生长因子诱导骨髓间充质干细胞肝向分化抑制慢性肝纤维化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0662

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (33): 5286-5291.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0662

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生长因子诱导骨髓间充质干细胞肝向分化抑制慢性肝纤维化

向俊西^1，2，刘鹏²，杨丽斐²，苏敬博²，张谞丰^1，2，刘学民^1，2，吕毅^1，2

¹西安交通大学第一附属医院肝胆外科，陕西省西安市 710061；²精准外科与再生医学国家地方联合工程研究中心，陕西省西安市 710061

修回日期:2018-07-11 出版日期:2018-11-28 发布日期:2018-11-28
通讯作者: 吕毅，博士，教授，主任医师，西安交通大学第一附属医院肝胆外科，陕西省西安市 710061；精准外科与再生医学国家地方联合工程研究中心，陕西省西安市 710061
作者简介:向俊西，男，1987年生，重庆市丰都县人，汉族，2016年西安交通大学毕业，博士，助理研究员，主治医师，主要从事肝脏与胆道再生医学基础及临床研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81501608)；陕西省重点科技创新团队计划(2014KCT-24)

Hepatic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells induced by additional growth factors inhibits chronic liver fibrosis

Xiang Jun-xi^{1, 2}, Liu Peng², Yang Li-fei², Su Jing-bo², Zhang Xu-feng^{1, 2}, Liu Xue-min^{1, 2}, Lü Yi^{1, 2}

¹Department of Hepatobiliary Surgery, First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China; ²National and Local Joint Engineering Research Center for Precision Surgery and Regenerative Medicine, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China

Revised:2018-07-11 Online:2018-11-28 Published:2018-11-28
Contact: Lü Yi, MD, Professor, Chief physician, Department of Hepatobiliary Surgery, First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China; National and Local Joint Engineering Research Center for Precision Surgery and Regenerative Medicine, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China
About author:Xiang Jun-xi, MD, Assistant researcher, Attending physician, Department of Hepatobiliary Surgery, First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China; National and Local Joint Engineering Research Center for Precision Surgery and Regenerative Medicine, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81501608; Key Scientific and Technological Innovation Team Plan of Shaanxi Province, No. 2014KCT-24

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
细胞诱导分化：是指干细胞在可逆性轻度损伤或细胞外因素的诱导下，通过诱导物与细胞表面受体结合而介导细胞分化为某种特定类型和功能的细胞。诱导分化的主要方法有加入特定组合的生长因子或细胞因子、与诱导组织或细胞共培养、移植入特定器官或部位、结合报告基因转染某一特定转录因子或标志基因等。
肝纤维化：是指由多种原因引起的肝内胶原纤维过度沉积并伴有肝细胞减少、肝小叶结构紊乱、肝功能受损的病理状态，是许多慢性肝病进展为肝硬化的前期阶段。目前认为在肝纤维化过程中采取有效的治疗措施可能减缓或部分逆转进展，而发展至肝硬化阶段则不可逆。

摘要
背景：骨髓间充质干细胞在改善肝纤维化或肝硬化所致肝损伤中的作用仍存在争议，骨髓间充质干细胞移植对慢性肝纤维化的治疗作用是否与其分化程度相关，尚有待进一步研究。
目的：通过体外诱导骨髓间充质干细胞肝向分化并进行体内植入，观察其对肝脏慢性纤维化的治疗作用。
方法：分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞，通过体外诱导骨髓间充质干细胞肝向分化，获得肝样细胞。采用四氯化碳构建大鼠慢性肝纤维化模型，将骨髓间充质干细胞或肝样细胞通过尾静脉注射法行体内植入，观察并比较各组间大鼠生存率、肝纤维化程度、肝功能指标。
结果与结论：①骨髓间充质干细胞具有体外分化潜能，经诱导成功分化为肝样细胞；②将肝样细胞移植到慢性肝纤维化大鼠体内，大鼠4周生存率提高至66.7%，肝纤维化程度减轻至(14.69±0.37)%，白蛋白水平提高至(29.4±0.7) mg/L，谷草转氨酶水平降低至(347.0±11.3) U/L，优于模型组及骨髓间充质干细胞移植组(P < 0.05)；③结果提示，骨髓间充质干细胞经肝向诱导分化后行体内移植，能够改善慢性肝纤维化大鼠的肝脏功能，减轻纤维化程度，并提高生存率。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-7772-3261(向俊西)

