2.1   HuMSCs形态   见图1，人脐带组织块在培养基中孵育5-7 d，可见部分组织块贴壁变圆，周围有新生细胞爬出，呈梭形，稀疏分布；继续孵育至7-10 d，爬出的原代细胞密度明显增加，趋于融合，细胞形态细长，体积增大，与成纤维细胞相似。原代细胞生长速度慢，10-14 d细胞融合度达80%-90%可传代。传代后细胞生长速度较快，1∶3传代约3 d可长满培养瓶。该细胞系在体外可培养10代以上，但细胞增长速度在9代后减慢，细胞开始变得宽大、扁平。实验采用第4代细胞，此阶段细胞呈长梭形，生长活力佳。




2.2   HuMSCs表面生物学标志物的表达   实验选取第 4 代细胞样本进行流式细胞检测，结果显示HuMSCs稳定高表达CD73 (99.01%)，CD90 (95.6%)，CD105 (96.2%)，低表达或者不表达CD11b(0.80%)，CD19(0.6%)，CD34(0.4%)，CD45(0.6%)， HLA-DR(0.6%)，见图2。



2.3   MAFA-PDX1过表达慢病毒载体成功构建    HBLV-ZsGreen-PURO滴度为3×108 TU/mL。HBLV-h-MAFA-PDX1-3xflag-ZsGreen-PURO滴度为1×108 TU/mL，h-MAFA-PDX1测序结果比对见图3。



2.4   MAFA-PDX1过表达慢病毒感染HuMSCs的最适感染复数值   用感染复数值为5，10，20，30的MAFA-PDX1过表达慢病毒感染HuMSCs，培养72 h后在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光强度，流式细胞仪检测慢病毒的感染率。
图4为MAFA-PDX1慢病毒感染HuMSCs 72 h后倒置荧光显微镜下照片，感染复数值为5时细胞发出的绿色荧光较弱，而感染复数值为10，20，30时细胞发出的绿色荧光逐渐增 强。




图5为MAFA-PDX1慢病毒感染HuMSCs的感染率，感染复数值5时慢病毒感染率为52.6%；感染复数值为10，20，30时感染率分别为99%，100%，100%。随着感染复数值升高，部分HuMSCs出现死亡，且感染复数值越高，死亡细胞数量越多。最适感染复数值是选择细胞感染率大于90%同时细胞状态良好情况下的最小感染复数值。因此，实验选择感染复数值为10的MAFA-PDX1过表达慢病毒感染HuMSCs。



2.5   MAFA-PDX1修饰的HuMSCs向胰岛素分泌细胞分化   
2.5.1   细胞形态学观察   见图6。①方案A(单纯慢病毒组)：诱导第5天，细胞形态失去明显成纤维结构，细胞呈圆形或者类圆形，体积略增大，折光性增强，并开始出现细胞聚集；诱导第11天，部分细胞聚集成团，并呈半悬浮状态。无论是第5天还是第11天，方案A诱导分化后聚集成团细胞数量均少于方案B和方案C。②方案B(先药物诱导再加慢病毒组)：诱导第5天，部分细胞呈圆形或多角形，周边突出逐渐缩短，部分细胞聚集成团，但成团状细胞数量较少，半悬浮生长；第11天细胞聚集生长更为明显，出现聚集生长的胰岛样细胞团。方案B第11天聚集成团的细胞数量明显多于其余2种诱导方案。③方案C(慢病毒和药物诱导同时进行组)：诱导第5天，部分细胞呈圆形或多角形，周边突出逐渐缩短，部分细胞聚集成团，半悬浮生长，聚集成团的细胞较方案A和方案B多；诱导第11天细胞生长缓慢，细胞聚集成团数量较第5天减少。




