两种肾虚证型去势模型大鼠骨小梁微观结构及骨代谢的差异

doi:10.12307/2022.681

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (23): 3768-3772.doi: 10.12307/2022.681

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两种肾虚证型去势模型大鼠骨小梁微观结构及骨代谢的差异

何兴鹏1，郑利钦1，李鹏飞2，3，悦桂阳1，李志鸿4，吴敏辉1，林梓凌5，6

1广州中医药大学第一临床医学院，广东省广州市 510405；2暨南大学附属江门中医院，广东省江门市 529000；3江门市中心医院，广东省江门市 529030；4广州中医药大学国际学院，广东省广州市 510405；5广州中医药大学第一附属医院创伤骨科，广东省广州市 510405；6广州中医药大学岭南医学研究中心，广东省广州市 510405

收稿日期:2021-08-31 接受日期:2021-11-29 出版日期:2022-08-18 发布日期:2022-02-12
通讯作者: 林梓凌，博士，主任医师，教授，博士研究生导师，广州中医药大学第一附属医院创伤骨科，广东省广州市 510405；广州中医药大学岭南医学研究中心，广东省广州市 510405
作者简介:何兴鹏，男，1994年生，河南省平顶山市人，汉族，广州中医药大学在读硕士，主要从事创伤骨科、骨与关节损伤的生物力学研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(81673996)，项目负责人：林梓凌；国家自然科学基金青年项目(81904220)，项目负责人：李鹏飞

Differences of trabecular microstructure and bone metabolism in two types of kidney-deficiency ovariectomized rats

He Xingpeng1, Zheng Liqin1, Li Pengfei2, 3, Yue Guiyang1, Li Zhihong4, Wu Minhui1, Lin Ziling5, 6

1First School of Clinical Medicine of Guangzhou University of Chinese Medicine; 2Jiangmen Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Jinan University; 3Jiangmen Central Hospital; 4International College of Guangzhou University of Chinese Medicine; 5Department of Traumatic Orthopedics, First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine; 6Lingnan Medical Research Center of Guangzhou University of Chinese Medicine

Received:2021-08-31 Accepted:2021-11-29 Online:2022-08-18 Published:2022-02-12
Contact: Lin Ziling, MD, Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, Department of Traumatic Orthopedics, First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China; Lingnan Medical Research Center of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China
About author:He Xingpeng, Master candidate, First School of Clinical Medicine of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China (General Program), No. 81673996 (to LZL); the National Natural Science Foundation of China (Youth Program), No. 81904220 (LPF)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
骨小梁：骨内微结构，是骨皮质在松质骨内的延伸部分，在骨髓腔内呈现不规则的立体网状结构，具有承载负荷、在骨小梁之间及骨小梁与皮质骨之间传导及分散应力载荷的作用，是一个影响骨强度的主要因素。骨小梁具有一定的数目、质量、方向和厚度等，其形态计量学参数可客观准确地衡量骨小梁的生物性能，为骨质疏松症等疾病的评价和预防提供可靠依据。
骨代谢指标：应用于骨质疏松以及代谢性骨病的评估指标，是由成骨细胞或破骨细胞分泌的酶和激素，以及骨基质的胶原蛋白或非胶原蛋白代谢产物。骨代谢生化指标可及时反映骨转换状态，灵敏度高、特异性强，用于骨质疏松诊断分型、预测骨折风险、抗骨质疏松治疗疗效评价以及代谢性骨病的诊断与鉴别诊断。

