脂肪干细胞携载汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束的制备

doi:10.12307/2022.780

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (31): 4996-5001.doi: 10.12307/2022.780

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脂肪干细胞携载汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束的制备

王笑1，刘卿1，胡瑶蕊1，谷成旭1，郭绮萱1，朱永林2，张璐萍1

1滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室，山东省烟台市 264000；2滨州医学院烟台附属医院骨科，山东省烟台市 264000

收稿日期:2021-11-02 接受日期:2021-12-28 出版日期:2022-11-08 发布日期:2022-04-24
通讯作者: 张璐萍，博士，副教授，滨州医学院基础医学院解剖学教研室，山东省烟台市 264000
作者简介:王笑，女，1995年生，山东省泰安市人，汉族，滨州医学院在读硕士，主要从事脊髓损伤修复研究。
基金资助:
烟台市科技计划项目(2021YD067)，项目负责人：朱永林

Preparation of wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles delivered by adipose stem cells

Wang Xiao1, Liu Qing1, Hu Yaorui1, Gu Chengxu1, Guo Qixuan1, Zhu Yonglin2, Zhang Luping1

1Department of Human Anatomy, Basic Medical Sciences, Binzhou Medical University, Yantai 264000, Shandong Province, China; 2Department of Orthopedics, Yantai Affiliated Hospital of Binzhou Medical University, Yantai 264000, Shandong Province, China

Received:2021-11-02 Accepted:2021-12-28 Online:2022-11-08 Published:2022-04-24
Contact: Zhang Luping, PhD, Associate professor, Department of Human Anatomy, Basic Medical Sciences, Binzhou Medical University, Yantai 264000, Shandong Province, China
About author:Wang Xiao, Master candidate, Department of Human Anatomy, Basic Medical Sciences, Binzhou Medical University, Yantai 264000, Shandong Province, China
Supported by:
Science and Technology Project of Yantai, No. 2021YD067 (to ZYL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
聚己内酯：是一种生物相容性、可生物降解和无毒的热塑性聚酯。
聚乙二醇：是目前应用最广泛的生物相容性高分子化合物之一，是已投入临床使用的各类药物和治疗剂的主要成分。

背景：汉黄芩苷已被证明有抗炎、神经保护等多种药理活性作用，但其半衰期短、难溶于水，有机溶剂溶解后不良反应大。研究发现，聚己内酯-聚乙二醇能够结合高度疏水的药物，解决药物难溶问题且可以达到缓释的效果，但无法精确靶向到达损伤部位，制成胶束后因其尺寸小，可以穿透细胞膜。
目的：制备汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束以及脂肪干细胞携载汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束，以解决汉黄芩苷难溶性和半衰期短的问题，并使药物能靶向到达损伤部位。
方法：透析法制备汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束，对其进行表征，检测包封率和载药量及体外释药速率。采用胶原酶消化法制备SD大鼠脂肪干细胞，流式细胞术、免疫组化、免疫荧光检测CD90、CD44、CD45的表达，成脂诱导14 d后进行油红O染色。CCK-8法检测汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束对脂肪干细胞的毒性。香豆素6和汉黄芩苷胶束与脂肪干细胞共孵育进行细胞定位。
结果与结论：①汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束平均粒径为(26.7±0.4) nm，Zeta电势为(-33.2±0.3) mV，外观为比较均一的圆球型；②汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束包封率为(90.2±2.04)%，载药量为(9.18±0.31)%；③游离汉黄芩苷24 h累计释放率为98%，汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束96 h累计释放率为87%；④流式细胞术、免疫组化、免疫荧光结果显示，脂肪干细胞表面标志CD90、CD44高表达，CD45几乎不表达，成脂诱导后油红O染色显示脂滴呈红色；⑤CCK-8结果显示，胶束质量浓度在10-200 mg/L时，对脂肪干细胞无毒性；⑥激光共聚焦显微镜观察可见，香豆素6和汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束能进入脂肪干细胞线粒体；⑦结果表明，汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束可进入脂肪干细胞内，脂肪干细胞可携载汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束。
缩略语：聚己内酯-聚乙二醇：polycaprolactone- polyethylene glycol，PCL-PEG

https://orcid.org/0000-0002-9424-5812 (王笑)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 汉黄芩苷, 聚己内酯, 聚乙二醇, 胶束, 表征, 体外释放, 脂肪干细胞

