刺山柑总生物碱干预椎间盘退变模型大鼠髓核细胞的增殖与凋亡

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.3082

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (11): 1699-1704.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.3082

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刺山柑总生物碱干预椎间盘退变模型大鼠髓核细胞的增殖与凋亡

刘志刚，郭庆功，陈景涛

河南大学第一附属医院骨科，河南省开封市 475001

收稿日期:2020-03-11 修回日期:2020-03-17 接受日期:2020-05-09 出版日期:2021-04-18 发布日期:2020-12-21
通讯作者: 郭庆功，主任医师，教授，河南大学第一附属医院骨科，河南省开封市 475001
作者简介:刘志刚，男，1974年生，山东省威海市人，汉族，硕士，副主任医师，主要从事骨科基础与临床研究。

Effect of Capparis spinosa total alkaloid on proliferation and apoptosis of nucleus pulposus cells in an intervertebral disc degeneration rat model

Liu Zhigang, Guo Qinggong, Chen Jingtao

Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Henan University, Kaifeng 475001, Henan Province, China

Received:2020-03-11 Revised:2020-03-17 Accepted:2020-05-09 Online:2021-04-18 Published:2020-12-21
Contact: Guo Qinggong, Chief physician, Professor, Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Henan University, Kaifeng 475001, Henan Province, China
About author:Liu Zhigang, Master, Associate chief physician, Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Henan University, Kaifeng 475001, Henan Province, China

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
椎间盘退变：是指椎间盘组织由于老龄化、长期单一机械应力造成的椎间盘组织退行性病变，一般表现为神经性疼痛及椎间盘突出等症状，其病理基础一般来自于椎间盘组织长期炎症、髓核细胞的衰老、凋亡、生长活性降低，以及胶原蛋白表达水平下降导致的细胞外基质合成减少等。
Ⅱ型胶原蛋白：胶原蛋白是结缔组织的主要成分，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ等型。Ⅱ型胶原蛋白主要由软骨组织产生，其形成的胶原蛋白纤维有很高的机械强度，用于组成软骨组织的基质部分。胶原纤维组成的软骨基质在缓解骨骼应力、骨骼摩擦中发挥重要作用，当Ⅱ型胶原蛋白表达过低时会导致软骨基质退变及一系列相关疾病。

背景：刺山柑总生物碱在细胞生长、胞外基质合成上有一定效用，而髓核细胞的老化、凋亡是椎间盘退变的主要病理基础之一，因此推测刺山柑总生物碱可能通过髓核细胞对椎间盘退变有一定影响。
目的：探讨刺山柑总生物碱对椎间盘退变大鼠模型及髓核细胞的影响。
方法：①32只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、刺山柑总生物碱低剂量组和刺山柑总生物碱高剂量组，每组8只，后3组构建大鼠椎间盘退变模型，假手术组进行假手术对照。造模成功后，刺山柑总生物碱低、高剂量组大鼠分别灌胃刺山柑总生物碱225 mg/kg和 450 mg/kg，1次/d，连续4周。给药结束后苏木精-伊红染色观察椎间盘组织病理形态变化，免疫组化观察Ⅱ型胶原蛋白的表达，Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖的表达。②分离培养2只SD大鼠椎间盘髓核细胞并分为对照组、氧糖剥夺模型组和给药组，其中氧糖剥夺模型组髓核细胞接种于无糖无血清的DMEM培养基中培养，给药组在造模基础上，添加10 mg/L刺山柑总生物碱浓缩液。培养24 h采用CCK-8法检测细胞增殖情况，培养48 h采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，培养48 h采用Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖的表达。
结果与结论：①与假手术组相比，模型组大鼠椎间盘组织出现纤维环裂隙、髓核细胞聚集、皱缩，而刺山柑总生物碱低、高剂量组相较于模型组都有改善；②模型组椎间盘组织Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖表达显著低于假手术组，而刺山柑总生物碱低、高剂量组Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖表达均高于模型组(P < 0.05)；③与对照组相比，氧糖剥夺模型组髓核细胞表现为形态不规则和凋亡状态，给药组细胞形态相较于氧糖剥夺模型组有所改善；④与对照组相比，氧糖剥夺模型组髓核细胞增殖缓慢，凋亡率升高，Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖表达降低(P < 0.05)；与氧糖剥夺模型组相比，给药组髓核细胞增殖加快、凋亡率下降，Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖表达升高(P < 0.05)；⑤结果表明，刺山柑总生物碱可通过促进髓核细胞增殖并抑制其凋亡和基质降解来改善椎间盘退变。
https://orcid.org/0000-0003-2526-1875 (刘志刚)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 椎间盘退变, 刺山柑, 总生物碱, 髓核细胞, 细胞外基质, 胶原蛋白, 蛋白聚糖, 大鼠

