麝香黄芪复方滴丸含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖分化

doi:10.12307/2024.160

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (19): 2960-2966.doi: 10.12307/2024.160

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麝香黄芪复方滴丸含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖分化

陈娜1，2 ，王燕琳3，孙慧芳3，樊飞燕2，李东红2，张运克1，2

1河南中医药大学第一附属医院，河南省郑州市 450046；2河南中医药大学，河南省郑州市 450046；3郑州大学第一附属医院，河南省郑州市 450046

收稿日期:2023-04-07 接受日期:2023-05-19 出版日期:2024-07-08 发布日期:2023-09-25
通讯作者: 张运克，博士，2007 年从中国中医科学院博士后流动站出站，教授，主任医师，博士生导师，博士后合作导师，河南中医药大学，河南省郑州市 450046；河南中医药大学第一附属医院，河南省郑州市 450046
作者简介:陈娜，女，1993 年生，河南省驻马店市人，汉族，2020年河南中医药大学毕业，硕士，医师，主要从事中医药防治脑血管疾病的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81974564)，项目负责人：张运克；中原科技创新领军人才(224200510027)，项目负责人：张运克

Shexiang Huangqi compound dripping pills-containing serum promotes proliferation and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells

Chen Na1, 2, Wang Yanlin3, Sun Huifang3, Fan Feiyan2, Li Donghong2, Zhang Yunke1, 2

1First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, Henan Province, China; 2Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, Henan Province, China; 3First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450046, Henan Province, China

Received:2023-04-07 Accepted:2023-05-19 Online:2024-07-08 Published:2023-09-25
Contact: Zhang Yunke, PhD, Professor, Chief physician, Doctoral supervisor, Post-doctoral co-supervisor, First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, Henan Province, China; Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, Henan Province, China
About author:Chen Na, Master, Physician, First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, Henan Province, China; Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, Henan Province, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, No. 81974564 (to ZYK); Central Plains Leading Talent of Science and Technology Innovation, No. 224200510027 (to ZYK)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

缺血性脑卒中：多发于中老年人，具有发病率、致残率及致死率高的特点，是由于血管阻塞造成血流量供应减少和组织缺氧，最终导致神经功能障碍。
骨髓间充质干细胞：是一种多能干细胞，具有自我更新、分化、分泌及归巢的特点，可分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等，具有低免疫原性、易扩增等特点。

背景：骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)已被广泛用于治疗神经系统疾病，但由于血脑屏障的限制以及干细胞在受损部位存活率、分化率低，导致治疗效果有限。

目的：探讨麝香黄芪复方滴丸含药血清对BMSCs增殖、迁移和向星形胶质细胞分化的影响。
方法：SD雄性大鼠连续灌胃麝香黄芪复方滴丸5 d后进行腹主动脉取血，分离血清备用。采用CCK-8法检测体积分数5%，10%，20%含药血清对BMSCs增殖的影响；划痕实验观察体积分数10%含药血清对BMSCs横向迁移的影响；Transwell小室培养BMSCs，用结晶紫染色和DAPI核染色观察体积分数10%含药血清对BMSCs纵向迁移的影响；用含体积分数10%含药血清的诱导液或与星形胶质细胞共培养观察BMSCs向星形胶质细胞分化情况。

结果与结论：①体积分数10%和20%含药血清在第2，3天促进细胞增殖更明显，且两种体积分数无统计学差异；②在划痕30，48 h时，10%含药血清组BMSCs迁移量显著高于对照组；③10%含药血清组BMSCs穿过Transwell小室滤过膜的数量高于对照组；④体积分数10%含药血清可能促进BMSCs向星形胶质细胞方向分化，但分化作用较弱，星形胶质细胞能进一步促进含药血清诱导BMSCs向星形胶质细胞方向分化；⑤结果表明，体积分数10%含药血清能促进BMSCs体外增殖、迁移；与星形胶质细胞共培养可能促进BMSCs向星形胶质细胞方向分化。

https://orcid.org/0000-0001-6862-4635 (陈娜)；https://orcid.org/0000-0003-1500-1535 (张运克)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 缺血性脑卒中, 麝香黄芪复方滴丸, 含药血清, 骨髓间充质干细胞, 星形胶质细胞, 增殖, 迁移, 分化

