决明子水提物干预N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导高血压模型大鼠血压的变化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.3105

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (11): 1705-1711.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.3105

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决明子水提物干预N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导高血压模型大鼠血压的变化

叶泉英1，陈启生2，李艳文3，王婷4，陈小艳4，岳赟4

佛山科学技术学院，1口腔医学院医学基础实验教学中心，4口腔医学院，广东省佛山市 528000；2佛山市南海区人民医院肝胆外科，广东省佛山市 528000；3广东药科大学生命科学与生物制药学院，广东省广州市 510006

收稿日期:2019-12-23 修回日期:2019-12-23 接受日期:2020-04-22 出版日期:2021-04-18 发布日期:2020-12-21
通讯作者: 陈启生，硕士，主任医师，佛山市南海区人民医院肝胆外科，广东省佛山市 528000
作者简介:陈启生，硕士，主任医师，佛山市南海区人民医院肝胆外科，广东省佛山市 528000
基金资助:
佛山科学技术学院学术基金(gg08503)，项目负责人：李艳文；2019大学生创新创业训练计划项目(XJ2018190)，项目负责人：王婷

Effect of cassia seed aqueous extract on blood pressure level in N-nitro-L-arginine-methyl ester induced hypertensive rats

Ye Quanying1, Chen Qisheng2, Li Yanwen3, Wang Ting4, Chen Xiaoyan4, Yue Yun4

1Medical Basic Experimental Teaching Center, Foshan University, Foshan 528000, Guangdong Province, China; 2Department of Hepatobiliary Surgery, Nanhai District People’s Hospital, Foshan 528000, Guangdong Province, China; 3College of Life Science and Biopharmaceuticals, Guangdong Pharmaceutical University, Foshan 510006, Guangdong Province, China; 4School of Stomatology, Foshan University, Foshan 528000, Guangdong Province, China

Received:2019-12-23 Revised:2019-12-23 Accepted:2020-04-22 Online:2021-04-18 Published:2020-12-21
Contact: Chen Qisheng, Master, Chief physician, Department of Hepatobiliary Surgery, Nanhai District People’s Hospital, Foshan 528000, Guangdong Province, China
About author:Ye Quanying, Master, Experimentalist, Medical Basic Experimental Teaching Center, Foshan University, Foshan 528000, Guangdong Province, China
Supported by:
the Academic Foundation of Foshan University, No. gg08503 (to LYW); 2019 College Student Innovation and Entrepreneurship Training Program, No. XJ2018190 (to WT)

摘要/Abstract

摘要： 文题释义：
N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导高血压：N-硝基-L-精氨酸甲酯诱发的高血压是公认的实验模型，其特征在于广泛的一氧化氮缺乏和长时间持续性血压升高，其确切的机制基于以下事实：L-精氨酸的结构类似物N-硝基-L-精氨酸甲酯以非酶水解代谢为活性形式Nω-硝基-L-精氨酸(L-NOARG)，与内皮型一氧化氮合酶竞争性结合。内皮型一氧化氮合酶抑制作用减弱了一氧化氮的合成和代谢，一氧化氮是介导血管舒张的最小的气态细胞间信号分子。随后，一氧化氮缺乏会导致全身血管收缩和高血压。由于N-硝基-L-精氨酸甲酯模型可模拟人类的高血压，因此非常适合研究新药的心血管作用。
决明子：现代研究发现许多中药具有降压作用，决明子就是其中之一，而且作为国家卫生部首批公布的药食同源的中药品种之一，现已被市场开发成袋泡茶、滴眼液、决明子枕等多种形式。决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明C. tora L.的干燥成熟种子。始载于《神农本草经》，具有清肝明目、润肠通便的作用。决明子药理作用广泛，对许多疾病均有较好的治疗效果，具有良好的开发价值。

