人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2144

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (1): 78-83.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2144

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人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠

郭璇1，解军1，索金荣2，李英蕊1，黄磊1，马牧南1，李静静3，傅松涛1，2，3

1山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，山西省太原市 030001；2山西宾大干细胞科技有限公司，山西省太原市 030001；3山西省生物医药健康研究生教育创新中心，山西省太原市 030001

收稿日期:2020-01-04 修回日期:2020-01-10 接受日期:2020-02-19 出版日期:2021-01-08 发布日期:2020-11-19
通讯作者: 傅松涛，硕士，教授，山西医科大学基础医学院，山西省太原市 030001；山西宾大干细胞科技有限公司，山西省太原市 030001；山西省生物医药健康研究生教育创新中心，山西省太原市 030001
作者简介:郭璇，男，1994年生，陕西省延安市人，汉族，2020年山西医科大学毕业，硕士，主要从事干细胞与组织再生研究。
基金资助:
山西省‘1331工程’重点学科建设计划经费；山西省国际科技合作基金(201703d421022)；山西省重点研发计划(国际科技合作)(201903D421023)

Transplantation of islet-like cells induced by human umbilical cord mesenchymal stem cells via different ways for the treatment of type 1 diabetic mice

Guo Xuan1, Xie Jun1, Suo Jinrong2, Li Yingrui1, Huang Lei1, Ma Munan1, Li Jingjing3, Fu Songtao1, 2, 3

1Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medicine, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China; 2Shanxi Binda Stem Cell Technology Co., Ltd., Taiyuan 030001, Shanxi Province, China; 3Shanxi Provincial Biomedical Health Graduate Education Innovation Center, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China

Received:2020-01-04 Revised:2020-01-10 Accepted:2020-02-19 Online:2021-01-08 Published:2020-11-19
Contact: Fu Songtao, Master, Professor, Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medicine, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China; Shanxi Binda Stem Cell Technology Co., Ltd., Taiyuan 030001, Shanxi Province, China; Shanxi Provincial Biomedical Health Graduate Education Innovation Center, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
About author:Guo Xuan, Master, Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medicine, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
Supported by:
the Fund for Shanxi “1331 Project” Key Subject Construction; The International Scientific and Technological Cooperative Foundation of Shanxi Province, No. 201703d421022; Key R&D Program of Shanxi Province (International Cooperation), No. 201903D421023

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞：人脐带间充质干细胞具有多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞、胰岛细胞等，在相关因子作用下，可使其分化为分泌胰岛素的细胞，称为胰岛样细胞。
葡萄糖耐量：检测胰岛样细胞移植后糖尿病鼠是否可以更好地响应外周血糖浓度变化，释放胰岛素，降低血糖。

背景：人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞移植于1型糖尿病鼠体内，会使血糖降低，糖尿病症状有所改善，但腹腔移植的方式少有报道。
目的：观察不同途径移植人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞对于1型糖尿病小鼠的治疗效果。
方法：选采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞，然后将其定向分化为胰岛样细胞。从15只雄性C57BL/6J小鼠中随机取3只小鼠做正常组，其余12只小鼠腹腔注射链脲佐菌素制备1型糖尿病模型。造模成功9只小鼠随机分为糖尿病组、尾静脉-胰岛样细胞组、腹腔-胰岛样细胞组，每组3只。造模10 d后，正常组和糖尿病组不予处理，尾静脉-胰岛样细胞组经尾静脉注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×105个细胞)，腹腔-胰岛样细胞组经腹腔注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×105个细胞)。移植后每周检测2次血糖，移植后28 d进行葡萄糖耐量实验，移植后42 d检测胰岛素水平。
结果与结论：①与糖尿组相比，尾静脉-胰岛样细胞组在移植后第10天开始血糖明显下降，一直维持到31 d，胰岛素水平升高，葡萄糖耐量改善，差异有显著性意义(P < 0.05)；腹腔-胰岛样细胞组血糖、胰岛素水平、葡萄糖耐量未见明显改善；②结果提示，应用人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞治疗1型糖尿病鼠，尾静脉注射是一种比较理想的移植方式，腹腔注射的效果不佳。

https://orcid.org/0000-0001-7907-0316(郭璇)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 人脐带间充质干细胞, 1型糖尿病, 胰岛样细胞, 腹腔, 静脉, 移植, 鼠, 实验