2.5.2   不同方案诱导后细胞中胰岛相关基因表达
(1)方案A(单纯慢病毒组)诱导后细胞中胰岛相关基因表达，见图7。诱导第5天时，与对照组相比，MAFA和PDX1基因表达显著升高，二者的相对表达量分别为37 989.71±7 685.54(P=0.002)，844.09±22.49(P < 0.001)；GCG、GLUT2、NKX6.1基因表达升高，其相对表达量分别为33.30±14.50(P=0.035)，3.35±1.07(P=0.037)，5.48±1.79 (P=0.026)；INS和NEUROG3基因表达在统计学上无明显差异，分别为0.90±0.39(P=0.735)，0.35±0.21(P=0.181)。诱导第11天时，与对照组相比，MAFA和PDX1基因表达显著升高，二者的相对表达量分别为16 307.57±1 890.56(P < 0.001)，327.89±23.25(P < 0.001)；GCG、NKX6.1基因表达升高，其相对表达量分别为8.69±3.47(P=0.037)，2.65±0.59(P=0.025)；INS、GLUT2和NEUROG3基因表达在统计学上无明显差异，分别为1.26±0.14(P=0.118)，1.91±0.66(P=0.124)，0.28±0.03 (P=0.139)。



(2)方案B(先药物诱导再加慢病毒组)诱导后细胞中胰岛相关基因表达，见图8。诱导第5天时，与对照组相比，MAFA、GCG、INS、NKX6.1基因表达升高，其相对表达量分别为85.73±14.23(P=0.001)，40.46±6.54(P=0.001)，1.77±0.10(P=0.002)，5.39±1.51(P=0.016)；PDX1、GLUT2、NEUROG3基因表达在统计学上无明显差异，分别为0.18±0.06 (P=0.084)，2.06±1.16(P=0.269)，1.03±0.10(P=0.772)。诱导第11天时，与对照组相比，MAFA和PDX1基因表达显著升高，二者的相对表达量分别为193 881.49±20 119.50(P < 0.001)，2 644.85±146.88(P < 0.001)；GCG、INS、GLUT2基因表达升高，其相对表达量分别为2.98±0.73(P=0.033)，19.40± 2.44(P < 0.001)，5.02±1.38(P=0.015)；NKX6.1、NEUROG3基因表达在统计学上无明显差异，分别为0.90±0.13(P=0.546)，2.38±0.96(P=0.226)。MAFA、GCG、INS基因在诱导第5，11天均表达升高，其中MAFA和INS基因第11天表达量显著高于第5天，GCG基因第5天表达量高于第11天。NKX6.1基因在诱导第5天升高，第11天无明显表达。



(3)方案C(慢病毒和药物诱导同时进行组)诱导后细胞中胰岛相关基因表达，见图9。诱导第5天时，与对照组相比，MAFA和PDX1基因表达显著升高，二者的相对表达量分别为314 696.50±52 937.80(P=0.001)，4 414.68±736.09 (P=0.001)；GCG、INS基因表达升高，其相对表达量分别为25.53±6.23(P=0.005)，2.07±0.04(P < 0.001)；GLUT2、NKX6.1、NEUROG3基因表达在统计学上无明显差异，分别1.64±0.85(P=0.350)，1.77±1.46(P=0.523)，0.70±0.25 (P=0.406)。诱导第11天时，与对照组相比，MAFA和PDX1基因表达显著升高，二者的相对表达量分别为36 448.73±1 309.93(P < 0.001)，617.14±95.67(P=0.001)；INS基因表达升高，其相对表达量为2.93±0.09(P < 0.001)；GLUT2基因表达降低，其相对表达量为0.26±0.16(P=0.003)；GCG、NKX6.1、NEUROG3基因表达在统计学上无明显差异，分别为1.78±0.35(P=0.135)，0.74±0.20(P=0.272)，0.59±0.03(P=0.297)。MAFA、PDX1、INS基因在诱导第5，11天均表达升高，其中MAFA、PDX1基因第5天表达量高于第11天，INS基因第11天表达量高于第5天。GCG在诱导第5天表达升高，第11天无明显表达。NKX6.1基因在第5，11天均无明显表达。



(4)比较不同方案诱导后细胞中胰岛相关基因表达差异，见图10。同一诱导时间点3个方案横向比较，诱导第5天，方案C的MAFA和PDX1基因表达量最高；诱导第11天，方案B的MAFA和PDX1基因表达量最高。方案B在诱导第5天GCG基因表达，第11天INS和GLUT2基因表达是3个方案中最高的。因此，方案B具有更好地向胰岛素分泌细胞分化的潜能。



