自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞构建颞颌关节

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.30.009

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架：将一定量壳聚糖溶入六氟异丙醇中，制成壳聚糖溶液，低温搅拌溶解，与纳米羟基磷灰石及过氧化物混合，在超声匀质分散成均匀溶液，加入京尼平交联，然后将溶液倒入含石蜡颗粒的模具中制备样品，进行冷冻相分离。冷冻干燥后正己烷去除石蜡再进行冷冻干燥，得到释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架。
外力压迫髁状突部位软骨细胞的变化：可激活细胞增殖活性，而减少细胞分泌活性，当注射肉毒素A时可导致软骨增殖层的细胞凋亡，抑制下颌骨的发育。因此髁状突部位软骨细胞受到受到外界影响，当该部位骨折发生时结构受到破坏，软骨细胞也进一步发生相应的病理变化。

背景：将自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞在模拟微重力下复合培养构建的活性组织工程骨，不仅具有优良成骨的潜在特性，而且具有自体释氧功能，能有效防止早期血管化不足缺氧导致的移植失败。
目的：观察自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞修复不同类型颞颌关节髁状突骨折的效果。
方法：将30只SD大鼠随机分为3组，每组10只，其中1组为正常对照，实验1组建立颞颌关节髁状突纵行骨折模型，植入自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与软骨细胞；实验2组建立颞颌关节髁状突横断骨折模型，植入自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与软骨细胞。植入后1，3，6周，采用免疫荧光法检测增殖细胞核抗原阳性细胞数，使用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况，采用RT-PCR方法检查软骨内成骨标志物Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子的表达。
结果与结论：①实验1组、实验2组不同时间点的增殖细胞核抗原阳性细胞数高于正常对照组(P < 0.05)，植入后3，6周的软骨细胞凋亡数低于正常对照组(P < 0.05)，植入后3，6周的Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子表达高于正常对照组(P < 0.05)；②实验1组植入后3，6周的增殖细胞核抗原阳性细胞数低于实验2组(P < 0.05)，植入后3周的软骨细胞凋亡数低于实验2组(P < 0.05)，植入后3，6周的Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子表达高于实验2组(P < 0.05)；③结果表明：自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞修复不同类型颞颌关节髁状突骨折有着一定的差异性。

ORCID: 0000-0002-6630-3413(廖天安)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 生物材料, 纳米材料, 自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞, 颞颌关节髁状突骨折, 不同类型骨折, 软骨细胞, 增殖, 凋亡, 软骨内成骨

Abstract:

BACKGROUND: The autologous oxygen-delivering biomimetic nanoscaffold is composited with chondrocytes in simulated microgravity to construct the active tissue-engineered bone, which not only has excellent osteogenic potential characteristics, but also has autologous releasing oxygen, and additionally can effectively prevent early transplant failure caused by sufficient revascularization and hypoxia.
OBJECTIVE: To investigate the effects of autologous oxygen-delivering biomimetic nanoscaffold composited with chondrocytes on repairing different types of temporomandibular joint condylar fractures.
METHODS: Totally 30 Sprague-Dawley rats were randomly divided into control group, experimental groups 1 and 2 (n=10 per group). The autologous oxygen-delivering nano-hydroxyapatite/chitosan scaffold composited with chondrocytes were transplanted into rats with temporomandibular joint condylar longitudinal fracture in the experimental group 1 and those with temporomandibular joint condylar transverse fracture in the experimental group 2, respectively. At 1, 3 and 6 weeks after transplantation, the number of proliferating cell nuclear antigen-positive cells was detected by immunofluorescence assay; the chondrocyte apoptosis was detected using TUNEL method, and expressions of collagen type II, Sox9 and vascular endothelial growth factor were observed by RT-PCR technology.
RESULTS AND CONCLUSION: The number of proliferating cell nuclear antigen-positive cells in the experimental groups 1 and 2 were significantly higher than that in the control group at different time points after transplantation (P < 0.05). At 3 and 6 weeks after transplantation, the number of apoptotic chondrocytes in the experimental groups 1 and 2 was significantly lower than that in the control group (P < 0.05); significantly higher and highest expressions of collagen type II, Sox9 and vascular endothelial growth factor were found in the experimental groups 2 and 1 compared with the control group, respectively (P < 0.05). Additionally, compared with the experimental group 2, the number of proliferating cell nuclear antigen-positive cells was significantly lower in the experimental group 1 at 3 and 6 weeks after transplantation (P < 0.05); the number of apoptotic chondrocytes was significantly lower in the experimental group 1 at 3 weeks after transplantation (P < 0.05). These results indicate that autologous oxygen-delivering biomimetic nanoscaffold composited with chondrocytes to repair different types of temporomandibular joint condylar fractures presents some different outcomes.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