关键词: 肝纤维化, 骨髓间充质干细胞, 诱导分化, 细胞移植, 肝功能, 生存率, 干细胞, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: The use of bone marrow mesenchymal stem cells to improve hepatic fibrosis or cirrhosis is still controversial. Whether the effect of bone marrow mesenchymal stem cell transplantation for chronic liver fibrosis is related to the degree of differentiation remains to be further studied.
OBJECTIVE: To explore the effect of hepatic-differentiated bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in the treatment of chronic liver fibrosis.
METHODS: Rat bone marrow mesenchymal stem cells were separated, cultured and purified by differential adherent culture. A 3-step protocol including sequential addition of growth factors, cytokines and hormones was used to induce the bone marrow mesenchymal stem cells to differentiate into hepatocyte-like cells. An animal model of chronic liver fibrosis was constructed by using tetrachloride. The bone marrow mesenchymal stem cells or hepatic-like cells were then implanted through the tail vein injection. The survival rate, liver fibrosis degree and liver function of rats were compared between groups.
RESULTS AND CONCLUSION: Bone marrow mesenchymal stem cells had the potential of differentiation in vitro and successfully differentiated into hepatic-like cells. After transplantation of hepatocyte-like cells, the 4-week survival rate of rats increased to 66.7%, the degree of liver fibrosis was significantly reduced to (14.69±0.37)%, the albumin level increased to (29.4±0.7) mg/L, and the level of glutamate transaminase decreased to (347.0±11.3) IU/L, which were significantly improved as compared with the model group and bone marrow mesenchymal stem cell transplantation group. To conclude, transplantation of hepatic-differentiated bone marrow mesenchymal stem cells can improve the liver function, reduce liver fibrosis and improve the survival rate of chronic liver fibrosis rats.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Bone Marrow, Mesenchymal Stem Cell Transplantation, Liver, Fibrosis, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

向俊西，刘鹏，杨丽斐，苏敬博，张谞丰，刘学民，吕毅. 生长因子诱导骨髓间充质干细胞肝向分化抑制慢性肝纤维化[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(33): 5286-5291.

Xiang Jun-xi, Liu Peng, Yang Li-fei, Su Jing-bo, Zhang Xu-feng, Liu Xue-min, Lü Yi. Hepatic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells induced by additional growth factors inhibits chronic liver fibrosis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(33): 5286-5291.

图/表（结果） 1

2.1 大鼠BMSCs培养、鉴定及诱导肝向分化 BMSCs传代至第3代时，绝大多数细胞呈均一的小梭形，细胞呈“鱼群状”生长，见图1A。流式细胞术检测结果显示，细胞均一高表达CD29、CD44、CD90，其阳性率分别为(96.6±2.8)%，(84.3±11.1)%，(88.9±8.4)%，而CD34、CD45则明显呈低表达，分别为(1.5±1.3)%，(6.1±2.8)%，符合BMSCs表面标记物的表达特征^[22]。油红O染色及茜素红染色显示，经诱导分化后胞浆内可见密集的红染脂滴、致密的红色矿化结节形成，证实所获BMSCs具有成脂及成骨分化潜能(图1B，C)。

经肝向诱导分化至第21天，BMSCs即呈现出类似肝细胞的立方形，呈铺路石样分布并密集排列(图1D)，透射电镜下可见细胞核浆比下降，而胞浆内可见多种成熟的细胞器结构及特异的黑色糖原颗粒(图1E，F)。免疫荧光显示，细胞表达肝脏特异性合成蛋白—白蛋白(图1G)，糖原染色结果显示胞浆内可见紫红色糖原颗粒(图1H)。