2.5.3   双硫腙染色结果   经药物诱导或(和)MAFA-PDX1基因共同修饰后，用双硫腙染色来鉴别诱导后细胞内锌离子的鳌合情况，见图11。在倒置相差显微镜下可观察到，经方案A、方案B、方案C诱导第11天部分细胞被双硫腙染成棕红色，提示诱导后的细胞含有锌离子，而对照组没有染色。方案A、C中部分细胞可被染成棕红色，但颜色较浅；方案B中部分小岛状细胞被染成棕红色，颜色较深。同时，在双硫腙染色过程中，随着染色时间的延长，多数贴壁无染色细胞变成悬浮细胞，只有部分染色细胞仍然保持贴壁状态。

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1型糖尿病是由于自身免疫系统调节紊乱，自身反应性T细胞对胰岛β细胞特异性免疫损伤导致的糖尿病。目前临床上主要的治疗方法是通过胰岛素替代治疗控制血糖，但不能遏制胰岛β细胞功能的进行性衰竭，无法有效阻止远期并发症的发生[1-2]。更为理想的方案是胰岛细胞移植，但由于供体细胞来源严重短缺、移植后免疫排斥反应等因素，限制了其临床应用。因此，急需寻找一种更好的方案来治疗糖尿病。
干细胞具有多向分化潜能和自我更新能力，干细胞来源胰岛β细胞移植被认为是治疗1型糖尿病的有效手段[3-4]。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，HuMSCs)是一种成体干细胞，取自废弃脐带，具有细胞含量丰富、增殖能力强、低免疫原性、无道德伦理争议等优势，是理想的细胞来源[5-8]。XIAO等[9-10]应用胰-十二脂肠同源盒1(pancreatic and duodenal homeobox 1，PDX1)、肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(MAFb ZIP transcription factor A，MAFA)2个基因注射到小鼠胰岛中，可使胰岛α细胞转分化为β细胞，提示MAFA、PDX1基因在胰岛β细胞的发育、分化中起着重要的作用。国内外多个研究团队将MAFA和PDX1等腺病毒载体导入干细胞，实现了将干细胞分化为胰岛β样细胞，但总体来说细胞的分化效率不高。研究表明慢病毒在细胞水平能持续稳定表达[11-14]，因此，该实验拟用MAFA-PDX1过表达慢病毒感染HuMSCs，并联合小分子化合物诱导方法，诱导HuMSCs向胰岛β细胞分化。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

1.1    设计   细胞学观察实验。
1.2   时间及地点   实验于2019年10月至2021年3月在汕头大学医学院干细胞研究中心完成。
1.3   材料
1.3.1   脐带来源   经汕头大学医学院第二附属医院伦理委员会批准，伦理号：汕大医附二伦审科(2018-04)号，人脐带来源于汕头大学医学院第二附属医院产科手术室行剖宫产术分娩的足月健康新生儿，并取得产妇及其家属同意，签署知情同意书。
1.3.2   试剂   DMEM/F12培养基(美国Gibco公司)；L-DMEM培养基(美国Gibco公司)；H-DMEM培养基(美国Gibco公司)；胎牛血清(美国Gibco公司)；尼克酰胺(Solarbio公司)；β-巯基乙醇(Solarbio公司)；Exendin-4(Solarbio公司)；双硫腙(Solarbio公司)；GoScript反转录系统(美国Promega公司)；Trizol(Invitrogen公司)；qPCR Master Mix(美国Promega公司)。
1.4   方法   
1.4.1   HuMSCs的分离和培养   生理盐水冲洗健康足月新生儿脐带，去除血凝块，剔除脐动静脉和羊膜，将剩余的脐带间充质组织剪成1.0-2.0 mm3的组织块，均匀铺板在12孔板中，加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基，置于37 ℃，体积分数为5%CO2细胞培养箱中培养，3 d换液1次，细胞融合度达80%加入含体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM培养基进行细胞传代。
1.4.2   流式细胞术鉴定HuMSCs表型   酶解第4代HuMSCs，500×g离心5 min沉淀细胞，弃去上清，加入流式细胞工作液1 mL，再次离心沉淀细胞，使用100 μL流式工作液重悬细胞，按5 μL抗体/管分别加入对应抗体，置于避光孵育15 min：anti-human CD73-APC、anti-human CD90-EITC、anti-human CD105-PerCP-Cy5.5、anti-human HLA-DR-PE、anti-human CD11b-PE、anti-human CD19-PE、anti-human CD34-PE、anti-human CD45-PE，随后洗涤，重悬，使用BD CantoII流式细胞仪检测。

