湿润烧伤膏干预烧伤模型大鼠创面愈合及α-平滑肌肌动蛋白的表达

doi:10.12307/2022.680

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
烧伤：是常见的软组织损伤类型，包括火烧伤、电烧伤及烫伤等，致死率及致畸率极高。烧伤区会引起周围组织毛细血管通透性增加，导致体液的渗出，造成局部组织水肿，创面缺血/缺氧，使得患者在治疗过程中可能因感染、创面溶痂、预后瘢痕增生等影响愈合进程。
α-平滑肌肌动蛋白：是肌成纤维细胞的标志性蛋白，在创面愈合和血管生成中发挥重要作用。伤口部位的收缩和瘢痕的形成是创面愈合修复的基础，而肌成纤维细胞是伤口收缩的动力，α-平滑肌肌动蛋白是伤口瘢痕形成的基础。

背景：湿润烧伤膏能够抑制炎症反应，降低氧化应激水平，加速创面愈合速度，广泛用于治疗烧伤创面、皮肤放射性损伤、糖尿病足病，并取得了显著效果，但对其机制的研究仍处于空白阶段。
目的：基于转化生长因子β1/Smad家族成员3信号通路探讨湿润烧伤膏对烧伤模型大鼠创面愈合及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。
方法：将80只SPF级SD雄性大鼠随机分为假烫伤组、模型组、湿润烧伤膏组、转化生长因子β1组，后3组采用圆形烫伤仪(直径为2.5 cm)构建大鼠模型，伤后湿润烧伤膏组创面涂抹湿润烧伤膏，转化生长因子β1组注射转化生长因子β1，假烫伤组、模型组创面涂抹生理盐水。第21天麻醉处死，观察各组大鼠伤后创面愈合情况；采用苏木精-伊红染色观察大鼠创面组织病理学表现；免疫组化染色检测创面组织表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平；ELISA法检测大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的表达水平；黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸显色法检测创面组织氧化应激指标超氧化物歧化酶、丙二醛水平；Western-blot检测创面组织转化生长因子β1、磷酸化Smad家族成员3蛋白表达水平。
结果与结论：①与假烫伤组相比，模型组大鼠创面愈合率、表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白、超氧化物歧化酶、转化生长因子β1、Smad家族成员3水平显著降低(P < 0.05)，肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6、丙二醛水平显著升高(P < 0.05)；②与模型组相比，湿润烧伤膏组和转化生长因子β1组大鼠创面愈合率、表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白、超氧化物歧化酶、转化生长因子β1、磷酸化Smad家族成员3水平显著升高(P < 0.05)，创面上皮组织基本形成，胶原组织清晰可见；肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6、丙二醛水平显著下降(P < 0.05)；③而湿润烧伤膏组和转化生长因子β1组上述指标相比差异无显著性意义(P > 0.05)；④提示湿润烧伤膏可通过激活转化生长因子β1/Smad家族成员3信号通路，降低烧伤模型大鼠氧化应激水平和炎症程度，增加α-平滑肌肌动蛋白表达水平，从而促进创面愈合。
缩略语：转化生长因子β1：transforming growth factor-β1，TGF-β1；Smad家族成员3：Smad family member 3，Smad3

https://orcid.org/0000-0002-1857-9984 (杨树楷)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 烧伤, 转化生长因子β1, Smad家族成员3, 湿润烧伤膏, 创面愈合, α-平滑肌肌动蛋白

