透射电镜观察结果：载有槲皮素的纳米微球呈圆形，外面有一壳聚糖层包绕，微球与微球之间分散，粒径大小较一致，基本不粘连。聚己内酯纳米纤维表面光滑，直径均匀。聚己内酯/聚乙二醇纳米纤维由于聚乙二醇的加入表面相对不平整，直径均匀。聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纳米纤维表面光滑，直径不均匀，能看到微球的影像纺入了静电纺丝中。

 扫描电镜观察结果：载药纳米微球呈现出规则的球形，表面相对光滑，直径较均匀。聚己内酯纳米纤维支架由丝状结构相互堆叠形成，聚己内酯纳米纤维直径均匀，表面光滑，无断裂。聚己内酯/聚乙二醇和聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纳米纤维表面相对不平整，可能是聚乙二醇与微球的加入所导致，纳米纤维不规则交织成网状结构，形成大小不一的孔隙，增加了支架材料的比表面积，且能便于营养物质与代谢产物的进出，为细胞的附着与生存提供了足够的空间和良好的环境。
2.2   纳米纤维支架的静态接触角   见图3。

图3为去离子水滴在纳米纤维支架薄膜上2 s后所拍摄的图片，聚己内酯组2 s后的静态接触角为123.1°，聚己内酯/聚乙二醇组2 s后的静态接触角为16.2°，聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组2 s后的静态接触角为6.1°。可以看出，聚己内酯/聚乙二醇组的静态接触角相对于聚己内酯组显著减小，说明液滴大部分渗透入纤维材料中，证明聚乙二醇发挥了它的亲水性的优点，显著增加了材料的亲水性能；聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组的静态接触角小于聚己内酯/聚乙二醇组，可能微球的加入增大了纤维的粗糙程度或孔隙率，从而进一步改善了材料的亲水性。
2.3   槲皮素标准曲线及回归方程    以无水乙醇溶液作为空白对照组，归零后，测定每种槲皮素乙醇溶液在375 nm处的吸光度值，以Y轴作为吸光度值，X轴作为浓度，绘制标准曲线图，如图4所示，并得出回归方程为：Y=0.067 33×X+0.011 53，R2=0.991 9，表明药物质量浓度在2-12 mg/L之内，呈现良好的线性关系。



2.4   微球包封率及材料体外释药曲线   经计算得出，槲皮素纳米微球的包封率约为75.08%，槲皮素可以有效包裹于微球内。

通过体外释药曲线可见，槲皮素纳米微球呈现出平缓上升的趋势，前4 d释放的药物含量达到30%左右；聚己内酯/
聚乙二醇/槲皮素微球纳米纤维支架前4 d释放的药物含量与槲皮素纳米微球无明显差异，到后期药物释放逐渐平缓，释放速度明显低于槲皮素纳米微球，1个月的释放含量达到70%左右，见图5。



2.5   纳米纤维支架的细胞相容性   
2.5.1   细胞增殖实验结果   见图6。

培养第1天，3组之间细胞增殖比较差异无显著性意义(P > 0.05)；培养第4，7天，聚己内酯/聚乙二醇组、聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组细胞增殖吸光度值高于空白对照组(P < 0.05)，表明聚己内酯/聚乙二醇、聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纳米纤维支架都能够保持MC3T3-E1细胞的活性并促使其增殖；聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球培养第7天的细胞增殖吸光度值高于聚己内酯/聚乙二醇组(P < 0.05)，说明槲皮素的加入进一步促进了细胞的增殖。
2.5.2   碱性磷酸酶活性检测结果   见图7。

诱导培养第7，14天时，聚己内酯/聚乙二醇组与空白对照组细胞碱性磷酸酶活性比较差异无显著性意义(P > 0.05)；诱导培养第7，14，21天时，聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组细胞碱性磷酸酶活性高于空白对照组(P < 0.05)；诱导培养第21天时，聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组细胞碱性磷酸酶活性高于聚己内酯/聚乙二醇组(P < 0.05)，说明聚己内酯/聚乙二醇、聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纤维支架能够促进细胞碱性磷酸酶的表达。
2.5.3   茜素红染色结果   见图8。

可以看出，空白对照组细胞相对于聚己内酯/聚乙二醇组的钙盐沉积较少，聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组的钙结节数量较前两组明显增多，说明聚己内酯/聚乙二醇纳米纤维支架材料与槲皮素微球均能够促进细胞的矿化。