Key words: Nanocomposites, Chondrocytes, Mandibular Condyle, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

王鸿，廖天安，王涛，符良斌，胡广伟，邓伟. 自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞构建颞颌关节[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(30): 4469-4475.

Wang Hong, Liao Tian-an, Wang Tao, Fu Liang-bin, Hu Guang-wei, Deng Wei . Autologous oxygen-delivering biomimetic nanoscaffold composited with chondrocytes reconstructs the temporomandibular joint[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(30): 4469-4475.

图/表（结果） 3

参考文献

[1] 杨驰,何冬梅,陈敏洁,等.課突囊内骨折的临床特点和分类研究[J].中国口腔颌面外科杂志, 2010,8(3): 208-211.
[2] He D,Yang C,Chen M,et al.Intracapsular condylar fracture of the mandible:our classification and open treatment experience.J Oral Maxillofac Surg. 2009; 67(8):1672-1679.
[3] 徐婷.生物机械应力对下颌髁突适应性改建的影响[J].国际口腔医学杂志,2009,36(1):52-54.
[4] Uckan S,Bayram B,Kecik D,et al.Effects of titanium plate fixation on mandibular growth in a rabbit model.J Oral Maxillofac Surg.2009;67(2):318-322.
[5] 杨驰,何冬梅,陈敏洁,等.下颌骨課突囊内骨折的治疗探讨[J].中国口腔颂面外科杂志,2010,8(2):112-118.
[6] Kanayama H,Masuda Y,Adachi T,et al.Temporal alteration of chewing jaw movements after a reversible bite-raising in guinea pigs.Arch Oral Biol. 2010;55(1): 89-94.
[7] 李毅,王东.两种手术入路治疗下颂骨髁突中位骨折效果评价[J].武警后勤学院学报(医学版), 2012,21(3):193-195.
[8] Abdel-Galil K,Loukota R.Fractures of the mandibular condyle:evidence base and current concepts of management.Br J Oral Maxillofac Surg. 2010;48(7): 520-526.
[9] Nishiyama KK,Graeme M.Reproducibility of bone micro-architecture measurements in rodents by in vivo micro-computed tomography is maximized with three-dimensional image registration.J Bone. 2010;46: 155-161.
[10] Jiao K,Dai J,Wang MQ,et al.Age-and sex-related changes of mandibular condylar cartilage and subchondral bone:a histomorphometric and micro-CT study in rats.Arch Oral Biol.2010;55:155-163.
[11] 郭家平,李志进,董青山,等.125例縣突骨折临床回顾性研究?[J].临床口腔医学杂志,2011,27(9):540-541.
[12] Prasad S,Kuracina J,Edward A,et al.Altering occlusal vertical dimension provisionally with metal onlays:A clinic report.J Pros Dent. 2008;100(5): 338-342.
[13] Jiao K,Dai J,Wang MQ,et al.Subchondral bone loss following orthodontically induced cartilage degradation in the mandibular condyles of rats. J.Bone. 2010;9:10-16.
[14] Soares CJ,Castro CG,Neiva NA.Effect of gamma irradiation on ultimate tensile strength of enamel and dentin.J Dent Res.2010;89(2):159-164.
[15] Pegado RE,Do AF,Florio FM,et al.Effect of different bonding strategies on adhesion to deep and superficial permanent dentin.Eur J Dent.2010;4(2):110-117.
[16] Beloica M,Goracci C,Carvalho CA,et al.Microtensile vs microshear bond strength of all-in-one adhesives to unground enamel.J Adhes Dent. 2010;12(6): 427-433.
[17] Lin J,Shinya A,Gomi H,et al.Bonding of self-adhesive resin cements to enamel using different surface treatments:bond strength and etching pattern evaluations. Dent Mater.2010;29(4):425-432.
[18] Osorio R,Aguilera FS,Otero PR,et al.Primary dentin etching time,bond strength and ultra-structure characterization of dentin surfaces.J Dent. 2010;38(3): 222-231.
[19] Sauro S,Di Renzo S,Castagnola R,et al.Comparison between water and ethanol wet bonding of resin composite to root canal dentin.Am J Dent. 2011;24(1): 25-30.
[20] Zhao SJ,Zhang L,Tang LH,et al.Nanoleakage and microtensile bond strength at the adhesive-dentin interface after different etching times.Am J Dent. 2010;23(6):335-340.
[21] Vinay S,Shivanna V.Comparative evaluation of microleakage of fifth,sixth,and seventh generation dentin bonding agents:An in vitro study.J Conserv Dent.2010;13(3):136-140.
[22] Hamouda IM,Samra NR,Badawi MF.Microtensile bond strength of etch and rinse versus self-etch adhesive systems.J Mech Behav Biomed Mater. 2011;4(3): 461-466.
[23] Albaladejo A,Osorio R,Toledano M,et al.Hybrid layers of etch-and-rinse versus self-etching adhesive systems.Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 2010;15(1): 112-118.