背景：目前去势大鼠是成熟可靠的骨质疏松症动物模型，对肾阳虚证、肾阴虚证大鼠模型的建立与相关观察指标也已有比较详细的研究，但对肾阳虚证、肾阴虚证骨质疏松的“病证结合”大鼠模型研究还有待完善。交感-副交感神经功能测定是判断阴虚、阳虚证型的一个特异性指标，但用来分析两种肾虚证型骨骼系统相关指标方面仍存在不足，“病证结合”需要更多的实验依据和观察指标。
目的：比较分析肾阳虚证和肾阴虚证骨质疏松大鼠骨小梁微观结构参数及血清中骨代谢指标的差异。
方法：手术摘除20只SD雌性大鼠双侧卵巢建立去势骨质疏松模型，10周后随机分为肾阳虚组、肾阴虚组，每组10只。肾阳虚组去势大鼠臀部肌肉注射氢化可的松注射液，肾阴虚组去势大鼠灌胃甲状腺片混悬药液，均1次/d，连续14 d，造模成功后采用Micro-CT扫描获取大鼠左侧股骨感兴趣区域骨微结构参数，ELISA法检测大鼠血清中骨形成及骨吸收相关指标。
结果与结论：①成功建立两种肾虚证型去势骨质疏松大鼠病证结合模型；②与肾阳虚组大鼠相比，肾阴虚组大鼠骨小梁骨密度及骨体积分数明显升高，骨小梁数量增加，骨小梁厚度减小，血清各项骨形成、骨吸收指标明显升高，提示肾阴虚组大鼠骨代谢过程明显加快；③结果表明，肾阳虚、肾阴虚证型去势骨质疏松大鼠骨小梁微观结构及骨代谢指标存在明显差异，其机制仍需进一步研究。

https://orcid.org/0000-0001-7363-9962 (何兴鹏)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 肾虚证, 去势大鼠, 骨质疏松, Micro-CT, 骨代谢指标

Abstract: BACKGROUND: At present, ovariectomized rats are a mature and reliable animal model of osteoporosis, and establishment and observational evaluation of rat models of two types of kidney deficiency have been relatively detailed. However, further exploration is needed on the rat models of osteoporosis combined with syndromes of kidney-yang deficiency and kidney-yin deficiency. The sympathetic-parasympathetic nerve function test is used as a specific index to judge the syndrome of yin-deficiency and yang-deficiency, but this indicator is relatively insufficient for evaluating and analyzing the skeletal system of the two types of kidney-deficiency syndromes. “Integration of disease and syndrome” requires more experimental evidence and observational indicators.
OBJECTIVE: To compare trabecular microstructure parameters and serum bone metabolism indicators between osteoporosis rat models of kidney-yang deficiency and kidney-yin deficiency.
METHODS: The ovaries of 20 female Spraque-Dawley rats were surgically removed to make postmenopausal osteoporotic rat models. Ten weeks after operation, all model rats were randomly divided into two groups (n=10 per group): kidney-yang deficiency group and kidney-yin deficiency group. Gluteal intramuscular injection of hydrocortisone and intragastric administration of thyroid hormone tablets were given to the kidney-yang deficiency group and the kidney-yin deficiency group, respectively, once a day for 14 consecutive days. After modeling, micro-CT was used to detect trabecular microstructure parameters in the region of interest of the left femur, and ELISA was used to detect serum bone formation and bone resorption indicators.
RESULTS AND CONCLUSION: Two types of kidney-deficiency osteoporosis rat models were successfully established. Compared with the kidney-yang deficiency group, bone mineral density, bone volume/total volume, and trabecular number were significantly increased, trabecular thickness decreased, and serum bone formation and bone resorption indicators significantly increased in the kidney-yin deficiency group. Therefore, bone metabolism was faster in the kidney-yin deficiency group than the kidney-yang deficiency group. All these findings indicate significant differences in trabecular microstructure parameters and bone metabolism indicators between two kidney-yang and kidney-yin deficiency groups, and the mechanisms need to be further studied.

Key words: kidney-deficiency syndrome, ovariectomized rat, osteoporosis, Micro-CT, bone metabolism indicator

中图分类号:

何兴鹏, 郑利钦, 李鹏飞, 悦桂阳, 李志鸿, 吴敏辉, 林梓凌. 两种肾虚证型去势模型大鼠骨小梁微观结构及骨代谢的差异[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(23): 3768-3772.

