骨痹散干预膝骨关节炎兔软骨组织相关信号通路的变化

doi:10.12307/2023.812

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (35): 5622-5627.doi: 10.12307/2023.812

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骨痹散干预膝骨关节炎兔软骨组织相关信号通路的变化

李东东1，陈光友1，李晓明2，吴雪莲2，朱凯1，雷杨1，易露1

1西南医科大学附属中医医院骨伤科，四川省泸州市 646000；2西南医科大学康复医学系，四川省泸州市 646000

收稿日期:2022-08-16 接受日期:2022-10-27 出版日期:2023-12-18 发布日期:2023-06-02
通讯作者: 陈光友，博士，副教授，副主任中医师，西南医科大学附属中医医院骨伤科，四川省泸州市 646000
作者简介:李东东，男，1983年生，2011年成都中医药大学毕业，硕士，主治中医师，主要从事脊柱与骨关节疾病方面的研究。
基金资助:
西南医科大学附属中医医院课题(2018XYLH-019)，项目负责人：陈光友

Effects of Gubi Powder on cartilage tissue-related signaling pathways in rabbits with knee osteoarthritis

Li Dongdong1, Chen Guangyou1, Li Xiaoming2, Wu Xuelian2, Zhu Kai1, Lei Yang1, Yi Lu1

1Department of Orthopedics and Traumatology, Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China; 2Department of Rehabilitation Medicine, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China

Received:2022-08-16 Accepted:2022-10-27 Online:2023-12-18 Published:2023-06-02
Contact: Chen Guangyou, MD, Associate professor, Associate chief physician, Department of Orthopedics and Traumatology, Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
About author:Li Dongdong, Master, Attending physician, Department of Orthopedics and Traumatology, Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
Supported by:
Project of the Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine, Southwest Medical University, No. 2018XYLH-019 (to CGY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

膝骨关节炎：主要因素有软骨基质合成和分解代谢失调、软骨下骨板损害使软骨失去缓冲作用、关节内局限性炎症等，导致膝关节出现疼痛、活动障碍、晨僵等一系列症状和体征。
Wnt/β-catenin信号通路：是调节骨关节炎的重要通路之一。Wnt/β-catenin信号通路的激活会影响软骨细胞的正常增殖、分化和凋亡，软骨基质降解，导致骨关节炎的发生。

背景：Wnt 信号转导的活化与膝骨关节炎的发病机制密切相关，当前对 Wnt 信号通路的研究侧重于 Wnt/β-catenin信号通路及其激活或抑制蛋白的表达。
目的：观察院内协定处方骨痹散对膝骨关节炎模型兔体内炎症因子与Notch3/Hes1及Wnt/β-catenin信号通路的影响，为临床治疗提供新的用药思路。
方法：将40只新西兰大白兔随机分为假手术组、模型组、阳性组与骨痹散组，每组10只，使用改良Hulth法构建兔膝骨关节炎模型，持续造模8周，模型构建完毕后假手术组、模型组膝骨关节处涂抹生理盐水，阳性组涂抹双氯芬酸钾凝胶，骨痹散组涂抹骨痹散，每天敷8 h，连续1周。给药完毕后观察动物活动情况并进行行为学评分，ELISA法检测血清中前列腺素E2、环氧化酶2、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平，苏木精-伊红染色与番红O染色观察软骨组织病变情况，免疫组织化学法检测膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶1，2，3，13蛋白的表达水平，Western blot法检测膝关节软骨组织中Notch3、Hes1、Wnt5a、β-catenin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平。