2.2 生存率比较 在造模及接受细胞移植后的观察期内，正常对照组大鼠未发生死亡，观察期内存活率为100%。移植后观察，模型组大鼠存活率最低，至第4周末时仅为33.3%，BMSCs移植组次之，为55.6%，肝样细胞移植组生存率较高，为66.7%，见图2。

2.3 肝脏形态学分析 移植后第4周处死存活的所有大鼠并取肝脏组织行大体观察及组织学评价，见图3。大体观察可见，正常对照组大鼠肝脏形态及质地正常、表面光滑、色泽均一、边缘锐利。模型组、BMSCs移植组、肝样细胞移植组大鼠肝脏则呈现出不同程度色泽晦暗、质地明显变硬且不均，以模型组最为显著，而肝样细胞移植组程度最轻。

对各组大鼠肝脏进行苏木精-伊红染色及Masson染色，结果显示：正常对照组大鼠肝脏细胞形态正常，排列紧密有序，肝小叶形态清楚、规则，汇管区及中央静脉结构清楚。模型组肝脏内可见大量胶原纤维不规则增生，假小叶形成，肝细胞出现点片状坏死，肝内炎性细胞大量浸润。与模型组相比，BMSCs移植组、肝样细胞移植组大鼠肝脏纤维化程度均有不同程度的改善，胶原纤维增生及假小叶形成依次减少，肝细胞坏死数量降低。对Masson染色照片进行累积吸光度测量，以分析并比较各组肝脏内胶原纤维增生程度，见图4。正常组肝脏阳性染色率为(4.99±0.58)%，低于其余3组；模型组阳性率为(21.73±7.56)%，高于2个细胞移植组；BMSCs移植组阳性率为(14.69±0.37)%，亦高于肝样细胞移植组(11.14±0.82)%，差异有显著性意义(P < 0.05)。

2.4 大鼠肝功能比较 移植后4周收集各组存活大鼠的血清进行肝功能检测及比较，见图5。模型组大鼠血清白蛋白水平低于正常组[(23.8±2.3) mg/L，(35.4±0.9) mg/L]，而模型组谷草转氨酶水平则高于正常组[(559.8±44.4) U/L，(129.1±4.8) U/L]。BMSCs移植组白蛋白、谷草转氨酶水平[(26.7±0.8) mg/L，(432.0±14.0) U/L]，与模型组比较有一定程度的改善，肝样细胞移植组的肝功能改善程度更大[(29.4±0.7) mg/L，(347.0±11.3) U/L]，优于BMSCs移植组(P < 0.05)，但与正常对照组相比仍有较大差距。

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引言

肝纤维化是指由多种原因引起的肝内胶原纤维过度沉积并伴有肝细胞减少、肝小叶结构紊乱、肝功能受损的病理状态，是许多慢性肝病进展为肝硬化的前期阶段。目前认为在肝纤维化过程中采取有效的治疗措施可能会减缓或部分逆转进展，而发展至肝硬化阶段则不可逆^[1-3]。因此，在早期控制和逆转肝纤维化进展的方法成为研究的热点。