[24] Zanatta FB,Pinto TM,Kantorski KZ,et al.Plaque, gingival bleeding and calculus formation after supragingival scaling with and without polishing:a randomised clinical trial.Oral Health Prev Dent. 2011; 9(3):275-280.
[25] Leung CC,Palomo L,Griffith R,et al.Accuracy and reliability ofone-beam computed tomography for measuring alveolar bone height and detecting bony dehiscences and fenestrations.Am J Orthod Dentofacial Orthop.2010;137(4):109-119.
[26] Kassab MM,Badaw i H,Dentino AR.Treatment of gingival Recession.Dent Clin North Am. 2010;54(1): 129-140.
[27] Lei WY,Rabie AB,Wong RW.Repair of a defect following the removal of an impacted maxillary canine by orthodontic tooth movement:a case report.Cases J.2010;3(2):62-69.
[28] Liu D,Zhou Y,Li C,et al.Denaturing gradient gel electrophoresis analysis with different primers of subgingival bacterial communities under mechanical debridement.Microbiol Immunol.2010;54(11):702-706.
[29] Tetradis S,Anstey P,Graff-Radford S.Cone beam computed tomography in the diagnosis of dental disease.J Calif Dent Assoc.2010;38(1):27-32.
[30] Viotti RG,Kasaz A,Pena CE,et al.Microtensile bond strength of new self-adhesive luting agents and conventional multistep systems.J Prosthet Dent.2009; 102(5):306-312.
[31] Levin L,Einy S,Zigdon H,et al.Guidelines for periodontal care and follow-up during orthodontic treatment in adolescents and young adults.J Appl Oral Sci.2012;20(4):399-403.
[32] Boyer S,Fontanel F,Danan M,et al.Severe periodontitis and orthodontics:evaluation of long-term results.Int Orthod.2011;9(3):259-273.
[33] Shrout PE,Fleiss JL.Intraclass correlations:uses in assessing rater reliability.Psychol Bull. 1979;86(2): 420-428.
[34] Shoreibah EA,Ibrahim SA,Attia MS,et al.Clinical and radiographic evaluation of bone grafting in corticotomy-facilitated orthodontics in adults.J Int Acad Periodontol.2012;14(4):105-113.
[35] Corbacho de Melo MM,Cardoso MG,Faber J,et al.Risk factors for periodontal changes in adult patients with banded second molars during orthodontic treatment. Angle Orthod.2012;82(2):224-228.
[36] Fung K,Chandhoke TK,Uribe F,et al.Periodontal regeneration and orthodontic intrusion of a pathologically migrated central incisor adjacent to an infrabony defect.J Clin Orthod.2012;46(7):417-423.
[37] Zhang J,Zhou S,Li R,et al.Magnetic bead-based salivary peptidome profiling for periodontal-orthodontic treatment.Proteome Sci.2012;10(1):63.
[38] Viecilli RF,Budiman A,Burstone CJ.Axes of resistance for tooth movement:does the center of resistance exist in 3-dimensional space?Am J Orthod Dentofacial Orthop.2013;143(2):163-172.
[39] Graber LW,Vanarsdall RL,Vig WL,et al. Orthodontics: current principles and techniques.5th ed.St Louis: Elsevier Mosby, 2012:807-841.
[40] Yonenaga K,Nishizawa S,Fujihara Y,et al.The optimal conditions of chondrocyte isolation and its seeding in the preparation for cartilage tissue engineering. Tissue Eng Part C Methods.2010;16(6):1461-1469.
[41] Ciocca L,Tarsitano A,Marchetti C,et al.A CAD-CAM- prototyped temporomandibular condyle connected to a bony plate to support a free fibula flap in patients undergoing mandiblectomy: A pilot study with 5 years of follow up.J Craniomaxillofac Surg.2016.pii: S1010-5182(16)30039-7.
[42] Sharma D,Khasgiwala A,Maheshwari B,et al. Superolateral dislocation of an intact mandibular condyle into the temporal fossa: case report and literature review.Dent Traumatol.2016. doi:10.1111/edt.12282.[Epub ahead of print]
[43] Dimitriou D,Tsai TY,Park KK,et al.Weight-bearing condyle motion of the knee before and after cruciate-retaining TKA: In-vivo surgical transepicondylar axis and geometric center axis analyses.J Biomech. 2016.pii:S0021-9290 (16)30530-9. doi: 10.1016/j.jbiomech.2016.04.033. [Epub ahead of print]
[44] Xu L,Guo H,Li C,et al.A time-dependent degeneration manner of condyle in rat CFA-induced inflamed TMJ. Am J Transl Res. 2016;8(2):556-567.
[45] Zhao LL,Tong PJ,Xiao LW.Internal fixation with lag screws plus an anti-sliding plate for the treatment of Hoffa fracture of the lateral femoral condyle.Zhongguo Gu Shang.2016;29(3):266-269.