Abstract: BACKGROUND: Moist exposed burn ointment (MEBO) can inhibit inflammation, reduce oxidative stress, and accelerate wound healing. It has been widely used in the treatment of burn wounds, skin radiation damage, and diabetic foot disease, and has achieved significant results. However, the research on its mechanism is still in a blank stage.
OBJECTIVE: To investigate the effects of MEBO on wound healing and expression of α-smooth muscle actin in a rat burn model through the transforming growth factor β1 (TGF-β1)/Smad family member 3 (Smad3) signaling pathway.
METHODS: Eighty specific-pathogen free male Sprague-Dawley rats were randomly divided into a sham scald group, a model group, a MEBO group, and a TGF-β1 group. Except for the sham scald group, rats in the other groups were treated with a circular scald apparatus (2.5 cm in diameter) to construct rat models. Rats in the MEBO group were treated with MEBO. Rats in the TGF-β1 group were treated with TGF-β1. Rats in the sham scald and model groups were treated with physiological saline. On the 21st day, the rats were killed under anesthesia, and wound healing was observed in each group. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the pathological manifestations of the rat wound. Immunohistochemical staining was used to detect the expression of epidermal growth factor receptor and α-smooth muscle actin. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the expression of inflammatory factors, tumor necrosis factor-α, interleukin-1β, and interleukin-6, in rat serum. Xanthine oxidase method and thiobarbituric acid coloration method were used to detect the levels of oxidative stress indicators, superoxide dismutase and malondialdehyde, in wound tissue. Western blot was used to detect the protein expression of TGF-β1, and phospho-Smad3 in rat wound tissue.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the sham scald group, the wound healing rate and the levels of epidermal growth factor receptor, α-smooth muscle actin, superoxide dismutase, TGF-β1, and phospho-Smad3 were significantly reduced (P < 0.05); and the levels of tumor necrosis factor-α, interleukin-1β, interleukin-6, and malondialdehyde were increased significantly in the model group (P < 0.05). Compared with the model group, the wound healing rate and the levels of epidermal growth factor receptor, α-smooth muscle actin, superoxide dismutase, TGF-β1, and phosoho-Smad3 were significantly increased in the MEBO group and TGF-β1 group (P < 0.05). Epithelial tissue basically formed covering the wound surface, and the collagen tissue was clearly visible in the MEBO group and TGF-β1 group. Compared with the model group, the levels of tumor necrosis factor-α, interleukin-1β, interleukin-6, and malondialdehyde were significantly decreased in the MEBO group and TGF-β1 group (P < 0.05). However, these above-mentioned indicators showed no significant difference between the MEBO group and the TGF-β1 group (P > 0.05). To conclude, MEBO can reduce oxidative stress and inflammation in burn rats by activating the TGF-β1/Smad3 signaling pathway, and increase the expression level of α-smooth muscle actin, thereby promoting wound healing.

Key words: burn, transforming growth factor β1, Smad family member 3, moist exposed burn ointment, wound healing, α-smooth muscle actin

中图分类号:

杨树楷, 瓦庆彪, 袁晓燕. 湿润烧伤膏干预烧伤模型大鼠创面愈合及α-平滑肌肌动蛋白的表达[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(23): 3762-3767.

Yang Shukai, Wa Qingbiao, Yuan Xiaoyan. Moist exposed burn ointment intervenes with wound healing and expression of alpha-smooth muscle actin in burn model rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(23): 3762-3767.

图/表（结果） 9

2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠80只，分为4组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。
2.2 各组大鼠烧伤创面愈合情况比较各组大鼠创面均无明显感染迹象，随着时间的推移，伤口逐渐愈合。烫伤7 d后，各组大鼠创面出现愈合，模型组脓液明显，湿润烧伤膏组和TGF-β1组创面基本结痂。烫伤14 d后，各组大鼠创面愈合明显，模型组痂下残留部分脓液；湿润烧伤膏组和TGF-β1组愈合进程明显加快。烫伤21 d后，模型组大鼠创面颜色较深，周围组织有部分水肿，创面逐步愈合；湿润烧伤膏组创面明显缩小，仅残留小部分未愈合伤口；TGF-β1组创面基本完全愈合，见图1。

与假烫伤组相比，模型组创面愈合缓慢；与模型组相比，湿润烧伤膏组和TGF-β1组创面愈合率明显升高(P < 0.05)，见表1。

2.3 各组大鼠创面组织病理学比较苏木精-伊红染色结果显示，假烫伤组大鼠表皮和真皮无明显变化；烫伤21 d，模型组大鼠出现部分上皮化，形成少量纤维和胶原蛋白沉积，存在丰富的肉芽组织和严重的炎症反应；湿润烧伤膏组大鼠表面覆盖坚固的表皮，表皮衬里存在明显的重构和角质化，少量淋巴细胞出现，纤维蛋白渗出减少，大量胶原蛋白沉积；TGF-β1组大鼠上皮基本形成，成纤维细胞肥大且密集分布，胶原组织清晰可见，见图2。