Abstract: BACKGROUND: Wogonoside has been proven to have anti-inflammatory, neuroprotective and other pharmacological activities. Wogonoside is difficult to dissolve in water and has a short half-life. In an organic solvent, wogonoside may bring patients with serious adverse reactions. Polycaprolactone-polyethylene glycol can combine highly hydrophobic drugs and achieve sustained release, but cannot accurately target the lesion. Micelles, because of their small size, can penetrate cell membranes.
OBJECTIVE: To prepare wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles and adipose stem cells as a carrier to deliver wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles so as to overcome the insolubility and short half-life of wogonoside and enable the drug to target the damage site.
METHODS: Wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles were prepared by dialysis method and characterized. Encapsulation rate, drug loading and in vitro drug release rate were detected. SD rat adipose stem cells were prepared by collagenase digestion. The expression of CD90, CD44, and CD45 was detected by flow cytometry, immunohistochemistry, and immunofluorescence. After 14 days of adipocytes induction, oil red O staining was performed. CCK8 assay was used to detect cytotoxicity of wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles to adipose stem cells. The micelles of coumarin 6 and wogonoside were co-incubated with adipose stem cells for cell localization.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles had a mean particle size of (26.7±0.4) nm, a Zeta potential of (-33.2±0.3) mV, and a relatively uniform shape of round ball. (2) The encapsulation rate of wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles was (90.2±2.04)% and the drug loading was (9.18±0.31)%. (3) The cumulative release rate of free wogonoside was 98% for 24 hours, and that of wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles was 87% for 96 hours. (4) Flow cytometry, immunohistochemistry, and immunofluorescence showed that CD90 and CD44 were highly expressed, while CD45 was almost not. Oil red O staining showed red droplets after lipid induction. (5) CCK8 assay showed that the micellar mass concentration in the range of 10-200 mg/L had no effect on cells. (6) Confocal laser confocal results showed that coumarin 6 and wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles could enter the mitochondria of adipose stem cells. (7) The results showed that the wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles could enter adipose stem cells, and adipose stem cells could carry wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles. wogonoside; polycaprolactone; polyethylene glycol; micelles; characterization; in vitro release; adipose stem cells

Key words: wogonoside, polycaprolactone, polyethylene glycol, micelles, characterization, in vitro release, adipose stem cells

中图分类号:

王笑, 刘卿, 胡瑶蕊, 谷成旭, 郭绮萱, 朱永林, 张璐萍. 脂肪干细胞携载汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束的制备[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(31): 4996-5001.

Wang Xiao, Liu Qing, Hu Yaorui, Gu Chengxu, Guo Qixuan, Zhu Yonglin, Zhang Luping. Preparation of wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles delivered by adipose stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(31): 4996-5001.

图/表（结果） 9

2.1 丁达尔效应一束光线透过汉黄芩苷PCL-PEG胶束时，从垂直入射光方向可以观察到胶束里面出现一条光亮的通路，见图2。

2.2 汉黄芩苷PCL-PEG胶束粒径分布、Zeta电位、形态汉黄芩苷PCL-PEG胶束平均粒径为(26.7±0.4) nm，Zeta电势为(-33.2±0.3) mV，见图3A，B。透射电镜观察显示，汉黄芩苷 PCL-PEG纳米胶束外观表现为比较均一的圆球型，见图3C。

2.3 汉黄芩苷载药量、包封率经高效液相色谱测定汉黄芩苷 PCL-PEG纳米胶束包封率为(90.2±2.04)%，载药量为(9.18±0.31)%。
2.4 体外释放情况汉黄芩苷释放较快，在24 h累计释放达到98%，而汉黄芩苷PCL-PEG胶束释药相对比较缓慢，最初释放速率快，随后呈现为缓释状态，在96 h内累计释放量为87%，达到缓释效果，见图4。