引言

由于颞颌关节髁状突骨结构的特殊性，该部位骨折即使能够愈合，亦常需要长达几周甚至几个月的固定、限制活动，容易出现感染等多种并发症，严重影响患者的康复及生活质量^[1]，因此研究颞颌关节髁状突骨折愈合机制具有重大经济及社会意义。颞颌关节髁状突骨折是颜面部最易发生骨折的部位之一，该部位骨折的发生率占所有下颌骨折的50%左右，而且颞颌关节在人体咀嚼功能、语言功能中发挥着重要作用，且髁状突又是下颌骨的主要发育中心，该部位骨折尤其是对于儿童将会影响着整个颜面部的发育和生长，因此成为口腔颌面研究的重要课题^[2-3]。由于其部位的特殊性、复杂性和骨折的多样性，给分类带来了很大的困难，至今仍未有统一的分类方法，一个好的分类对治疗选择及康复判断起着重要作用，但任何髁状突骨折都是通过复杂而有序的软骨内成骨实现的^[4-6]。近年来，运用软骨细胞缩短骨折愈合时间、提高骨修复障碍的治愈率已逐渐成为临床骨科研究的热点^[7]。髁状突创伤修复是一个复杂的生理过程，涉及到多种细胞和分子的参与^[8]。已有研究发现在软骨修复方面，在纤维蛋白凝胶中加入抑肽酶和氨甲环酸，可有效延缓支架材料降解速度，将其与软骨细胞在微重力环境下复合培养，证实改良的纤维蛋白胶复合物体能较好地修复软骨缺损^[9]，同时证实了骨形态发生蛋白等多细胞生长因子在软骨修复中的作用。在骨修复材料方面也取得了一定的研究成果，有研究发现可注射纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架有良好修复兔股骨髁缺损的能力^[10]；作者前期在纳米缓释系统上进行了深入研究，成功合成了纳米磷灰石/胶原复合阿霉素-聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米囊缓释系统支架，并进行实验^[11-13]。因此在已有研究的基础上，构建自体释氧纳米仿生支架与软骨细胞这一种新型活性组织工程骨，该新型骨修复材料具备良好的机械性能及生物活性，同时具备自体释氧功能^[14-15]。实验从髁突修复和骨折发生创面类型角度入手，观察自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞对不同类型颞颌关节髁状突骨折的细胞修复学特点，为颞颌关节髁状突骨折创伤修复诊治评估提供依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点实验于2014年8月至2015年10月在海南医学院分子材料实验室完成。

