Ye Yucai1, 2, Li Shuo4, Hou Meng4, Wang Zhaojun1, 2

1Shanxi Medical University, Taiyuan 030000, Shanxi Province, China; 2Department of Physiology, Shanxi Medical University; Key Laboratory of Cellular Physiology, Ministry of Education; Key Laboratory of Cellular Physiology in Shanxi Province, Taiyuan 030000, Shanxi Province, China; 3Department of Microbiology and Immunology, School of Basic Medical Sciences, Shanxi Medical University, Taiyuan 030000, Shanxi Province, China; 4Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China

Received:2022-10-21 Accepted:2022-12-09 Online:2023-12-18 Published:2023-06-02
Contact: Wang Zhaojun, MD, Associate professor, Shanxi Medical University, Taiyuan 030000, Shanxi Province, China; Department of Physiology, Shanxi Medical University; Key Laboratory of Cellular Physiology, Ministry of Education; Key Laboratory of Cellular Physiology in Shanxi Province, Taiyuan 030000, Shanxi Province, China
About author:Li Xinru, Master candidate, Shanxi Medical University, Taiyuan 030000, Shanxi Province, China; Department of Physiology, Shanxi Medical University; Key Laboratory of Cellular Physiology, Ministry of Education; Key Laboratory of Cellular Physiology in Shanxi Province, Taiyuan 030000, Shanxi Province, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China (General Program), No. 82171428 (to CHY); Natural Science Research Foundation of Shanxi Provincial Department of Science and Technology (General Program), No. 20210302123306 (to WZJ); Shanxi Provincial Science and Technology for Medical Innovation Program - Key Research Project, No. 2021XM33 (to CHY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

阿尔茨海默病：是一种起病隐匿的神经退行性疾病。临床上表现为进行性记忆功能丧失、失语、认知行为能力损害乃至丧失生活自理能力。
GEO数据库：是一个蕴含高通量测序数据的免费公共数据库。科学研究可以与之相结合，判断疾病的潜在变异基因或药物的潜在作用靶点。

背景：阿尔茨海默病的机制挖掘十分重要，通过生物信息学对阿尔茨海默病潜在治疗靶点的研究，可以为阿尔茨海默病治疗提供良好的指示作用。
目的：使用生物信息学分析方法筛选与阿尔茨海默病发病机制相关的基因并在动物水平加以实验验证。
方法：利用GEO在线数据库筛选差异基因；利用DAVID在线数据库进行GO/KEGG富集分析；使用STRING数据库进行蛋白互作网络的构建；使用HPA数据库判断目的蛋白在人体中的分布情况；最后使用免疫荧光技术和免疫印迹技术验证分析蛋白表达情况。

结果与结论：①利用GEO在线数据库内数据集GSE48350获取阿尔茨海默病与健康人群的基因芯片，使用GEO2R在线分析平台分析两个人群的差异基因，其中上调基因42个，下调基因131个；②GO基因功能注释分析结果显示差异基因主要位于突触前、运输囊泡和胞外囊泡；介导神经递质释放和突触小泡功能等生物进程；参与磷脂结合、受体-配体活性和网格蛋白结合等分子功能的构成；③KEGG通路分析结果显示差异基因主要富集于神经活性配体-受体相互作用、γ-氨基丁酸神经突触与逆行内源性大麻素信号等突触功能相关信号通路；④结合蛋白互作网络筛选出5个上调关键基因：CLU、GFAP、CD44、FOS、ANXA1；5个下调关键基因：GABRG2、SYT1、SYN2、KCNC1、SLC32A1；⑤实验证实在阿尔茨海默病小鼠模型的海马组织中GABRG2、KCNC1、SLC32A1表达显著下调；⑥结果提示上述3个基因可以作为治疗和诊断阿尔茨海默病的潜在基因，为阿尔茨海默病的治疗提供重要的线索，亦可以作为阿尔茨海默病与癫痫的共治疗靶点。

https://orcid.org/0000-0002-3948-882X(李欣儒)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: GEO数据库, 阿尔茨海默病, 癫痫, 生物信息学, GABRG2, KCNC1, SLC32A1