Abstract: BACKGROUND: Bone marrow mesenchymal stem cells have been widely used to treat neurological diseases. However, due to limitations of the blood-brain barrier, low survival rate and differentiation rate of stem cells at damaged sites, the therapeutic effect is limited.
OBJECTIVE: To investigate the effects of Shexiang Huangqi compound dripping pills on proliferation, migration and astrocyte differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells.
METHODS: Male SD rats were treated with Shexiang Huangqi compound dripping pills for 5 days after continuous gavage. Blood was collected from the abdominal aorta and serum was separated for later use. The effect of 5%, 10% and 20% drug-containing serum on the proliferation of bone marrow mesenchymal stem cells was detected by CCK-8 assay. The effect of 10% drug-containing serum on lateral migration of bone marrow mesenchymal stem cells was observed by scratch test. Bone marrow mesenchymal stem cells were cultured in Transwell cells. The effects of 10% drug-containing serum on longitudinal migration of bone marrow mesenchymal stem cells were observed by crystal violet staining and DAPI nuclear staining. Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into astrocytes was observed by inducing solution with 10% drug-containing serum or co-culture with astrocytes.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) 10% and 20% drug-containing serum promoted cell proliferation more significantly on days 2 and 3, and there was no statistical difference between the two concentrations. (2) At 30 and 48 hours, bone marrow mesenchymal stem cell migration in 10% drug-containing serum group was significantly higher than that in the control group. (3) The number of bone marrow mesenchymal stem cells filtered through Transwell cells in 10% drug-containing serum group was higher than that in the control group. (4) 10% drug-containing serum might promote the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells to astrocytes, but the differentiation effect was weak, and astrocytes might further promote the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into astrocytes induced by drug-containing serum. (5) The results exhibited that the 10% drug-containing serum could promote the proliferation and migration of bone marrow mesenchymal stem cells in vitro. Co-culture with astrocytes may promote the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells towards astrocytes.

Key words: ischemic stroke, Shexiang Huangqi compound dripping pills, drug-containing serum, bone marrow mesenchymal stem cell, astrocyte, proliferation, migration, differentiation

中图分类号:

陈娜 , 王燕琳, 孙慧芳, 樊飞燕, 李东红, 张运克. 麝香黄芪复方滴丸含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖分化[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(19): 2960-2966.

Chen Na, Wang Yanlin, Sun Huifang, Fan Feiyan, Li Donghong, Zhang Yunke. Shexiang Huangqi compound dripping pills-containing serum promotes proliferation and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(19): 2960-2966.

图/表（结果） 6

2.1 SD大鼠BMSCs的形态 BMSCs选用生长状态良好第8代细胞，细胞贴壁生长，刚贴壁的细胞光镜下观察类似成纤维细胞外观，呈梭形或扁平状态，之后细胞逐渐增大，可见三角形或多角形，见图1。

2.2 SD大鼠BMSCs的表面标记物利用免疫荧光法进行BMSCs表面标志物鉴定，结果显示CD90、CD73、CD44表达阳性，说明培养的细胞为间充质干细胞，与购买公司提供结果一致，见图2。

2.3 CCK-8检测不同体积分数含药血清对BMSCs增殖的影响第1天，与对照组比较，20%含药血清组细胞活力明显提高(P < 0.05)；第2天，与对照组比较，10%，20%含药血清组细胞活力增加明显(P < 0.05)；第3天，与对照组比较，5%，10%，20%含药血清组细胞活力都增加明显(P < 0.000 1)，但各组间无明显差异。整体观察，5%含药血清组第3天细胞活力明显增加，10%含药血清组第2，3天细胞活力明显增加，20%含药血清组第1-3天细胞活力明显增加，但第2，3天时，10%，20%含药血清组细胞呈增长趋势，且组间无差异，表明不同体积分数含药血清培养均提高了BMSCs活力，见表2。考虑血清用量，实验选择体积分数10%含药血清进行以下实验。

2.4 含药血清促进BMSCs横向迁移划痕实验6，24 h时，10%含药血清组BMSCs迁移与对照组无明显差异(P > 0.05)；在30，48 h时，10%含药血清组BMSCs迁移数量显著高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.01)，见图3。

2.5 含药血清促进BMSCs纵向迁移分别用结晶紫染色和DAPI核染色的方法观察BMSCs穿过Transwell小室滤过膜的数量，结果显示10%含药血清组BMSCs穿过Transwell小室滤过膜的数量高于对照组，见图4。