Abstract: BACKGROUND: Capparis spinosa total alkaloids (CSTA) have certain effects on cell growth and extracellular matrix synthesis. The aging and apoptosis of nucleus pulposus cells are one of the main pathologies of intervertebral disc degeneration. Therefore, it is assumed that CSTA may have certain effect on the degeneration of the intervertebral disc.
OBJECTIVE: To study the effect of CSTA on intervertebral disc degeneration rat model and nucleus pulposus cells.
METHODS: Thirty-two Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham, model, CSTA-H, and CSTA-L groups with eight in each group. Rat models of intervertebral disc degeneration were made in the model group, CSTA-L group and CSTA-H group. The CSTA-L and CSTA-H groups were given intragastric administration of CSTA 225 mg/kg/d and 450 mg/kg/d for 4 weeks respectively. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the pathological changes of the intervertebral disc. Immunohistochemistry and western blot were used to detect the expression of type II collagen and aggrecan. Nucleus pulposus cells from the intervertebral disc of another two Sprague-Dawley rats were separated, cultured and divided into a control group, an oxygen-glucose deprivation (OGD) group and an administration group (OGD+CSTA 10 mg/L). After being cultured for 24 hours, the morphology of nucleus pulposus cells was observed, the cell proliferation ability was detected by cell counting kit-8, the cell apoptosis was detected by flow cytometry, and the expression of type II collagen and aggrecan were detected by western blot.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the sham group, the intervertebral disc tissue of the model group showed fiber ring fissures, aggregation and shrinking of nucleus pulposus cells, and different improvements were found in the CSTA-L and CSTA-H groups. (2) The expression levels of type II collagen and aggrecan in the model group were significantly lower than those in the sham, CSTA-L and CSTA-H groups (P < 0.05). (3) Compared with the control group, the cells in the OGD group showed irregular morphology and death status, whereas the cell morphology in the administration group was improved. (4) Compared with the control group, nucleus pulposus cells in the OGD group showed lower proliferation, higher apoptotic rate, and lower levels of type II collagen and aggrecan (P < 0.05). Compared with the OGD group, nucleus pulposus cells in the administration group showed faster proliferation, lower apoptotic rate, and higher levels of type II collagen and aggrecan. To conclude, CSTA can improve intervertebral disc degeneration by promoting proliferation and inhibiting apoptosis of nucleus pulposus cells as well as inhibiting the degradation of extracellular matrix.

Key words: intervertebral disc degeneration">, Capparis spinosa">, total alkaloids">, nucleus pulposus cells">, extracellular matrix">, collagen">, aggrecan">, rat

中图分类号:

刘志刚, 郭庆功, 陈景涛. 刺山柑总生物碱干预椎间盘退变模型大鼠髓核细胞的增殖与凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(11): 1699-1704.

Liu Zhigang, Guo Qinggong, Chen Jingtao. Effect of Capparis spinosa total alkaloid on proliferation and apoptosis of nucleus pulposus cells in an intervertebral disc degeneration rat model[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(11): 1699-1704.