结果与结论：①与假手术组相比，模型组动物行走困难，膝关节软骨组织损伤严重，血清中前列腺素E2、环氧化酶2、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平升高(P < 0.05)，软骨组织中基质金属蛋白酶1，2，3，13和Bax、Caspase-3、Wnt5a、β-catenin蛋白表达升高(P < 0.05)，Notch3、Hes1、Bcl-2蛋白表达降低(P < 0.05)；②与模型组相比，骨痹散组动物行走情况良好，血清中前列腺素E2、环氧化酶2、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平降低(P < 0.05)，膝关节软骨组织损伤减轻，软骨组织中基质金属蛋白酶1，2，3，13和Bax、Caspase-3、Wnt5a、β-catenin蛋白表达降低(P < 0.05)，Notch3、Hes1、Bcl-2蛋白表达升高(P < 0.05)；③结果表明，院内协定处方骨痹散能减轻兔膝骨关节炎的症状，改善软骨组织病变，减少血清中炎症因子水平，作用机制可能与调控Notch3/Hes1、Wnt/β-catenin信号通路有关。

https://orcid.org/0000-0003-2652-1528(李东东)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 膝骨关节炎, 骨痹散, 软骨组织, 兔, 中药复方, Wnt, β-catenin, Notch3, Hes1

Abstract: BACKGROUND: Activation of Wnt signaling is closely related to the pathogenesis of knee osteoarthritis. Current research on the Wnt signaling pathway has focused on the Wnt/β-catenin signaling pathway and the expression of its activation or inhibition proteins.
OBJECTIVE: To observe the effect of Gubi Powder, an in-hospital prescription, on inflammatory factors and Notch3/Hes1 and Wnt/β-catenin signaling pathways in rabbits with knee osteoarthritis model, providing new drug ideas for clinical treatment.
METHODS: Forty New Zealand rabbits were divided into sham operation group, model group, positive group (diclofenac potassium gel) and Gubi Powder group, with 10 rabbits in each group. The modified Hulth method was used to construct the rabbit knee osteoarthritis model, which lasted for 8 weeks. After modeling, normal saline was applied to the knee joints of the sham operation group and model group, diclofenac potassium gel was applied to the positive group, and Gubi Powder was applied to the Gubi Powder group, 8 hours a day, for 1 week. After administration, animal activity and behaviors were evaluated and scored; serum levels of prostaglandin E2, cyclooxygenase-2, interleukin 1β and tumor necrosis factor α were determined by ELISA; pathological changes of cartilage tissue were observed by hematoxylin-eosin staining and Safranin-O staining; protein levels of matrix metalloproteinases 1, 2, 3, and 13 in cartilage tissue of the knee joint were determined by immunohistochemistry; and protein levels of Notch3, Hes1, Wnt5a, β-catenin, Bcl-2, Bax, and Caspase-3 in cartilage tissue of the knee joint were determined by western blot assay.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the sham operation group, animals in the model group had difficulties in walking, serious cartilage injury in the knee joint, significantly elevated levels of serum prostaglandin E2, cyclooxygenase 2, interleukin 1β and tumor necrosis factor α (P < 0.05), significantly increased protein expression levels of matrix metalloproteinases 1, 2, 3, and 13, Bax, Caspase-3, Wnt5a and β-catenin in cartilage tissue (P < 0.05), and decreased protein expression levels of Notch3, Hes1, and Bcl-2 (P < 0.05). Compared with the model group, the walking condition of animals in the positive group and Gubi Powder group was improved, the serum levels of prostaglandin E2, cyclooxygenase-2, interleukin 1β and tumor necrosis factor α were decreased, cartilage damage of the knee was alleviated, the protein expression levels of matrix metalloproteinases 1, 2, 3, and 13, Bax, Caspase-3, Wnt5a and β-catenin in cartilage tissue were reduced (P < 0.05), and the protein expression levels of Notch3, Hes1, and Bcl-2 were increased (P < 0.05). To conclude, Gubi Powder can alleviate the symptoms of knee osteoarthritis in rabbits, improve the pathological changes of the cartilage, and reduce inflammatory factor levels in serum. The mechanism of action may be related to the inhibition of Notch3/Hes1 and Wnt/β-catenin signaling pathways.

Key words: knee osteoarthritis, Gubi Powder, cartilage tissue, rabbit, Chinese herbal compound, Wnt, β-catenin, Notch3, Hes1

中图分类号:

李东东, 陈光友, 李晓明, 吴雪莲, 朱凯, 雷杨, 易露. 骨痹散干预膝骨关节炎兔软骨组织相关信号通路的变化[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(35): 5622-5627.