众多研究证实干细胞改善肝纤维化或肝硬化所致的肝损伤具有积极作用^[4-5]。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是来源于骨髓的成体干细胞，属于中胚层非造血多能干细胞，于20世纪60年代由德国学者Friedenstein首次发现并描述为骨髓来源的一种贴壁生长的成纤维细胞样细胞^[6-8]，具有易获取、增殖快、多向分化、免疫调节功能等特点，且自体移植无伦理学障碍、无排斥反应，在细胞移植治疗中具有显著的优势^[9-10]。BMSCs可在合适的生物活性因子诱导下，分别向包括肝细胞在内的全部3个胚层的细胞分化，促进细胞再生和组织修复^[11-12]。研究证实，BMSCs植入体内能够发挥肝细胞保护作用、抑制肝纤维化进程、促进肝再生、改善受损肝脏的功能^[13-14]。此外，BMSCs所介导的肝脏修复机制还在于其强大的旁分泌作用。BMSCs能够分泌血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、单核细胞趋化蛋白1、基质细胞源性因子1等，发挥促进微血管重建和肝细胞增殖的功能^[15]。但另一部分研究则表明BMSCs植入体内能够促进肝星状细胞及成纤维细胞的活化，使肝细胞抗纤维化能力减弱，从而加速了肝脏纤维化病变进程^[16-17]，并警示临床移植人源BMSCs有加重肝纤维化的风险。还有研究表明多能干细胞在体外经诱导分化为心肌细胞、胰岛β细胞、神经细胞后再行体内移植能治疗心肌病、糖尿病、神经系统疾病等^[18-20]。因此，BMSCs移植对慢性肝纤维化的治疗作用是否与其分化程度相关，尚有待进一步研究。该实验通过体外诱导BMSCs肝向分化并进行体内植入，探讨其对于肝脏慢性纤维化的治疗作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞学实验及随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2014年6月至2015年12月在西安交通大学先进外科技术与工程研究所完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 健康4周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠，体质量100-120 g，用于BMSCs的提取以及慢性肝纤维化模型构建，购买于西安交通大学医学部实验动物中心，生产许可证号：SCXK(陕)2007-001。大鼠饲养于室温18-25 ℃、自然光线环境，标准饲料喂养，每日定时观察进食及活动情况。手术操作前常规禁食12 h，但不禁饮。实验过程严格遵照国家科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见(2016)》进行，并获得西安交通大学医学部实验动物中心动物伦理委员会审查并批准。

1.3.2 实验仪器及试剂 CO₂恒温培养箱(Thermo Scientific公司)；倒置相差显微镜、正置荧光显微镜(Olympus公司)；流式细胞仪(BD公司)；透射电子显微镜及扫描电子显微镜、全自动生化分析仪(Hitachi公司)；DMEM/F12培养基、谷氨酰胺、胰蛋白酶(碧云天)；青链霉素(Hyclone公司)；胎牛血清(Gibco公司)；2-磷酸-抗坏血酸、丙酮酸钠、β-甘油磷酸二钠盐、IBMX、L-脯氨酸、吲哚美辛、地塞米松、烟酰胺、抑瘤素M、ITS混悬剂(Sigma公司)；肝细胞生长因子(Peprotech公司)；碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子(Invitrogen公司)；四氯化碳(西安化学试剂厂)；CD29、CD34、CD44、CD45、CD90单克隆抗体(ebiosience公司)；白蛋白抗体(Abcam公司)；FITC标记山羊抗兔二抗(北京鼎国)；苏木精-伊红染色试剂盒、Masson三色染色液套组(珠海贝索)。

1.4 实验方法

1.4.1 大鼠BMSCs分离、培养及纯化 采用改良的全骨髓差速贴壁法分离、培养大鼠BMSCs，具体方案参见课题组既往发表文献^[21]。简述如下：严格麻醉消毒，解剖获取大鼠下肢长骨，于超净工作台内用培养基冲洗骨髓腔，过滤收集细胞，接种于细胞培养瓶中培养。经过1.5 h后获取上层悬液接种至新瓶培养，早期全量换液2次，分别在12 h及24 h，此后每3 d换液。大约80%融合时即可传代，3代后采用流式细胞技术鉴定细胞表面标志物，并通过诱导成脂、成骨分化评价其多向分化潜能^[22]。

成脂诱导液成分：DMEM培养基+体积分数为10%胎牛血清+1%青/链霉素+0.1 mmol/L吲哚美辛+0.5 mmol/L IBMX+10 mg/L胰岛素+1 μmol/L地塞米松。

成骨诱导液成分：DMEM培养基+体积分数为10%胎牛血清+1%青/链霉素+10 mmol/L β-甘油磷酸钠+50 μmol/L 2-磷酸-L-抗坏血酸+1 μmol/L地塞米松。