背景：高血压现代诊疗理念是通过降压治疗保护靶器官、改善临床症状与最大程度减少临床事件。决明子在动物实验和临床实践中有降压作用，但是其是否有助于改善高血压血管功能障碍、氧化应激和终末器官损害仍有待于进一步研究。
目的：评估决明子水提物对N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导的高血压大鼠的降压功效。
方法：灌胃N-硝基-L-精氨酸甲酯构建高血压大鼠模型，然后给予决明子水提物[500 mg/(kg•d)]治疗，均连续灌胃4周，1次/d。每周测量1次血压、心率。最后一次灌胃给药24 h后，检测血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素、血肌酐、脂质谱以及肝脏和肾脏中丙二醛、一氧化氮、还原型谷胱甘肽水平、血管紧张素转化酶活性。通过免疫组化和实时定量PCR分析大鼠肾脏组织中内皮型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶蛋白及基因表达。
结果与结论：与高血压模型组相比，决明子水提物治疗4周有效降低了高血压大鼠的平均动脉压、舒张压、收缩压(P < 0.05)，并改善肝脏和肾脏标志物、脂质分布和氧化状态。此外，决明子水提物显著降低了高血压大鼠肝脏和肾脏中血管紧张素转化酶活性(P < 0.05)。在决明子水提物处理的大鼠肾脏中，内皮型一氧化氮合酶的基因和蛋白表达均显著高于高血压模型组。以上结果表明，决明子水提物显示出相当大的降压潜力，其降压机制包括上调内皮型一氧化氮合酶表达、抗氧化和血管紧张素转化酶抑制作用。

https://orcid.org/0000-0002-1714-4989 (叶泉英)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 高血压, N-硝基-L-精氨酸甲酯, 决明子, 水提物, 肾脏, 肝脏, 酶, 大鼠, 实验

Abstract: BACKGROUND: The concept of modern diagnosis and treatment of hypertension is to protect target organs, improve clinical symptoms and minimize clinical events through antihypertensive treatment. Cassia seed has an antihypertensive effect that has been confirmed in animal experiment and clinical practice, but whether it can improve the vascular dysfunction, oxidative stress and end organ damage of hypertension remains to be further studied.
OBJECTIVE: To evaluate the antihypertensive effect of cassia seed water extract on hypertensive rats induced by N-nitro-L-arginine methyl ester.
METHODS: A rat model of hypertension was established by intragastric administration of N-nitro-L-arginine methyl ester to observe the changes of blood pressure and heart rate after the intervention of cassia seed aqueous extract (500 mg/kg per day), once a day, for 4 continuous weeks. Blood pressure and heart rate were measured once a week. At 24 hours after the final administration, serum levels of aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, urea and serum creatinine, and lipid mass spectrometry were detected by an automatic biochemical analyzer. Malondialdehyde, nitric oxide, reduced glutathione levels and angiotensin converting enzyme activity in rat liver and kidney were determined by corresponding assay kits. The expression levels of endothelial nitric oxide synthase and inducible nitric oxide synthase protein and gene in rat kidney tissues were examined by immunohistochemistry as well as real-time quantitative PCR.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the model group, cassia seed aqueous extract treatment significantly reduced mean arterial pressure, diastolic pressure and systolic pressure (P < 0.05) in hypertensive rats, and improved liver and renal markers, lipid distribution and oxidative status. In addition, cassia seed aqueous extract significantly reduced the activity of angiotensin-converting enzyme in the liver and kidney of hypertensive rats (P < 0.05). The protein and mRNA expression levels of endothelial nitric oxide synthase in the kidney of rats treated with cassia seed aqueous extract were significantly higher than those of the model group. In conclusion, cassia seed water extract has shown considerable potential for antihypertension, and its anti-hypertension mechanism includes up-regulation of endothelial nitric oxide synthase expression, antioxidants and inhibition of angiotensin-converting enzymes.