Li Dongdong, Chen Guangyou, Li Xiaoming, Wu Xuelian, Zhu Kai, Lei Yang, Yi Lu. Effects of Gubi Powder on cartilage tissue-related signaling pathways in rabbits with knee osteoarthritis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(35): 5622-5627.

图/表（结果） 9

2.1 实验动物数量分析共44只新西兰大白兔参加实验，其中4只用于验证模型是否成功，另外40只兔均进入结果分析，中途无脱落。
2.2 各组兔的一般行为给药结束后，假手术组动物饮食正常，奔跑与活动未出现障碍；模型组动物出现食欲不振、活动减少、行走不便、奔跑困难等情况；与模型组相比，阳性组与骨痹散组动物食欲与精神状态有所好转，活动范围与幅度增加。具体评分结果见表2。

2.3 各组兔膝关节软骨组织病理形态假手术组关节软骨结构完整，关节软骨结构分层清晰，未见明显潮线，软骨细胞分布均匀，软骨内无血管和神经，未见明显软骨缺损、软骨细胞坏死及纤维增生等病理改变；模型组可见局部软骨面缺损，缺损区域软骨细胞显著减少，大量软骨细胞坏死，软骨层明显变薄甚至丢失，缺失区域大量纤维组织增生，可见较多胶原纤维以及核呈长梭形的纤维细胞；阳性组可见局部软骨面缺损，软骨细胞排列紊乱，软骨细胞数量减少，软骨细胞坏死，部分软骨层丢失，缺失区域存在纤维组织增生情况，可见较多胶原纤维和纤维细胞，未见明显炎性细胞浸润；骨痹散组可见局部软骨面不同程度缺损，软骨细胞数量减少，部分软骨层丢失，多量纤维组织增生，可见较多胶原纤维和纤维细胞，未见明显炎性细胞浸润，见图1，2和表3。

2.4 各组兔血清中炎症因子水平与假手术组相比，模型组动物血清中环氧合酶2、前列腺素E2、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平均显著性升高(P < 0.01)，与模型组相比，阳性组与骨痹散组动物血清中环氧合酶2、前列腺素E2、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平均显著性降低(P < 0.05)，见表4。

2.5 各组兔膝软骨组织中基质金属蛋白酶1，2，3，13的表达与假手术组相比，模型组动物膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶1，2，3，13蛋白表达水平显著性升高(P < 0.05)；与模型组相比，阳性组与骨痹散组基质金属蛋白酶1，2，3，13蛋白表达水平显著性降低(P < 0.05)，见图3和表5。

2.6 各组兔膝软骨组织中基质蛋白、凋亡蛋白与Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达与假手术组相比，模型组动物膝关节软骨组织中Bax、Caspase-3、Wnt5a、β-catenin蛋白表达水平显著升高(P < 0.05)，Bcl-2、Notch3、Hes1蛋白表达降低(P < 0.05)；与模型组相比，阳性组与骨痹散组Bax、Caspase-3、Wnt5a、β-catenin蛋白表达水平显著降低(P < 0.05)，Bcl-2、Notch3、Hes1蛋白表达升高(P < 0.05)，见图4和表6。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。两组比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。
1.2 时间及地点实验于2019年2-6月在西南医科大学动物实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物雄性新西兰大白兔44只，清洁级，体质量3.0-4.0 kg，购自成都达硕实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK(川)2020-030，使用许可证号：SYXK(川)2019-189。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2 药品与试剂骨痹散由西南医科大学附属中医医院药剂科制备(制川乌18 g、制草乌18 g、川芎12 g、乳香12 g、没药12 g、海桐皮24 g、透骨草24 g、白鲜皮18 g、酒军18 g、秦艽18 g、威灵仙18 g、桑枝18 g，甘草12 g、禹白附18 g、王不留行24 g、莱菔子24 g，研成粉末，蜂蜜调配成膏状)；双氯芬酸钾凝胶，国药准字H20020385，购自太极集团·四川天诚制药有限公司；环氧合酶2(SEKRT-0218)购自北京索莱宝科技有限公司；前列腺素E2(ZC-52609)、白细胞介素1β(ZC-52385)、肿瘤坏死因子α(ZC-52984) ELISA试剂盒均购自上海茁彩生物科技有限公司；基质金属蛋白酶1(10371-2-AP)、基质金属蛋白酶13(18165-1-AP)抗体均购自武汉三鹰生物技术有限公司；Bax(K009716P)、Bcl-2(K009640P)、基质金属蛋白酶2(K009709P)抗体购自北京索莱宝科技有限公司；Notch3(ab23426)、Hes1(ab71559)购自Cell Signaling Technology公司；Caspase-3(ab184787)、基质金属蛋白酶3(ab52915)、Wnt5a(ab229200)、β-catenin(ab32572)和β-actin(ab8227)均购自艾博抗(上海)贸易有限公司。
1.3.3 主要仪器 Multiskan™ FC酶标仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]；CX23显微镜(日本Olympus公司)；ChemiDoc MP多功能凝胶成像仪、Mini-PROTEAN® Tetra电泳系统(美国Bio-Rad公司)。
1.4 实验方法