1.4.3   构建、包装慢病毒载体

(1)构建慢病毒载体：对目的载体pHBLV-CMV-MCS-3FLAG-EF1-Zs Green-T2A-PURO 37 ℃酶切，胶回收；片段PCR回收；处理好的目的片段与载体连接，构建反应体系(20 μL)；转化(感受态细胞：DH5α)；抗性：氨苄霉素，37 ℃、230 r/min培养过夜；转化后的平板挑菌，37 ℃、230 r/min摇菌14 h，用菌液进行PCR鉴定，将阳性克隆菌液送测序公司测序。
(2)包装慢病毒载体：制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，3种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，将psPAX2，pMD2G辅助质粒和携带MAFA，PDX1基因的穿梭质粒共转染293T细胞，转染6 h后，更换为含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12完全培养基，培养48 h和72 h后，离心收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，4 ℃，82 700×g离心120 min，最后得到高滴度的慢病毒超离液。
1.4.4   MAFA-PDX1过表达慢病毒感染HuMSCs   采用感染复数值为5，10，20，30的MAFA-PDX1过表达慢病毒感染HuMSCs，按照1/2体积感染法操作，感染72 h后在倒置荧光显微镜下观察细胞发出绿色荧光的强弱，并用流式细胞术检测细胞感染率。选择最适感染复数值进行后续实验。
1.4.5   形态学观察   在MAFA-PDX1过表达慢病毒感染诱导HuMSCs过程中，倒置显微镜下观察细胞形态变化并拍照。
1.4.6   HuMSCs诱导分化为胰岛素分泌细胞的方案   应用3种方案对HuMSCs进行诱导分化，诱导时间均为11 d。①方案A为单纯慢病毒组：第1天加入MAFA-PDX1过表达慢病毒，培养液为含体积分数为10%胎牛血清的H-DMEM培养基，隔天换液。②方案B为先药物诱导再加慢病毒组，具体步骤：药物诱导第1天，培养液为含10 mmol/L尼克酰胺、1 mmol/L β-巯基乙醇，体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM培养基，药物诱导第2，3天，培养液为含10 mmol/L尼克酰胺、1 mmol/L β-巯基乙醇、体积分数为10%胎牛血清的H-DMEM培养基，药物诱导第4-11天，培养液为含10 mmol/L Exendin-4，10 mmol/L尼克酰胺、1 mmol/L β-巯基乙醇，体积分数为10%胎牛血清的H-DMEM培养基，期间于第7天加入MAFA-PDX1过表达慢病毒。③方案C是慢病毒和药物诱导同时进行组，第1天加入MAFA-PDX1过表达慢病毒，余同方案B。

1.4.7   qRT-PCR法检测诱导后细胞胰岛相关基因表达情况   诱导前和方案A、B、C分别诱导第5，11天，按照RNA simple  Total RNA kit说明书提取总RNA，RT-PCR步骤按照Quantscript RT Kit进行获得反转录产物，梯度稀释反转录产物，SYBR® Premix DimerEraserTM，ROX Reference Dye在室温解冻，基因引物序列见表1。设3个复孔，对各项指标进行检测及数据分析。