2.5 脂肪干细胞形态细胞接种12 h后，开始有贴壁细胞出现，72 h后贴壁细胞增多，开始呈长梭形生长。传代后细胞形态无明显变化，见图5。

2.6 流式细胞术、免疫荧光、免疫组化鉴定结果流式细胞术结果显示，细胞表面标志物CD90、CD44高表达(约99.4%，98.4%)；细胞表面标志物CD45几乎不表达(约1.2%)，见图6A。免疫荧光和免疫组化结果均显示，细胞表面标志物CD90、CD44高表达，细胞表面标志物CD45几乎不表达，见图6B，C。

2.7 成脂诱导分化能力成脂诱导14 d后，显微镜下观察可见脂滴形成，油红O染色显示脂滴呈红色，见图7。

2.8 CCK-8检测细胞毒性 PCL-PEG胶束质量浓度在10-200 mg/L时对脂肪干细胞无影响，因此，后续实验选用的胶束质量浓度为200 mg/L，见图8。

2.9 脂肪干细胞携载香豆素6和汉黄芩苷 PCL-PEG胶束香豆素6 和汉黄芩苷PCL-PEG胶束与脂肪干细胞共孵育30 min和1，2，4 h，细胞有绿色荧光，且孵育时间越长，绿色荧光越多，见图9A。香豆素6与脂肪干细胞共孵育30 min和1，2，4 h，细胞有绿色荧光，且孵育时间越长，绿色荧光越多，见图9B。为了进一步确认香豆素6，香豆素6 和汉黄芩苷PCL-PEG胶束是否进入细胞线粒体，孵育线粒体探针，结果显示，香豆素6 和汉黄芩苷PCL-PEG胶束进入细胞线粒体，见图10A，且时间越久进入线粒体越多，香豆素6未进入细胞线粒体，见图10B。

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引言

炎症反应是导致脊髓损伤后功能恢复差的重要原因[1]。研究表明，汉黄芩苷具有抗炎、神经保护等多种药理活性作用[2]。汉黄芩苷是一种黄酮类化合物，见图1，黄酮类化合物通常含有多个酚羟基，虽然酚羟基为亲水基，但是分子中的苯环为疏水基团，分子中的2个苯环决定其在水中溶解度不高，易溶于甲醇等有机溶剂，但大多数有机溶剂对身体有害，因此限制了黄酮类化合物作为注射剂等方面的应用[3-4]。

最近，纳米载体递送系统的发展受到越来越多的关注[5]。为了克服药物难溶问题，可以将其负载到纳米粒子上，在水溶液中形成稳定的悬浮液[6]。聚己内酯是一种生物相容性、可生物降解和无毒的热塑性聚酯[7]。聚乙二醇是目前应用最广泛的生物相容性高分子化合物之一，已被FDA批准应用于临床[8]。聚己内酯-聚乙二醇(polycaprolactone-polyethylene glycol，PCL-PEG)两亲嵌段共聚物可以自组装成由亲水壳和疏水核组成的纳米球，药物嵌入在聚合物胶束的内核中，而外壳允许药物稳定地存在于水溶液和体液中，这增加了药物的亲水性。因为它们无毒，可以通过水解酯键来降解，从而使其可以从血液中清除，在药物制剂的开发中被广泛使用。此外，聚合物药物载体本身没有任何药理作用，由于其良好的生物相容性和生物降解性，在生物医学领域有着广泛的应用[5，9-10]。