2.4 各组大鼠创面组织表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平比较免疫组化结果显示，表皮生长因子受体定位于上皮细胞中，α-平滑肌肌动蛋白定位于真皮中，阳性染色为棕黄色。假烫伤组大鼠表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白呈强阳性表达；烫伤21 d，模型组大鼠表皮生长因子受体部分表达，α-平滑肌肌动蛋白微弱表达；湿润烧伤膏组和TGF-β1组在基底层和基底上层均发现表皮生长因子受体大量表达，真皮中α-平滑肌肌动蛋白阳性率显著增加。与假烫伤组相比，模型组大鼠表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平显著降低；与模型组相比，湿润烧伤膏组和TGF-β1组表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平显著升高(P < 0.05)，见表2及图3。

2.5 各组大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6水平比较 ELISA结果显示，与假烫伤组相比，模型组大鼠肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6表达水平显著升高；与模型组相比，湿润烧伤膏组和TGF-β1组大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6水平显著下降(P < 0.05)，见表3。

2.6 各组大鼠创面组织氧化应激指标超氧化物歧化酶、丙二醛水平比较检测结果显示，与假烫伤组相比，模型组大鼠超氧化物歧化酶水平显著降低，丙二醛水平显著升高；与模型组相比，湿润烧伤膏组和TGF-β1组大鼠超氧化物歧化酶水平显著升高，丙二醛水平显著下降(P < 0.05)；而湿润烧伤膏组和TGF-β1组超氧化物歧化酶、丙二醛水平差异无显著性意义(P > 0.05)，见表4。

2.7 各组大鼠创面组织TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平比较 Western blot结果显示，与假烫伤组相比，模型组大鼠TGF-β1、p-Smad3水平显著降低；与模型组相比，湿润烧伤膏组和TGF-β1组大鼠TGF-β1、p-Smad3蛋白水平显著升高(P < 0.05)；而湿润烧伤膏组和TGF-β1组的TGF-β1、p-Smad3水平相比差异无显著性意义(P > 0.05)，见表5及图4。