He Xingpeng, Zheng Liqin, Li Pengfei, Yue Guiyang, Li Zhihong, Wu Minhui, Lin Ziling. Differences of trabecular microstructure and bone metabolism in two types of kidney-deficiency ovariectomized rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(23): 3768-3772.

图/表（结果） 6

参考文献

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引言

骨质疏松症在中国平均患病率为15.7%[1]，据统计，50岁以上人群中有50%的女性和20%的男性会出现骨质疏松性骨折，其中髋部骨折后致残率及死亡率高，给家庭和社会带来沉重负担[2-3]。因此，研究骨质疏松性骨折具有重大的临床意义。骨质疏松症在中医临床分为不同证型，肾精亏虚是骨质疏松症的主要病因病机，肾阳虚证与肾阴虚证是肾虚证的2种主要证型。西医辨病和中医辨证相结合的现代“病证结合”模式，已成为当前中西医结合治疗骨质疏松症的重要策略[4-5]。
去势大鼠的骨骼生理特征与早期绝经后妇女骨骼生理特征相似，包括骨转换增加、松质骨比骨皮质丢失更多等[6]，且因实验条件容易控制、建模因素单一、重复性较好，已成为成熟可靠、使用最广泛的动物模型[7]。目前，对肾阳虚证、肾阴虚证大鼠模型的建立与相关观察及评价指标也已有比较详细的研究[8]，但对肾阳虚证、肾阴虚证骨质疏松的“病证结合”大鼠模型研究还有待完善。以西医的“病”与中医的“证”相结合制备动物实验模型，能使中医药科学研究更加具有严谨性和可靠性[9-10]。
既往研究采用交感-副交感神经功能作为判断阴虚、阳虚证型的一个特异性指标[11]，但该指标用来评估2种肾虚证型骨骼系统仍存在不足。该研究拟在2种肾虚证型去卵巢骨质疏松大鼠病证结合动物模型的基础上，比较分析骨质疏松肾阳虚证和肾阴虚证大鼠骨小梁微观结构参数及血清骨代谢指标的差异，为“病证结合”提供更多的实验依据，以期为临床治疗不同肾虚证型骨质疏松症提供参考。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计比较肾阳虚、肾阴虚证型骨质疏松模型大鼠骨小梁微观结构及血清差异的实验研究，两组间均数比较采用独立样本t检验。
1.2 时间及地点实验于2020年12月至2021年4月在广州中医药大学动物实验中心完成，资料收集于2021年5-8月在广州中医药大学岭南医学研究中心完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 SPF级4月龄雌性SD大鼠20只，体质量250-300 g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物质量合格证编号：SCXK(粤)2018-0034，饲养于广州中医药大学三元里校区SPF级动物实验室，自由摄水饮食。
1.3.2 实验药物氢化可的松注射液(20 mL∶100 mg)购自天津金耀氨基酸有限公司，国药准字H12020887；甲状腺片(40 mg×100片)购自山东省惠诺药业有限公司，国药准字H37020075。
1.3.3 实验仪器 Skyscan1172Micro-CT机(Bruker公司，比利时)；台式离心机(Eppendorf公司，德国)，均由广州中医药大学岭南医学研究中心提供；碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶、1型前胶原氨基端延长肽、骨钙素、Ⅰ型胶原交联N-末端肽ELISA试剂盒(广州四和生物科技股份有限公司)。
1.4 方法
1.4.1 大鼠去卵巢、分组参照张晓文等[12]研究，采用手术摘除大鼠双侧卵巢的方法建立去势骨质疏松动物模型。大鼠称质量后，予以3%戊巴比妥钠(1.5 mL/kg)腹腔注射全麻；暴露并消毒腹部皮肤，取腹部正中切口，沿腹直肌进入腹腔，找到并游离卵巢组织，用3-0无菌线结扎周围组织后，切除卵巢；局部止血后逐层缝合筋膜皮肤，并注意术后保温。术后自由进食饮水10周。10周后，将20只SD大鼠随机分为肾阳虚组、肾阴虚组，每组10只。