Abstract: BACKGROUND: The mechanism mining of Alzheimer’s disease is very important and bioinformatics is an effective prediction technology for the potential targets of Alzheimer’s disease.
OBJECTIVE: To screen the genes related to the pathogenesis of Alzheimer’s disease and verify them at the animal level by bioinformatics analysis.
METHODS: Differentially expressed genes were screened through the GEO online database. GO/KEGG enrichment analysis was performed using the DAVID online database. A protein-protein interaction network was constructed using the STRING database. Target protein distribution in human was identified using the HPA database. Finally, protein expression was analyzed using immunofluorescence and western blot techniques.
RESULTS AND CONCLUSION: Gene chips for Alzheimer’s disease and healthy populations were obtained using GSE48350, a dataset within the GEO online database, and the GEO2R online analysis platform was used to analyze the differentially expressed genes between the two populations, including 42 up-regulated genes and 131 down-regulated genes. Results of the GO enrichment analysis suggested that the differentially expressed genes were mainly located in presynaptic, transport vesicles and extracellular vesicles, to mediate biological processes such as neurotransmitter release and synaptic vesicle function. KEGG pathway analysis results showed that differentially expressed genes were mainly enriched in synaptic function-related signaling pathways such as neuroactive ligand-receptor interactions, γ-aminobutyric acid synapses and retrograde endogenous cannabinoid signaling. Based on the protein interaction network, five up-regulated hub genes (CLU, GFAP, CD44, FOS, ANXA1) and five down-regulated hub genes (GABRG2, SYT1, SYN2, KCNC1, SLC32A1) were identified. It was confirmed that the expression of GABRG2, KCNC1, and SLC32A1 in the hippocampal tissue in a mouse model of Alzheimer’s disease were significantly downregulated. To conclude, these three genes can be used as potential genes for the treatment and diagnosis of Alzheimer’s disease and provide important clues for the treatment of Alzheimer’s disease. GABRG2, KCNC1 and SLC32A1 are also co-therapeutic targets for Alzheimer’s disease and epilepsy.

Key words: GEO database, Alzheimer’s disease, epilepsy, bioinformatics, GABRG2, KCNC1, SLC32A1

中图分类号:

李欣儒, 柴世凡, 李蔚然, 蔡红艳, 叶育采, 李硕, 侯萌, 王昭君. 阿尔茨海默病发病机制相关基因生物信息学分析及实验验证[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(35): 5653-5658.

Li Xinru, Chai Shifan, Li Weiran, Cai Hongyan, Ye Yucai, Li Shuo, Hou Meng, Wang Zhaojun. Bioinformatics analysis and experimental validation of genes related to the pathogenesis of Alzheimer's disease [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(35): 5653-5658.

图/表（结果） 9

2.1 阿尔茨海默病患者与对照人群海马组织中差异基因表达情况使用GEO2R在线分析软件对阿尔茨海默病患者及健康受试者海马组织中差异基因进行分析，共有173个差异基因符合筛选标准，其中上调基因42个，下调基因131个。表1和表2展示了排名前20的上调及下调基因。使用R包(v4.0.3)绘制了差异基因的火山图及热图，见图1。

2.2 差异基因的GO富集分析和KEGG通路分析使用DAVID在线数据库进行GO富集分析及KEGG通路分析，结果显示：差异基因主要富集在信号释放、神经递质转运、突触小泡周期(生物过程)；突触前、运输囊泡、胞外囊泡(细胞组分)；磷脂结合、受体-配体活性、网格蛋白结合(分子功能)。KEGG信号通路主要为神经活性配体-受体相互作用、γ-氨基丁酸神经突触，逆行内源性大麻素信号。上述均与突触功能相关，使用R包可视化并展示了排名前10的GO富集结果和全部的KEGG结果，见图2。

2.3 蛋白互作网络的构建及关键基因的筛选结果根据蛋白关联度筛选出了5个上调的关键基因：CLU、GFAP、CD44、FOS、ANXA1；5个下调的关键基因：GABRG2、SYT1、SYN2、KCNC1、SLC32A1。可视化结果见图3。通过对关键基因功能的初步查询，下调关键基因的功能符合作者的猜想，因此选用下调的关键基因进行进一步的GO/KEGG分析。

2.4 下调关键基因在体内的分布情况为了确定实验正确的取材来源，使用HPA数据库对GABRG2、SYT1、SYN2、KCNC1、SLC32A1等5个基因的分布情况进行分析，分析结果证实5个基因均首要表达于脑组织，见图4。因此选用3xTg小鼠的脑海马组织进行后续研究。

2.5 下调关键基因的GO富集分析和KEGG通路分析结果使用DAVID在线数据库对GABRG2、SYT1、SYN2、KCNC1、SLC32A1等5个基因进行GO富集分析及KEGG通路分析。生物过程主要富集在突触小泡周期、突触释放信号、神经递质分泌；细胞组分主要富集在突触前、胞外囊泡膜、突触小泡膜；分子功能主要富集在阴离子跨膜转运蛋白活性、次级活性单羧酸跨膜转运蛋白活性、苯二氮卓受体活性；KEGG信号通路主要为γ-氨基丁酸神经突触、突触囊泡循环、尼古丁成瘾。功能亦主要与突触功能相关，可视化结果见图5。