由细胞增殖实验与成骨性能实验结果可知，聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纳米纤维支架具有良好的细胞相容性。

创伤、肿瘤、感染、骨质疏松等疾病均可造成骨缺损，骨组织自身修复的能力与年龄、缺损范围、机体抵抗力等因素有关。现如今骨缺损的解决方法主要为骨移植，骨移植来源于自体骨、异种骨、同种异体骨与合成材料，但是因为供骨和成骨潜力的问题，在临床运用方面相对棘手。近几年，组织工程领域的研究尤为热门，引导骨再生的骨组织工程成为了治疗骨缺损的另一种方法。组织工程包括种子细胞、支架材料、生长因子三个部分[1]，其中骨形成蛋白2[2-3]、尼尔样Ⅰ型分子等多肽类生长因子已被证实可以促进成骨细胞的增殖分化[4-5]，但由于其价格昂贵、储存和运输条件要求较高等因素尚且不能普及使用。

中医药是中国文化的珍宝，自古以来为人类健康做出了巨大贡献，弘扬中医文化、传承岐黄薪火才能保持自身特色，提升文化自信。中草药大多是纯天然植物，来源广泛，成本较低，且具备较高的安全性，对肝肾的伤害较西药小。槲皮素作为一种天然的黄酮类化合物，广泛存在于果蔬、植物的根、种子和葡萄酒中，特别是苹果和洋葱中[6]。黄酮类化合物以其抗氧化和抗炎的性质而备受关注。槲皮素及其衍生物已被作为天然抗氧化剂用于心血管疾病、肿瘤和一些代谢疾病的治疗，如骨质疏松症、糖尿病等[7-8]。此前的研究发现，槲皮素具有抗过敏、抗炎症、抗氧化、抗病毒、降血压、抗血小板聚集等作用[9]。研究证实槲皮素具有促成骨作用[10-11]，其被认为是迄今发现最有效的成骨化学物质，但作用机制尚不清楚[12]。槲皮素几乎不溶于水，脂溶性弱，口服槲皮素生物利用率低，不适用于经口给药。此外据报道，口服槲皮素代谢迅速，并会在多个器官中蓄积[13]。槲皮素较差的稳定性、溶解性不利于其功效的发挥和运用。支架材料作为缓释载体使药物的释放具有持续性、稳定性、靶向性，可有效解决槲皮素的不足之处。

一般来说，纳米材料泛指结构尺寸接近分子规模或介于1-1 000 nm的维度上的物质[14]，比人体内细胞的平均体积小1 000倍，它们的体积小、制作方式灵活、比表面积与体积比高，使其成为理想的药物输送系统[15]。其中，微球有多种用途，主要是因为它们能够将材料包裹于其中，常用于食品工业、医疗设备、化学涂层、传感器等；微球作为靶向位置的药物递送剂已被广泛研究应用于各种生物医学领域，如疫苗接种、疾病治疗和组织再生；这些微球能够延长药物在生理条件下的生物活性，长期保持药物的可控释放，同时可以微创给药，在提高药物分子治疗质量方面显示出了很大的潜力[16]。

静电纺丝纳米纤维支架具有较大的比表面积和较高的孔隙率，为细胞的附着与增殖提供较大的空间，并且能有效控制营养物质的扩散与代谢物的排出，在三维纳米结构中生长的细胞在形态和功能上与体内细胞相似[17]。聚己内酯是一种可生物降解的脂肪族聚酯，价格相对较低，而且它能够塑造成不同的形式、具有足够的机械强度，且经过美国食品药品监督管理局认证可应用于组织工程，这使得它区别于其他用于支架开发的生物材料[18]。然而，聚己内酯较差的降解速度和亲水性仍是生物医学应用的一个挑战。聚乙二醇作为骨组织工程应用的天然支架材料，它的机械强度较低，但具有较好的亲水性、无毒性[19]，已被美国食品和药物管理局(FDA)批准能够应用于临床，低分子质量的聚乙二醇易通过肾脏排泄[20]，具备良好的降解性能。潘璐等[21]使用静电纺丝技术制备了聚己内酯/聚乙二醇大孔径复合纳米纤维膜，发现聚己内酯∶聚乙二醇=80∶20时，纳米纤维的形态比较好、直径也比较一致、力学性能较好。彭兰兰[22]的研究发现，当聚己内酯∶聚乙二醇=80∶20时，扫描电镜可看到细胞在电纺丝膜上朝各个方向充分伸展，呈梭形或不规则的三角形，细胞数量增多，厚度增大，局部生长呈现一定的取向；随着聚乙二醇含量的进一步增加，电纺丝膜的降解速率逐渐下降。静电纺丝技术将不同聚合物以一种在不降低其有效性的情况下协同其所需的独特性能的方式进行组合，可满足生物材料的要求，具有可重复性、低成本和高产率的优点[23]。因此，将聚己内酯和聚乙二醇共混在一起形成聚己内酯/聚乙二醇复合材料，可以得到一种理想的骨组织工程支架。