2.6 含药血清促进BMSCs向星形胶质细胞分化第14天时，与对照组比较，含10%含药血清的诱导分化液诱导BMSCs向星形胶质细胞分化，但GFAP阳性表达率较低，这可能和细胞生物学活性、诱导方法有一定联系，见图5A，B。星形胶质细胞与BMSCs直接共培养发现细胞形态发生明显变化，相互连接成网聚集分布，折光性明显增强，细胞间有较粗且长的类似于轴突或树突样结构形成，见图5C。用Transwell小室间接共培养星形胶质细胞和BMSCs，发现含药血清在星形胶质细胞的共同作用下能够促进BMSCs向星形胶质细胞方向分化，见图5D。

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引言

脑卒中是多发于中老年人的临床常见病，因其发病率、致残率及致死率高的特点，严重威胁人类的生命健康，是全球性的公共卫生问题。脑卒中患者60%-70%为缺血性脑卒中，脑卒中后神经细胞死亡是由于血管阻塞造成血流量供应减少和组织缺氧，最终导致神经功能障碍[1]。缺血性脑卒中目前主要的治疗方法是静脉溶栓和血管取栓，由于受治疗时间窗的限制及颅内出血风险，能够及时接受治疗使血流再通的患者有限[2]。同时，血流再通引起缺血再灌注会加重脑组织的损伤及神经功能障碍。因此，研究更有效的治疗缺血性脑卒中的方法显得尤为重要。
骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是治疗缺血性脑卒中的一种很有前途的干细胞类型，移植BMSCs可减少脑缺血引起的直接或间接组织损伤，促进神经功能改善[3-4]。移植的间充质干细胞可以通过增殖、迁移、分化为神经细胞、分泌外泌体或营养因子等起到减轻炎症反应、减少细胞凋亡、促进神经功能改善等作用[5-6]。星形胶质细胞是血脑屏障的重要组成部分，还可以调节炎症反应，对于维持血脑屏障的正常功能起到重要的作用[7-8]。但由于血脑屏障的限制，干细胞移植效率有限。目前研究提高间充质干细胞移植治疗效率是学者研究的热点，且主要集中在对干细胞进行诱导、刺激、基因编辑等。中药对间充质干细胞的增殖、分化也起到促进作用[9-10]。中药化学成分复杂，特别是中药复方，经口服吸收后，认为发挥药效的活性成分应该是被吸收入血的成分。“血清药物化学”最先由德国科学家格哈德·多马克所提出[11]，后来王继军教授结合中医药理论提出中药血清药物化学[12]。课题组前期进行了麝香黄芪复方滴丸的基础方补阳还五汤的实验研究，结果显示补阳还五汤治疗脑卒中的主要机制包括调节血脑屏障通透性、抑制炎症反应等方面[13-15]。麝香黄芪复方滴丸加入芳香开窍药麝香、冰片，具有益气活血开窍的作用。
该实验旨在通过麝香黄芪复方滴丸含药血清培养BMSCs，观察细胞增殖、迁移、向星形胶质细胞分化情况，从而探讨中药与BMSCs的作用关系。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计体外细胞观察实验，统计差异分析使用 t 检验或单因素方差分析进行组间比较。
1.2 时间及地点实验于2021年5月至 2022年12月在河南中医药大学动物实验中心完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 12只SPF级SD雄性大鼠购于山东济南朋悦实验动物繁育有限公司(NO.37072621100529683)，6-8周龄，体质量(200±20) g。动物饲养于河南中医药大学实验动物中心，许可证编号：SYXK(豫)2020-0004。饲养环境：12 h/12 h明暗交替；温度：22-26 ℃；日温差≤3 ℃；相对湿度：50%-70%；换气次数：20-30次/h；气流速度≤0.18 m/s；氨浓度≤14 mg/m3；噪声≤60 dB。动物自由进食水和活动，适应性饲养1周。该实验通过了河南中医药大学实验动物伦理委员会许可并在其监督下进行，伦理审查批准编号：DWLL201903032。
1.3.2 实验试剂与仪器 DMEM高糖培养基、PBS、无血清细胞冻存液、胰蛋白酶消化液、二甲基亚砜、抗荧光衰减剂(含DAPI)、CCK-8试剂盒(北京索莱宝生物科技公司)；CD44、CD73、CD90抗体(Bioss)；GFAP抗体(武汉三鹰公司)；结晶紫溶液(武汉Servicebio公司)；细胞培养箱、酶标仪(美国Thermo公司)；倒置荧光显微镜(德国Lecia公司)等。
1.4 方法
1.4.1 BMSCs和星形胶质细胞培养第2代冻存BMSCs购自Cyagen Biosciences (产品编号：RASMX-01001)，第2代冻存星形胶质细胞购自BNCC公司(产品编号：337745)。复苏培养，待细胞密度达到80%-90%时可进行传代扩增。向T25 cm2细胞培养瓶中加入适量胰蛋白酶消化液消化，离心，加入适量培养液或冻存液进行传代或冻存。细胞冻存液(二甲基亚砜∶胎牛血清=1∶9)，冻存管转移到液氮中长期保存。