Abstract: BACKGROUND: Transplanting islet-like cells induced by human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSCs) into type 1 diabetic mice can reduce blood glucose level and improve the symptoms of diabetes mellitus. However, there are few reports on intraperitoneal transplantation.
OBJECTIVE: To study the therapeutic effect of transplantation of islet-like cells induced by hUC-MSCs in different ways for the treatment of type 1 diabetic mice.
METHODS: The hUC-MSCs were isolated and cultured by tissue explants adherent method and differentiated into islet-like cells. The 3 of 15 male C57BL/6J mice were used as normal group, and the remaining mice were taken to prepare a mouse model of type 1 diabetes using intraperitoneal injection of streptozotocin. After successful modeling, nine model mice were randomly divided into diabetes group, tail vein-islet-like cells group, and abdomen-islet-like cells group, with three mice in each group. After 10 days of modeling, the normal group and diabetic group were not treated. The tail vein-islet-like cells group was injected with 5×105 cells/0.4 mL islet-like cells via the tail vein and the abdomen-islet-like cells group was intraperitoneally injected with 5×105 cells/0.4 mL islet-like cells. During the treatment, the blood glucose and insulin levels were measured twice a week; glucose tolerance test was performed at 28 days after cell transplantation; and fasting insulin level was detected at 42 days after cell transplantation.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the diabetic group, in the tail vein-islet-like cells group, the blood glucose level began to decrease on the 10th day after transplantation and maintained until the 31st day, and the insulin level and glucose tolerance significantly improved (P < 0.05). However, there was no significant improvement in blood glucose level, insulin level and glucose tolerance in the abdomen-islet-like cells group. (2) To conclude, transplantation of hUC-MSCs induced islet-like cells for the treatment of type 1 diabetic mice via tail vein is an ideal transplantation method, and the effect of intraperitoneal injection is unsatisfactory.

Key words: human umbilical cord mesenchymal stem cells, type 1 diabetes mellitus, islet-like cells, abdomen, vein, transplantation, mouse, experiment

中图分类号:

郭璇, 解军, 索金荣, 李英蕊, 黄磊, 马牧南, 李静静, 傅松涛. 人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(1): 78-83.

Guo Xuan, Xie Jun, Suo Jinrong, Li Yingrui, Huang Lei, Ma Munan, Li Jingjing, Fu Songtao. Transplantation of islet-like cells induced by human umbilical cord mesenchymal stem cells via different ways for the treatment of type 1 diabetic mice[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(1): 78-83.

图/表（结果） 10

2.1 人脐带间充质干细胞的形态原代培养第7天可见脐带组织块周围有贴壁细胞爬出，细胞大小不一，呈多角形或梭形。待生长至80%-90%融合度时，进行消化传代。传至第3代时，细胞呈形态大小均一的长梭形漩涡状，见图1。

2.2 人脐带间充质干细胞的表型鉴定结果流式细胞仪检测第3代人脐带间充质干细胞表面抗原，结果显示CD90、 CD44、CD29的阳性率分别为99.2%，99.8%，100.0%，CD45、CD34的阳性率分别为0.1%，0.0%，见图2。

2.3 人脐带间充质干细胞成骨、成脂诱导分化能力人脐带间充质干细胞成骨诱导21 d后，经茜素红染色可见红色颗粒物。成脂诱导21 d后，油红O染色呈可见大量油样的红色空泡。结果表明人脐带间充质干细胞可向成骨细胞、成脂细胞方向分化，见图3。

2.4 人脐带间充质干细胞向胰岛样细胞分化过程中形态变化人脐带间充质干细胞向胰岛样细胞分化共分为4个阶段。第1阶段：细胞开始有变圆趋势，向一个方向生长；第2阶段：细胞变圆并开始聚集；第3阶段：变圆细胞大量聚集，有胰岛样细胞团产生；第4阶段：大量胰岛样细胞团产生，见图4。