此次实验将槲皮素包裹于壳聚糖和牛血清蛋白组成的纳米微球中，再将微球通过静电纺丝技术纺入聚己内酯/聚乙二醇中，形成载有槲皮素微球的纳米纤维支架，达到药物的双重缓释效果，并研究该复合材料对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

1.1   设计   材料学实验和细胞学实验，组间比较进行单因素方差分析。
1.2   时间及地点   实验于2021-10-18在滨州医学院临床医学实验室完成。
1.3   材料
1.3.1   主要试剂与材料   槲皮素(MW=302.24，上海麦克林生化科技有限公司)；牛血清蛋白、壳聚糖(美国Sigma公司)；聚己内酯(上海麦克林生化科技有限公司)；聚乙二醇(无锡市亚泰联合化工有限公司)；无水乙醇、冰醋酸、N，N-二甲基二酰胺、二氯甲烷(国药试剂)。
1.3.2   主要仪器与设备   超净工作台(美国Thermo Electron公司)；紫外线分光光度计(日本Hitachi公司)；磁力搅拌器(金坛区西城新瑞仪器厂)；微量注射泵(深圳市通力维纳科技有限公司)；pH仪(瑞士METTLER TOLEDO公司)；Beckman高速离心机(美国Beckman Coulter公司)；超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；铜网(中镜科仪)；高压电源(大连鼎通科技发展有限公司)。
1.4   实验方法   
1.4.1   制备载有槲皮素的纳米微球  采用改良去溶剂法制备载有槲皮素的纳米微球[24]。①将100 mg牛血清蛋白置于10 mL去离子水中，磁力搅拌器搅拌20 min直至其完全溶解，制备成质量分数1%的牛血清蛋白溶液，利用pH仪测定溶液pH值，使用氢氧化钠溶液或盐酸溶液将溶液pH值调至8.00；②称取0.5 mg槲皮素，将其置于1 mL无水乙醇中，磁力搅拌器搅拌直至其彻底溶解，制备出槲皮素溶液；③利用微量注射泵(速率为1 mL/min)将1 mL槲皮素溶液注入牛血清蛋白溶液；④在磁力搅拌下，利用微量注射泵向上述溶液中逐滴加无水乙醇40 mL，注入速率为30 mL/h，磁力搅拌8 h；⑤将50 mg壳聚糖置于50 mL稀醋酸溶液中，磁力搅拌30 min至其完全溶解，制备壳聚糖溶液；⑥利用微量注射泵将40 mL壳聚糖溶液注入持续搅拌的牛血清蛋白溶液中，磁力搅拌8 h；⑦将最终制成的溶液于高速离心机下12 000 r/min离心15 min，向离心后的白色沉淀物中加入10 mL去离子水/无水乙醇(体积比为50/50)混合溶液，超声震荡20 min至沉淀完全溶解，此步骤重复3次，直至离心后的上清液清澈，向最终的沉淀物中加2 mL去离子水/无水乙醇(体积比为50/50)混合溶液溶解沉淀，此为壳聚糖包被的槲皮素纳米微球溶液，将溶液冷冻干燥为冻干粉，于4 ℃存放。
1.4.2   制备纳米纤维支架   采用静电纺丝技术制备纳米纤维支架[24]。称取1.575 g聚己内酯，溶解于4.5 mL N，N-二甲基二酰胺溶液和6 mL二氯甲烷溶液的混合溶液中，磁力搅拌至少8 h，得到聚己内酯溶液。称取1.575 g聚己内酯、0.393 7 g聚乙二醇溶解于4.5 mL N，N-二甲基二酰胺溶液和6 mL二氯甲烷溶液的混合溶液中，磁力搅拌至少8 h，得到聚己内酯/聚乙二醇溶液。称取100 mg槲皮素微球冻干粉，加入4.5 mL N，N-二甲基二酰胺溶液中，磁力搅拌至完全溶解，此为A液；称取1.575 g聚己内酯、0.393 7 g 聚乙二醇置于6 mL二氯甲烷溶液中，磁力搅拌至完全溶解，此为B液；使用微量注射泵将A液逐滴泵入B液中，磁力搅拌24 h，得到聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球溶液。