2.6 下调关键基因的免疫荧光结果使用免疫荧光技术对WT及3xTg小鼠脑海马组织中GABRG2、KCNC1与SLC32A1表达情况进行分析，见图6。GABRG2、KCNC1与SLC32A1在3xTg组的荧光强度均显著低于WT组(P < 0.001，n=6)。GABRG2、KCNC1与SLC32A1在WT组和3xTg组的荧光强度分别为：GABRG2 (WT：58.78±11.81，3xTg：21.50±7.50)；KCNC1 (WT：59.25±7.44，3xTg：25.00±6.61)；SLC32A1(WT：56.07±6.41，3xTg：24.04±7.51)。与WT对照组相比，3xTg组GABRG2、KCNC1与SLC32A1表达量均显著下调，GABRG2、KCNC1与SLC32A1是阿尔茨海默病模型中的下调基因，可以作为阿尔茨海默病的潜在治疗靶点。

2.7 下调关键基因的免疫印迹结果使用免疫印迹技术对WT及3xTg小鼠脑海马组织中GABRG2、KCNC1与SLC32A1表达情况进行分析，见图7。GABRG2、KCNC1与SLC32A1在3xTg组的相对表达量均显著低于WT组(GABRG2、KCNC1，P < 0.05，n=3；SLC32A1，P < 0.01，n=3)。GABRG2、KCNC1与SLC32A1在WT组和3xTg组的相对表达量分别为：GABRG2 (WT：0.93±0.12，3xTg：0.69±0.02)；KCNC1 (WT：0.77±0.06，3xTg：0.65±0.02)；SLC32A1(WT：0.98±0.19，3xTg：0.39±0.06)。与免疫荧光实验结果相同，与WT对照组相比，3xTg组GABRG2、KCNC1与SLC32A1表达量均显著下调。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，组间差异采用t检验进行分析。
1.2 时间及地点实验于2022年8-10月在山西医科大学细胞生理学实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物实验采用12月龄APP/PS1/Tau(3xTg)转基因小鼠及其同背景C57B6/129野生型小鼠(WT)，体质量均为35 g左右，30只雄性3xTg小鼠购于美国Jackson Laboratory公司(stock number: 34830-JAX)；30只雄性对照小鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司。饲养于山西医科大学动物实验中心三级无特定病原体(SPF级)动物房，湿度30%-50%，室温20-25 ℃，光照和黑暗各12 h交替循环保证正常的昼夜节律，饮水进食充足。
实验方案经山西医科大学动物实验伦理委员会批准，审批号为SYDL2021008。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2 实验试剂和仪器兔抗小鼠SLC32A1一抗购于Proteintech Group, Inc.，美国，货号：14471-1-AP，免疫荧光稀释比例1∶200，免疫印迹稀释比例1∶1 000；兔抗小鼠KCNC1一抗购于江苏亲科生物研究中心有限公司(Affinity Biosciences)，货号：DF4314，免疫荧光稀释比例1∶300，免疫印迹稀释比例1∶1 000；兔抗小鼠GABRG2一抗购于艾博抗上海贸易有限公司(Abcam)，货号EPR25325，免疫荧光稀释比例1∶500，免疫印迹稀释比例1∶1 000；FITC山羊抗兔 IgG (H+L)购于武汉爱博泰克生物科技有限公司(ABclonal Technology Co.,Ltd.)，货号：AS011，稀释比例1∶100；HRP山羊抗兔IgG (H+L)购于武汉爱博泰克生物科技有限公司，货号：AS014，稀释比例1∶5 000。
1.4 方法