以细胞为载体的药物递送系统有很多优势，可以加强对药物分布的控制、趋向损伤部位等[11]。可作为载体的细胞包括红细胞、干细胞、中性粒细胞等[12-14]，其中干细胞不仅对炎症环境有内在归巢能力，而且能够逃脱免疫系统的检测[15]。脂肪干细胞具有以下优点：①来源丰富，容易获得；②可通过微创方法获得；③增殖迅速；④适合自体移植；⑤多向分化潜能[16]。因此，脂肪干细胞是一种临床和实验中实用的载体[17]。“裸药物”可以将活性分子装载到干细胞中，使用载体不仅可以避免药物在细胞内的水解或酶降解，改善药物的水溶性，还保护干细胞免受药物本身的潜在细胞毒性影响。在可用于干细胞负载的纳米结构药物传递系统中，基于胶束的装置似乎是最合适的，因为它们的尺寸小，能够溶解疏水药物，同时保护药物不受外部环境的影响[18]。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计体外观察性实验，主要进行汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束制备与表征测试，干细胞提取与鉴定，干细胞与香豆素6和汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束共孵育。
1.2 时间及地点实验于2019年10月至2021年10月在滨州医学院烟台校区人体解剖与组织胚胎学实验室完成。
1.3 材料汉黄芩苷(成都曼斯特生物科技有限公司)；PCL-PEG(相对分子质量为3 000，亲疏水段相对分子质量分别为2 000和1 000，上海士宇生物技术有限公司)；香豆素6(Sigma公司)；FITC anti-rat CD44、PE anti-rat CD45、APC anti-ratCD90(BioLegend公司)；Anti-CD90、Anti-CD44、Anti-CD45(Bioss公司)。Mastersizer 3000激光粒度仪(英国马尔文仪器有限公司)；JEOL2010透射电子显微镜(日本电子株式会社)；Ultimate 3000高效液相色谱仪(美国Thermo Fisher公司)；SHA-CA恒温水浴摇床(常州市伟嘉仪器制造有限公司)；超净工作台(昆山市禄宏净化科技公司)。
实验动物：SD大鼠10只，6-8周龄，体质量240 g左右，雌雄各半，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，动物机构许可证号：SCXK(鲁)20190003，人工控制光照(12∶12光/暗周期)，温度为(22±2) ℃，相对湿度为(55±10)%。所有实验方案已获得滨州医学院实验动物伦理委员会批准。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.4 实验方法
1.4.1 汉黄芩苷PCL-PEG胶束的制备采用透析法制备汉黄芩苷PCL-PEG胶束。分别称取5 mg汉黄芩苷与45 mg的PEG-PCL溶于N，N-二甲基甲酰胺中形成有机相，逐滴滴加到去离子水中，搅拌一定时间，将混合溶液置于透析袋中，用去离子水透析12 h以上，完全除去N，N-二甲基甲酰胺，收集透析袋中的溶液，过0.22 μm的微孔滤膜除去未包载的汉黄芩苷。冷冻干燥后即得汉黄芩苷纳米胶束。同法制备香豆素6替换药物的荧光PCL-PEG胶束，用于进一步荧光定位研究。
1.4.2 丁达尔效应将汉黄芩苷PCL-PEG胶束倒入小烧杯中，用激光笔从一侧照射，观察并拍照。
1.4.3 汉黄芩苷PCL-PEG胶束粒径分布、Zeta电势及透射电镜分析室温条件下，以50倍蒸馏水溶解稀释汉黄芩苷PCL-PEG胶束溶液，加入石英皿中，通过马尔文激光粒度仪检测样品的粒径分布与Zeta 电位。将汉黄芩苷PCL-PEG胶束适量稀释后，吸取10 μL液体滴于碳膜的铜网上，干燥后通过透射电镜观测纳米粒形态。