1.4.8   双硫腙染色   方案A、B、C诱导第11天，细胞中加入1 mL双硫腙工作液，37 ℃孵育20 min，PBS洗涤2 min ×3次，在倒置相差显微镜下拍照观察。对照组为诱导前的第4代HuMSCs。
1.5   主要观察指标   ①在MAFA-PDX1过表达慢病毒感染HuMSCs诱导分化过程中，倒置显微镜下观察细胞形态变化；②qRT-PCR法检测诱导后细胞胰岛相关基因表达；③双硫腙染色鉴别诱导后细胞内锌离子的鳌合情况。
1.6   统计学分析   所有实验重复3次，数据均以x±s表示。用SPSS 19.0软件进行统计学分析。统计方法包括独立样本t检验、方差分析。P < 0.05为差异有显著性意义，P < 0.01为差异有非常显著性意义。文章统计学方法已经由汕头大学医学院第二附属医院生物统计学专家审核。

间充质干细胞是具有自我更新潜能并能够分化为各种组织细胞类型的成体多能干细胞，来源方便且不存在伦理问题，易于分离、培养、扩增和纯化，因此是治疗糖尿病的理想种子细胞。
既往研究发现干细胞通过小分子化合物诱导为胰岛β细胞的效率不高，不足以应对临床需求。MAFA是具有胰岛β细胞特异性的转录因子，是促进胰岛β细胞发育和维持β细胞功能的主要因子；PDX1是决定内胚层时期胰腺发育的关键性转录因子，在成熟的胰岛β细胞中则维持其生存及增殖[15]。将胰岛分化的关键基因通过病毒载体导入干细胞中，有望获得高分化效率的胰岛β细胞，为糖尿病治疗开辟了一条新途径。腺病毒和慢病毒均为哺乳动物常见的表达系统，腺病毒表达系统携带基因不能整合到宿主基因组中，因此不能长期高表达，无法获得转基因动物，且具有高免疫原性。而慢病毒表达系统携带基因可整合至宿主细胞基因组中，长时间高水平表达，可建立基因稳定过表达的细胞株，且具有低免疫原性可减少移植后自身免疫反应发生[11]。因此，该实验应用MAFA-PDX1过表达慢病毒感染HuMSCs，获得MAFA和PDX1基因的稳定高表达，再结合小分子化合物诱导分化，期望可得到胰岛素高分泌细胞。
2015年JENNINGS等[16-17]在《Development》上详细描述了人类胰腺发育的过程，构建了人类胰腺发育全面、动态的基因组图谱。人类胰腺发育会依次经历以下几个阶段：多能干细胞、定向内胚层、原肠管、后前肠、胰腺内胚层、内分泌前体、不成熟β细胞和成熟β细胞[16-19]。人类胰腺来源于背侧和腹侧内胚层，背芽在受孕后26 d检测到，腹芽在受孕后30 d检测到，二者在怀孕后6-8周肠道旋转时融合[17]。表达PDX1的多能干细胞(MP细胞)分化为尖端和双能干细胞，尖端进一步分化为腺泡细胞，而双能干细胞通过短暂的表达NEUROG3(NGN3)分化为内分泌细胞。内分泌细胞的分化受NGN3调节，NGN3是形成内分泌祖细胞的关键转录因子[20-25]。该实验3种诱导分化方案，无论是诱导第5天还是第11天，均未见NEUROG3表达，见图10，可能是MAFA和PDX1基因修饰使HuMSCs跨越了NGN3短暂表达阶段直接到达内分泌祖细胞。有学者采用单细胞测序研究人类胰腺内分泌细胞诱导过程中的基因动态表达，多能干细胞诱导的胰岛样组织中主要包括 4 种细胞类型，共分为6个阶段：诱导8 d到达第3阶段，此阶段细胞主要表达PDX1；诱导第 13 天到达第 4 阶段，细胞除了表达 PDX1 外，开始表达 NKX6.1 和 CHGA；诱导第5，6阶段开始产生成熟的胰岛细胞，SC-β细胞(表达INS、NKX6.1、ISL1和其他β细胞标志物)、SC-α细胞(表达 GCG、ARX、IRX2和INS)、SC-EC细胞(表达CHGA、TPH1、LMX1A和SLC18A1)、非内分泌细胞[26]。内分泌细胞的形成需要一些关键的转录因子，如胰岛α细胞的形成需要表达ARX、GCG[27-28]，胰岛β细胞在成熟胰岛中会特异性表达NKX6.1[29]。该实验3种诱导分化方案在诱导第5天和第11天均可部分表达胰岛素相关基因，见图10。