不同剂量糖皮质激素联合马血清构建激素诱导型股骨头缺血性坏死兔模型

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.08.014

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (8): 1229-1235.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.08.014

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不同剂量糖皮质激素联合马血清构建激素诱导型股骨头缺血性坏死兔模型

曹良权1，杜斌2，孙光权2，刘锌2，陈国庆3，顾磊1，刘兵4

1南京中医药大学，江苏省南京市 210029；2江苏省中医院，江苏省南京市 210029；3淮安市中医院，江苏省淮安市 223001；4宣城市中医院，安徽省宣城市 242000

收稿日期:2016-11-09 出版日期:2017-03-18 发布日期:2017-04-14
通讯作者: 杜斌，医学博士，博硕士生导师，主任医师，江苏省中医院，江苏省南京市 210029
作者简介:曹良权，男，1989年生，河南省人，汉族，硕士，主要从事股骨头坏死及关节病研究。
基金资助:
江苏省2011年度“六大人才高峰”D类资金(2011-WS-102)

Construction of a rabbit model of steroid-induced osteonecrosis of the femoral head by combining different concentrations of glucocorticoids with horse serum

Cao Liang-quan1, Du Bin2, Sun Guang-quan2, Liu Xin2, Chen Guo-qing3, Gu Lei1, Liu Bing4

1Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China; 2Jiangsu Province Hospital of TCM, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China; 3Huaian Hospital of Traditional Medicine, Huaian 223001, Jiangsu Province, China; 4Xuancheng Hospital of Traditional Chinese Medicine, Xuancheng 242000, Anhui Province, China

Received:2016-11-09 Online:2017-03-18 Published:2017-04-14
Contact: Du Bin, M.D., Chief physician, Master’s and Doctoral supervisor, Jiangsu Province Hospital of TCM, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
About author:Cao Liang-quan, Master, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
Supported by:
the D Class Foundation of “Six Talent Summits” of Jiangsu Province in 2011, No. 2011-WS-102

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
激素性股骨头缺血性坏死模型：是由于激素服用或注射过量导致股骨头血供障碍，使部分或全部股骨头出现缺血的病理现象，通过在实验动物上模拟致病因素，来间接研究激素股骨头缺血性坏死的疾病本质。
糖皮质激素：又名“肾上腺皮质激素”，是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，也可由化学方法人工合成，具有调节糖、脂肪和蛋白质的生物合成和代谢的作用，还具有抗炎作用。

摘要
背景：糖皮质激素的应用已成为中国股骨头坏死的主要因素，建立一个可信的、有效的、低死亡率的激素性股骨头坏死模型，可为更好的探索股骨头坏死的治疗创造条件。
目的：通过联合静脉注射不同剂量的马血清和不同剂量的糖皮质激素以建立激素诱导型早期股骨头坏死兔模型。
方法：将30只健康雄性新西兰白兔随机分为6组，其中4组分别耳缘静脉注射低、高剂量马血清(10，20 mg/kg)并联合肌肉注射低、高剂量地塞米松(5，10 mg/kg)进行造模，地塞米松组仅用高剂量地塞米松(10 mg/kg)造模，对照组静脉注射不同剂量生理盐水(20，2 mL/kg)。
结果与讨论：①MRI骨坏死异常信号：高剂量地塞米松联合高剂量马血清组白兔的股骨头在干预后第2周于MRI上首先出现骨坏死异常信号，而除对照组外的其他4组则在干预后第4周出现骨坏死异常信号。干预后第6周，高剂量地塞米松联合高剂量马血清组中80%的兔表现出骨坏死信号，显著高于低剂量地塞米松联合高剂量马血清组(50%)、高剂量地塞米松联合低剂量马血清组(40%)、低剂量地塞米松联合高剂量马血清组(25%)、地塞米松组(20%)(P < 0.05)；②血脂水平：地塞米松联合马血清组血清三酰甘油和总胆固醇水平在进行第1次地塞米松注射后的第3，7，14，30天明显高于对照组(P < 0.05)；③空骨陷窝程度：与对照组相比，高剂量地塞米松联合高剂量马血清组空骨陷窝程度有轻度增加(P < 0.05)；④结果说明，高剂量地塞米松联合高剂量马血清组能够成功建立早期激素性股骨头坏死模型，且更安全有效。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0002-3664-0064(杜斌)