1.4.1 数据来源在GEO数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)中，根据下列标准进行数据筛查：①具有阿尔茨海默病样本和对照样本的数据集；②研究目标是人类脑内海马组织。数据集GSE48350符合要求，该数据集包含19例阿尔茨海默病患者和43名健康对照者的脑组织，脑组织来自ADRC脑库。基因数据来自人脑海马、内脑皮质、额上皮质和中央后回4个部位，该研究选择海马组织作为研究目标。
1.4.2 差异基因筛选使用GEO2R在线分析软件(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r/)对阿尔茨海默病及健康受试者海马组织中差异基因进行分析，差异基因筛选标准为：P < 0.05，| logFC |≥1。随后使用R包(v4.0.3)进行可视化处理。
1.4.3 差异基因的GO富集分析和KEGG通路分析 GO富集分析包含3个模块，分为生物过程(biological process，BP)、细胞组分(cellular component，CC)和分子功能(molecular function，MF)。KEGG则可以在分子通路水平研究特定的生物进程。使用DAVID在线数据库(https://david.ncifcrf.gov/)进行GO富集分析及KEGG通路分析。P < 0.05为差异有显著性意义。随后使用R包(v4.0.3)进行可视化。
1.4.4 蛋白互作网络的构建及关键基因的筛选使用STRING1数据库(http://string-db.org)进行蛋白互作网络分析，随后使用Cytoscape软件进行可视化处理。使用Cytoscape软件中的cytoHubba插件，根据基因的链接程度筛选关键基因，并选择连接度最高的5个基因。
1.4.5 关键基因的分布情况 Human Protein Atlas(HPA)数据库(https://www.proteinatlas.org)是记录特定蛋白质在人体组织、细胞和器官内分布情况的数据库。通过对HPA数据库的查询，可以得知特定蛋白在人体内的分布情况。该研究使用HPA数据库来观察下调关键基因是否主要表达于脑组织，以供后续实验目标的选择。
1.4.6 动物实验验证
(1)免疫荧光实验：3xTg和WT小鼠灌注取脑后，冰冻切片，使脑组织切片厚度为30 μm，使用40 g/L多聚甲醛4 ℃固定脑切片30 min，PBS清洗5次，每次5 min；随后加入1% TritonX-100室温孵育15 min，PBS清洗5次，每次5 min；5% BSA室温封闭60 min后，弃去封闭液直接滴加GABRG2、KCNC1和SLC32A1一抗，4 ℃孵育过夜，次日吸去一抗，PBS清洗5次，每次5 min；随后加入荧光二抗，37 ℃避光孵育1 h，PBS清洗；加入DAPI染色液常温染色10 min，PBS清洗；使用抗淬灭试剂封固，置于荧光显微镜下观察，并用Image J 8.0软件对荧光强度进行分析。
(2)免疫印迹实验：3xTg和WT小鼠脱颈处死后取出完整脑，剥离出海马组织；将海马组织在冰上剪成碎块后加入蛋白酶抑制剂、RIPA裂解液充分吹打混匀；使用超声破碎仪破碎组织，超声时间2 s/间隔2 s，根据破碎情况决定破碎次数，然后在冰上裂解30 min；再次超声破碎处理直至无黏稠，在高速离心机中13 000 r/min离心25 min，分层提取上清即为蛋白溶液，使用BCA蛋白测定法进行蛋白定量(30 μg/μL)，95 ℃煮样5 min充分变性；随后分离胶在下、浓缩胶在上，加入Maker 5 μL和样品10 μL进行电泳；从负极到正极依次为超厚滤纸、凝胶、PVDF膜、超厚滤纸，半干转膜20 min；随后放在脱脂奶粉中室温封闭2 h；加入对应一抗(与免疫荧光实验一致)4 ℃过夜，次日加入对应二抗(HRP山羊抗兔IgG)室温反应1 h；室温下使用ECL发光液孵育2 min，曝光机曝光，最后使用Image J对条带的灰度值进行分析。
1.5 主要观察指标 GABRG2、KCNC1和SLC32A1在3xTg小鼠和对照小鼠脑海马组织中的表达情况。
1.6 统计学分析采用GraphPad Prism 8.0软件进行数据统计学处理以及绘图，数据以x±s表示，使用t检验进行分析，P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经通过山西医科大学生物统计学专家审核。