1.4.2 肾阳虚、肾阴虚证造模自去卵巢后第11周始，肾阳虚组去势大鼠给予氢化可的松注射液(20 mg/kg)臀部肌肉注射，1次/d，连续14 d[13]；将甲状腺片打磨成粉末后用纯水配制成质量浓度为15 g/L的混悬药液，肾阴虚组去势大鼠按10 mL/kg灌胃药液，1次/d[14]，连续14 d。每组动物自由饮食、饮水，维持实验室温度(25±1) ℃，定期记录各组大鼠生存状态及体质量变化。

1.4.3 大鼠血清及股骨采集造模结束后禁食1 d，次日空腹注射3%戊巴比妥钠(1.5 mL/kg)腹腔全麻，腹主动脉采血，血液静置1 h，3 000 r/ min离心15 min，分离血清，-80 ℃冰箱保存待检；大鼠失血死亡后，迅速剔除股骨周围软组织，分离双侧股骨，左侧股骨用40 g/L多聚甲醛固定液保存，进行Micro-CT扫描。
1.4.4 股骨Micro-CT扫描取上述左侧股骨进行Micro-CT扫描，层距为15 μm，图片像素大小14.91 μm，扫描条件为：图像矩阵1 024×1 024，整合时间为360 ms，能量/强度为80 kVp、100 μA，以0°旋转，扫描范围设定为股骨中上段及中下段。扫描完成后进行原始数据重建，调整分析区域股骨方向为股骨颈与水平方向垂直，选取生长板远端100层，厚度为100层的松质骨为感兴趣区域进行三维重建，设定灰度阈值127。获得大鼠股骨感兴趣区域骨微结构参数：骨小梁平均骨密度(bone mineral density，BMD)、骨体积分数(bone volume /total volume，BV/TV)、骨表面积密度(bone surface/trabecular volume，BS/TV)、骨小梁数量(trabecular number，Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness，Tb.Th)、骨小梁分离度(trabecular separation/Spacing，Tb.Sp)。
1.4.5 血清相关指标检测应用ELISA法检测大鼠血清碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽、骨钙素、Ⅰ型胶原交联N-末端肽水平，操作步骤参照试剂盒说明书。
1.5 主要观察指标 ①大鼠股骨感兴趣区域骨微结构参数：骨小梁平均骨密度、骨体积分数、骨表面积密度、骨小梁数量、骨小梁厚度、骨小梁分离度；②大鼠血清碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶、1型前胶原氨基端延长肽、骨钙素、Ⅰ型胶原交联N-末端肽水平。
1.6 统计学分析采用统计软件SPSS 26.0进行统计分析。计量资料以x±s表示，两组间均数比较采用独立样本t检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