1.4.2 免疫荧光鉴定BMSCs表面标志物提前两三天将第8代BMSCs接种24孔细胞培养板中备用，每孔5×104个细胞。待细胞密度达到60%-70%时可进行免疫荧光检测，用40 g/L多聚甲醛固定30 min，3%BSA封闭液和0.25%tritonX-100 通透液按1∶1等体积混合，以每孔200 μL的量加入24孔板中，室温静置30 min，封闭通透细胞，吸弃封闭通透液，PBS洗3次，摇床每次5 min；孵育一抗：用3%BSA 稀释一抗至有效浓度(CD44、CD73、CD90，1∶200)，按每孔200 μL的量加入24 孔板中，4 ℃孵育过夜；洗涤后孵育二抗：用3%BSA稀释荧光二抗至合适浓度(山羊抗兔IgG，1∶200)，以每孔200 μL的量加入24孔板中，室温静置，避光孵育约1 h；洗涤后核染封固：在24孔板的每孔内加入适量抗荧光衰减封片剂(含DAPI 溶液)，倒置荧光显微镜下观察并拍照。

1.4.3 麝香黄芪复方滴丸含药血清的提取麝香黄芪复方滴丸由河南中医药大学药学院制剂室提供(批号：20210101)，建立高效液相色谱指纹图谱，结果表明实验室自制麝香黄芪复方滴丸质量一致性较好，总体差异较小，说明滴丸的制备工艺稳定，质量可控性良好[16]。SD雄性大鼠，随机分为给药组和空白组各6只。给药组给药剂量为 44 g/(kg·d)，连续灌胃给药 5 d，空白组给予生理盐水 44 mL/(kg·d)，末次给药后2 h，腹主动脉取血，分离血清，经0.45 μm滤膜过滤，56 ℃水浴灭活30 min，置于-80 ℃冰箱保存备用[17-19]。液质联用技术鉴定部分血清成分见表1，含药血清成分鉴定由课题组其他成员完成[16]。

