低氧对内皮祖细胞迁移的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0810

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (12): 1902-1908.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0810

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低氧对内皮祖细胞迁移的影响

赵辉，郜玉忠

锦州医科大学附属第一医院，辽宁省锦州市 121000

收稿日期:2017-11-13 出版日期:2018-04-28 发布日期:2018-04-28
通讯作者: 郜玉忠，主任医师，硕士生导师，锦州医科大学附属第一医院，辽宁省锦州市 121000
作者简介:赵辉，男，1987年生，辽宁省锦州市人，2014年辽宁医学院毕业，硕士，医师，主要从事骨关节与运动损伤的研究。
基金资助:
辽宁省自然科学基金项目资助(2014022010)

Hypoxia induces the migration of endothelial progenitor cells

Zhao Hui, Gao Yu-zhong

the First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University, Jinzhou 121000, Liaoning Province, China

Received:2017-11-13 Online:2018-04-28 Published:2018-04-28
Contact: Gao Yu-zhong, Chief physician, Master’s supervisor, the First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University, Jinzhou 121000, Liaoning Province, China
About author:Zhao Hui, Master, Physician, the First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University, Jinzhou 121000, Liaoning Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Liaoning Province, No. 2014022010

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
细胞迁移(cell migration)：也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。
内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)：是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞(angioblast)，在生理或病理因素刺激下，可从骨髓动员到外周血参与损伤血管的修复。1997年，Asahara等首次证明循环外周血中存在能分化为血管内皮细胞的前体细胞，并将其命名为血管内皮祖细胞。近年来的研究显示，内皮祖细胞在心脑血管疾病、外周血管疾病、肿瘤血管形成及创伤愈合等方面均发挥重要作用，并为缺血性疾病的研究治疗提供了新思路。近年来，内皮祖细胞生物学特性和治疗作用的研究成为这一领域新的热点。

摘要
背景：研究证明，低氧微环境下局部内皮祖细胞通过释放基质细胞衍生因子1等细胞因子促进内皮祖细胞的动员、归巢。
目的：分析不同低氧时间点对内皮祖细胞基质细胞衍生因子1蛋白表达的影响，及对内皮祖细胞迁移影响，为治疗缺血性疾病提供新的思路。
方法：①取SD大鼠的四肢长骨骨髓，分离、培养内皮祖细胞并鉴定；②将分离培养的细胞分4组置于常氧和低氧条件下：常氧对照组、低氧6 h组、低氧12 h组、低氧24 h组；③采用ELISA法、免疫荧光法检测不同氧气浓度和时间条件下内皮祖细胞上清液基质细胞衍生因子1的表达；RT-PCR及Western Blot检测不同条件下基质细胞衍生因子1 mRNA和蛋白的表达；Transwell检测低氧对内皮祖细胞迁移的影响。
结果与结论：①实验分离培养的细胞经鉴定为内皮祖细胞；②ELISA和免疫荧光检测结果均显示：与常氧对照组比较，培养上清液中基质细胞衍生因子1的表达在低氧6 h开始增强，12 h表达最强，24 h又有所减弱；④RT-PCR及Western Blot检测结果显示：与常氧对照组相比，低氧诱导基质细胞衍生因子1的mRNA和蛋白相对表达量显著上调(P < 0.01)，其中，低氧12 h条件下基质细胞衍生因子1的表达最强，依次为低氧24 h和低氧6 h；⑤与常氧对照组比较，低氧组24 h穿膜细胞数显著增加(P < 0.05)，低氧 12 h组显著多于低氧6 h组和低氧24 h组；⑥结果表明，低氧能够促进基质细胞衍生因子1的分泌，并诱导内皮祖细胞迁移。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0003-0405-5618(赵辉)

关键词: 内皮祖细胞, 低氧, 迁移, 组织构建

Abstract:

BACKGROUND: Local endothelial progenitor cells (EPCs) have been reported to promote migration and homing of EPCs by releasing stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) under hypoxia environment.
OBJECTIVE: To investigate the effect of different hypoxia periods on the expression of SDF-1 protein in EPCs and the migration of EPCs, thus providing new ideas for the treatment of ischemic diseases.
METHODS: The bone marrow of the long bone was removed from Sprague-Dawley rats used for isolate EPCs. After culture and identification, EPCs were divided into four groups: control (normoxia), 6-, 12- and 24-hour hypoxia groups. The expression level of SDF-1 in the supernatant of EPCs in each group was detected by ELISA and immunofluorescence. The mRNA and protein levels of SDF-1 were detected by RT-PCR and western blot assay. The effect of hypoxia on the migration of EPCs was tested by Transwell assay.
RESULTS AND CONCLUSION: The obtained cells were identified as EPCs. ELISA and immunofluorescence results showed that compared with the control group, the expression level of SDF-1 began to increase at 6 hours of hypoxia, peaked at 12 hours of hypoxia, and then decreased at 24 hours of hypoxia. RT-PCR and western blot assay results found that the mRNA and protein expression levels of SDF-1 were the highest in the 12-hour hypoxia group, followed by 6- and 24-hour hypoxia groups, and the lowest in the control group (P < 0.01). The number of EPCs penetrating the membrane in the 12-hour hypoxia group was significantly more than that in the 6- and 24-hour hypoxia groups, and the number in the 24-hour hypoxia group was significantly more than that in the control group (P < 0.05). In summary, hypoxia can promote the secretion of SDF-1 and induce the migration of EPCs.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Cell Hypoxia, Endothelial Cells, Cell Movement, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

赵辉，郜玉忠. 低氧对内皮祖细胞迁移的影响[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(12): 1902-1908.

Zhao Hui, Gao Yu-zhong. Hypoxia induces the migration of endothelial progenitor cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(12): 1902-1908.

图/表（结果） 2

2.1 光镜下观察内皮祖细胞的形态内皮祖细胞通常于接种后两三天开始贴壁。接种后第4天，可见细胞团聚呈“集落”样；接种后2周，可见细胞成“鹅卵石”样改变，见图1。

2.2 流式细胞检测结果与分析结果显示，CD34阳性率为(53.21±5.14)%，CD133阳性率为(50.33±6.08)%，血管内皮生长因子受体2阳性率为(55.07±4.16)%，CD34(+)、CD133(+)、血管内皮生长因子受体2(+)的阳性率较高，可以说明实验分离的细胞符合内皮祖细胞特征，为内皮祖细胞。见图2。

2.3 ELISA检测不同条件下基质细胞衍生因子1的表达低氧 6，12，24 h诱导基质细胞衍生因子1的表达，6 h表达开始增强，12 h表达最强，24 h又有所减弱。与常氧对照组比较，低氧组基质细胞衍生因子1的表达显著增高(P < 0.05)；低氧12 h显著高于低氧6 h和24 h(P < 0.05)。见表2。
2.4 免疫荧光检测不同条件下基质细胞衍生因子1的表达
低氧6，12，24 h诱导基质细胞衍生因子1的表达，与常氧对照组比较，低氧6 h表达开始增强，12 h表达最强，24 h又有所减弱。因基质细胞衍生因子1为胞质和胞膜表达，FITC为绿色荧光。见表3，图3。
2.5 RT-PCR检测不同条件下基质细胞衍生因子1 mRNA的表达分析RT-PCR条带图可知，低氧6，12，24 h诱导基质细胞衍生因子1的表达，与常氧对照组比较，低氧6 h表达开始增强，12 h表达最强，24 h又有所减弱，见图4。分析表4可知，与常氧对照组相比，低氧6，12，24 h诱导基质细胞衍生因子1 mRNA的表达显著上调(P < 0.01)。
2.6 Western blot检测不同条件下基质细胞衍生因子1蛋白的表达分析图5 Western blot条带和可知，与常氧对照组相比，低氧6，12，24 h诱导条件下基质细胞衍生因子1蛋白的表达增加，其中，低氧12 h条件下基质细胞衍生因子1蛋白的表达最强，依次为低氧24 h和低氧6 h，对基质细胞衍生因子1和β-actin蛋白积分光密度进行计算，将两者比值作为基质细胞衍生因子1的相对表达量，结果与条带的表达情况相符合，说明Western blot检测结果与ELISA检测和免疫荧光检测结果相吻合，见表5。
2.7 Transwell检测低氧对内皮祖细胞迁移的影响分析表6可知，与常氧对照组比较，低氧组24 h穿膜细胞数显著增加(P < 0.05)；低氧12 h组显著多于低氧6 h组和低氧24 h组，差异有显著性意义(P < 0.05)。见图6。