关键词: 组织构建, 骨组织工程, 激素性股骨头坏死, 兔, 动物模型, 马血清, 地塞米松, 糖皮质激素, 血脂谱, 核磁共振, 组织学, 泮托拉唑, 青霉素

Abstract:

BACKGROUND: Glucocorticoid has been shown to be a major factor of osteonecrosis of the femoral head
(ONFH), so constructing a reliable, effective and low mortality ONFH model will be helpful for searching for a better treatment strategy of ONFH.
OBJECTIVE: To construct a rabbit model of early ONFH by intravenous injection of different concentrations of glucocorticoids and horse serum.
METHODS: Thirty healthy male New Zealand rabbits were randomly allotted to six groups, followed by given the injection of 10 mg/kg horse serum combined with 5 mg/kg dexamethasone (group A), 10 mg/kg horse serum combined with 10 mg/kg dexamethasone (group B), 20 mg/kg horse serum combined with 5 mg/kg dexamethasone (group C), 20 mg/kg horse serum combined with 10 mg/kg dexamethasone (group D), 10 mg/kg dexamethasone (group E), and 2 mL/kg normal saline (control group) via ear veins, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: Abnormal MRI signal of the femoral head appeared in the group D at postoperative 2 weeks, while abnormal signal was seen at postoperative 4 weeks in the other groups except the controls. Six weeks postoperatively, 80% rabbits in the group D showed abnormal signals, which were significantly more than those in the groups C (50%), B (40%), A (25%), and E (20%) (P < 0.05). The serum levels of triglyceride and total cholesterol in the groups A, B, C, D were significantly higher than those in the control group at 3, 7, 14 and 30 days after injection (P < 0.05). Compared with the control group, the ratio of empty lacuna sigmificantly increased in the group D (P < 0.05). These results indicate that the injection of high concentration of horse serum combined with the high concentration of dexamethasone is successful and safe to make an animal model of early ONFH.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Tissue Engineering, Dexamethasone, Models, Animal

中图分类号:

R318

曹良权，杜斌，孙光权，刘锌，陈国庆，顾磊，刘兵. 不同剂量糖皮质激素联合马血清构建激素诱导型股骨头缺血性坏死兔模型[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(8): 1229-1235.

Cao Liang-quan1, Du Bin2, Sun Guang-quan2, Liu Xin2, Chen Guo-qing3, Gu Lei1, Liu Bing4. Construction of a rabbit model of steroid-induced osteonecrosis of the femoral head by combining different concentrations of glucocorticoids with horse serum[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(8): 1229-1235.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析实验共纳入30只新西兰白兔， 2只白兔在使用马血清和地塞米松后死亡，5只白兔在实验过程中患病但仍存活，其中4只是因皮肤软组织感染，1只因肛门直肠感染。最终进入结果分析28只，分别为高剂量地塞米松联合低剂量组5只，高剂量地塞米松联合高剂量马血清组5只，低剂量地塞米松联合高剂量马血清组4只，低剂量地塞米松联合低剂量马血清组5只，地塞米松组4只，对照组5只。

2.2 兔一般情况在实验过程中，高剂量地塞米松联合低剂量马血清组、高剂量地塞米松联合高剂量马血清组、低剂量地塞米松联合高剂量马血清组、低剂量地塞米松联合低剂量马血清组在静脉注射地塞米松后自主性活动减少，体质量显著增加，尤其在注射马血清之后尤为明显。2只白兔在使用马血清和地塞米松后死亡(低剂量地塞米松联合高剂量马血清组组1只，地塞米松组1只)，5只白兔在实验过程中患病但仍存活(高剂量地塞米松联合低剂量马血清组组2只，高剂量地塞米松联合高剂量马血清组组1只，低剂量地塞米松联合低剂量马血清组组1只，对照组1只)，其中4只是因皮肤软组织感染，1只因肛门直肠感染。存活的白兔精神及饮食均正常。