Key words: hypertension">, N-nitro-L-arginine-methyl ester">, cassia seed">, aqueous extract">, kidney">, liver">, enzyme">, rat">, experiment

中图分类号:

叶泉英, 陈启生, 李艳文, 王婷, 陈小艳, 岳赟. 决明子水提物干预N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导高血压模型大鼠血压的变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(11): 1705-1711.

Ye Quanying, Chen Qisheng, Li Yanwen, Wang Ting, Chen Xiaoyan, Yue Yun. Effect of cassia seed aqueous extract on blood pressure level in N-nitro-L-arginine-methyl ester induced hypertensive rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(11): 1705-1711.

图/表（结果） 9

2.1 实验动物数量分析 48只大鼠参加实验，均进入结果分析。
2.2 决明子水提物对高血压大鼠体质量、血压、心率的影响如图1A所示，各组大鼠的体质量没有显著差异。服用N-硝基-L-精氨酸甲酯4周，高血压模型组大鼠平均动脉压、舒张压、收缩压明显高于正常对照组(P < 0.05)，见图1B-D。与高血压模型组相比，决明子水提物能有效降低高血压大鼠的平均动脉压、舒张压、收缩压(P < 0.05)，并且作用效果与卡托普利相似。在4周结束时，各组之间的心率没有显著差异。

2.3 决明子水提物对高血压大鼠血清生化指标的影响与正常对照组相比，高血压模型组肝脏标志酶(谷丙转氨酶和谷草转氨酶)活性和肾损伤标志物(肌酐和尿素)水平显著升高(P < 0.05)，见表1。与高血压模型组相比，决明子水提物能有效降低高血压大鼠的谷丙转氨酶活性以及尿素、肌酐水平(P < 0.05)。此外，与正常对照组相比，高血压模型组大鼠的血清三酰甘油、胆固醇和低密度脂蛋白显著升高(P < 0.05)，高密度脂蛋白水平显著降低(P < 0.05)，而决明子水提物显著逆转了N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导的高血压大鼠血清脂质谱紊乱(P < 0.05)。

2.4 决明子水提物对高血压大鼠血管紧张素转换酶活性、一氧化氮及氧化状态的影响与正常对照组相比，高血压模型组大鼠肝脏和肾脏的血管紧张素转化酶活性、丙二醛水平显著升高(P < 0.05)，而一氧化氮、还原型谷胱甘肽水平显著降低(P < 0.05)。决明子水提物的治疗显著降低了高血压大鼠肝脏和肾脏的血管紧张素转化酶活性(P < 0.05)，同时提高了一氧化氮、还原型谷胱甘肽水平(P < 0.05)，见表2。

2.5 决明子水提物对高血压大鼠肾脏组织病理学的影响图2为各组大鼠肾脏的组织病理学评估。正常对照组的肾脏无组织病理学改变，见图2A。与正常对照组相比，高血压模型组肾小球肥大伴系膜溶解，表现为系膜细胞和内皮细胞坏死，肾小球簇与鲍曼囊壁层粘连，鲍曼囊壁层中度增厚，蛋白渗漏导致鲍曼腔扩张，见图2B。此外，肾小管上皮细胞表现出明显的坏死性变化，管腔内大量的蛋白铸型堆积，同时观察到间质组织中胶原沉积和单核炎性细胞聚集。参考组、决明子组肾组织病理学改变明显减轻，见图2C，D。参考组表现为鲍曼腔扩张，部分肾小球簇粘连，鲍曼囊壁层轻度增厚，肾小管上皮轻度坏死性改变。决明子组表现为轻度肾小球簇坏死、肾小球簇粘连、鲍曼腔扩张和蛋白渗漏。由此可见，决明子水提物治疗能显著改善肾脏组织病理学表现。

2.6 决明子水提物对高血压大鼠心脏组织病理学的影响图3为各组大鼠心脏的组织病理学评估。正常对照组心肌组织学正常，见图3A。高血压模型组显示严重心肌变性、坏死和纤维化伴单核细胞浸润，见图3B。决明子组表现为轻度心肌变性，心肌纤维化减少，见图3C。参考组表现为中度心肌变性、坏死、单核炎症细胞聚集和胶原纤维沉积，见图3D。