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引言

烧伤是常见的软组织损伤类型，包括火烧伤、电烧伤及烫伤等，患病率在外伤中占第4位，致死率及致畸率极高，给家庭和社会造成沉重负担[1-2]。炎症发生、新生血管形成、胶原沉积、再上皮化等都与创面愈合密切相关[3-5]。湿润烧伤膏可在创面形成一层保护膜，阻止创面水分蒸发，有助于促进表皮干细胞分化，改善病变微环境，提高组织的免疫功能[6]，广泛用于治疗烧伤创面、皮肤放射性损伤、糖尿病足病，并取得显著效果。杨新蕾等[7]发现湿润烧伤膏能有效促进难愈创面的愈合，并能改善愈合后瘢痕及色素沉积。梁吉星[8]发现湿润烧伤膏能有效抑制肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症因子的表达，改善瘢痕形态，减轻疼痛，从而治疗深Ⅱ度烧伤。张丽艳[9]发现湿润烧伤膏能有效增加糖尿病皮肤溃疡小鼠血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平，从而提高抗氧化能力，加速创面愈合速度。转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)能够促进上皮组织生成，加速组织修复。Smad家族成员3(Smad family member 3，Smad3)能够提高α-平滑肌肌动蛋白表达水平，加速创面组织纤维化，具有很好的抗炎、消肿效果。研究发现TGF-β1/Smad3信号通路在创面愈合中起重要调控作用。JIANG等[10]发现人骨髓间充质干细胞来源的外泌体通过TGF-β/Smad信号通路刺激皮肤创面愈合。JI等[11]发现腐植酸钠通过激活大鼠TGF-β/Smads信号通路来加速皮肤伤口愈合。但湿润烧伤膏是否通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对烧伤模型大鼠创面愈合及α-平滑肌肌动蛋白表达产生影响研究较少。
此次研究通过构建大鼠烧伤模型，探讨湿润烧伤膏是否通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对烧伤模型大鼠创面愈合发挥保护作用，为湿润烧伤膏治疗烧伤创面愈合提供理论依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，组间比较采用单因素方差分析，两两间比较采用独立t检验。
1.2 时间及地点实验于2019年1-11月在四川大学华西口腔医学院完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 80只SPF级SD雄性大鼠，体质量220-250 g，购自豪威生物科技有限公司，生产许可证号：SYXK(津)2019-0006。饲养环境为室温23-25℃，标准湿度55%-60%，12 h/12 h昼夜交替，饮水饮食正常，分笼饲养，1周后用于实验。此次研究目的及实验操作经四川大学华西口腔医学院动物实验伦理委员会批准，批准号：K2020017。
1.3.2 主要试剂和仪器湿润烧伤膏(汕头市美宝制药有限公司)；TGF-β1蛋白(美国Selleck公司)；TGF-β1、p-Smad3抗体(美国CST公司)；辣根过氧化物酶标记的二抗(北京博尔西科技有限公司)；苏木精-伊红染色试剂盒[生工生物工程(上海)股份有限公司]；BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)；肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6 ELISA试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；Thermo酶标仪(上海热电仪器有限公司)；组织包埋机(德国Leica公司)；台式冰冻离心机(美国Beckman公司)；蛋白电泳仪(美国Bio-Rad公司)；X71光学显微镜(日本Olympus公司)。
1.4 方法
1.4.1 动物分组、模型制作及给药
分组：采用随机数字表法将80只大鼠分为假烫伤组、模型组、湿润烧伤膏组(20 mL/kg[5])和TGF-β1组(20 mL/kg[12])，每组20只。
模型制作：除假烫伤组外，采用圆形烫伤仪(直径为2.5 cm)构建烫伤大鼠模型，各组腹腔注射3%戊巴比妥钠(30 mL/kg)进行麻醉，在背部距离肩胛骨2 cm处脱毛(3 cm×3 cm)并消毒，用烫伤仪(温度为85 ℃，时间为8 s)在大鼠无毛区造成深Ⅱ度烫伤，形成圆形皮肤缺损创面；假烫伤组调节烫伤仪温度为37 ℃，其他操作同上。立刻皮下注射醋酸氢化可的松(0.6 mg/kg)抗感染，腹腔注射乳酸林格氏液(5 mL)抗休克。

给药：烫伤当天各组均用生理盐水清洗伤口并用医用无菌纱布覆盖。湿润烧伤膏组创面涂抹湿润烧伤膏，每2 d换药1次；TGF-β1组创面下注射TGF-β1，1次/d，连续给药21 d；假烫伤组、模型组创面涂抹生理盐水。烫伤第21天所有大鼠麻醉，取眼球血，离心留取上清于-20 ℃备用；麻醉处死大鼠，取创面组织标本部分浸于40 g/L多聚甲醛中固定，部分放于-20 ℃保存待测。