1.4.1 膝骨关节炎动物模型的构建[9] 取44只健康新西兰大白兔，其中40只分为4组，每组10只，除假手术组外，模型组、阳性组与骨痹散组均采用改良Hulth法构建膝骨关节炎动物模型，另外4只造模后，以大体解剖见软骨面部分区域明显变薄，粗糙无光泽，作为造模成功的标准，验证模型是否成功。首先戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉大白兔，注射剂量30 mg/kg，然后于右后肢膝关节外侧纵向逐层切开，切口长度5 cm，分离关节并完整切除内侧半月板、前交叉韧带和内侧副韧带。为了防治切口感染术后肌注青霉素160万U/(kg·d)，连续8 d。术后第4天即强迫兔奔跑(0.5 h/d)，持续8周。假手术组只进行关节探查而不切除半月板与韧带。

1.4.2 给药模型构建8周后各组开始给药，假手术组与模型组膝骨关节处涂抹生理盐水，阳性组涂抹双氯芬酸钾凝胶(2 g)，骨痹散组涂抹骨痹散(8 g)，用纱布进行包扎，每天敷8 h，连续1周。
1.4.3 一般性体征观察各组动物手术与给药后进行观察，观察指标为奔跑与活动情况，后肢活动情况，并对步行情况进行分级评分：0分为正常步态；1分为轻度跛行；2分为中度跛行。

1.4.4 膝骨关节组织病理学观察最后一次给药12 h麻醉后处死大白兔，收集膝关节软骨组织制作石蜡切片，经苏木精-伊红染色与番红O染色后观察软骨组织病理学变化，并进行Mankin评分，4项指标合计为最终得分，评分标准见表1。

1.4.5 血清中炎症因子水平检测各组动物处死前进行心脏采血，分离血清，按照ELISA试剂盒说明书检测环氧合酶2、前列腺素E2、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平。
1.4.6 免疫组织化学染色收集各组动物的膝关节软骨组织，常规固定，经包埋、切片后，按免疫组化试剂盒要求进行实验操作，加入基质金属蛋白酶1，2，3，13一抗(1∶1 500)，4 ℃过夜孵育，再加入二抗(1∶1 500)常温下孵育30 min，DAB显色，常规脱水，透明，中性树胶封固，每张组织切片在100倍放大倍数下采集3个视野，Image J图像处理软件统计测量平均吸光度值。
1.4.7 蛋白质免疫印迹分析收集各组动物膝关节软骨组织，冰上进行蛋白质提取与定量，然后按照Western blot法进行凝胶电泳，一抗为Wnt5a(1∶800)、β-catenin(1∶800)、Bax(1∶800)、Bcl-2(1∶800)、Caspase-3(1∶800)、β-actin(1∶1 500)、Notch3(1∶2 000)、Hes1(1∶2 000)，最后使用ECL试剂盒进行蛋白条带显影后在凝胶成像系统中进行曝光拍照，以β-actin作为内参计算各蛋白表达水平。
1.5 主要观察指标 ①各组兔活动评分；②各组兔膝关节软骨组织病理形态；③各组兔血清中炎症因子水平；④各组兔膝软骨组织中基质金属蛋白酶1，2，3，13的表达；⑤各组兔膝软骨组织中Wnt5a、β-catenin、Bax、Caspase-3、Bcl-2、Notch3、Hes1的表达。
1.6 统计学分析数据用x±s表示。使用SPSS 25.0进行数据分析，统计方法为单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法经过西南医科大学附属中医医院统计学专家审核。