2.7 决明子水提物对高血压大鼠eNOS、iNOS蛋白及基因表达的影响在基因水平上，高血压模型组肾脏中的eNOS mRNA水平降低至1/10(0.14倍)，卡托普利和决明子水提物给药后显示出对eNOS下调的保护作用，在肾脏中增加了3.05倍和3.97倍，见表3。在蛋白质水平上，免疫组化显示eNOS主要在肾小管上皮细胞、内皮衬里毛细血管簇和肾内皮衬里表达，与正常对照组相比，高血压模型组肾脏的eNOS免疫染色明显降低。与高血压模型组相比，参考组、决明子组的eNOS蛋白表达显著增加(P < 0.05)，见图4。研究观察到iNOS mRNA在各组之间差异无显著性意义；在蛋白水平上，与正常对照组相比，高血压模型组、参考组、决明子组肾脏中均显示出增强的iNOS表达，见图5。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。
1.2 时间及地点实验于2018年1至12月在佛山科学技术学院机能实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 化学试剂 N-硝基-L-精氨酸甲酯(美国Sigma Aldrich公司)；RNA提取试剂盒和定量SYBR-Green-PCR试剂盒(美国Promega Corporation公司)；ReverTra Ace Qpcr RT试剂盒(日本TOYOBO公司)；5，5-二硫代-2-硝基苯甲酸(DTNB)、磷酸二氢钠、三氯乙酸、硫代巴比妥酸和所有其他化学品均为分析级化学品(美国Sigma Chemical 公司)；谷草转氨酶和谷丙转氨酶检测试剂盒(中生北控生物科技有限公司)；血清丙二醛、一氧化氮和还原型谷胱甘肽测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；大鼠血管紧张素转化酶ELISA检测试剂盒(天津安诺瑞康生物技术有限公司)。
1.3.2 药物卡托普利片(中美上海施贵宝制药有限公司)；决明子(广州海王星辰医药连锁有限公司)。取决明子50 g置烧杯中，加400 mL蒸馏水浸没药材，浸泡30 min，加热至沸腾，保持微沸60 min，过滤，药渣加入4倍量蒸馏水依法再次煎煮30 min，合并2次煎出液，置50 ℃水浴锅中缓慢蒸发，浓缩至50 mL(按生药算，相当于1 kg/L)，于4 ℃冰箱保存备用[15]。
1.3.3 实验动物成年雄性SD大鼠60只，体质量220-250 g，购自广东省医学实验动物中心，合格证编号：SCXK (粤)2013-0002。所有动物均在恒温和12 h光/暗循环下饲养。
1.4 实验方法
1.4.1 决明子水提物单剂量毒性研究将12只成年雄性SD大鼠放在聚丙烯笼中，随机分为2组：对照组灌胃蒸馏水，实验组灌胃新鲜制备的决明子水提物悬浮液(5 000 mg/kg)，每天给药1次，持续到第14天。每天记录所有动物的体质量，观察是否存在与治疗相关的死亡率或毒性症状。在目前的实验条件下，没有发现死亡率或发病率。根据OECD的指导方针，口服LD50高于5 000 mg/kg被认为是安全的。因此，该研究选择安全剂量(最大实验安全剂量的1/10=500 mg/kg)作为研究剂量。
1.4.2 模型建立和实验分组根据MAJITHIYA等[16]方法灌胃0.5% N-硝基-L-精氨酸甲酯诱发高血压。48只大鼠随机分组如下：正常对照组，仅灌胃蒸馏水；高血压模型组，连续4周每天上午灌胃N-硝基-L-精氨酸甲酯[50 mg/(kg•d)]；参考组，连续4周每天上午灌胃N-硝基-L-精氨酸甲酯[50 mg/(kg•d)]和下午灌胃卡托普利[15 mg/(kg•d)]；决明子组，连续4周每天上午灌胃N-硝基-L-精氨酸甲酯[50 mg/(kg•d)]和下午灌胃决明子水提物[500 mg/(kg•d)]，每组12只。