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引言

缺血性疾病一直是困扰人类健康的一大难题，一旦遇到患有股骨头坏死、心肌梗死、肢体缺血坏死等难以治愈的疾病，医生就会束手无策。随着科技的发展，干细胞移植技术迅猛发展，人们治愈缺血性疾病的愿望即将实现^[1-2]。

内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是一类未分化的细胞，成熟后分化为分布在人体的骨髓、外周血和肝脏中的内皮细胞(endothelial cells，ECs)，一般取自新生儿的脐血、胎儿的肝脏或者骨髓中。内皮祖细胞经过细胞分裂增殖、分化成为内皮细胞，内皮细胞是血管的必要组成部分。在人体需要时，内皮祖细胞到达外周血，并随着血液流动到达需要部位，分裂分化成为内皮细胞形成新生血管^[3]。所以，内皮祖细胞可以在在血管组织工程领域广泛应用，可以利用内皮祖细胞对贫血、血管内皮破损、缺血性坏死等血管类疾病进行治疗^[4-6]。目前，相关学者正在致力于将内皮祖细胞促进新生血管形成的特点应用于骨组织工程，期望能够通过内皮祖细胞促进组织工程骨的血管化，提高其成骨率^[7-8]。

研究证明，低氧微环境下局部内皮祖细胞通过释放基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1)等细胞因子促进内皮祖细胞的动员及归巢^[5^，^9-11]。可见内皮祖细胞血管修复的过程是在低氧微环境下进行的，研究发现在内皮祖细胞增殖、动员、迁移、归巢、凋亡等生理过程中基质细胞衍生因子1可发挥重要作用，SDF-1/CXCR4信号转导通路在胚胎发育、血管发育和心脏发育过程中也起着关键的作用^[12-13]。在缺血组织阻断基质细胞衍生因子1或在循环细胞阻断CXCR4将抑制内皮祖细胞向损伤部位聚集^[14]。

课题通过观察不同低氧时间点对内皮祖细胞基质细胞衍生因子1蛋白表达的影响，及对内皮祖细胞迁移影响进行实验研究，讨论其改善局部血运的可能，探讨不同低氧条件的诱导作用、使内皮祖细胞归巢至缺血部位改善和逆转人体缺血状态，为治疗缺血性疾病提供新思路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计分组对照细胞学实验。

1.2 时间及地点实验于2016年12月在锦州医科大学附属第一医院完成。

1.3 材料

实验动物：SD大鼠，体质量150-180 g，雌雄不限，数量60只，由锦州医科大学附属第一医院实验动物中心提供。实验动物操作过程遵循实验动物福利要求并获锦州医科大学实验动物伦理委员会批准。

实验用主要试剂：M199培养液、胎牛血清由Gibco提供，淋巴细胞分离液购自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)由PeproTech提供，CD34-FITC、CD133-FITC及血管内皮生长因子R2-FITC由Becton Dickinson公司提供，基质细胞衍生因子1抗体由Abcam公司提供，SABC免疫组织化学试剂盒及ACTIN抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供。

1.4 实验方法

1.4.1 内皮祖细胞的诱导分离培养利用PBS对SD大鼠四肢长骨中的骨髓进行冲洗，利用离心管收集洗涤下来的骨髓，密度梯度离心法分离出单个核细胞(白色絮状物层)，重悬在含有胎牛血清、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的M199培养液中，在细胞培养瓶中预先包被人纤维连接蛋白(HFN)，然后接种细胞，在37 ℃，体积分数5%CO₂的条件下培养3 d后换液除去未贴壁的细胞继续培养，每隔三四天对培养液进行更换，当细胞融合达到80%-90%时可进行传代培养，以后每8-10 d可传代培养1次。