将上述不同的混合溶液分别注入注射器中，选用9号针头，电压调节为23.5 kV，接收距离20 cm，推进速度3 mL/h，环境湿度< 50%的条件下静电纺丝，分别得到聚己内酯、聚己内酯/聚乙二醇、聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纳米纤维支架薄膜。将纺出的支架薄膜置于真空中干燥备用。
1.4.3   微球与纳米纤维支架的表征

透射电镜观察：将制备好的微球溶液保存于1 mL无水乙醇和去离子水(体积比为1∶1)的混合液中，取2 µL滴在铜网上，晾干，在透射电镜下观察并采集微球图像。使用铜网接收静电纺丝支架薄膜大约5 s，干燥后，置于透射电镜下观测并收集静电纺丝图像。

扫描电镜观察：将制备好的载药微球冻干粉和裁剪成合适尺寸的纤维薄膜，分别黏附在导电胶带上，喷金处理，扫描电镜下观察并采集图像。

静态接触角检测：用静态接触角实验来检测材料的亲水性能。预先裁剪一定大小的纳米纤维支架，保证表面清洁且均匀，将其放置在样品平台上，滴液2 µL。测试环境为：温度25.5 ℃，湿度61%，记录并拍摄液滴滴在样本上2 s后的静态接触角。
1.4.4   微球与载药纳米纤维支架的体外药物释放

槲皮素检测波长的选择：称取1 mg的槲皮素，溶于无水乙醇，以无水乙醇作为空白组，借助紫外线分光光度计，在200-400 nm波长范围内扫描，检测出槲皮素在375 nm波长处有最大吸光度值。

槲皮素标准曲线的建立：精密称取1 mg的槲皮素溶于无水乙醇中，制成质量浓度为100 mg/L的槲皮素储备液，取适量储备液用无水乙醇分别稀释成2，4，6，8，10，12 mg/L，并于375 nm波长处测定各样品的吸光度值。绘制出标准曲线，并计算出回归方程。

微球包封率及材料体外释药曲线：将微球混合溶液每次离心后的上清液储存起来，使用紫外线分光光度计检测上清液的吸光度值，计算出上清液的药物含量，从而得出微球包封率。微球包封率=(药物总质量-上清液中药物的含量)/药物总质量×100%。

取一定量的微球冻干粉放入离心管中，加入1 mL PBS，放入37 ℃转速100 r/min的恒温振荡培养箱中，在预定时间(12 h，24 h，2 d，3 d，4 d，5 d，6 d，7 d)取出离心管，12 000 r/min离心20 min后，取上清液1 mL，利用紫外线分光光度计在375 nm的波长下测出吸光度值，计算出药物释放的含量后，再加入1 mL的PBS到离心管中。绘制出槲皮素微球释放曲线。

将一定质量聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纳米纤维支架(约10 mg)分别浸入装有3 mL PBS的离心管中，放入37 ℃转速100 r/min的恒温振荡培养箱中，在预定时间(12 h，24 h，2 d，3 d，4 d，6 d，8 d，10 d，14 d，18 d，24 d，30 d，36 d)取出离心管，12 000 r/min离心20 min后，取出上清液1 mL，用无水乙醇稀释适当倍数，利用紫外线分光光度计在375 nm的波长下测出吸光度值，计算出药物释放的含量后，再加入1 mL的PBS到玻璃瓶中。绘制出槲皮素纳米纤维支架释放曲线。
1.4.5   纳米纤维支架的细胞相容性   将聚己内酯/聚乙二醇纳米纤维支架、聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纳米纤维支架裁剪成与96孔板和24孔板孔径相匹配的大小，从铝箔纸上完整揭下，正反面紫外线消毒4 h，用高压灭菌后的不锈钢环将电纺丝膜压在孔板底部，防止浮起。用含有1%青霉素-链霉素的PBS将纳米纤维支架完全浸湿2 h后，加入完全培养基(含1%双抗、体积分数10%胎牛血清的α-MEM培养基)再浸湿2 h，然后进行细胞接种。将对数生长期的MC3T3-E1细胞(滨州医学院临床医学实验室提供)用胰蛋白酶消化下来制成细胞悬液，按照1×104/cm2、3×104/cm2的密度分别接种于96孔板、24孔板中，以单独培养的细胞为空白对照组。