1.4.4 CCK-8检测细胞增殖情况在96孔板中接种第8代BMSCs悬液，每孔200 μL( 2×104个细胞)，每组至少3个复孔，将培养板放在培养箱中预培养24 h。实验分5组，分别为空白组、对照组、5%含药血清组、10%含药血清组、20%含药血清组。空白组不加入细胞，其余组加入等浓度的BMSCs；对照组加入不含血清的DMEM高糖培养基，含药血清组分别加入含体积分数为5%，10%，20%含药血清的DMEM高糖培养基。干预培养24 h，每孔加入90 μL培养基、10 μL CCK-8 溶液(注意不要产生气泡，以免影响观察效果)，混匀后把培养板放入37 ℃细胞培养箱孵育2 h，使用酶标仪测定450 nm波长处吸光度值。细胞活力=(实验组吸光度值-空白组吸光度值)/(对照组吸光度值-空白组吸光度值)×100%。
1.4.5 划痕实验观察细胞迁移情况用Marker笔在6孔板背后，比着直尺均匀地划横线，间隔0.5-1.0 cm，每孔穿过5条线。在6孔板中每孔加入5×105个第8代BMSCs，培养细胞至汇合度90%以上，用200 μL枪头垂直与横线做划痕，每孔大于3条，用PBS洗去划下的细胞，实验组加入含体积分数为10%含药血清的DMEM高糖培养基，对照组加入等量DMEM高糖培养基，放入37 ℃细胞培养箱继续培养。按照6，24，30，48 h时间点进行拍照。用Image软件对不同时间点细胞的空白面积进行统计分析。
1.4.6 结晶紫染色及DAPI染色观察细胞迁移情况用Transwell 小室12孔板，上室加入1×105个第8代BMSCs与500 μL含体积分数10%胎牛血清的DMEM高糖培养基，下室加入相同培养基，置于37 ℃细胞培养箱中培养6 h左右观察细胞贴壁，弃去培养基，用PBS轻柔洗涤2次，两组上室换成不含血清的DMEM高糖培养基，下室含药血清组加入含体积分数10%含药血清的DMEM高糖培养基，对照组加入等量的不含血清的DMEM高糖培养基，继续培养至细胞铺满小室，用棉签擦去Transwell上室细胞，下室每孔加入1 mL 40 g/L多聚甲醛室温固定20 min，PBS洗3遍，每次5 min，每孔加入1 mL 0.1%结晶紫染液进行染色30 min，PBS轻轻冲洗，将染色后的小室放在干净的载玻片上，膜底面贴着载玻片，进行拍照。
DAPI染色：细胞固定后直接使用抗荧光衰减剂(含DAPI)进行核染色5 min左右，把染色后的小室放在干净的载玻片上，膜底面贴着载玻片，进行拍照。注意不要让细胞完全干燥，影响拍照效果。
1.4.7 向星形胶质细胞诱导分化在6孔板中接种第8代BMSCs，每孔3×105个细胞，用体积分数10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养，待BMSCs贴壁后换成含1%N2、2% B27的DMEM-F12培养基诱导分化，含药血清组加入含体积分数10%含药血清的诱导液。细胞长满后可进行两三次传代，最后一次传代孔内放入细胞爬片进行免疫荧光染色，每组3个爬片。免疫荧光步骤同1.4.2(抗体GFAP 1∶200)。
直接共培养：将第7代星形胶质细胞与第8代BMSCs消化计数，按104∶106比例加入6孔板中共培养，先用体积分数10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养，待BMSCs贴壁后换成含体积分数10%含药血清、1%N2、2%B27的DMEM-F12培养基诱导分化10 d左右，采用细胞免疫荧光法检测GFAP的表达。
间接共培养：将第8代BMSCs种植在12孔Transwell 细胞培养板下室中，每孔1×105个细胞，每组3孔，在上室种植第7代星形胶质细胞。待细胞贴壁后，换成含体积分数10%含药血清、1%N2、2%B27的DMEM-F12培养基诱导分化14 d左右，采用细胞免疫荧光法检测下室BMSCs中GFAP的表达。
1.5 主要观察指标 BMSCs在麝香黄芪复方滴丸含药血清培养条件下的增殖、迁移及分化情况。
1.6 统计学分析用Graph Pad Prism 8 软件进行统计作图，两组比较采用 t 检验，多组比较用单因素方差分析，P < 0.05 为差异有显著性意义。文章统计学方法已经通过河南中医药大学生物统计学专家审核。