1.4.2 各组大鼠烧伤创面愈合情况烫伤后第7，14，21天，每组取3只大鼠，拍照并记录创面愈合情况(创面颜色、化脓情况、肿胀程度、结痂情况等)。采用HVviewing 8.0图像分析软件测量创面面积，创面愈合率=(原始创面面积－未愈合创面面积)/原始创面面积×100%。
1.4.3 苏木精-伊红染色观察大鼠创面组织病理学表现烫伤第21天，取出40 g/L多聚甲醛固定的创面组织行常规脱水、石蜡包埋等步骤制作3 μm石蜡切片，切片用二甲苯脱蜡、苏木精-伊红染色、乙醇梯度脱水、二甲苯透明、中性胶封固，最后于显微镜(×200)下观察创面组织的形态学变化。
1.4.4 免疫组化染色检测创面组织表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平烫伤第21天，取出制成的创面组织石蜡切片，切片于60 ℃烤箱熔蜡，经二甲苯脱蜡、乙醇梯度脱水后，进行高压抗原修复，体积分数3%的H2O2室温孵育20 min，PBS洗涤3次，分别滴加兔抗大鼠一抗表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白(1∶100)孵育过夜，PBS洗涤，次日滴加山羊抗兔二抗孵育20 min，快速滴加DAB显色液显色，苏木精复染，乙醇梯度脱水、透明、封固，显微镜(×400)下观察，棕黄色为阳性表达。随机选取10个视野，使用NIS Elements BR(3.22版)成像软件进行染色细胞计数，并量化为所计数细胞总数的百分比。
1.4.5 ELISA法检测大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的水平烫伤第21天，取出大鼠冻存的眼球血上清，按照ELISA试剂盒说明，包被、加样、加抗体、显色、终止反应，同时稀释标准品，绘制标准曲线，检测大鼠血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的水平。
1.4.6 各组大鼠创面组织氧化应激指标超氧化物歧化酶、丙二醛水平检测烫伤第21天，取一份创面组织，加入细胞裂解液匀浆，4 ℃、9 000 r/min离心10 min，取上清，-20 ℃保存待测。采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活性；硫代巴比妥酸显色法(TBA法)检测丙二醛水平。
1.4.7 Western-blot检测创面组织TGF-β1、p-Smad3表达水平烫伤第21天，取一份创面组织，加入细胞裂解液匀浆进行总蛋白提取，用BCA蛋白检测试剂盒测定各组蛋白浓度，蛋白定量变性后进行SDS-PAGE电泳分离蛋白，电泳后迅速转至PVDF膜上，放入含5%脱脂牛奶中室温封闭2 h，分别加入对应一抗TGF-β1、p-Smad3(1∶2 000)4℃过夜。TBST洗涤3次后，加入二抗(1∶10 000)室温孵育2 h，最后避光下加入ELC显色剂显色，Bio-rad凝胶成像仪记录蛋白灰度并拍照，以GAPDH作为对照，对各组蛋白进行相对定量分析。
1.5 主要观察指标 ①烫伤后第7，14，21天大鼠烧伤创面愈合情况；②烫伤后第21天大鼠创面组织病理学表现；③创面组织表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平；④大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的表达水平；⑤创面组织TGF-β1、p-Smad3的表达水平。
1.6 统计学分析数据分析应用SPSS 22.0软件，符合正态分布的计量资料采用x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两间比较采用独立t检验，P < 0.05表示差异有显著性意义。