讨论

阿尔茨海默病的机制研究一直在进行，目前主流的是β淀粉样蛋白学说和Tau蛋白学说[4-7]。针对这些学说的治疗靶点也有很多，但是都不能在根本上治疗阿尔茨海默病。正如前文所述，生物信息学技术是一种能够将疾病与信息学相结合的优秀技术。因此可以尝试将生物信息学与疾病靶点预测相结合，尝试挖掘出对疾病治疗有效的靶点及药物。根据GO/KEGG富集分析结果得知，关键基因多富集在突触功能上。对所有下调关键基因的功能进行查询，GABRG2、KCNC1与SLC32A1均参与到突触功能的调控中，因此将这3个蛋白作为此次研究的重点。通过实验发现GABRG2、KCNC1与SLC32A1在阿尔茨海默病中表达显著下调，提示这3个基因是阿尔茨海默病的潜在治疗基因。
通过检索文献进一步了解关键基因的意义。GABRG2的全称是γ-氨基丁酸A型受体γ2亚基(gamma-aminobutyric acid A receptor, subunit gamma 2)，是一种编码γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid，GABA)A 型受体的亚基[4，8]。GABA-A 型受体具有多个亚基，例如α1-6、β1-3、γ1-3、δ、ε、π、θ和ρ1-3[9]，其中γ2由GABRG2编码并发挥作用。GABA-A型受体参与诸多大脑功能的调控，比如兴奋性传递、摄食功能和认知功能。目前针对GABRG2的研究多与癫痫相关[10]，尚无阿尔茨海默病相关的研究。该实验发现在阿尔茨海默病中GABRG2显著下调，GABRG2与阿尔茨海默病有潜在的联系可供探讨。
KCNC1即电压门控钾通道C家族成员1(potassium voltage-
gated channel subfamily C member 1)，是一种离子通道蛋白[5，11]，
主要表达在抑制性γ-氨基丁酸能中间神经元和小脑神经元[12]。电压门控钾通道(voltage-gated potassium channels，Kv)是一组特定的钾通道，它们随着细胞膜上电压的变化而开启和关闭，它们被划分为12个亚型：Kv1-Kv12。KCNC1参与编码Kv3.1通道，钾离子通道病与多种人类疾病有关，包括癫痫、发育迟缓和共济失调[13-15]。Kv3通道功能受损会影响快速峰值神经元的放电，导致神经递质释放失调，进而引起神经细胞死亡[16-17]。目前尚无KCNC1与阿尔茨海默病相关性的研究，该研究发现KCNC1在阿尔茨海默病中的表达显著下调，提示阿尔茨海默病神经细胞功能障碍亦与KCNC1相关，KCNC1可以作为阿尔茨海默病的一个潜在治疗靶点。
SLC32A1(Solute Carrier Family 32 Member 1)是一种编码膜蛋白的蛋白质编码蛋白，SLC32A1可以将γ-氨基丁酸和甘氨酸摄取到突触囊泡内[6]。SLC32家族由单个成员组成：囊泡抑制性氨基酸转运体(vesicular inhibitory amino acid transporter，VIAAT)或囊泡γ-氨基丁酸转运体(vesicular GABA transporter，VGAT)。VIAAT能够将氨基丁酸或甘氨酸交换为质子状态，VIAAT存在于γ-氨基丁酸神经元和甘氨酸神经元的突触囊泡中以及一些内分泌细胞中，它可以诱导H(+)-ATP酶驱动的抑制性氨基酸的摄取和随后的胞外释放[18]。研究证实，SLC32A1的错义变异会影响γ-氨基丁酸向突触囊泡的转运，影响正常的神经元功能并诱发发热性癫痫和遗传性癫痫[7]。
GABRG2、KCNC1与SLC32A1均与γ-氨基丁酸神经元功能相关，阿尔茨海默病通常伴随记忆功能丧失、神经递质水平异常和神经功能受损，而γ-氨基丁酸是中枢神经系统中最主要的抑制性神经递质。γ-氨基丁酸可以通过抑制兴奋性神经元来动态调控神经网络，因此γ-氨基丁酸对阿尔茨海默病等神经系统退行性疾病有不可或缺的作用[19]。大量实验均证实γ-氨基丁酸表达水平在阿尔茨海默病中显著下降[20-23]，
γ-氨基丁酸相关蛋白GABRG2、KCNC1与SLC32A1在阿尔茨海默病中也显著下调，以往的实验与作者的实验结果不谋而合。因此GABRG2、KCNC1与SLC32A1可以作为阿尔茨海默病的潜在治疗靶点。
正如前文所述，GABRG2、KCNC1与SLC32A1是癫痫有意义的研究靶点，该实验发现这3个γ-氨基丁酸能神经元相关蛋白与阿尔茨海默病亦具有相关性。众所周知，癫痫最典型表现是异常的脑电活动。2019年在美国洛杉矶举行的阿尔茨海默病协会国际会议(AAIC)上指出，阿尔茨海默病会导致神经元的缺少和死亡，大量坏死的神经元会导致异常的脑电活动并诱导癫痫的发作，阿尔茨海默病患者的癫痫发作频率明显增高并且极易复发[24]。因此探索阿尔茨海默病与癫痫的共享机制可以更好地在治疗阿尔茨海默病的同时，减少癫痫的发生频率并改善患者的预后。针对上述观点，该实验推测GABRG2、KCNC1与SLC32A1或许可以作为阿尔茨海默病和癫痫研究相连接的枢纽，为阿尔茨海默病和癫痫的共性治疗提供更多的选择。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

阿尔茨海默病发病机制相关基因生物信息学分析及实验验证

Bioinformatics analysis and experimental validation of genes related to the pathogenesis of Alzheimer's disease

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