1.3 材料

实验动物：4周龄雄性SD大鼠，购自海南医学院实验动物中心，体质量(200.34±25.96) g，许可证号为36252942。选取其中10只用于制备颞颌关节髁状突纵行骨折，为实验1组；10只用于制备颞颌关节横断骨折模型，为实验2组；另取10只作为正常对照，实验中所用的动物实验都严格遵守动物伦理学要求进行。

1.4 实验方法

自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架的制备：将一定量壳聚糖(占总质量40%)溶入六氟异丙醇中，制成壳聚糖溶液，低温搅拌溶解，与纳米羟基磷灰石及过氧化物(占总质量60%)混合，在超声匀质分散成均匀溶液，加入京尼平交联，然后将溶液倒入含石蜡颗粒的模具中制备样品，进行冷冻相分离。冷冻干燥后正己烷去除石蜡再进行冷冻干燥，得到释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架，见图1。

模型制备与分组干预：实验1组、实验2组大鼠禁食12 h后固定，以噻胺酮50 mg/kg进行腹腔麻醉，麻醉成功后进行剃毛、手术消毒铺巾，在大鼠左侧耳前进行手术切开，逐层暴露直至关节囊，找到关节下腔，沿着关节囊行横切口，往下牵扯髁突，显示出关节下腔后，实验1组使用小骨凿在内侧1/3部位行纵行劈骨，形成矢状髁状突纵行骨折模型，植入自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架，采用注射器在损伤部位注射1×10⁵软骨细胞；实验2组不需要切除关节囊，只需要在乙状切迹部位采用骨凿截骨，游离髁突，形成颞颌关节的横断骨折模型，植入自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架，采用注射器在损伤部位注射1×10⁵软骨细胞。止血之后缝合。

切片制作：植入第1，3，6周时处死大鼠，每个时间点每组处死3只，进行骨折断端的取材，使用多聚甲醛进行固定，10%EDTA脱钙处理，乙醇梯度离心脱水之后进行石蜡包埋，切片保存。

1.5 主要观察指标

免疫荧光化学方法检测增殖细胞核抗原阳性细胞数：脱蜡水合以后，依据胞浆抗原或者核抗原的修复条件而选用相应的修复液进行抗原修复，体积分数3%双氧水消除内源性过氧化物酶15 min，50 μL非免疫动物血清封闭，加第一抗过夜，50 μL生物素标记第二抗体，辣根过氧化物酶孵育，DBA显色，荧光染料37 ℃避光孵育30 min，DAPI室温避光孵育5 min，荧光显微镜下观察后拍片。

结果判断：取5张片，每张片取5个视野，取平均值，阳性表达以细胞核着色为主。①阳性细胞数评分，< 5%计为0分，6%-25%计为1分，26%-50%计为2分，51%-75%计为3分，> 75%计为4分。②染色着色评分：不着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。最后结果评判阳性率和着色强弱相加之和为总得分，0分计为阴性组“-”，1.0-2.0分计为弱阳性组“+”，3.0-4.2分计为阳性组“++”，5-7分计为强阳性组“+++”。

TUNEL法检测细胞凋亡情况：脱蜡水合后，使用蛋白酶K孵化15 min，PBS水洗3次×5 min， TUNEL反应液50 μL孵育60 min，在通过PBS水洗3次×5 min，DBA显色，苏木精复染，脱水干燥之后，中性树胶封固，结果判断同上。