2.3 各组兔健康率、患病率、死亡率变化与其他组相比，高剂量地塞米松联合高剂量马血清不会增加患病率和死亡率，模型的安全性是可靠的。见图1。

2.4 各组核磁共振成像(MRI)检测结果如图2所示，在对照组，通过MRI成像研究发现所有股骨头均正常。高剂量地塞米松联合高剂量马血清组在干预2周后在MRI成像发现第一个异常信号。高剂量地塞米松联合低剂量马血清组、低剂量地塞米松联合高剂量马血清组、低剂量地塞米松联合低剂量马血清组、地塞米松组在干预第4周出现异常，都表现为在MRI T1WI表现为小结节低信号影，在T2WI相上表现为斑片状或是小结节状高信号影。干预第6周，高剂量地塞米松联合高剂量马血清组中80%(4/5)的白兔于MRI上表现出骨坏死信号，同时，低剂量地塞米松联合高剂量马血清组中50%(2/4)白兔出现骨坏死信号，在高剂量地塞米松联合低剂量马血清组为40%(2/5)，地塞米松组为50%(2/5)，低剂量地塞米松联合低剂量马血清组为20%(1/5)。

2.5 各组兔血脂谱变化在进行第1次注射地塞米松后的第3，7，14，30天检测模型组的兔子的血清胆固醇和三酰甘油水平明显高于对照组，在高剂量地塞米松联合低剂量马血清组、高剂量地塞米松联合高剂量马血清组、地塞米松组尤为明显(P < 0.05)，各地塞米松组联合马血清组与总胆固醇之间差异无显著性意义(表2，3)。然而，高剂量地塞米松联合高剂量马血清组与低剂量地塞米松联合高剂量马血清组、低剂量地塞米松联合低剂量马血清组相比，其血清胆固醇水平明显升高(P < 0.05)。见表2，3。

2.6 各组兔骨组织变化在6组实验标本中，未发现肉眼可见的骨坏死或是塌陷的股骨头。与对照组相比，空骨陷窝程度在高剂量地塞米松联合高剂量马血清组逐渐增加，一些骨小梁已破损不完整。在低剂量地塞米松组或低剂量马血清组或地塞米松联合生理盐水组，空骨陷窝程度中度增加(P < 0.05)，骨小梁部分破碎，脂肪细胞明显增加，见表4。

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引言

骨坏死是指骨组织中存在坏死灶，最常见于主要活动关节凸面的软骨下骨。高剂量激素治疗是引起骨坏死的一项主要危险因素。任何病因导致的股骨头坏死都具有较一致的病理表现，在激素性股骨头坏死的患者标本中也发现了骨髓腔内出血。早前有学者指出，激素性股骨头坏死比其他病因引起的骨坏死进展更快^[1]，很难从临床样本中发现骨坏死的进展机制。一些学者已利用激素相关骨坏死动物模型来评价不同的治疗方法，但得出的结果是否可以应用到人类疾病中仍不得而知。激素相关的骨坏死动物模型能够帮助实验研究骨坏死的发病机制、诊断、治疗以及对病因的干预。目前研究也证实股骨头坏死发生率与糖皮质激素使用之间存在正相关^[2]，更重要的是，最近的一项研究表明，更高剂量的激素可能会增加激素诱导型股骨头坏死的发生率^[3]，动物实验模型同时也表明高剂量的激素更有可能引起股骨头坏死^[4]，但是单独使用激素处理并没有获得具有爬行替代、软骨下骨塌陷和退行性关节损害的进展期骨坏死^[5]。在Jaffe等^[6]的一项研究中，单纯应用醋酸可的松肌注，在第3周可出现严重的软骨下骨血管内脂肪栓塞，第5周出现了骨质疏松，但未出现股骨头坏死表现。而在Hu等^[7]的骨坏死模型研究中，应用马血清和泼尼松造模，研究发现骨陷窝细胞和脂肪细胞有所增加，但也未能证实股骨头坏死的发生。研究证实注射马血清能够诱导动物全身超敏反应的发生，Matsui等^[8]通过注射马血清引发血管炎后再给予高剂量的糖皮质激素来建立兔股坏死动物模型，并与单独应用马血清及激素进行比较，组织学发现联用组20个标本有14个(70%)在股骨干部位发生了骨坏死，而在单独应用马血清及激素未发生骨坏死，但在动物股骨头内未见早期的骨坏死表现。

实验利用6种不同剂量的马血清和糖皮质激素，包括同组中应用高剂量的马血清和激素，以对比分析不同剂量的马血清和激素建立的股骨头坏死模型在影像学、血脂水平及组织学中的异常表现，探索建立一个可信的、有效的、低死亡率的激素性股骨头坏死动物模型以支撑实验的进一步研究。