骨质疏松症属于中医学“骨痿”“骨痹”范畴，肾虚不能滋养骨髓是骨质疏松症的发病关键，“肾主骨”理论对临床中医骨伤科疾病诊疗有着重要的指导价值[17]，骨的生理、病理变化与肾关系密切，肾充则骨强，肾虚则骨衰，故能从本质上反映骨组织功能状态的指标，有望对肾与骨内在本质联系及肾阴虚、肾阳虚证候的本质进行更深一步阐释。该研究采用成熟的去势造模法，建立大鼠骨质疏松症模型，然后以激素为干预，分别构建骨质疏松肾阴虚证和骨质疏松肾阳虚证模型。通过虚证辨证参考标准[18-20]，并结合大鼠股骨微观结构、血清骨代谢指标以评价病证结合模型。
肾作为先天之本，在中医藏象学说中占有极其重要的地位，中医的证候研究是连接临床和基础理论的桥梁[21]。生物学角度研究表明，肾虚生物学基础可能与下丘脑-垂体-性腺轴发生紊乱有关[22]，性激素水平下降进而引起成骨细胞功能下降，使单位体积内骨组织含量减少发生骨质疏松[23]。詹正烜等[24]通过研究肾阴虚、肾阳虚模型大鼠股骨皮质骨差异表达的蛋白质，从功能蛋白质组角度表明肾阴虚证与肾阳虚证之间存在显著差异，为中医临床辨证研究骨组织提供一定的理论基础。
目前在骨组织研究领域，Micro-CT 可早期发现骨质疏松症骨小梁骨微结构变化，在微米级高清晰扫描骨小梁立体结构，不仅可精确计量标本整体骨量参数，还可测试大量骨结构参数[25]，能够很好地研究骨结构和骨密度的数量性指标及微细改变，结合有限元分析方法能够反映力学特性变化[26]。骨体积分数表示骨组织体积与组织体积比值，可直接反映骨量变化；骨表面积密度可以间接反映骨量变化情况；骨小梁数目代表感兴趣区域中每毫米骨组织与非骨组织交点数量的平均值；骨小梁厚度表示骨小梁平均厚度；骨小梁分离度表示骨小梁之间髓腔平均宽度[27]。
在骨质疏松症中，骨组织代谢已发生改变，引起骨质流失和骨微观结构的改变，从而导致骨组织脆性增加。骨代谢标志物可以很好地反映成骨和破骨细胞的活性及骨组织分解情况，从而有效评估骨代谢水平[28]。骨特异性碱性磷酸酶是成骨细胞的一种细胞外酶，参与骨形成过程，在血清中稳定，是成骨细胞成熟和具有活性的标志，碱性磷酸酶被认为是最精确的骨形成标志物之一；骨钙素又称为γ-羧基谷氨酸骨蛋白(GLa蛋白)，是骨基质矿化的必需物质，骨钙素反映了骨代谢的总体水平，是反映骨形成的特异性生化指标；1型前胶原氨基末端肽水平反映成骨细胞合成骨胶原的能力，可用于监测成骨细胞活力和骨形成，是新骨形成的特异性敏感指标；抗酒石酸酸性磷酸酶在监测骨代谢方面有重要作用；Ⅰ型胶原交联N-末端肽主要反映破骨细胞骨吸收活性，可灵敏地反映骨代谢的变化，被认为是目前反映骨吸收状况最敏感、最特异的指标[29-30]。
该研究结果表明，与肾阴虚大鼠相比，肾阳虚组大鼠骨小梁骨密度及骨体积分数明显降低，骨小梁数量减少，骨小梁厚度明显增加，血清各项骨形成、骨吸收标志物水平明显降低，表明肾阳虚组大鼠骨代谢明显减慢，Micro-CT研究参数与血清骨代谢指标结果相符合，即肾阳虚组骨质疏松症大鼠骨小梁出现“量少、质稀、体厚”的形态特点，这与肾阳虚证下丘脑-垂体-靶腺轴功能紊乱、骨钙代谢相关基因表达水平均降低、加速骨流失等相关研究相一致[31-33]。与肾阳虚组大鼠相比，肾阴虚组大鼠骨小梁骨密度及骨体积分数明显升高，骨小梁数量增加，骨小梁厚度减小，血清各项骨形成、骨吸收标志物均明显升高，表明肾阴虚组大鼠骨代谢明显加快，骨形成过程加快，故见骨小梁骨密度及骨体积分数升高，骨小梁数量增加；骨吸收过程同样加快，故虽然骨小梁数量增加，但骨小梁厚度减小，即肾阴虚组骨质疏松症大鼠骨小梁出现“量多、质密、体薄”的形态特点，这与既往肾阴虚证下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进、交感神经活动兴奋、代谢组学变化、代谢加速、产热增加等相关研究相一致[16，21，34]。该研究通过骨小梁微观结构与血清骨代谢指标差异的系统阐述，将既往肾阳虚证、肾阴虚证的现代本质研究与骨质疏松症相结合，为中医临床研究不同肾虚证型骨质疏松症提供新的角度。
该研究两组大鼠骨表面积密度及骨小梁间隙参数未见明显差异，可能与个人选取感兴趣区域操作习惯有关，研究过程已保证所有感兴趣区域均由同一人选取，其参数差异等相关机制仍需进一步研究。此外，肾阴虚大鼠造模过程中出现1只死亡，猜测与实验人员灌胃操作不规范有关。血清检测仅选取5项特异性骨形成与骨吸收指标进行研究，仍有许多骨代谢生化指标，如钙磷代谢调节指标、激素与细胞因子等未进行检测[35]，有望在后期实验进行进一步深入探讨。
综上所述，肾阳虚、肾阴虚证型去势骨质疏松大鼠骨小梁微观结构及骨代谢指标存在明显差异，但对肾阳虚、肾阴虚证型骨质疏松病证结合动物模型仍需进一步深入的研究，相信随着科研水平的进步，医学界将会对不同肾虚证型骨质疏松症有更全面的认识，为临床中西医结合治疗肾虚证型骨质疏松症提供更多的依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