2.5 双硫腙染色结果双硫腙可特异性结合胰岛素分子中的锌离子，胰岛样细胞经双硫腙染色形成红棕色胰岛样细胞团，见图5。

2.6 C肽水平诱导完成后，分别以低糖(5.5 mmol/L)和高糖

(25 mmol/L )刺激胰岛样细胞，C肽水平分别为0.528，

0.785 μg/L，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图6。

2.7 胰岛样细胞RT-PCR检测结果胰岛样细胞的Insulin、PDX1 mRNA 表达显著高于未诱导的人脐带间充质干细胞，差异有显著性意义(P < 0.001)，见图7。

2.8 各组小鼠血糖水平在移植观察42 d周期内，正常组血糖水平远低于糖尿病组，差异有显著性意义(P < 0.000 1)。尾静脉-胰岛样细胞组血糖下降，第10天开始与糖尿病组差异有显著性意义(P < 0.05)，一直维持到 31 d。腹腔-胰岛样细胞组在移植后血糖开始上升，1周后下降，此后略低于糖尿病组，差异无显著性意义(P > 0.05)，见图8。

2.9 各组小鼠葡萄糖耐量实验结果移植后28 d，对各组进行腹腔注射葡萄糖耐量实验。与糖尿病组相比，正常组2 h后血糖水平恢复正常；尾静脉-胰岛样细胞组葡萄糖耐量明显改善，血糖水平接近起始血糖水平，而腹腔-胰岛样细胞组血糖水平并未恢复至起始血糖水平，见图9。

2.10 各组小鼠胰岛素水平见图10。
移植后42 d，正常组、糖尿病组、尾静脉-胰岛样细胞组、腹腔-胰岛样细胞组胰岛素水平分别为0.188，0.191，1.273，0.236 mIU/L。与糖尿病组相比，尾静脉-胰岛样细胞组胰岛素水平升高，差异有显著性意义(P < 0.000 1)，而腹腔-胰岛样细胞组胰岛素水平未见升高，差异无显著性意义(P > 0.05)。