1.4.2 内皮祖细胞的鉴定

(1)形态学检测：利用倒置相差显微镜对细胞生长情况和形态学变化进行观察，根据内皮祖细胞形态进行鉴定^[15]。

(2)流式细胞检测：利用无血清的M199培养基将诱导培养的第3代内皮祖细胞的细胞浓度稀释为1×10⁹ L^-1，分别利用10 μL FITC标记的CD34抗体、CD133及血管内皮生长因子R2抗体进行标记后，避光孵育30 min，利用流式细胞仪对内皮祖细胞表面特有生物标记进行分析，将细胞以同型的IgG-FITC染色作为对照，CD34(+)、CD133(+)、血管内皮生长因子受体2(+)的细胞被认为符合内皮祖细胞特征。

1.4.3 实验分组分组及处理方式见表1。

1.4.4 ELISA检测不同条件下基质细胞衍生因子1的表达将基质细胞衍生因子1和生物素标记的抗体在37 ℃条件下进行温育后进行洗涤，利用亲和素标对HRP进行标记，继续与上述处理后的抗体进行温育，然后洗涤除去未结合的酶结合物，底物A和B进行混合后会与酶结合物作用产生颜色，以仪器读取呈色结果作为ELISA检测基质细胞衍生因子1质量浓度的结果。

1.4.5 免疫荧光法检测不同条件下基质细胞衍生因子1的表达利用PBS对已收集的常氧和低氧6，12，24 h的细胞涂片进行冲洗(2次)，按荧光试剂盒说明书进行染色。以基质细胞衍生因子1为一抗，染色结果基质细胞衍生因子1为胞浆和胞膜发绿色荧光(FITC)为阳性。

1.4.6 RT-PCR检测不同条件下基质细胞衍生因子1 mRNA的表达 RNA提取试剂Trizol对常氧和低氧6，12，24 h的细胞进行总RNA提取，利用超微量紫外可见分光光度计核酸蛋白测定仪测定RNA浓度，并将RNA浓度调整为1 g/L，将2 μg总RNA为模板反转录合成cDNA，再以cDNA为模板对基质细胞衍生因子1基因和内参GAPDH进行实时荧光定量PCR反应。每一个样品设置3个重复，PCR反应体系为20 μL。

扩增条件为：94 ℃预变性3 min，94 ℃变性30 s， 55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，35个循环，72 ℃延伸10 min，扩增后进行琼脂糖凝胶电泳，利用凝胶扫描系统对电泳结果进行分析。

基质细胞衍生因子1扩增引物：上游5-GAG CCA ACG TCA AGC ATC TCA-3，下游5-TTC GGG TCA ATG CAC ACT TGT-3；

内参GAPDH扩增引物为：上游5-ACG GAC AGG ATT GAC AGA TT-3，下游5-GCC ACT TGT CCC TCT AAG AA-3。

表1 实验分组干预方法

Table 1 Grouping and interventions

组别	条件
常氧对照组	体积分数21%O₂，25%CO₂，54%N₂
低氧6 h组	体积分数1%O₂，5%CO₂，94%N₂
低氧12 h组	体积分数1%O₂，5%CO₂，94%N₂
低氧24 h组	体积分数1%O₂，5%CO₂，94%N₂

1.4.7 Western blot检测不同条件下基质细胞衍生因子1蛋白的表达收集不同实验组的内皮祖细胞，吸取培养液后，PBS冲洗3次，加入RIPA蛋白裂解液提取总蛋白，并利用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白质浓度，100 ℃变性10 min。利用10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离后，电转移印记于PVDF膜后，5%脱脂奶粉-TBST封闭2 h，孵育一抗(1∶1 000，兔抗人单克隆抗体)和单克隆抗体β-actin 4 ℃过夜，TBST漂洗3次后，在37 ℃下孵育辣根过氧化物酶标记的二抗(1∶2 000，羊抗兔多克隆抗体)2 h，TBST洗膜后，将ECL化学发光试剂A和B等体积混匀后与膜进行反应，暗室显影并曝光，利用UVI凝胶成像系统摄像，Image-Pro Plus8.0软件对基质细胞衍生因子1和β-actin蛋白积分光密度(IOD)进行计算，将两者比值作为基质细胞衍生因子1的相对表达量。