1.4.3 血压记录在实验开始时和每周一下午14：00测量1次清醒状态下大鼠的血压(收缩压和舒张压)和心率。在尾袖法记录血压之前，将动物限制在鼠筒中10-20 min/d，持续5 d让其适应环境，然后在恒温控制的加热柜中将动物在36 ℃加热30 min，以更好地检测尾动脉脉搏，将大鼠鼠尾穿过传感器，尽可能将传感器置于尾根部(BP-300A全自动无创血压测量系统，成都泰盟软件有限公司)，在袖带自动充气和放气期间记录放大的脉冲。使用以下公式计算平均动脉血压。平均动脉血压=舒张压+0.412(收缩压-舒张压)。
1.4.4 标本采集及分析最后1次灌胃给药24 h后，用乙醚麻醉动物，通过眼眶后静脉丛穿刺收集血样，并以4 000 r/min离心10 min分离血清，测定生化指标。随后，所有动物在乙醚麻醉下颈椎脱位处死,立即取出整个肝脏、肾脏和心脏，用冰生理盐水冲洗，并保持-80 ℃直到进一步分析。将部分肾脏和心脏组织置于体积分数为10%甲醛溶液中进行组织病理学检查。
1.4.5 生化分析通过全自动生化仪检测血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素和血肌酐、脂质谱。根据厂家说明书，采用试剂盒法测定大鼠肝脏和肾脏中丙二醛、一氧化氮、还原型谷胱甘肽水平和血管紧张素转化酶活性。
1.4.6 组织病理学检查对各组大鼠的肾脏和心脏进行固定和处理，获得4 μm石蜡包埋切片。采用苏木精-伊红染色对肾小球、肾小管、肾间质组织和心肌组织进行病理学评估。
1.4.7 免疫组化分析对各组大鼠的肾脏进行免疫组化分析。组织切片经脱蜡、再水化和10 mmol/L柠檬酸缓冲液预处理以获得抗原。将切片在4 ℃的加湿培养箱中孵育2 h，加入兔多克隆抗内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNos)抗体(1 ∶50，美国Santa Cruz Biotechnology公司)和单克隆抗诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNos)抗体(1 ∶ 25，Santa Cruz Biotechnology公司)4 ℃下培养过夜，然后在室温下用二抗(美国Santa Cruz公司)培养 20 min，使用二氨基联苯胺溶液对切片进行显影并用苏木精复染。使用CX31显微镜(日本Olympus公司)观察，随机选择5个视场，记录免疫阳性区域(深棕色)。阳性染色面积百分比(%)计算为10个视野/玻片的平均值。
1.4.8 实时定量PCR分析eNOS、iNOS基因表达按照制造商的说明书，使用RNA提取试剂盒从100 μg的肾脏组织样品中纯化总RNA。使用ReverTra Ace Qpcr RT试剂盒将每个样品的总RNA反转录为cDNA。使用SYBR-Green-PCR试剂盒在Bio-rad IQ5实时PCR系统(美国BioRad公司)中进行RT-qPCR反应。以GAPDH为内控基因，通过共扩增标准化的实时PCR技术检测eNOS和iNOS mRNA表达水平。引物序列如下：eNOS正向引物为5′-TAC GGA GCA GCA AAT CCA C-3′，反向引物为5′-CAG GCT GCA GTC CTT TGA TC-3′；iNOS正向引物为5′-GGA GCG AGT TGT GGA TTG-3′，反向引物为5′-CCA GGA AGT AGG TGA GGG -3′；GAPDH正向引物为5′-AAG GTC ATC CCA GAG CTG AA-3′，反向引物为5′-ATG TAG GCC ATG AGG TCC AC-3′。
1.5 主要观察指标 ①血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素、血肌酐、脂质谱；②肝脏和肾脏中丙二醛、一氧化氮、还原型谷胱甘肽水平、血管紧张素转化酶活性；③肾脏组织中eNOS、iNOS蛋白及基因表达；④苏木精-伊红染色对肾小球、肾小管、肾间质组织和心肌组织进行病理学评估。
1.6 统计学分析所有结果均以x±s表示。多组比较采用方差分析(ANOVA)和LSD检验。P < 0.05为差异有显著性意义。所有统计分析均使用SPSS 22.0软件进行。