RT-PCR法检测Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子表达：取1 g实验1组、实验2组大鼠骨折断端及正常对照组颞颌关节髁状突的组织，加入1 mL Trizol，按照Trizol说明书提取总RNA。取2 μg总RNA行反转录cDNA，取20 μL作为反应体系。PCR反应由反转录产物2 μL及18sRNA和Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子的引物共同组成。反应过程按照标准的RT-PCR步骤进行：首先预变性的反应条件为95 ℃、5 min，接着进行梯度变性反应，94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，72 ℃ 7 min，共进行30次的循环。接着对所得到的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过拍摄电泳图像对所得到的电泳结果进行凝胶成像分析系统分析。内参选择18sRNA作为参照，同样完成以上PCR系统的成像，对得到的半定量结果进行对比分析，通过量化的吸光度积分值进行分析(A值)。

1.6 统计学分析所有采集的数据应用SPSS 21.0统计软件进行分析。其中对符合正态分布资料的数据采用 x(_)表示，应用t 检验进行两两数据之间比较。具有统计学差异的以P < 0.05表示。 ±s

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

颞颌关节髁状突骨折在颌面部骨折中属于发生了最高的骨骼骨折之一，约占下颌骨骨折的一半以上，髁状突骨折若处理不当极易发生颌关节相关的并发症及后遗症^[16]。目前髁状突骨折由于其病因多样、结构复杂等因素导致其分类标准尚未完全统一，主要的分类原则主要有2个，首先是按照骨折线的部位来分类，分为高中低位的骨折，另一种分类方法是按照骨折脱位和移位的程度来分类^[17-20]。由于患者的身体状况及病因等影响因素，对髁状突骨折的分类要达到一个共同的目标，就是服务于治疗。

决定髁状突骨折的断端修复的重要影响因素是该部位软骨细胞的数量，软骨细胞的增殖和凋亡在髁状突骨折修复中发挥着重要的作用，影响着颞下颌关节的生长发育^[21-24]。不同类型的颞颌关节髁状突骨折与软骨细胞的增殖凋亡及软骨内成骨是否具有一定的相关性，实验构建释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖新型骨修复材料，新型骨修复材料具备良好的机械性能及生物活性，同时具备自体释氧功能^[25-26]。利用京尼平与壳聚糖共聚物的荧光特性，为研究细胞与支架材料之间的相互作用，以及观察细胞在支架表面的黏附、定位和迁移提供了一个有效手段^[27-29]。实验通过采用自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞对髁突修复和骨折发生创面类型这一角度入手，以髁状突纵行和横断骨折2大类型论软骨细胞在骨折后的表达和修复情况，为髁状突骨折的修复及康复提供细胞学依据。

国内外已有研究发现，髁状突部位软骨细胞在发生外力压迫时，可激活细胞增殖活性，而减少细胞分泌活性，当注射肉毒素A时可导致软骨增殖层的细胞凋亡，抑制下颌骨的发育^[30-33]。因此髁状突部位软骨细胞受到受到外界影响，当该部位骨折发生时结构受到破坏，软骨细胞也进一步发生相应的病理变化^[34-36]。髁状突部位又是下颌骨的生长区，因此影响着下颌骨的生长方向和生长量，从而影响着下颌颜面部的生长发育^[37-45]。实验通过构建鼠髁状突部位不同创面类型的骨折模型，采用自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞的干预，研究其对不同切面创伤性骨折软骨细胞表现的影响。提示由于髁状突部位骨折断端的不同受到的应力失衡打破了软骨细胞增殖和凋亡之间的平衡，自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞使得软骨细胞数目对断端修复有所差异，自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞对软骨内成骨的情况也有一定的不同，影响着髁状突部位骨折断端的修复及形态恢复，从而影响下颌骨及颌面部内修复。

综上所述，髁状突骨折之后，局部骨折部位受到应力及骨折创伤后机体的应激反应都存在一定的差异性，骨折初期周围出现反应性充血，自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞的干预随之产生了相应的软骨细胞相关组织修复反应，实验结果提示了自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞对不同类型颞颌关节髁状突骨折在软骨细胞增殖、凋亡及软骨内成骨能力上有着一定的差异性，对不同骨折类型的康复评估体系构建具有一定的指导作用，也为今后更细致的体外修复分类及治疗提供了思路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程