方案A除了高表达MAFA和PDX1外，诱导第5天，GCG、NKX6.1、GLUT2基因表达升高；在诱导第11天，GCG和NKX6.1表达升高，但上调幅度较第5天要低。无论是第5天还是第11天，在统计学意义上均未见INSULIN基因表达，见图7。这表明，单纯MAFA和PDX1慢病毒修饰HuMSCs可部分诱导为胰岛α细胞，但未能成功诱导为胰岛β细胞。方案B和方案C均为基因修饰联合药物诱导，但二者基因修饰的时间点不一样。方案B是先药物诱导，最后4 d加入MAFA-PDX1过表达慢病毒，这符合人类胰腺发育的过程。方案B前3 d在含尼克酰胺和β-巯基乙醇的培养基中培养，第4天开始加入Exendin-4。诱导第5天，方案B的PDX1基因无明显表达，而MAFA基因明显上调，与MAFA同步上调的还有基因GCG、INSULIN、NKX6.1。诱导第11天，方案B的MAFA和PDX1基因表达是3者中最高的，在相对应的时间节点上，INSULIN基因表达也是最高的，同时，GCG和NKX6.1基因也有上调，见图8，10。从方案B的诱导结果看到，在诱导第5天，GCG基因表达明显升高，说明部分诱导出胰岛α细胞；在诱导第11天，INSULIN和GLUT2基因表达均有升高，但NKX6.1无表达，说明该方案可部分诱导出胰岛β细胞，且分化效率为3个方案中最高的。而方案C在诱导起始即开始基因修饰，且同时加入药物诱导，除高表达MAFA和PDX1外，在诱导第5天，GCG和INSULIN基因表达升高，在诱导第11天，仅有INSULIN基因表达升高，GCG无表达，见图9。这说明，方案C在诱导第5天已出现部分胰岛α细胞和少量胰岛β细胞，但随着诱导的继续，INSULIN基因继续表达，胰岛β细胞分化仍在继续，而胰岛α细胞的分化已停止。因此，方案B具有更好地向胰岛素分泌细胞分化的潜能。
实验的创新点在于应用MAFA-PDX1修饰HuMSCs，结合基因修饰和药物诱导，共同向胰岛素高分泌细胞方向分化，在短时间内(11 d诱导时间)获得高分化效率的胰岛β细胞。通过细胞形态学、胰岛相关基因表达水平和双硫腙染色等结果，可以得出基因修饰联合小分子化合物诱导在获得胰岛β细胞方面优于单纯基因修饰的结论。这给下一步工作指明了方向，基于基因修饰的干细胞疗法有望治愈糖尿病。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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文题释义：

过表达慢病毒：慢病毒载体是以HIV为基础发展起来的基因治疗载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，可以在体内较长期的表达且安全性高。慢病毒为“自杀”性病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒，慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假性病毒。过表达慢性病毒产品可通过对慢病毒载体的改造和病毒包装，获得带特定基因序列的慢病毒颗粒，以满足不同的实验需求。
基因修饰：主要是指利用生物化学方法修改DNA序列，将目的基因片段导入宿主细胞内，或者将特定基因片段从基因组中删除，从而达到改变宿主细胞基因型或者使得原有基因型得到加强的作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

本实验应用MAFA-PDX1过表达慢病毒感染人脐带间充质干细胞，获得MAFA和PDX1基因的稳定高表达，再结合小分子化合物诱导分化，为在短时间内获得高分化效率的胰岛β细胞提供实验基础。基于基因编辑的干细胞疗法在糖尿病的治疗研究中取得了一定成果，随着研究进一步的开展，未来经基因编辑的干细胞疗法，有望彻底治愈糖尿病。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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