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材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点于2014年2月至2014年7月间于南京医科大学附属江苏省人民医院动物实验中心完成。

1.3 材料健康成年新西兰白兔30只，均为雄性，体质量在2.5-3.0 kg(平均2.7 kg)，由中国南京江宁动物实验中心提供，许可证号：SCXK(苏)2012-0003。在整个实验过程中，所有实验动物的处置均符合《实验动物保健与使用指导意见》规范。

1.4 实验方法

1.4.1 分组及干预新西兰雄性白兔30只被随机分为6组：高剂量地塞米松(湖北天药制药责任有限公司，湖北襄阳市)联合低剂量马血清(Gibco)组、高剂量地塞米松联合高剂量马血清组、低剂量地塞米松联合高剂量马血清组、低剂量地塞米松联合低剂量马血清组、地塞米松组及对照组，每组5只。具体干预方法见表1。

所有实验动物包括对照组动物均每日肌肉注射80万单位青霉素(山东鲁抗责任有限公司，山东省德州市)预防感染，及泮托拉唑钠(Aosaikang pharmaceuticals company) 40 mg静脉注射护胃。

1.4.2 核磁共振检测在最后1次肌注地塞米松后的第2，4，6周，从各组中随机挑选2只兔行MRI检查。以5-7 mL/kg无菌注射体积分数8%水合氯醛进行静脉麻醉。麻醉深度至少不能进行角膜反射以保证白兔能保持蛙位行核磁共振扫描。常规行T1，T2加权扫描，观察股骨头外形是否正常，股骨头内出现的异常高低信号。

1.4.3 血脂谱检测在实验前及进行第1次注射地塞米松后的第3，7，14，30天，禁食12 h，于次日清晨分别于耳缘静脉抽取3 mL血液，滴加适量肝素后离心15 min，取上清液，以酶法检测每只兔子的血清胆固醇和三酰甘油水平，而对照组在第1次注射生理盐水之后应用此法检测其血清胆固醇及三酰甘油水平，检测仪器为AU-2700型全自动生化分析仪，购自日本奥林巴斯公司，试剂盒均购自日本积水化学工业株式会社。

1.4.4 组织学观察在30日的实验中，每组随机选择2只白兔的双侧股骨头，共12只，24个股骨头。以股骨头冠状面沿股骨头软骨下骨将股骨头切成4 mm³的骨标本，并将其放入体积分数10%EDTA中脱钙，用HM315R石蜡切片机(Micromag，Germany)行组织切片后，用苏木精-伊红染色，每个切片在400倍光镜下随机取10个视野，计算视每个野内空骨陷窝面积，算得总面积及平均值。

1.5 主要观察指标各组健康率、患病率、死亡率、MRI影像上表现的骨坏死异常信号，血清三酰甘油水平，血清胆固醇水平，组织切片骨小梁结构，骨组织切片空骨陷窝总面积。

1.6 统计学分析实验数据以x(_)±s表示，采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较用t 检验，检验水准α=0.05。

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讨论

糖皮质激素一直是免疫介导疾病的一线用药，或者作为辅助治疗应用于多种炎症性、感染性或恶性疾病。众所周知，糖皮质激素可对众多组织产生不利影响，并依据其剂量、给药途径和治疗时间不同在全身引起多种不良反应。在1957年报道了首例激素性股骨头坏死以来，有很多人和动物研究报道糖皮质激素和股骨头坏死之间的关联^[9]，迄今为止，糖皮质激素已被认为是非创伤性股骨头坏死的最常见原因，尽管如此，激素性股骨头坏死的生理机制及其有效的预防和治疗方案尚未完全确立。而建立富有成效的动物实验模型是进行股骨头坏死实验研究的基础。实验研究对比分析不同剂量地塞米松联合马血清建立激素诱导型股骨头坏死白兔模型的有效性和安全性，证实高剂量地塞米松联合高剂量马血清能够成功建立早期激素性股骨头坏死模型，且更安全有效。