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引言

糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所致的以高血糖为特征的代谢性疾病[1]。据国际糖尿病联合会报道：全世界大约有3亿人患有糖尿病，并呈上升趋势。1型糖尿病多由胰岛β细胞自身免疫破坏所致，而较为常见的2型糖尿病主因胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍所致[1-2]。对于糖尿病患者，尤其是1型糖尿病患者，必须使用外源性胰岛素来控制血糖稳定。尽管胰岛素治疗效果不错，但其不能消除糖尿病所带来的慢性并发症，例如心血管疾病、肾功能衰竭、视网膜病变和神经病变等[3-4]。STEPHENS等[5]将正常鼠胰岛用1型寡聚胶原包裹移植到糖尿病鼠皮下，发现其可以降低血糖并维持血糖稳定90 d。但由于胰岛供者的缺少也限制了此种方法在临床上的应用。
近些年来，科学家们发现移植间充质干细胞可以治疗糖尿病。间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的多能干细胞，可诱导分化成骨细胞[6-7]、脂肪细胞[7]、心肌细胞[8]、胰岛β细胞[9]。WANG等[10]将人脐带间充质干细胞移植到1型糖尿病大鼠体内，可降低其血糖并修复胰岛功能；YU等[11]将脂肪间充质干细胞移植到2型糖尿病大鼠体内，不仅可以降低血糖而且可改善相应并发症。目前认为间充质干细胞治疗糖尿病主要机制为：①在胰腺微环境下定向诱导分化为胰岛β细胞，代替受损胰岛功能[12]；②通过释放抗炎和免疫调节因子，修复胰岛功能[13]；③通过归巢和旁分泌多种细胞因子以及核酸片段，改善胰岛细胞微环境[13]。为了更好地发挥间充质干细胞治疗糖尿病的效果，科学家们对其进行体外诱导，在相关因子的作用下使其分化为能分泌胰岛素的细胞，即胰岛样细胞，将其移植到糖尿病鼠体内，发现其降糖效果优于直接移植间充质干细胞[14]。
目前胰岛样细胞移植治疗糖尿病的主要途径有尾静脉移植[15]、门静脉移植[14，16]、肾被膜移植[17]，而腹腔移植少有报道。李兰兰等[18]实验研究发现人脐带间充质干细胞诱导分化的胰岛素分泌细胞在体外保持低免疫原性，但移植到体内后由于微环境的变化而具有一定免疫原性。虽然移植后会存在一定免疫原性，但腹腔含有丰富的血管网，便于胰岛样细胞获得血供和养分，也便于其感受外周循环中糖浓度的变化同时迅速向血液中释放胰岛素，从理论上来判断腹腔应该是胰岛样细胞移植较为理想的位点。EL-TANTAWY等[19]通过腹腔移植骨髓间充质干细胞于1型糖尿病大鼠体内，可对其高血糖、高脂血症和氧化应激等多方面进行改善。故而，该实验将人脐带间充质干细胞诱导分化为胰岛样细胞，对比观察尾静脉移植和腹腔移植治疗1型糖尿病鼠的效果，为移植胰岛样细胞治疗糖尿病寻求更佳的移植方式。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计对比观察动物实验。
1.2 时间及地点 2017年10月至2019年10月在山西医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。
1.3 材料
1.3.1 脐带组织来源于山西医科大学附属第一医院产科健康婴儿脐带组织，经产妇及家属知情同意并已签署知情同意书。
1.3.2 实验动物健康雄性C57BL/6J小鼠15只，6-8周龄，体质量20-22 g，由山西医科医科大学实验动物中心提供，许证号：SCXK(晋)2015-0001。
1.3.3 实验试剂与仪器倒置显微镜(Nikon，日本)；超净工作台(上海博讯医疗设备厂，中国)；恒温细胞培养箱(上海力申科学仪器有限公司，中国)；人脐带间充质干细胞成骨、成脂诱导分化培养基试剂盒(Cyagen，美国)；小鼠抗人CD90-FITC、CD34-PE、CD29-PE、CD44-PE、CD45-APC(BD，美国)；尼克酰胺、链脲佐菌素、双硫腙(Sigma，美国)；表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子(PeproTech，美国)；活化素A(上海爱必信生物科技有限公司，中国)；胰岛素/转铁蛋白/硒(Gibco，美国)；人C肽定量ELISA试剂盒(上海西唐生物科技有限公司，中国)；人超敏胰岛素ELISA试剂盒(ALPCO，美国)；RevertAidlst cDNA Synth Kit(Thermo Scientific，美国)；SYBR premix EX Taq(Takara，日本)。
1.4 实验方法
1.4.1 人脐带间充质干细胞的分离与培养采用组织块贴壁分离培养方法[20-21]，待细胞爬出且融合度达到50%-60%时，弃去组织块。细胞生长至80%-90%融合度时用胰蛋白酶消化传代，比例为1∶2或1∶3。