讨论

N-硝基-L-精氨酸甲酯诱发的高血压是公认的实验模型，其特征在于广泛的一氧化氮缺乏和长时间持续性血压升高，其确切的机制基于以下事实：L-精氨酸的结构类似物N-硝基-L-精氨酸甲酯以非酶水解代谢为活性形式Nω-硝基-L-精氨酸(L-NOARG)，与eNOS竞争性结合[17-19]。一氧化氮合酶抑制作用减弱了一氧化氮的合成和代谢，一氧化氮是介导血管舒张的最小的气态细胞间信号分子，一氧化氮缺乏会导致全身血管收缩和高血压。由于N-硝基-L-精氨酸甲酯模型可模拟人类的高血压，因此非常适合研究新药的心血管作用。该研究中，与正常血压对照组相比，口服N-硝基-L-精氨酸甲酯与血压、平均动脉压显著升高相关，与之前描述的N-硝基-L-精氨酸甲酯导致血压延长的研究结果一致[20]，证实了高血压的诱导作用。此外，选择卡托普利作为阳性对照药，是因为它的降压作用已经得到公认，并且具有独立于降压之外的肾脏保护作用。实验结果也证实：卡托普利具有良好的降压和保护肾功能功效。
大量证据表明，N-硝基-L-精氨酸甲酯对NOS的慢性抑制改变了各种生化指标[19]。与正常对照组相比，N-硝基-L-精氨酸甲酯给药后肝脏标志酶(谷丙转氨酶和谷草转氨酶)活性显著升高，与先前的研究一致[21]，表明出现肝损伤。BULBUL等[22]研究表明在生理条件下一氧化氮维持肝脏灌注，因此N-硝基-L-精氨酸甲酯对一氧化氮合成抑制导致灌注压显著升高。决明子水提物对高血压相关肝损伤的保护作用通过降低血清谷丙转氨酶得到证实。然而，决明子水提物对谷草转氨酶活性没有影响，这可能是由于谷草转氨酶在心脏、肾脏、大脑、骨骼肌和红细胞中更广泛地表达。此外，80%的细胞谷草转氨酶活性定位于线粒体。因此，氧化应激相关线粒体损伤增加谷草转氨酶释放。
N-硝基-L-精氨酸甲酯高血压大鼠血清肌酐和尿素水平显著升高，用决明子水提物处理可降低尿素和肌酐水平。由于一氧化氮是肾血流动力学的一个关键调节器，高血压状态下一氧化氮合成抑制导致肾功能降低，包括肾标志物受损和尿钠排泄减少以及肾血流量、尿流率和肾小球滤过率降低[23]。以往研究表明决明子是一种有效的利尿剂，归因于其通过增加一氧化氮生成而产生的血管舒张作用[24]。众所周知，决明子中的多酚成分具有抗高血压的潜力，因为它们能够通过刺激内皮细胞产生一氧化氮来增强动脉扩张[25]。此外，决明子水提物可能有降血脂作用。总的来说，生化指标结果反映了决明子水提物具有降低肝肾损害和高血压相关血脂异常发生率的能力。
血管紧张素转酶是一种羧肽酶，催化血管紧张素Ⅰ转化为具有生物活性的血管紧张素Ⅱ[25-26]。一氧化氮拮抗化血管紧张素Ⅱ对血管张力和肾钠排泄的作用，并下调血管紧张素转化酶的合成。另一方面，血管紧张素Ⅱ通过促进血管紧张素转化酶氧化降解，降低一氧化氮的生物利用度[27]。血管紧张素Ⅱ与一氧化氮的功能失衡是高血压终末器官损害的重要病理生理机制。事实上，血管紧张素转化酶抑制是一种重要的策略，通过降低氧化应激和内皮细胞凋亡来降低血压并提供广泛的端部器官保护[28-30]。在该研究中，N-硝基-L-精氨酸甲酯能够刺激肝脏和肾脏中的血管紧张素转化酶活性提高，与之前的研究一致[21]。决明子水提物和卡托普利对高血压大鼠肝、肾组织均有明显的血管紧张素转化酶抑制作用。