讨论

骨性关节炎是关节炎最常见的形式，随着社会的老龄化和肥胖的流行，骨性关节炎的发病率预计将在未来20年内继续增加[10]。骨性关节炎的特征是软骨降解和软骨下骨改变、骨赘形成，并伴有滑膜局部炎症，在膝关节也存在半月板退变和挤压的情况发生。膝骨关节炎的药物治疗多以对症抗炎治疗为主，另外中药可以促进局部微循环扩张，加快炎性产物代谢，以控制疼痛、改善自我报告的身体功能和生活质量为目的[11-12]。但口服非类固醇抗炎药只能间歇性地使用最短时间和尽可能低的剂量来控制疼痛，并且会对心血管、肝脏、肾脏等器官造成不良影响[13]。以往的研究表明，白细胞介素1β在骨性关节炎的发生发展中起核心作用。白细胞介素1β可刺激基质金属蛋白酶的产生，在骨性关节炎发病机制中可降解细胞外基质成分，如Ⅱ型胶原和蛋白多糖等。此外，据报道，Wnt/β-catenin和丝裂原活化蛋白激酶信号通路激活都参与了骨性关节炎的发生发展。靶向抑制白细胞介素1β诱导的基质金属蛋白酶过度表达可能是治疗骨性关节炎的一种潜在方法。该实验使用院内协定处方骨痹散，其中制川乌、制草乌、秦艽、威灵仙都是治疗关节炎的常用中药，具有抗炎止痛及扩张局部组织血管的功效，毒副作用小。实验结果发现，骨痹散在治疗膝骨关节炎中发挥与非类固醇抗炎药基本一致的效果，鉴于中药复方具有不良反应发生率低的优点，这对膝骨关节炎治疗药物的选择有一定的指导作用。
膝骨关节炎是以软骨组织退化、降解为主要病理特征。软骨细胞存在于软骨组织中，调节细胞外基质的分泌。细胞外基质组成和关节软骨稳态与软骨的生物力学功能密切相关。软骨细胞依赖软骨组织稳态来维持细胞存活和正常的生物合成功能[14]。当出现膝骨关节炎时，细胞外基质稳态被打乱，细胞外基质的合成减少，导致软骨中分解代谢酶活性增强，最终造成细胞外基质降解[15]。Notch信号是通过细胞表面配体和受体的相互作用激活的，这依赖于细胞与细胞之间的接触。局部微血管的生成有利炎性产物的代谢，减轻炎性症状。研究表明，Notch受体是形成功能血管的前提，是不可或缺的要素，Notch3受体缺少会造成血管功能障碍，影响扩张[16-18]。Notch3受体在动脉血管生长中具有重要地位，它参与血管平滑肌细胞的增殖、分化、成熟、凋亡等全过程。Notch3信号途径在血管形成中的作用已经通过大量实验得到证明[19-20]。
该研究通过对比模型组与骨痹散组动物体征与膝关节病理学后发现，骨痹散组兔后肢活动幅度增大，活动范围变广，食欲增加，膝关节中的软骨组织退化情况减弱，软骨结构分层逐渐清晰，缺损区域得到修复，局部微血管扩张，炎性细胞的聚集与浸润减少，说明骨痹散能从症状上缓解膝骨关节炎的进程。
膝骨关节炎发病的确切机制尚不清楚，但主要因素被认为是促炎细胞因子触发的慢性炎症，研究表明白细胞介素1β等炎性物质是这种炎症反应的主要决定因素[21]。白细胞介素1β极大地影响软骨细胞中细胞外基质的成分，干扰关键性结构蛋白的合成，同时影响软骨细胞中基质金属蛋白酶13等基质金属蛋白酶的合成，对软骨成分具有破坏作用[22]。白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α增加后，刺激软骨降解酶的生成，进一步损伤关节软骨[23]。类前列腺素是存在于滑膜液中的一类重要信号分子，而环氧合酶2被认为是炎症亚型因子[24]。非类固醇抗炎药主要抑制体内环氧合酶2，发挥抗炎与缓解疼痛效果，从而延缓膝骨关节炎发展。因此炎性细胞因子被认为是治疗膝骨关节炎的关键，而中药因为其多靶点的药理特性，在抗炎上具有巨大优势。该研究发现骨痹散能有效减少兔血清中环氧合酶2、前列腺素E2、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平，与双氯芬酸钾凝胶的抗炎效果基本一致，说明骨痹散在膝骨关节炎的抗炎效果上与非类固醇抗炎药拥有相同的效果。