细胞增殖实验：培养1，4，7 d后，在96孔板每孔中加入10 μL的CCK-8溶液，混匀，置于37 ℃恒温培养箱中1-4 h后，将CCK-8与培养基的混合溶液吸出至新的96孔板中，酶标仪在450 nm处检测每组吸光度值。每组设置5个复孔，取平均值。

细胞成骨性能检测：细胞于24孔板接种1 d后，改换为含有成骨诱导液(含10 mmol/L β-甘油磷酸钠、50 mg/L维生素C、10 nmol/L地塞米松、1%双抗、体积分数10%胎牛血清的α-MEM培养基)的完全培养基，隔天换液。诱导培养7，14，21 d后，根据碱性磷酸酶试剂盒说明书操作，在405 nm波长下测出每组的吸光度值；每组设置3个复孔，取平均值。诱导培养21 d时，使用茜素红染色，倒置显微镜下观察空白对照组、正置显微镜下观察纳米纤维支架组矿化结节情况。
1.5   主要观察指标   各组纳米纤维支架的表征及对MC3T3-E1细胞增殖和成骨性能的影响。
1.6   统计学分析   全部数据采用GraphPad Prism 8.0.2进行处理，组间比较进行单因素方差分析，设P < 0.05时差异有显著性意义。该文统计学方法已经滨州医学院生物统计学专家审核。

去溶剂法制备牛血清蛋白微球[25]，无水乙醇的加入会产生白蛋白的脱溶和胶体稳定性的丧失，从而形成白蛋白纳米颗粒的白色胶体分散体[26]。许多学者采用静电自组装的方法，将带有正电荷的壳聚糖包裹白蛋白外层，从而达到稳定纳米颗粒的目的，避免交联剂的加入影响细胞的活性[27]。静电纺丝纳米材料已被广泛用于载药、组织工程、医用敷料等方面，静电纺丝技术与设备也逐渐成熟[28-29]。静电纺丝溶液在高压电场中形成丝状结构相互交织成网，细胞在这种三维网状空间中的形态与功能极大程度上模拟了体内细胞。聚乙二醇的加入提高了材料的亲水性，同时聚乙二醇的溶解可使纤维部分断裂，增加了材料的降解率，从而释放空间，使细胞往膜的深层方向生长，反之细胞的生长又进一步促进纤维的断裂，有利于细胞的迁移与增殖[22]。电纺丝与微球两种缓释材料的结合，起到双倍的药物控释作用，缓解了药物释放初期的突释现像，降低了局部药物浓度。

槲皮素作为一种植物雌激素，可以从饮食中以糖苷的形式吸收，人血浆中槲皮苷的测定浓度通常为0.5×10-6-1.6×10-6 mol/L[30]。以往的研究表明，2×10-6 mol/L的槲皮素能够促进人脂肪干细胞的成骨分化，5×10-6 mol/L的槲皮素则能明显促进类成骨细胞的成骨分化[31]。WONG等[32]研究了槲皮素在体外对MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性的影响，并探究了槲皮素溶液结合胶原基质作用于新西兰大白兔骨缺损处的影响，结果显示10 μmol/L的槲皮素可提高MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶活性，在实验动物中骨缺损内有新骨的生长。有研究显示，由于材料内的药物量是一定的，随着药物的逐渐释放药物浓度逐渐降低，故材料的载药量一般应为体外最适药物浓度的10-200倍[33]。基于以上结论，此次实验决定采用0.5 mg槲皮素作为载药量进行体外实验。