1.4.2 人脐带间充质干细胞的表型鉴定流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD34、CD90、CD45、CD44的表达。
1.4.3 人脐带间充质干细胞的成骨、成脂诱导分化严格按照人脐带间充质干细胞成骨、成脂诱导分化培养基试剂盒说明书进行操作。
1.4.4 人脐带间充质干细胞向胰岛样细胞分化取生长状态良好的第4代人脐带间充质干细胞，待细胞融合度达到80%-90%时诱导其向胰岛样细胞分化，共分为4个阶段[14-17]。第1阶段：加入诱导液1培养3 d；第2阶段：加入诱导液2培养5 d，间隔两三天更换新鲜培养液；第3阶段：加入诱导液3培养5 d，间隔两三天更换新鲜培养液；第4阶段：加入诱导液4培养14 d，间隔两三天更换新鲜培养液。诱导液1：DMEM/F12+4 nmol/L活化素A；诱导液2：DMEM/F12+10 mmol/L尼克酰胺+25 μg/L表皮生长因子；诱导液3：DMEM/F12；诱导液4：DMEM/F12+10 mmol/L尼克酰胺+
10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子+胰岛素/转铁蛋白/硒。
1.4.5 双硫腙染色取双硫腙粉末10 mg溶于1 mL二甲基亚砜中，配成储备液-20 ℃保存备用，使用之前0.22 μm孔径滤膜过滤，取10 μL加入1 mL胰岛样细胞培养基中，37 ℃孵箱中孵育30 min，PBS洗3次，显微镜下观察。
1.4.6 C肽水平检测诱导完成后，弃去培养液，PBS洗2次，加入L-DMEM(5.5 mmol/L葡萄糖)孵育2 h，收集培养液；诱导完成后，弃去培养液，PBS洗2次，加入H-DMEM
(25 mmol/L葡萄糖)孵育2 h，收集培养液。严格按照人C肽定量ELISA试剂盒说明书，分别检测低糖(5.5 mmol/L)和高糖(25 mmol/L )刺激胰岛样细胞2 h后C肽水平。
1.4.7 实时荧光定量PCR检测Insulin、PDX1 mRNA 相对表达量收集诱导完成后的胰岛样细胞，采用Trizol法提取细胞总RNA，用RevertAidlst cDNA Synth Kit反转录试剂盒进行反转录反应，用SYBR Premix EX Taq检测试剂盒进行实时荧光定量PCR检测，以GAPDH作为样品内参。GAPDH正向引物：5’-AGA AGG CTG GGG CTC ATT TG-3’，反向引物：5’-AGG GCC ATC CAC AGT CTT C-3’；Insulin正向引物：5’-ATC AAG CAG ATC ACT GTC CTT CT-3’，反向引物：5’-GAG AGC TTC CAC CAG GTG TG-3’；PDX1正向引物：5’-TCC CAT GGA TGA AGT CTA CC-3’，反向引物：5’-TGT CCT CCT CCT TTT TCC AC-3’，采用ΔΔCT法进行数据分析。
1.4.8 动物分组及1型糖尿病鼠模型建立 15只雄性C57BL/6J
小鼠经适应性喂养1周后，随机取3只作为正常组，其余小鼠给予55 mg/kg链脲佐菌素连续5 d腹腔注射[5] (过夜禁食12 h后给药，给药后2 h进食)。在给药后7，10 d取尾静脉血检测血糖(早10：00禁食，下午16：00测血糖，实验期间禁食不禁水)，2次都超过16.7 mmol/L，即为1型糖尿病鼠。符合糖尿病标准9只小鼠随机分为3组：糖尿病组、尾静脉-胰岛样细胞组、腹腔-胰岛样细胞组，每组3只。
1.4.9 胰岛样细胞移植诱导完成后，将胰岛样细胞用胰蛋白酶消化，生理盐水清洗3次，生理盐水重悬细胞沉淀使其细胞浓度为1.25×109 L-1。造模10 d后，正常组、糖尿病组不予处理，尾静脉-胰岛样细胞组经尾静脉注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×105个细胞)，腹腔-胰岛样细胞组经腹腔注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×105个细胞)。早 10：00禁食，下午16：00测血糖，每周三、周日检测2次血糖，共6周。
1.4.10 葡糖糖耐量实验移植后28 d，对各组小鼠进行葡萄糖耐量实验。禁食6 h后，每组小鼠腹腔注射葡萄糖 (2.0 g/kg)，取尾静脉血，检测0，60，120 min血糖浓度。
1.4.11 胰岛素水平检测移植后42 d，各组小鼠禁食6 h后，4%水合氯醛麻醉，眼球取血，离心后取上清，严格按照人超敏胰岛素ELISA试剂盒说明书检测胰岛素水平。
1.5 主要观察指标 ①人脐带间充质干细胞的形态；②人脐带间充质干细胞表型鉴定；③人脐带间充质干细胞成脂、成骨诱导分化能力；④人脐带间充质干细胞向胰岛样细胞诱导过程中形态变化；⑤胰岛样细胞双硫腙染色结果；⑥低糖、高糖刺激下胰岛样细胞C肽水平；⑦胰岛样细胞Insulin、
PDX1 mRNA表达；⑧各组小鼠血糖、血清胰岛素水平和葡萄糖耐量实验结果。
1.6 统计学分析实验数据用SPSS 20.0统计软件进行分析。采用t 检验进行组间比较，单因素方差分析进行多组间比较，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