基于文献检索，大多数建立激素性股骨头坏死模型的方法如下：仅用糖皮质激素，糖皮质激素联合马血清，糖皮质激素联合细菌内毒素等^[10]。Bekler等^[11]研究证实单一使用糖皮质激素不是骨坏死发展的唯一危险因素，单用激素很难诱导出典型的兔股骨头坏死模型。Yamaguchi等^[12]对30只白兔单次肌注20 mg/kg的甲强龙，3周后发现有73.3%的兔的股骨及肱骨干骺端发生了坏死，而股骨头坏死多为骨坏死的早期表现，单用激素会在股骨及肱骨干等长骨处发现骨坏死，不仅局限在股骨头，因此此种模型不是理想的股骨头坏死动物模型。既往大量文献证实应用糖皮质激素联合细菌内毒素造模的成功率较高，而糖皮质激素联合马血清造模成功率仅次于此方法^[13-17]。然而，糖皮质激素联合内毒素组有相对较高的死亡率^[18]。内毒素是革兰阴性菌细胞壁的重要组成部分，如果静脉注射内毒素，则能够导致Shwartzman现象^[19]，该现象能够使凝血机制异常激活，尽管它有益于激素型股骨头坏死建模，但同时它也会引起严重的软组织感染，在糖皮质激素联合内毒素组，造模成功的关键在于其严重的自身反应，这也将导致模型动物的死亡风险增加^[20]。临床工作中，可发现系统性红斑狼疮、干燥综合征、感染性休克、肾病综合征等疾病应用激素治疗后，易出现股骨头坏死的并发症，这就说明在应用激素前，机体就存在血液及脉管系统的病变基础，如过敏性血管炎。所以在造模过程中加入异体血清，引起机体的免疫性炎症反应，这样更接近临床激素性股骨头坏死的发病过程，而建立的股骨头坏死模型能更好的应用于临床股骨头坏死的发病机制、诊断及治疗的研究。马血清是一种多重抗原复合物，能够导致Ⅲ型过敏反应^[21]。抗原抗体复合物沉积在血管内皮细胞，当血小板的体积和数量增加，从而使冠状动脉内官腔狭窄，血流难以通过，最终导致股骨头坏死。

Matsui等^[8]注射马血清后使兔出现过敏性血管炎，进而用激素诱导兔股骨头坏死模型，并进行组织切片后观察，发现4-6周后出现骨髓坏死，6-8周后出现骨坏死。而Nakata等^[22]采用间隔3周分2次注射马血清(10 mL/kg)建立骨坏死模型，观察到红细胞外渗及小动脉微血栓是骨坏死的早期病理改变。

本实验调整马血清和激素注射的剂量和时间，从而避免因注射过量及间隔时间过短而引起过度的免疫反应致动物死亡。鉴于王伟等^[15]在重复Nakata的实验时出现较高的动物死亡率(6只兔子死亡5只，均在第2次马血清注射后 5 min内发生死亡)。实验在预实验中重复该实验方法，而结果并未出现大量动物死亡，因此，为提高动物造模成功率，缩短造模时间，实验调整了马血清的用量及注射周期，以低剂量(10 mL/kg)和高剂量(20 mL/kg)并配比不同剂量激素，预实验中连续两周注射马血清后并未出现兔死亡，但可见动物活动量下降。实验中于第2周注射马血清后 0.5 h动物死亡1只，分析其原因可能为注射马血清后本身免疫机能下降(实验动物饮食及活动能力下降)，此外注射过程中药物推注过快，从而导致动物死亡。根据既往文献资料，给予2.5-5.0 mL/kg剂量的地塞米松，每周隔日1次肌肉注射，同时给予马血清5-10 mL/kg每周两次经耳缘静脉注射^[23]，在预实验中，实验可以发现，正常剂量的地塞米松(4 mg/kg隔日1次肌肉注射)联合马血清(7.5 mL/kg每周1次静脉注射)几乎是不起作用的。等待6周后在MRI下检查并未出现骨髓水肿信号。目前实验试验性地应用高剂量的地塞米松(10 mg/kg)和高剂量的马血清(20 mL/kg)诱导激素性股骨头坏死模型，并与传统剂量组对比。高剂量地塞米松联合高剂量马血清组的白兔股骨头在两周之后于MRI上最早表现出异常信号，这与其他模型组相比至少早两周。更重要的是，双倍剂量的激素应用可使股骨头水肿发生率较高，同时其三酰甘油和总胆固醇水平也较高。组织病理学检查同时也证实与对照组相比，空骨陷窝水平在高剂量地塞米松联合高剂量马血清组逐渐增加，其中一些骨小梁已破碎成片。对比之下，双倍剂量组与其他组包括空白对照组，其安全性相近。