图/表（结果） 6

2.1 刺山柑总生物碱对椎间盘组织病理形态的影响大鼠椎间盘组织苏木精-伊红染色结果如图1所示，假手术组大鼠椎间盘界限清晰，纤维环结构完整，髓核细胞排列均匀；模型组椎间盘纤维环出现严重裂隙，髓核细胞聚集、皱缩，基质减少，呈现退变症状；与模型组相比，刺山柑总生物碱低剂量组纤维环断裂、细胞皱缩现象得到一定改善，而刺山柑总生物碱高剂量组纤维环结构及髓核细胞形态基本趋于正常。

2.2 刺山柑总生物碱对椎间盘组织Ⅱ型胶原蛋白表达的影响各组大鼠椎间盘组织中Ⅱ型胶原蛋白表达如图2所示，细胞膜染成棕色的为Ⅱ型胶原蛋白阳性表达细胞。假手术组Ⅱ型胶原蛋白阳性表达率为(53.2±3.5)%，与假手术组相比，模型组Ⅱ型胶原蛋白表达阳性率(6.30±0.42)%显著降低(P < 0.05)；与模型组相比，刺山柑总生物碱低剂量组[(38.3±2.7)%]和刺山柑总生物碱高剂量组[(45.7±2.1)%]Ⅱ型胶原蛋白表达阳性率均显著升高(P < 0.05)。

2.3 刺山柑总生物碱对髓核细胞形态的影响由图3可见，对照组髓核细胞形态结构清晰，为长梭形或多角形，核质分明；氧糖剥夺模型组髓核细胞之间的间隙模糊，呈现不规则、皱缩等损伤后凋亡样改变；与氧糖剥夺模型组相比，给药组细胞形态多为长梭形和多角形，核质分明，细胞界限较为清晰，提示损伤情况得到一定改善。

2.4 刺山柑总生物碱对髓核细胞增殖的影响由图4可见，与对照组相比，氧糖剥夺模型组髓核细胞增殖缓慢，而给药组细胞增殖速度高于氧糖剥夺模型组。在36 h和48 h时，氧糖剥夺模型组髓核细胞吸光度值显著低于对照组(P < 0.05)，给药组显著高于氧糖剥夺模型组(P < 0.05)。

2.5 刺山柑总生物碱对髓核细胞凋亡的影响由图5可见，氧糖剥夺模型组细胞凋亡率显著高于对照组(P < 0.05)，而给药组细胞凋亡率显著低于氧糖剥夺模型组(P < 0.05)。

2.6 刺山柑总生物碱对椎间盘组织和髓核细胞相关蛋白表达的影响由图6A可见，与假手术组相比，模型组椎盘组织Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖表达水平显著下降(P < 0.05)；与模型组相比，刺山柑总生物碱低、高剂量组椎盘组织Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖表达水平均显著升高，且刺山柑总生物碱高剂量组高于刺山柑总生物碱低剂量组，差异均有显著性意义(P < 0.05)。由图6B可见，与对照组相比，氧糖剥夺模型组髓核细胞中Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖蛋白表达量均显著降低(P < 0.05)；与氧糖剥夺模型组相比，给药组Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖表达均显著上升(P < 0.05)。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物体内实验和细胞培养体外实验。
1.2 时间及地点实验于2019年5至10月在河南大学第一附属医院分子医学实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 SD雄性大鼠40只，3月龄，体质量为200-250 g，购于河南省实验动物中心，动物许可证号：SYXK (豫)2017-0001。大鼠饲养于室温为20-25℃，相对湿度为40%-70%的环境中。该研究实施经过河南大学第一附属医院伦理委员批准。
1.3.2 实验药材、试剂刺山柑药材购于新疆麦迪森维药有限公司饮片厂，刺山柑总生物碱提取方法参照何承辉等[7]研究方法进行；Annexin V-FITC/PI双染试剂盒购于上海碧云天生物科技有限公司；CCK-8试剂盒购于南京诺唯赞生物科技有限公司；Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖抗体购于Abcam公司。
1.4 实验方法
1.4.1 动物分组、造模和干预随机选取30只大鼠进行颈椎间盘退变建模手术[8]：剪去大鼠颈后部毛发，清洁皮肤，腹腔注射10%水合氯醛3.5 mL/kg麻醉大鼠，横向切断颈头肌和头、颈、寰最长肌，切除颈髂肋肌与头半棘肌，随后依次切除C2-C6棘上韧带和棘间韧带，止血后缝合皮肤，术后每天肌肉注射青霉素8×104 U，连续3 d；选取8只大鼠进行假手术，仅切开皮肤止血后直接缝合。造模12周后，随机选取24只造模成功大鼠分为模型组、刺山柑总生物碱低剂量组和刺山柑总生物碱高剂量组，每组8只。刺山柑总生物碱低、高剂量组在造模12周后分别灌胃刺山柑总生物碱225 mg/kg和450 mg/kg，假手术组和模型组灌胃同等体积生理盐水，1次/d，连续给药4周。