此次实验使用聚乙二醇对聚己内酯进行修饰，显著改善了聚已内酯的疏水性，增强了静电纺丝支架的亲水性能及生物相容性，有助于细胞的早期附着；槲皮素纳米微球成功纺入静电纺丝中，增加了支架材料的比表面积，并进一步增加了材料的亲水性。微球与静电纺丝两种缓释材料的结合，起到双倍的药物控释作用，该复合材料的双重缓释作用能够使槲皮素的体外释放达到1个月左右。通过细胞增殖实验可以发现，第1天由于药物的突释现象，聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组对细胞的增殖作用小于其余两组，这种突释现象是由于聚乙二醇的加入增加了材料的亲水性，纤维与水分的相互作用使得药物从中释放，但随着时间的推移，培养第4，7天时，聚己内酯/聚乙二醇组与聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组对细胞的增殖效果逐渐凸显出来。通过细胞成骨实验可以发现，聚己内酯/聚乙二醇、聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球纤维支架能够促进细胞碱性磷酸酶的表达，成骨诱导21 d时聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组的成骨作用较聚己内酯/聚乙二醇组更明显；通过茜素红染色实验可以看出，聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球组钙盐沉积量明显高于其余两组。综上，聚己内酯/聚乙二醇纳米纤维支架能够促进MC3T3-E1细胞的增殖与成骨分化，槲皮素纳米微球的加入进一步增加了细胞增殖与成骨分化效果，二者起到协同作用。

成骨分化是骨形成和骨代谢的基础，研究显示多条信号通路参与成骨分化，它们各司其职却又彼此联系。其中，BMP-SMAD、Wnt/β-Catenin、Notch、Hedgehog、MAPK、FGF信号通路起到关键作用[34-36]，槲皮素的成骨作用可能涉及其中的部分通路。WANG等[37]研究了槲皮素对脂多糖刺激的MC3T3-E1成骨细胞分化的影响，结果显示槲皮素以剂量依赖的方式显著恢复了脂多糖抑制的成骨细胞相关基因mRNA和Osterix的蛋白表达，通过激活蛋白激酶(MAPK)通路逆转了脂多糖诱发的成骨细胞分化抑制。骨形成蛋白是转化生长因子β超家族的成员，能够诱导异位骨形成。槲皮素是一种类黄酮，化学性质类似于雌激素。先前的研究表明，骨形成蛋白和雌激素信号通路之间存在强烈的串扰。PANG等[38]研究发现槲皮素通过与内质网相互作用刺激骨形成蛋白信号传导，导致下游转录因子RUNX2和OSX的表达增加，最终刺激骨髓间充质干细胞的分化和矿化。槲皮素促进成骨分化的机制尚未完全确定，还需要更多的实验来验证当前的结论，需要进一步的研究来探索各个通路之间的联系和作用。

槲皮素纳米微球的制备受到溶液pH值、无水乙醇添加速度等的影响，这些条件不同，得到的纳米微球的尺寸、分散度或者载药率可能有所不同，此次实验的后续研究可围绕上述继续探讨。槲皮素除了具有良好的成骨能力，在杀菌和抗炎方面也能发挥显著效果[39-40]，此次实验所制备的槲皮素缓释支架在抗菌抗炎方面的作用需要后期实验的进一步验证。
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文题释义：
缓释材料：是指能够实现药物控释、降低局部药物浓度、达到药物长期释放的一种或多种复合材料，此种材料用于体内需要具备良好的生物安全性、生物相容性和一定的降解性。聚己内酯和聚乙二醇成本较低且经过美国食品药品监督管理局的认证，能应用于组织工程，二者的复合材料具有良好的机械性能和亲水性。
槲皮素：是一种天然的黄酮类化合物，普遍存在于蔬菜和水果中，已被广泛用于心血管疾病、抗肿瘤、骨质疏松治疗，其抗氧化、抗炎效果类似雌激素；研究发现，5×10-6 mol/L的槲皮素能明显促进类成骨细胞的成骨分化，10 μmol/L的槲皮素可提高MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶活性，槲皮素及其衍生物能够作为天然的成骨剂。

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创伤、肿瘤、感染、骨质疏松等疾病均可造成骨的缺损，近几年，组织工程方面的研究尤为热门，引导骨再生的骨组织工程成为了治疗骨组织缺损的新方法。槲皮素作为中草药，来源广泛，成本较低，具备较高的安全性，是迄今发现的最有效的成骨化学物质。此次实验通过静电纺丝技术制作出聚己内酯/聚乙二醇纳米纤维支架，并将槲皮素微球纺入支架中，得到双重缓释作用的聚己内酯/聚乙二醇/槲皮素微球复合支架。该支架具有良好的生物相容性和亲水性，能够促进MC3T3-E1细胞的增殖与分化。

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