两种肾虚证型去势模型大鼠骨小梁微观结构及骨代谢的差异

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[1]	姜欢畅, 张兆飞, 梁德, 江晓兵, 杨晓东, 刘志祥. 单侧多方向弯曲与直行椎体成形治疗胸腰椎骨质疏松性压缩骨折优势的比较[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1407-1411.
[2]	朱婵, 韩栩珂, 姚承佼, 周倩, 张强, 陈秋. 人体唾液成分与骨质疏松/骨量低下[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1439-1444.
[3]	李微, 朱汉民, 王鑫, 高雪, 崔婧, 刘雨昕, 黄树明. 左归丸干预卵巢摘除骨质疏松模型小鼠骨形态发生蛋白2信号通路的变化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1173-1179.
[4]	肖豪, 刘静, 周君. 脉冲电磁场治疗绝经后骨质疏松症的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1266-1271.
[5]	高俞锦, 彭双麟, 马治超, 陆诗, 曹花月, 王浪, 肖金刚. 糖尿病骨质疏松症模型小鼠脂肪干细胞的成骨能力[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 999-1004.
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[8]	侯万星, 李洪伟, 郑欣, 朱先任. 经皮椎体强化后骨水泥椎间盘渗漏与治疗前MRI发现的相关性[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 504-509.
[9]	王智强, 林路, 陈萧霖, 柯珍勇. 经皮椎体强化治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折：导航定位、骨折复位系统、骨水泥渗漏及材料的改良[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 631-636.
[10]	欧梁, 孔德忠, 徐道情, 倪景, 付兴前, 黄维琛. 比较聚甲基丙烯酸甲酯与自固化磷酸钙骨水泥在椎体成形中应用效果的 Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 649-656.
[11]	蔡风, 余波, 曾铎, 陈钦灿, 廖琦. 皮质骨轨迹螺钉内固定治疗老年骨质疏松性腰椎疾病[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(3): 403-407.
[12]	钟远鸣, 何炳坤, 吴卓檀, 吴思贤, 万通, 钟锡锋. Jack椎体扩张器后凸成形治疗骨质疏松性椎体压缩骨折：有效及安全的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(3): 487-492.
[13]	陈巧玲, 白亦光, 刘康, 林涛, 罗栩伟. 条件性敲除骨髓间充质干细胞中3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1基因后的成骨细胞分化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(24): 3785-3789.
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[15]	王路, 李丽梅, 李庆, 杨洪财, 蓝晓倩, 胡应瑞. 聚氨酯材料在骨质疏松性骨缺损修复中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(21): 3429-3434.