讨论

烧(烫)伤是常见的机体损伤，在治疗过程中可能因感染、创面溶痂、预后瘢痕增生等影响愈合进程，因此烧伤创面愈合及预后是临床关注的重点。烧伤区会引起周围组织毛细血管通透性增加，导致体液的渗出，造成局部组织水肿，创面缺血/缺氧。湿润烧伤膏可以在皮肤表面形成液态、膏态结构，液态层能够与坏死皮肤组织发生水解，使其液化并向膏层移动，换药时即可带走坏死组织产生的毒素，此外低氧、微酸的湿润环境能够促进成纤维细胞和毛细血管的生长，有利于提高创面愈合率。此次研究采用圆形烫伤仪构建大鼠皮肤烫伤模型，结果显示，烫伤7 d，模型组脓液明显，用湿润烧伤膏和TGF-β1干预后，湿润烧伤膏组和转化生子因子β1组创面基本结痂，随着时间的推移，各组大鼠创面愈合明显；烫伤21 d，模型组大鼠烫伤组织仍有部分水肿，形成少量纤维，胶原蛋白沉积及严重的炎症反应；湿润烧伤膏组和转化生子因子β1组仅残留小部分未愈合伤口，上皮基本形成，胶原组织清晰可见，说明湿润烧伤膏和转化生子因子β1能促进烧伤大鼠创面的愈合。
表皮生长因子是一种内分泌趋化因子，在皮肤组织中有多种靶细胞，包括表皮细胞、真皮成纤维细胞、血管内皮细胞等[13]。最早用于创面修复的小分子多肽，能够与表皮生长因子受体结合，促进上皮细胞、成纤维细胞的增殖、迁移，从而加速伤口的愈合，广泛用于治疗烧伤及难愈性伤口。α-平滑肌肌动蛋白是肌成纤维细胞的标志性蛋白，在创面愈合和血管生成中发挥重要作用[14-15]。伤口部位的收缩和瘢痕的形成是创面愈合修复的基础，而肌成纤维细胞是伤口收缩的动力，α-平滑肌肌动蛋白是伤口瘢痕形成的基础。卢孔君[16]发现复方柔性脂质体软膏能有效发挥表皮生长因子和维甲酸的协同作用，促进细胞增殖、迁移，从而加快烧伤伤口的愈合，提高伤口愈合质量。SIMONETTI等[17]发现达托霉素在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的烧伤愈合中通过促进表皮生长因子受体的表达，加速伤口愈合。刘昕等[18]发现输尿管热损伤增加了平滑肌成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白表达，从而导致平滑肌瘢痕形成。张萍等[12]发现重组牛碱性成纤维细胞生长因子能增加创面组织α-平滑肌肌动蛋白表达，从而促进糖尿病大鼠烧伤创面愈合。此次研究的免疫组化结果显示，表皮生长因子受体定位于上皮细胞中，α-平滑肌肌动蛋白定位于真皮中；假烫伤组大鼠表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白呈强阳性表达；模型组表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白少量表达；湿润烧伤膏组和TGF-β1组表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白大量表达；与假烫伤组相比，模型组表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平显著降低；与模型组相比，湿润烧伤膏组和TGF-β1组表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平显著升高。说明湿润烧伤膏和TGF-β1能加快上皮化进程，促进胶原形成。
烧伤后，由于创面毛细血管通透性的改变，使得组织液迅速凝集，机体组织损伤越严重，血清炎症因子浓度越高[19-20]，肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6等炎症因子会直接参与到机体炎症反应中。氧化应激条件下，蛋白质、脂类物质容易受到活性氧的攻击，导致变构及酶活性改变，从而引起细胞损伤，延迟烧伤愈合[21-22]。其中丙二醛是氧自由基引起的过氧化代谢产物，与细胞损伤程度呈正相关；超氧化物歧化酶是抗氧化物酶，能够中和活性氧，阻断脂质过氧化反应，反映机体清除氧自由基的能力。董小鹏等[23]发现生肌玉红膏对深Ⅱ度烧伤模型大鼠创面氧化应激水平有明显的抑制作用，从而助于创面愈合。巩文艺等[24]发现黄芪多糖能够改善抗氧化酶活性、提高清除氧自由基能力、降低炎症因子，对严重烧伤大鼠心肌组织氧化应激和炎症反应起抑制作用。徐汤灵等[25]发现花椒籽油通过降低血清炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6的表达，促进烧伤模型大鼠创面愈合。此次研究中与假烫伤组相比，模型组大鼠超氧化物歧化酶活性显著降低，丙二醛、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平显著升高；与模型组相比，湿润烧伤膏组和TGF-β1组大鼠超氧化物歧化酶活性显著升高，丙二醛、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6表达水平显著下降，说明湿润烧伤膏和TGF-β1能够降低烧伤模型大鼠的氧化应激水平和炎症程度。
TGF-β1是促进成纤维细胞的转化因子，能够促进上皮组织形成，加快组织修复，Smad3蛋白是TGF-β1最重要的细胞内信号转导蛋白，能够增强α-平滑肌肌动蛋白表达水平，加速创面组织纤维化，具有很好的抗炎消肿作用[26-28]。有研究显示TGF-β1/Smad3信号通路是创面愈合的重要调控途径[29-33]。张萍等[12]发现重组牛碱性成纤维细胞生长因子通过调控TGF-β1/Smad3信号通路，促进糖尿病大鼠皮肤创面愈合。郑晨果等[34]发现痣愈喷剂和湿润烧伤膏能提高肉芽组织中TGF-β1的表达水平，从而促进皮肤创面愈合，提高愈合速度，改善愈合质量。此次研究中与假烫伤组相比，模型组大鼠TGF-β1、p-Smad3蛋白水平显著降低；与模型组相比，湿润烧伤膏组和TGF-β1组大鼠TGF-β1、p-Smad3蛋白水平显著升高，说明湿润烧伤膏通过激活TGF-β1/Smad3信号通路发挥作用。
综上所述，湿润烧伤膏通过激活TGF-β1/Smad3信号通路，降低烧伤模型大鼠的氧化应激水平和炎症程度，增加α-平滑肌肌动蛋白的表达水平，从而促进创面愈合，为湿润烧伤膏治疗烧伤创面愈合提供新的思路。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程