1.4.4 高效液相色谱检测汉黄芩苷PCL-PEG胶束的包封率和载药量将上述制备的汉黄芩苷PCL-PEG胶束冷冻干燥后，精密称取冻干样品质量20 mg，加入2 mL无水甲醇溶解，1.5×104 r/min高速离心，取上清液以适量流动相稀释并过滤后，取20 μL进样高效液相色谱，测定277 nm波长处吸收峰，利用汉黄芩苷标准曲线计算汉黄芩苷PCL-PEG胶束中药物包封率和载药量，其中包封率=纳米粒包裹汉黄芩苷药量/投入汉黄芩苷药物总量× 100%；载药量=纳米粒包裹汉黄芩苷药量/药物纳米粒总质量×100%。
1.4.5 测定汉黄芩苷PCL-PEG胶束的体外释放曲线精密称取汉黄芩苷PCL-PEG冻干胶束(药物含量约2 mg)，以1.5 mL PBS(pH 7.4)溶解；另称取0.3 mg汉黄芩苷粉末，水浴超声溶解于1.5 mL含1%吐温80的PBS。将以上药液分别加入到透析管中(截留分子质量为2 000 Da；容量2 mL)，并将透析管放入37 ℃水浴摇床中含PBS的大离心管(振摇速率为100 r/min)，开始计时为0。在设定的时间点(即0.5，1，1.5，2，4，6，8，12，16，20，24，36，48，60，72，84，96 h)，取出大离心管，吸取200 μL透析出的外相溶液，并补充等体积PBS溶液。采用上述高效液相色谱方法检测各时间点样本中汉黄芩苷含量，计算汉黄芩苷PCL-PEG胶束的体外释药速率。
1.4.6 大鼠脂肪干细胞提取及培养取10只SD大鼠，采用1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(40 mg/kg)，剔除腹股沟区毛，乙醇浸泡15 min，取出腹股沟区脂肪，PBS洗3次，剪碎，1 000 r/min离心5 min，取上层脂肪，PBS清洗，加两三倍体积的0.1%Ⅰ型胶原酶，37 ℃消化1 h，加入等体积的含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12完全培养基终止消化，100 μm细胞筛过滤，离心，弃上层液体，70 μm细胞筛过滤，PBS洗2次，加入红细胞裂解液裂解2 min，加入PBS，离心，弃上清，含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12完全培养基重悬，40 μm细胞筛过滤，将细胞移入培养瓶中，12 h半量换液，48 h后全量换液，每3 d换1次液，细胞生长至90%时传代。
1.4.7 细胞形态观察倒置显微镜观察细胞形态并拍照。
1.4.8 流式细胞术、免疫荧光、免疫组化鉴定取第3代脂肪干细胞，PBS清洗，加入胰酶消化3 min，加入等体积的含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12完全培养基终止消化，离心，收集细胞沉淀，细胞计数，PBS重悬，取100 μL细胞悬液至流式管，加入CD90-APC、CD44-FITC、CD45-PE抗体，4 ℃避光孵育20 min，PBS清洗，上流式细胞仪检测。
取第3代脂肪干细胞，用40 g/L多聚甲醛固定20 min，羊血清封闭1 h，弃血清，加入CD44、CD45、CD90一抗，4 ℃孵育过夜，PBS清洗，加入荧光二抗孵育2 h，PBS清洗，DAPI孵育5 min，PBS清洗，加入抗荧光衰减封固剂，激光共聚焦显微镜拍片。
取第3代脂肪干细胞，用40 g/L多聚甲醛固定20 min，加入内源性过氧化物酶孵育10 min，PBS清洗，羊血清封闭1 h，弃血清，加入CD44、CD45、CD90一抗，4 ℃孵育过夜，PBS清洗，加入生物素标记山羊抗兔IgG孵育15 min，PBS清洗，加入辣根酶标记链霉卵白素工作液孵育15 min，PBS清洗，DAB显色5 min，加入水终止显色，加入苏木素染色 2 min，盐酸乙醇分化，流水返蓝，倒置显微镜拍片。
1.4.9 成脂诱导分化取第3代脂肪干细胞，加入成脂诱导液(HG-DMEM，体积分数为15%胎牛血清，10 μmol/L胰岛素，0.5 mmol/L IBMX，200 μmol/L吲哚美辛，1 μmol/L地塞米松)进行诱导分化，诱导第14天进行油红O染色，倒置显微镜下拍片。