为了避免因过度注射高剂量马血清引起的过度免疫反应而致动物死亡，一些研究者减少了第2次注射马血清的剂量，为建立股骨头坏死模型，实验严格控制地塞米松和马血清的剂量和应用时间^[8]。实验发现连续2次静脉注射马血清不会增加其患病率和死亡率，同时实验已经证实导致白兔死亡的原因是由于消化道感染和痢疾。使用糖皮质激素能以抑制前列腺素的效果和损害胃肠粘膜。同时，糖皮质激素通过抑制炎症介质来削弱人体免疫系统，因而在造模过程中如不注重预防感染，则会显著增加动物感染机率。在李超等^[24]完成的兔激素性股骨头坏死模型研究中，使用泮托拉唑的存活率明显高于未使用组(87.5% vs. 68.6%)。李瑞琪等^[25]同时研究发现，家兔通过使用兰索拉唑，其死亡率减少16.7%。所以使用盘尼西林和泮托拉唑钠可能是增加马血清的剂量和地塞米松的安全性的关键。

实验通过不同剂量配比的糖皮质激素和马血清进行股骨头坏死造模，并利用影像学、血液学及组织学来评估造模的可行性、安全性。脂质代谢紊乱被认为是激素性股骨头坏死的一个病理基础，高剂量激素的摄入，血液中总胆固醇和三酰甘油水平升高，进而导致高脂血症，这可能引起周围小血管的脂肪栓塞，导致股骨头内微循环障碍，进而引起股骨头坏死^[26-27]。实验中造模各组用药后出现了均血清胆固醇及三酰甘油水平升高，以高剂量激素联合高剂量马血清升高最为明显。这些结果证实了脂质代谢紊乱理论。

MRI为早期股骨头坏死的临床诊断较为敏感的方法，它能提供连续的断层扫描信息，在T1加权像坏死灶表现为低信号条带，在T2加权表现为双线征，通过MRI的特征性表现可以早期诊断股骨头坏死并进行分期，从而为治疗提供可靠依据。根据国际骨循环研究学会(ARCO)的分期标准：0 期，活检结果符合坏死，其他检查正常；Ⅰ期，骨扫描和/或 MRI 阳性；Ⅱ期，X线显示股骨头斑片状密度不均、硬化与囊变形成，MRI与骨扫描阳性，髋臼无变化；Ⅲ期，正蛙位 X射线片上出现新月征；Ⅳ期，关节面塌陷变扁、关节间隙狭窄、髋臼出现坏死变化、囊性变和骨刺。实验中高剂量马血清联合高剂量地塞米松组兔在MRI上表现为软骨下骨的低信号带，提示骨坏死，符合股骨头坏死ARCO分期中的2期表现。但实验所用核磁共振由江苏省中医院提供，没有实验动物研究所用的特殊项圈，因此文中所提供图像与动物专用高分辨MRI所出结果稍有偏差，希望在后续实验研究中能得出更好的结果以供参考。

组织学检查是目前股骨头坏死诊断的金标准，但临床上因其为有创性的检查很少应用。动物实验为验证动物模型的有效性，常以此作为建模成功的依据。激素性股骨头坏死在组织学上主要表现为骨陷窝内骨细胞减少，本次实验中，模型组骨小梁稀疏，一些骨小梁已断裂不完整，空骨陷窝率明显增加，尤其在高剂量地塞米松联合高剂量马血清组显著高于其他组，说明动物模型符合早期股骨头坏死表现。

实验结果证实，与传统股骨头坏死造模方式相比，高剂量的地塞米松联合高剂量的马血清能够建立早期股骨头坏死模型，且具有较高的成功率和类似的安全性。使用盘尼西林和泮托拉唑钠能够阻止严重感染和减少胃肠疾病的发生。然而其具体影响还需进一步研究。该实验由于样本量小而无法进行深入研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

不同剂量糖皮质激素联合马血清构建激素诱导型股骨头缺血性坏死兔模型

Construction of a rabbit model of steroid-induced osteonecrosis of the femoral head by combining different concentrations of glucocorticoids with horse serum

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