作为调控软骨关节炎的重要通路之一，Wnt/β-catenin通路在物种间高度保守，在器官生成、细胞分化和组织重塑中发挥着核心作用，影响着软骨细胞合成与分解代谢。研究发现，软骨细胞质中的Wnt转运到细胞核并与T细胞因子/淋巴样增强因子转录因子相互作用以激活β-catenin下游靶基因表达[25]。在膝骨关节炎中，Wnt通路被激活，β-catenin分泌增加，导致基质降解及功能减退，并促进骨分化、软骨降解、软骨细胞肥大和炎症反应[26]。研究表明，在退行性软骨细胞中，β-catenin表达水平上调，导致软骨丢失[27]。此外，β-catenin活化导致成年小鼠软骨细胞异常分化[28]。基质金属蛋白酶蛋白是Wnt/β-catenin通路下游重要调控因子，基质金属蛋白酶蛋白表达增多会造成关节软骨的破坏，诱发膝骨关节炎[29]。该研究发现，骨痹散组兔关节软骨组织中Wnt/β-catenin信号通路被抑制，Wnt5a与β-catenin蛋白的表达水平减少，同时发现凋亡蛋白Bax与Caspase-3的表达水平减少，Bcl-2的表达水平升高，导致组织中基质金属蛋白酶1，2，3，13分布减少，由此说明膝关节软骨细胞的降解与凋亡得到抑制，疾病进程得到延缓。
Notch3信号通路可调控局部微血管循环，且在软骨细胞纤维化中发挥重要的调节作用，影响软骨细胞的正常增殖、分化和凋亡。研究发现，Notch3通路有2个下游靶基因Hes1和Hey1，Notch3通过促进Hes1的表达导致软骨细胞凋亡，从而加重软骨损害程度[30]。研究表明，抑制Notch通路活化，可抑制Notch3表达，降低Hes1蛋白表达，减轻膝骨关节炎炎症水平[31-32]。该研究结果表明骨痹散能促进软骨组织Notch3、Hes1蛋白表达，促进内皮细胞生长，改善局部血管微循环。
综上所述，院内协定处方骨痹散具有抗炎、扩张微循环的作用，治疗膝骨关节炎的效果与非类固醇抗炎药相当，具体机制可能为通过调控Notch3/Hes1、Wnt/β-catenin信号通路，促进局部微循环血管扩张，减少血清中环氧合酶2、前列腺素E2、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α炎症因子的产生与组织中基质金属蛋白酶1，2，3，13蛋白的分布。但由于膝骨关节炎的发病机制复杂，当前实验只能证明院内协定处方骨痹散在Notch3 /Hes1、Wnt/β-catenin信号通路上有治疗膝骨关节炎的潜力，具有一定的局限性，今后将设计更多实验完善院内协定处方骨痹散抗膝骨关节炎的研究。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

骨痹散干预膝骨关节炎兔软骨组织相关信号通路的变化

Effects of Gubi Powder on cartilage tissue-related signaling pathways in rabbits with knee osteoarthritis

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