1.4.10 CCK-8检测细胞毒性取生长融合至90%的脂肪干细胞，胰酶消化，离心，含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12完全培养基重悬，细胞计数，接种于96孔板，每孔5 000个细胞，培养过夜，分别给予10，50，100，200，300，400，500，1 000 mg/L PCL-PEG胶束培养48 h，每孔加10 μL CCK-8溶液，放入培养箱1 h，酶标仪检测450 nm波长处吸光度值。
1.4.11 脂肪干细胞携载PCL-PEG胶束的制备用含香豆素6和汉黄芩苷的PCL-PEG胶束进行定位。分别将香豆素6，香豆素6和汉黄芩苷PCL-PEG胶束与脂肪干细胞共孵育30 min和1，2，4 h，激光共聚焦显微镜拍片。为了进一步观察胶束进入细胞的位置，分别将香豆素6，香豆素6 和汉黄芩苷PCL-PEG与脂肪干细胞共孵育30 min和1，2，4 h，线粒体探针孵育30 min，激光共聚焦显微镜拍片。
1.5 主要观察指标 ①汉黄芩苷PCL-PEG胶束表征及体外释放情况；②汉黄芩苷PCL-PEG胶束进入脂肪干细胞情况。

讨论

黄酮类化合物在水中的溶解度较低，使其在临床中应用很困难[19]。纳米药物是近年来出现的一种水溶性差、胃肠道毒性大的给药技术平台，研究和应用范围广泛。PCL-PEG聚合物可生物降解且生物相容良好，为将药物装载到纳米胶束中提供了高容量和重复性。

PCL-PEG共聚物结合了亲水性PEG和疏水性PCL的优点，可以快速形成纳米胶束，延长血液循环时间，降低毒性，组织分布广泛[20]。实验结果表明，汉黄芩苷PEG-PCL胶束将汉黄芩苷包在疏水内核中，不仅解决了其难溶性的问题，还通过减少有机溶剂的使用，从而减少了不良反应。汉黄芩苷胶束刚开始释放快，后期可稳定释放，达到了缓释的效果，可减少注射次数。

虽然基于纳米颗粒的药物传递系统在延长循环时间、提高持久性和控制药物释放方面取得了很大的进展，但靶向效率仍然很低。因此，细胞驱动的药物传递系统的研究越来越多。在过去的20年中，干细胞驱动的纳米药物传递系统受到了广泛的关注，该系统将纳米颗粒控释与干细胞靶向性优势相结合，提高细胞载体的药物给药性能，从而提高治疗效率[21-22]。

脂肪来源间充质干细胞不仅具有可塑性，而且还可以通过微创外科技术很容易地收集到足够数量的脂肪组织，所以脂肪来源间充质干细胞在治疗上是很有优势的[23]。李玉秋等[24]提取的脂肪干细胞呈长梭形，排列紧密，呈漩涡状生长，细胞形态与成纤维细胞相似，大小均一，多角形及圆形细胞少见。该研究观察到的脂肪干细胞形态与其一致。研究表明经体外培养的脂肪干细胞表型为CD31-/CD44+/CD45-/CD73+/CD90+/CD105+[25]。实验结果表明，细胞表面标志物CD90、CD44高表达，CD45几乎不表达，表明提取的细胞为脂肪干细胞。脂肪干细胞具有自我更新和多向分化潜力，在体外可分化成脂肪细胞等[26]。实验结果表明，脂肪干细胞可诱导分化为脂肪细胞，油红O染色可见红色的脂滴，提示提取的脂肪干细胞有成脂分化潜能。

脂肪干细胞携载汉黄芩苷胶束给药系统是一种载体-载体给药系统，一种载体是汉黄芩苷胶束，另一种载体是脂肪干细胞。通过脂肪干细胞能归巢到受损组织的能力介导精确药物靶向，PCL-PEG汉黄芩苷胶束不仅可以提高汉黄芩苷溶解性并且保证汉黄芩苷不会过早释放，还可以防止汉黄芩苷对脂肪干细胞的潜在毒性效应[18]。实验结果表明，汉黄芩苷胶束和脂肪干细胞共孵育，脂肪干细胞可以通过胞吞作用将汉黄芩苷胶束吞入细胞内，构建成干细胞和纳米颗粒双重给药系统，近年来，虽然干细胞运载纳米药物的研究很多，但大部分都是用于肿瘤，而用于脊髓损伤的很少。汉黄芩苷胶束虽可以直接用于脊髓损伤原位注射，但原位注射仅能在损伤后注射1次。脊髓损伤的康复是一个长期的过程，原位注射1次远远不够。因此，可以将汉黄芩苷胶束腹腔注射或静脉注射，利用干细胞的归巢效应，能趋向炎症部位，将汉黄芩苷药物运送到脊髓损伤部位，且干细胞本身也可以发挥治疗脊髓损伤的作用。该实验将为脊髓损伤应用难溶且半衰期短的药物提供一种思路。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

脂肪干细胞携载汉黄芩苷聚己内酯-聚乙二醇胶束的制备

Preparation of wogonoside polycaprolactone-polyethylene glycol micelles delivered by adipose stem cells

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