讨论

缺血性脑卒中是因脑部血液循环障碍导致脑组织局部缺血、缺氧、坏死或软化，进而出现神经功能障碍，临床表现为偏瘫、偏盲、言语障碍、吞咽困难等，多发于中老年人，给家庭和社会造成严重的危害[20]。脑卒中后发生一系列级联反应，其中免疫炎症反应、能量代谢障碍、氧化应激、钙离子超载及凋亡自噬信号失衡等是主要的病理过程，造成神经元、神经胶质细胞和血管损伤，以及血脑屏障通透性增加导致血管炎性水肿，神经功能损伤。神经炎症是导致神经损伤的重要因素之一，由于梗死区半暗带中的细胞被免疫细胞、炎症递质迅速涌入而影响[21]。脑损伤后，血脑屏障受到破坏，内皮细胞渗透性增加，免疫细胞及分泌的炎症递质通过血脑屏障向受损组织迁移，加重炎症反应，造成脑损伤[22]。因此，研究减轻缺血性脑卒中炎症反应对治疗脑卒中具有重要意义。BMSCs已被证实是多种疾病的潜在治疗策略，特别是在再生医学领域[23]。
BMSCs是一种多能干细胞，主要特点有自我更新、分化、分泌及归巢，实验证实BMSCs移植可调节免疫炎症反应和血脑屏障损伤，对缺血性脑卒中治疗具有重要意义[24]。BMSCs通过多种机制下调T淋巴细胞和B淋巴细胞、自然杀伤细胞和抗原呈递细胞，包括细胞间相互作用和产生可溶性因子来调节免疫炎症反应[25-26]。由于局部组织损伤或炎症，移植的干细胞在几天内会出现凋亡或死亡[27]。慢性炎症抑制移植细胞的迁移和存活，促进活性氧的产生，从而诱导细胞凋亡。因此，探讨减少移植干细胞凋亡和促进细胞迁移存活的方法为干细胞广泛应用提供更好依据[28]。
中医药可以促进BMSCs的增殖、分化，通过影响微环境促进其存活及功能的建立[10，29]。研究表明，中药单体及复方能够诱导 BMSCs 增殖，如复方补肾颗粒含药血清、归肾丸水提物等[30-31]。中药红花有效成分棕榈酸通过上调 C-X-C 趋化因子受体4的表达促进大鼠BMSCs体外迁移[32]。川芎嗪(0.1-200 μmol/L)预处理显著增加BMSCs的体外迁移和黏附能力[33]。刘永琦等[34]研究黄芪多糖诱导BMSCs 增殖，通过检测神经元特异性烯醇化酶的表达，证明黄芪多糖可诱导大鼠 BMSCs 定向分化为神经细胞。星形胶质细胞分泌神经营养因子调节突触形成、神经元分化和神经元存活[35-36]。该实验与星形胶质细胞共培养的BMSCs向星形胶质细胞分化能力增加，可能与星形胶质细胞分泌营养因子有关。中药可以诱导BMSCs增殖、分化，但是中药与细胞因子之间的联系和通路还需要进一步探讨。
中医理论认为，脑卒中的发病与积损正衰、年老体衰等有关。脑中风后，瘀血阻滞，水津停聚，聚而为浊，浊蕴成毒，最终浊毒上犯脑之玄府，玄府瘀滞闭阻，神机失乱，临床多以活血化瘀、醒脑开窍法治疗脑卒中[37-38]。麝香黄芪复方滴丸以治疗脑卒中的经典方剂补阳还五汤为基础方，有黄芪、当归、赤芍、地龙、川芎、红花、桃仁、麝香、冰片组成，具有补气活血开窍等功效。现代研究认为补阳还五汤能够减轻炎症反应，改善血脑屏障损伤，治疗缺血性中风历史悠久[39-40]。黄芪甲苷通过抑制氧化应激、炎症、焦亡等对缺血性脑卒中大鼠模型起到神经功能保护作用[41-43]。黄芪甲苷配伍三七总皂苷在体外能促进缺血再灌注模型BMSCs增殖、迁移，并诱导其向神经元、星形胶质细胞定向分化[44]。网络药理学分析川芎多种活性成分可能通过作用于血管内皮生长因子A、前列素内环氧化物合成酶2、雌激素受体等治疗缺血性脑卒中；体外实验结果表明，川芎活性成分藁本内酯能上调转化生长因子β1蛋白表达水平，提高缺氧缺糖再灌注损伤细胞的存活率[45]。芳香开窍药麝香、冰片可降低血脑屏障通透性，减轻炎症反应和脑水肿，改善神经功能缺损，具有抗脑缺血的作用[46-48]。骨髓中存在BMSCs，“肾生骨髓、脑为髓之海”。《灵枢·经脉》云：“人始生，先成精，精成而脑髓生”。肾生髓功能，与骨髓中BMSCs和脑髓中神经干细胞相似[49]。现代医学研究发现，BMSCs在细胞增殖、分化等方面与中医学“肾精”生长、发育、衰老等过程类似[50]。
综上所述，该实验通过用麝香黄芪复方滴丸含药血清体外干预BMSCs，显示中药麝香黄芪复方滴丸含药血清能体外促进BMSCs增殖、迁移和促进向星形胶质细胞分化，为探讨中药和干细胞治疗缺血性脑卒中的治疗提供思路，但是干细胞的作用机制仍需要进一步研究。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

麝香黄芪复方滴丸含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖分化

Shexiang Huangqi compound dripping pills-containing serum promotes proliferation and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells

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