1.4.8 Transwell检测低氧对内皮祖细胞迁移的影响利用含0.02%EDTA的0.25%胰酶对贴壁的内皮祖细胞进行消化，并利用无血清的M199培养基将其稀释为细胞浓度1×10⁸ L^-1的单细胞悬液后，将稀释好的4组的细胞悬液各 600 μL加入带Transwell培养板上室，37 ℃、体积分数5%CO₂培养24 h后擦去小室上层膜的细胞，利用多聚甲醛固定，并对其进行Giemsa染色5 min，附着于聚碳酯膜下表面的细胞在高倍镜下(×100)随机挑选8个视野进行计数并取平均值，通过计算染色数目可计算迁移细胞数量。

1.5 主要观察指标 ①内皮祖细胞的形态及鉴定；②ELISA检测不同条件下基质细胞衍生因子1的表达；③免疫荧光检测不同条件下基质细胞衍生因子1 的表达；④RT-PCR及Western blot检测不同条件下基质细胞衍生因子1 mRNA及蛋白的表达；⑤Transwell检测低氧对内皮祖细胞迁移的影响。

1.6 统计学分析实验结果采用SPSS 17.0统计软件进行分析。数据以x(_)±s表示，组间比较采用单因素方差分析，P < 0.05表示差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

随着中国经济水平的快速提升、人们饮食结构的变化、人口老龄化进程加快，可以引起血管疾病的高危因素也随之不断增加，缺血性疾病已经成为中国中年人、老年人的常见病，缺血性疾病的发生机制为：当发生外力损伤或病理性损伤时，会急剧降低甚至中断阻塞静脉或动脉的血流，显著降低远端动脉氧气供给和血运，使患者体内器官和组织发生严重的持久性缺血缺氧损伤，不仅能导致器官和组织丧失原有的生理功能，还有可能发生坏死现象危及生命，严重降低患者的生活质量。
目前，缺血性疾病主要通过外科手术、药物治疗、介入手术进行缓解治疗，虽然能在一定程度上改善患者的预后，治疗缺血性疾病的理想药物需要同时包含增加血流量、促血管新生、舒张血管和抗氧化等缺血耐受作用，但是临床现有的硝酸酯类一氧化氮供体药物无法同时满足上述作用，而外科手术和介入手术在对于类似心肌缺血等缺血性疾病进行治疗时，只能对大动脉中狭窄收缩部位进行扩张，无法解决发生小血管堵塞时手术或支架不能通过的弊端，均存在不同程度的风险性和局限性。随着科学技术的不断进进步，越来越多的研究人员把焦点对准治疗性血管形成，以期为治疗或延缓缺血性疾病进程提供新思路。他们的研究方向主要为利用干细胞或相关的细胞因子对缺血组织内血管新生发挥诱导作用，最终达到改善血液循环的目的。但是，将干细胞或细胞因子应用到缺血组织的过程中，需要对干细胞或细胞因子种类、应用浓度和剂量的选择、最适宜的应用途径进行探讨，但是目前研究表明，治疗方案如细胞因子种类、浓度和剂量、途径的不同，将会导致治疗效果也存在很大差别，截止到目前，都没有对有效的治疗手段达成共识。
缺血性疾病和血管新生过程密切相关，人体中原有的毛细血管不断分化形成新毛细血管的过程被称为血管新生，其中，新形成的毛细血管还不具有完整中膜结构，血管新生分为病理性的血管新生和生理性的血管新生，在动脉硬化、子宫内膜异位症、肿瘤、糖尿病性视网膜病变等疾病中多存在病理性的血管新生；而在子宫内膜的增殖过程、皮肤或组织的创伤修复以及月经周期的卵巢增殖过程中多发现生理性的血管新生。