1.4.2 苏木精-伊红染色进行组织学观察给药结束后，3%戊巴比妥钠过量麻醉处死，切开背部皮肤剥离椎间盘组织，取大鼠C4-C5椎间盘标本，置于40 g/L多聚甲醛溶液中固定，随后石蜡包埋，最后用切片机切成5 μm切片，进行苏木精-伊红染色：切片二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，苏木精染色5 min，盐酸乙醇分化30 s，温水浸泡15 min，伊红染色 2 min，梯度乙醇脱水，中性树脂封固，光学显微镜下观察。

1.4.3 免疫组化染色观察Ⅱ型胶原蛋白的表达将切片进行二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化，置于0.01 mol/L柠檬酸钠溶液中20 min，随后于体积分数为3%过氧化氢溶液中继续孵育10 min，PBS冲洗后滴加Ⅱ型胶原蛋白抗体4 ℃孵育过夜，PBS冲洗后滴加羊抗鼠抗体孵育1 h，最后加入DAB溶液染色5 min，蒸馏水冲洗3次，使用苏木精复染，氨水反蓝 15 min，继续用蒸馏水冲洗，梯度乙醇脱水后于二甲苯中透明，中性树脂封固，光学显微镜观察并拍照，ImageJ进行半定量分析Ⅱ型胶原蛋白表达。
1.4.4 细胞分离培养、造模和干预处理大鼠椎间盘髓核细胞分离与培养参照王厚磊等[9]的研究方法进行：2只3月龄雄性SD大鼠用3%戊巴比妥钠过量麻醉处死，浸入乙醇中消毒 5 min，无菌条件分离出腰椎，将椎间盘纤维环切开，取出髓核，无菌PBS冲洗3次，将髓核组织剪碎成约1 mm3的小块，加入2倍体积0.1%Ⅱ型胶原酶于37 ℃消化3 h，随后1 000 r/min离心5 min，弃去上清后再用10 U/mL透明质酸酶于37 ℃消化2 h，继续离心弃上清，加入含有体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基5 mL重悬细胞，接种于细胞培养瓶中，置于37 ℃，体积分数为5%CO2培养箱中培养，进行换液、传代和铺板。将第2代髓核细胞分为对照组、氧糖剥夺模型组和给药组，其中氧糖剥夺模型组髓核细胞接种于无糖无血清的DMEM培养基中，构建氧糖剥夺模型模拟大鼠退变腰椎间盘髓核细胞微环境；给药组在造模基础上，添加10 mg/L刺山柑总生物碱浓缩液至培养基中继续培养。
1.4.5 CCK-8法检测细胞增殖能力细胞给药后继续培养24 h进行CCK-8实验。将处于对数生长期的髓核细胞接种至96孔板中，每孔细胞数为4×103，分别于0，12，24，48 h检测细胞活性，每孔加入10 μL CCK-8检测液，混匀后培养箱中继续孵育2 h，最后用酶标仪测定450 nm处的吸光度值，每孔重复测量3次。
1.4.6 流式细胞术检测细胞凋亡使用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡，各组细胞培养48 h后，收集细胞上清液，胰酶消化后离心弃去上清，加入Annexin V-FITC和PI染色剂共同孵育细胞，最后上机检测细胞凋亡情况，实验重复3次。
1.4.7 Western blot检测椎间盘组织及髓核细胞中Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖的表达椎间盘组织剪碎后研磨成匀浆，加入含PMSF的RIPA裂解液，冰上研磨成匀浆后反应30 min；细胞培养48 h后加入RIPA裂解液裂解细胞，收集组织匀浆液及细胞裂解液，14 000 r/min离心20 min，取上清，测定蛋白浓度后进行SDS-PAGE电泳，转膜，室温封闭1 h，加入 1∶1 000稀释的鼠抗Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖一抗，4 ℃下孵育过夜，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗室温下孵育2 h，最后曝光拍照，计算蛋白相对表达量，以β-actin为内参对照。
1.5 主要观察指标 ①各组大鼠椎间盘组织的纤维环结构及髓核细胞形态、免疫组化染色后Ⅱ型胶原蛋白的表达强度；②各组髓核细胞的增殖活性和凋亡率；③各组大鼠椎间盘组织及各组髓核细胞中Ⅱ型胶原蛋白、蛋白聚糖的相对表达水平。
1.6 统计学分析实验数据以x±s表示，使用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，采用t检验和单因素方差分析比较组间差异，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