1.4.2 体外诱导BMSCs肝向分化 收集第3-5代状态良好的BMSCs接种于多聚赖氨酸包被的细胞培养板内，细胞浓度为(3-5)×10⁷ L^-1。经过48 h稳定贴壁后按流程启动诱导程序，诱导BMSCs定向分化为肝样细胞：无血清培养基(1#)2 d，分化培养基(2#)7 d，成熟培养基(3#)14 d，均隔天换液。诱导分化后的细胞分别行相差显微镜观察细胞形态，透射电镜观察细胞器等超微结构变化，免疫荧光染色及糖原染色检测白蛋白及糖原合成能力，综合评价细胞肝向分化的效果。

1#诱导液成分^[20]：IMDM培养基+1%青/链霉素+10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子+20 μg/L表皮细胞生长因子。

2#诱导液成分^[20]：IMDM培养基+1%青/链霉素+体积分数为10%胎牛血清+0.61 g/L尼克酰胺+20 μg/L肝细胞生长因子+10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子。

3#诱导液成分^[20]：IMDM培养基+1%青/链霉素+体积分数为10%胎牛血清+1 μmol/L 地塞米松+20 μg/L抑瘤素M+50 mg/L ITS⁺预混剂。

1.4.3 建立慢性肝纤维化模型及分组 采用四氯化碳腹腔注射建立大鼠慢性肝纤维化模型。实验动物随机分为4组×10只，分别为正常组、模型组、BMSCs移植组、肝样细胞移植组。除正常组外，其余3组每周进行3次腹腔内注射10%四氯化碳(食用油配制)，剂量为2 mL/kg，造模时间12周，共注射36次。

1.4.4 细胞移植 于造模第12周时进行大鼠尾静脉细胞注射移植，移植细胞数量约为5×10⁶个。正常组及模型组均接受生理盐水注射作为对照，BMSCs移植组接受BMSCs移植，肝样细胞移植组接受肝样细胞移植。细胞移植后继续给予10%四氯化碳腹腔注射4周，共注射12次。每日定时观察记录动物生存、活动、进食状态。

1.5 主要观察指标 ①细胞移植或生理盐水注射后的4周内连续记录大鼠生存情况并计算各组生存率；②细胞移植或生理盐水注射4周后取肝组织进行大体观察、苏木精-伊红染色、Masson染色，对比各组间慢性肝纤维化情况。应用Image J图像软件测量累积吸光度，并对肝内纤维组织进行半定量分析；③细胞移植或生理盐水注射4周后采用全自动生化分析仪检测并比较大鼠血清白蛋白及谷草转氨酶水平。

1.6 统计学分析 所有统计数据均采用SPSS 21.0 (SPSS,Inc.,Chicago,IL,USA)统计软件包进行分析。计量资料均以x(_)±s表示，组间比较采用student-t 检验；计数资料组间比较采用卡方检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

肝纤维化是许多慢性肝病进展为肝硬化的前期阶段，目前认为在肝纤维化过程中采取有效的治疗措施可能减缓或部分逆转进展，而发展至肝硬化阶段则不可逆。因此，如何在早期控制和逆转肝纤维化进展成为研究热点。

众多研究证实干细胞改善肝纤维化或肝硬化所致的肝损伤具有积极作用^[23]。Jiang等^[24]采用BMSCs与肝脏脱细胞支架构建肝样组织，嵌入肝内治疗急性肝衰竭小鼠模型；Ji等^[25]采用在细胞外基质中预分化的BMSCs进行细胞移植治疗肝纤维化小鼠模型，均发现肝功能明显改善，生存率显著提高。该研究考虑到细胞移植后需经过循环、归巢等过程，并逐渐发挥作用，短时间内对肝功能的影响有限，故选择移植后4周收集各组存活大鼠的血清进行肝功能检测及比较。结果证实，通过尾静脉注射的方式移植入BMSCs，能够减轻大鼠慢性肝纤维化程度，改善肝功能，提高受体大鼠生存率。