内皮祖细胞能够定向增殖分化为成熟血管内皮细胞(EC)[16]。在体外培养呈梭形，可形成管腔样结构，具有内皮细胞的特性，故命名为内皮祖细胞[16-17]。内皮祖细胞是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为血液-血管母细胞，在新生儿出生后，内皮祖细胞就在骨髓组织中定植，转基因小鼠骨髓移植模型揭示了：在人体肝脏、脾脏、外周血、骨髓中存在大量内皮祖细胞，在皮肤、肺和大肠组织中也存在一定量的内皮祖细胞，此外，在女性的子宫和卵巢中亦能检测到内皮祖细胞。最新研究表明：内皮祖细胞还存在于缺血组织的血管新生中心、皮肤创口和在肿瘤周边血管壁中。在人体处于病理状态或特殊生理状态下，内皮祖细胞可以被招募并富集到指定部位，通过血管形成途径特定分化为血管内皮细胞，将受损或衰老的内皮细胞进行更新与修复，不仅显著降低了冠状动脉支架植入后再狭窄的发生概率，还对动脉粥样硬化、股骨头坏死、心肌梗死、肢体缺血坏死等缺血性疾病引起的血管损伤进行改善。
1997年，当内皮祖细胞首次被提出后，15年时间内，人们对血管再生及修复过程有了全新的认识。内皮祖细胞主要存在于骨髓中，正常情况下仅占外周循环血的0.01%[18-21]。当人体组织器官有生理性需要血管新生或发生缺氧、缺血、血管内皮损伤时，内皮祖细胞的骨髓动员过程可以被人体组织器官所释放的生长因子、多种细胞因子和激素等物质所促进[22-24]。研究表明，一些外界因素可以分离内皮祖细胞与骨髓基质细胞，此时内皮祖细胞被输送到特定作用部位，该过程就是内皮祖细胞的动员与归巢[25-28]。Isgrò等[29]研究表明：CD34+干细胞趋化因子其中包括基质细胞衍生因子1，因此，CD34+细胞可能沿基质细胞衍生因子1浓度梯度向骨髓内迁移，这为干细胞在骨髓和外周血之间的迁移提出了一个新的可能机制。
本实验利用密度梯度离心法分离出SD大鼠骨髓单个核细胞，并利用内皮祖细胞贴壁时间大于48 h而间充质干细胞贴壁时间小于48 h的特点，诱导分化两三天后贴壁的细胞，并进行培养及传代。根据其内皮细胞特性进行鉴定，结果表明，所得细胞符合内皮祖细胞特点。本实验将分离培养的细胞分4组，置于常氧和低氧条件下，可见基质细胞衍生因子1浓度在低氧时表达增加，其中低氧条件下12 h时浓度最高，高于6 h及24 h；且随着基质细胞衍生因子1浓度增加，内皮祖细胞迁移数量增加。
骨髓是成人干细胞的主要储藏池[30-31]。骨髓微环境是由基质细胞和细胞外基质成分组成的，内皮祖细胞是骨髓干细胞的一个特殊亚型，是一种能定向分化为血管内皮细胞的前体细胞，具备迁移游走、自我更新和增殖分化能力[28，32-34]。在病理状态下，如伤口愈合、器官再生和肿瘤生长，能够参与新生血管形成骨髓来源的内皮祖细胞能在病理状态下动员，分化成血管内皮细胞，聚集到损伤部位而血管生成因子能够调控内皮祖细胞的行为[35-38]，而基质衍生因子1是促进内皮祖细胞的动员、聚集、黏附最重要的血管生成因子，在新生血管形成的多种病理过程中发挥关键的作用[39]。本文得出结论：低氧可以促进内皮祖细胞分泌基质细胞衍生因子1，并动员外源性内皮祖细胞按照浓度梯度迁移。根据此结论，作者认为，应用外源性内皮祖细胞可以促进缺血缺氧部位组织的血管化，改善缺血缺氧状态，进而进行组织修复。
随着对内皮祖细胞的研究逐步增加以及对低氧造成内皮祖细胞趋化作用的认识，人们更注重于将内皮祖细胞与治疗缺血缺氧性疾病联系起来[40]。但是目前仍有一些问题有待解决，如内皮祖细胞的局部浓聚是否会形成血管瘤等带来一定不良反应。虽然这些问题尚未解决，但是内皮祖细胞对缺血缺氧性疾病的治疗一定具有重要意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

低氧对内皮祖细胞迁移的影响

Hypoxia induces the migration of endothelial progenitor cells

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