在同样的背景下，目前的结果支持这样的论点，即决明子水提物降低血压是由于其血管舒张活性介导的血管紧张素转化酶失活。这种机制在预防或阻止终末器官疾病方面更为有效。先前的研究表明，N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导的一氧化氮缺乏性高血压导致显著的心脏炎症和心肌纤维化的发展，这是由于巨噬细胞和T细胞的心脏密度显著增加，这些细胞能产生多种促进成纤维细胞增殖和胶原沉积的细胞因子[31-32]。类似于血管紧张素转化酶抑制剂的治疗，决明子水提物可减少巨噬细胞浸润和细胞增殖，并减少心肌纤维化。此外，该研究发现决明子水提物能够抵消高血压大鼠抗氧化储备的减少。与正常对照组和卡托普利组相比，决明子水提物恢复了肾组织和肝组织中的谷胱甘肽水平和肝组织中的丙二醛水平。一些研究认为抗氧化剂和活性氧清除能力是决明子降压作用的另一种机制[33]。
已有研究证明eNOS在心血管系统中具有多种保护作用，而eNOS损伤或敲除会导致高血压[34-36]。在该研究中，高血压模型组肝脏和肾脏中一氧化氮的产生分别被抑制到正常水平的63%和42%。卡托普利治疗组的肝脏和肾脏均未显著恢复一氧化氮水平。决明子水提物能有效使高血压大鼠肝脏中的一氧化氮水平几乎正常化，并且使肾脏中一氧化氮水平增加至其正常水平的65%。此外，在mRNA和蛋白质水平上的结果均表明卡托普利或决明子水提物治疗的阳性保护作用。这些结果提示，eNOS的上调是介导决明子水提物组降压作用的机制。iNOS也是L-精氨酸的一氧化氮促合成酶之一[37]。该研究观察到iNOS mRNA在各组之间差异无显著性意义，而在蛋白水平上，参考组、决明子组在肾脏和心脏中均显示出增强的iNOS表达，这些发现与AMARAL等[38]一致。在该研究中，iNOS mRNA和蛋白质水平之间的差异可能是由于蛋白质除基因转录外还受到其他调控而引起的。大量证据表明，iNOS表达增加与高血压的发病机制有关，iNOS上调产生过量一氧化氮与超氧自由基反应形成过氧亚硝酸盐，从而促进亚硝化应激和内皮损伤[39-40]。此外，过量的iNOS活性会上调精氨酸酶活性，与eNOS竞争L-精氨酸形成一氧化氮[41]。
总之，决明子水提物显示出相当大的降压潜力，并能有效改善肝脏和肾脏功能，逆转血脂异常。此外，该研究提出了决明子水提物抗高血压效应的多重机制，包括上调eNOS表达、抗氧化剂和血管紧张素转化酶抑制作用。这些发现指出了决明子水提物作为高血压及其并发症的辅助治疗是有益的，满足高血压现代诊疗理念需求。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

决明子水提物干预N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导高血压模型大鼠血压的变化

Effect of cassia seed aqueous extract on blood pressure level in N-nitro-L-arginine-methyl ester induced hypertensive rats

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