BMSCs对于损伤肝脏的修复及功能改善作用，可能的机制包括^[26-28]：①分化为成熟肝细胞并发挥代谢功能，代偿肝功能不足；②通过旁分泌作用由多种生物活性因子改变微环境，促进肝细胞再生；③作用于肝星状细胞等肝内非实质细胞，降低胶原和其他基质蛋白的沉积。Ji等^[25]研究发现，移植后的BMSCs或肝样细胞有部分能够继续分化为肝细胞，但是比例仅为5%以下，尚不足以通过代偿功能改变肝损伤。同时，BMSCs移植降低了肝内α-平滑肌肌动蛋白的表达，并升高了白细胞介素10、肝细胞生长因子、白蛋白的表达，抑制了白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、转化生长因子β等因子的功能。白细胞介素10等可以活化基质金属蛋白酶1，降解胶原沉积，而白细胞介素6等能够通过作用于肝星状细胞而使胶原合成增多，进而证明BMSCs通过移植肝星状细胞活化改善了肝纤维化程度，并通过旁分泌生长因子促进了肝细胞再生及功能改善，进一步研究阐明BMSCs对肝脏损伤的影响及其机制，对于利用干细胞重建组织工程肝脏有重要意义。

尽管大部分研究对BMSCs改善慢性肝纤维化及肝功能的作用持积极乐观的态度，但也有部分学者提出了不同的意见。Russo等^[16]研究表明BMSCs植入体内能够促进肝星状细胞及成纤维细胞的活化，从而提高了肝脏纤维化病变的风险。Di Bonzo等^[17]将人源性BMSCs移植入免疫联合缺陷小鼠体内，结果发现归巢入肝内的移植细胞呈现成纤维细胞样形态。那么，BMSCs移植对慢性肝纤维化的作用是否与其分化程度相关，值得进一步研究。该实验在体外诱导BMSCs肝向分化后再移植入慢性肝纤维化大鼠体内，其生存率、肝纤维化程度、肝脏功能均有不同程度的改善，优于未分化的BMSCs移植组。因此可以推论，BMSCs移植对肝损伤的治疗作用可能与其肝向分化程度相关，提高BMSCs肝向分化的效率，有利于其体内植入后改善慢性肝纤维的治疗效果，这可能与不同分化阶段细胞的旁分泌功能及定向分化能力相关。但目前对于肝向诱导分化到哪个阶段最有利于移植尚无可靠研究。课题组将在进一步研究中尝试通过移植不同分化阶段的细胞来阐明这一问题。

目前，体外诱导BMSCs肝向分化的效率、成功率及可重复性较差，是制约其临床应用的难题，其关键在于这一分化过程不仅受生长因子等生化诱导信号的刺激，还受物理信号的调控。BMSCs所处的生态位对于其活性和功能至关重要，包括旁分泌信号、细胞外基质成分以及氧和营养物质的供应等^[29-31]。而传统的培养条件与体内三维环境差异巨大，并不利于细胞之间的信号传导，诱导信号因子容易失活，使干细胞容易失去分化潜能^[32-34]。因此，可靠的方法是在体外培养中尽量模拟体内肝细胞系分化过程，给细胞分化过程提供多种仿生的诱导信号，包括物理、化学及生物信号。有研究证明脱细胞支架保留了天然的细胞外基质结构和成分、三维多孔结构、微血管网络基底膜，是细胞生长的理想环境^[35]，若在脱细胞支架中培养BMSCs并通过添加外源性生长因子诱导其肝向分化，可能有利于优化提高其肝向分化的效率，展现出良好的应用前景。

总之，BMSCs经肝向诱导分化后行体内移植，能够改善慢性肝纤维化动物的肝脏功能，减轻纤维化程度，并提高生存率；提高干细胞肝向分化的效率，有利于其体内植入后改善慢性肝纤维的治疗效果。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

生长因子诱导骨髓间充质干细胞肝向分化抑制慢性肝纤维化

Hepatic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells induced by additional growth factors inhibits chronic liver fibrosis

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