椎间盘退变是椎间盘突出、椎管狭窄和脊柱关节不稳等疾病的最主要病因之一[10]。在临床中，外科医生可以运用物理疗法来修复椎间盘损伤，从而缓解患者疼痛，但是并不能够阻止椎间盘的进一步退变及其引起的椎间盘不稳等并发症，因此寻找新的可长期有效减缓椎间盘退变的药物具有重要临床意义。刺山柑作为中国新疆地区传统药材，具有活血化瘀、散寒、祛风等作用。已有研究证实，刺山柑总生物碱有抗脂质过氧化和抗炎镇痛的作用[11-12]，并且可以调节基质金属蛋白酶9/基质金属蛋白酶抑制剂1的平衡[13]。目前已有研究证实刺山柑在多种骨科疾病及退行性疾病中有一定疗效，但是否可以改善椎间盘退变尚不明确。因此该文章拟通过基础实验探讨刺山柑总生物碱是否可以抑制椎间盘退化及髓核细胞凋亡。
椎间盘退变是多种因素共同作用的结果，其病理表现有纤维环组织断裂及炎症反应、髓核细胞凋亡、髓核细胞外基质合成减少等[14-15]，因此抑制髓核细胞过度凋亡、促进髓核细胞增殖、促进蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的合成将是研究椎间盘退变的主要方向。目前中医药在包括椎间盘退变在内的退行性疾病中的应用是研究热点之一，如已有研究证实，桃仁-红花药、四环素联合桂枝加葛根汤、川芎可以增加Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达[16-18]，葛根提取物、黄芪多糖可以抑制基质金属蛋白酶家族的表达[19-20]，从而起到缓解椎间盘退变的作用。刺山柑具有多种药用价值。EL AZHARY等[21]、MOUTIA等[22]研究均显示刺山柑有效成分可以提高细胞代谢活性，在某些炎症情况下抑制白细胞介素17和增强白细胞介素4基因的表达从而发挥抗炎作用。MARESCA等[23]研究显示刺山柑根提取物可以急速缓解类风湿性关节炎引起的关节痛。刺山柑总生物碱是刺山柑的主要成分之一，目前已被报道可以应用于系统性硬皮病、骨关节炎等的缓解治疗上。康小龙等[24]研究显示刺山柑总生物碱可以通过上调HGF/C-Met通路改善系统性硬皮病小鼠的皮肤纤维化；还有研究显示，刺山柑总生物碱可有效缓解基质金属蛋白酶9及基质金属蛋白酶抑制剂1的表达平衡，对胞外基质合成有一定影响作用[13]。何承辉等[7]研究显示刺山柑总生物碱可以提高结缔组织中核心蛋白聚糖的表达，从而改善小鼠皮肤弹性。该研究通过构建大鼠颈椎间盘退变模型并进行刺山柑总生物碱干预，结果显示：与模型组相比，刺山柑总生物碱低、高剂量组均能改善椎间盘组织的病理形态，并提高Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达，与现有研究结论较为相似，且高剂量组效果较低剂量组更明显，提示其促进细胞外基质合成的作用可能有剂量依赖性。该研究进一步进行髓核细胞体外培养实验，结果显示刺山柑总生物碱同样可以调控Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达，与动物实验结果一致。髓核细胞凋亡和衰老也是椎间盘退变的主要生理特征之一[25]。氧糖剥夺模型可以模拟椎间盘退变中髓核细胞的微环境。研究显示，经典Wnt信号通路在此条件下会被激活促使细胞凋亡和胞外基质降解[26]。阿依提拉·麦麦提江等[5]研究证实刺山柑总生物碱可以抑制Wnt1及Wnt2表达从而抑制该信号通路的作用。因此，推测刺山柑总生物碱也可以通过调控该信号通路抑制椎间盘退变组织中髓核细胞的凋亡。该研究结果显示，刺山柑总生物碱给药组细胞的增殖活性高于氧糖剥夺模型组，凋亡率显著降低，提示刺山柑总生物碱可以通过促进髓核细胞增殖并抑制其凋亡，从而起到改善椎间盘退变的作用。
综上所述，刺山柑总生物碱可以促进髓核细胞增殖并抑制其凋亡，促进细胞外基质Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达，进而改善大鼠椎间盘退变，但刺山柑总生物碱对Wnt信号通路的影响尚不清楚，因此刺山柑总生物碱改善椎间盘退变的分子学机制仍需要进一步的实验深入研究。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