糖尿病已成为继心脑血管疾病、肿瘤之后另一个严重危害人们健康的重要慢性非传染性疾病，而中国糖尿病流行形势尤为严峻，近些年来患病率不断攀升，患病人数高居世界第一[22]。胰岛素是目前治疗1型糖尿病最好的药物，但它并不可以完全治愈糖尿病。
近些年来，科学家们发现可以通过移植间充质干细胞治疗糖尿病[10-13]，替代胰岛素疗法，但这种治疗方法也是有限的，它并不能一直维持糖尿病鼠血糖的稳定，只能起到短期维持作用。为了更好地发挥治疗效果，科学家们在体外诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化，从而移植到糖尿病鼠体
内[14-17]。目前，胰岛样细胞治疗糖尿病主要移植方式有尾静脉移植、门静脉移植、肾被膜移植。尾静脉移植方式在体液循环下经过门静脉阻滞，导致治疗效果并不显著。门静脉和肾被膜移植方式虽取得不错的治疗效果，但创伤性较大。而腹腔移植方式简便，创伤性小，并含有丰富的血管网，便于细胞摄取营养物质，胰岛素释放入血，理论上来看应该是一个理想的移植位点。
人脐带间充质干细胞由于其来源广泛、易于获取、低免疫原性、不涉及伦理问题等优点[23-26]，故该实验将人脐带间充质干细胞作为种子细胞，在相关因子诱导下使其成为胰岛样细胞。通过尾静脉和腹腔移植2种方式移植到1型糖尿病鼠体内，寻求最佳移植方式。实验结果表明，尾静脉-胰岛样细胞组移植后第10天血糖明显下降，一直维持到31 d，胰岛素水平增高，葡萄糖耐量得到明显改善，而腹腔-胰岛样细胞组移植后血糖、胰岛素水平、葡萄糖耐量均未见明显改善，与预想实验结果有较大差异。通过观察腹腔-胰岛样细胞组血糖曲线可以发现移植后小鼠血糖大幅升高，直至1周后才开始下降，此后血糖水平略低于糖尿病组。作者推测前期血糖升高可能是腹腔注射“异物”引起的应激性反应所致，导致相应细胞因子的释放，致使血糖调控进一步受到影响[27]。腹腔移植胰岛样细胞治疗效果较差可能与以下原因有关：①诱导分化过程中，人脐带间充质干细胞的低免疫原性发生改变[28-29]；②胰岛样细胞在新的微环境下具有一定免疫原性，致使单核巨噬细胞(先天免疫)的激活和免疫细胞浸润[18]；③腹膜腔具有独特的免疫特性，并含大量免疫细胞[30]；④移植的胰岛样细胞数目较少[19]。对于尾静脉移植方式，应该也存在一定的免疫排斥，只是在反应的时效、强度、路径和免疫调节等多个方面与腹腔途径存在差异，以至于在观察期内胰岛样细胞还是发挥了一定降糖作用，这有待对其进一步研究。
综上所述，腹腔直接移植胰岛样细胞并不是一个好的移植方法。这与EL-TANTAWY等[19]报道不一致，可能由于诱导过程中人脐带间充质干细胞的低免疫原性改变和胰岛样细胞数目移植较少有关。因此为了提高腹腔移植效率，可以通过免疫抑制剂联合胰岛样细胞共同治疗糖尿病[31]，也可以使用新型水凝胶包裹胰岛样细胞[32]，降低免疫排斥反应。有理由相信在不久的将来，干细胞治疗糖尿病的效果会越来越好。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠

Transplantation of islet-like cells induced by human umbilical cord mesenchymal stem cells via different ways for the treatment of type 1 diabetic mice

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