刺山柑总生物碱干预椎间盘退变模型大鼠髓核细胞的增殖与凋亡

Effect of Capparis spinosa total alkaloid on proliferation and apoptosis of nucleus pulposus cells in an intervertebral disc degeneration rat model

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[1]	刘志超, 张帆, 孙旗, 康晓乐, 袁巧妹, 柳根哲, 陈江. 不同静水压下人椎间盘髓核细胞的形态和活性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1172-1176.
[2]	曾祯, 胡经纬, 李璇, 唐琳梅, 黄志强, 李明星. 超声造影定量分析重度失血性休克再灌注模型大鼠复苏期的肾血流灌注[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1201-1206.
[3]	唐辉, 姚志浩, 罗道文, 彭双麟, 杨双林, 王浪, 肖金刚. 高脂高糖饮食结合链脲佐菌素建立2型糖尿病性骨质疏松症大鼠模型[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1207-1211.
[4]	伦志刚, 金晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[5]	邹刚, 徐志, 刘子铭, 李豫皖, 杨继滨, 金瑛, 张骏, 葛振, 刘毅. 人脱细胞羊膜支架促进Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞体外成韧带分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1037-1044.
[6]	陈俊毅, 王宁, 彭称飞, 朱伦井, 段江涛, 王烨, 贝朝涌. 脱钙骨基质与慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体转染骨髓间充质干细胞构建组织工程骨[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 510-515.
[7]	姜涛, 马磊, 李志强, 寿玺, 段明军, 吴硕, 马创, 魏琴. 血小板衍生生长因子BB诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3937-3942.
[8]	徐晓明, 陈艳, 宋倩, 袁露, 顾加明, 张丽娟, 耿洁, 董坚. 人胎盘间充质干细胞凝胶促进SD大鼠放射性皮肤损伤的愈合[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3976-3980.
[9]	郝晓娜, 张英杰, 李玉云, 许涛. 过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3988-3993.
[10]	江丽红, 吴晓锋, 欧阳林, 罗爱芳, 黄丽. 基于代谢组学腰椎间盘退变的计算机辅助诊断[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(24): 3796-3803.
[11]	徐伟龙, 左媛, 辛大奇, 贺晨阳, 赵鹏, 史鸣, 周博源, 刘雅婷, 赵岩. 急性钳夹型脊髓损伤模型大鼠造模方式的选择：一项网状Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3767-3772.
[12]	白胜超, 高扬, 王博, 李俊平, 王瑞元. 针刺干预大负荷运动损伤模型大鼠骨骼肌线粒体功能的动态变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3648-3653.
[13]	张亮, 马晓燕, 王佳虹. 肾衰饮调控慢性肾功能衰竭大鼠肾脏细胞凋亡的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3672-3677.
[14]	王皓, 陈明学, 李俊康, 罗旭江, 彭礼庆, 李获, 黄波, 田广招, 刘舒云, 眭翔, 黄靖香, 郭全义, 鲁晓波. 脱细胞猪皮基质构建组织工程半月板支架[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(22): 3473-3478.
[15]	董丽萍, 罗怀青, 袁衡, 龙娟, 许少辉. 增龄对大鼠缺血后肢侧支血管生长的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(20): 3156-3161.