中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (28): 4562-4566.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.28.024
• 干细胞移植 stem cell transplantation • 上一篇 下一篇
黄 明,周永梅,燕 玲,李 斌,吴奇峰,梁伟辉
出版日期:
2015-07-02
发布日期:
2015-07-02
作者简介:
黄明,女,1980年生,湖南省平江县人,汉族,2010年南方医科大学毕业,博士,副主任医师,主要从事职业病防治研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81302396);国家十二五科技支撑计划项目分课题(2014BAI12B01);广东省职业病防治重点实验室(2012A061400007);广东省医学科研基金(2015年)
Huang Ming, Zhou Yong-mei, Yan Ling, Li Bin, Wu Qi-feng, Liang Wei-hui
Online:
2015-07-02
Published:
2015-07-02
About author:
Huang Ming, M.D., Associate chief physician, Guangdong Province Hospital for Occupational Disease Prevention and Treatment, Guangzhou 510300, Guangdong Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81302396; the National Science and Technology Support Program of China during the 12th Five-Year Period, No. 2014BAI12B01; the Project of Guangdong Provincial Key Laboratory of Occupational Disease Prevention, No. 2012A061400007; Guangdong Medical Research Foundation in 2015
摘要:
背景:骨髓间充质干细胞植入染矽尘大鼠体内能归巢到受损肺部,但何种植入途径在体内的归巢效果更好尚不清楚。 目的:动态比较观察不同途径移植骨髓间充质干细胞在染矽尘大鼠体内的分布情况。 方法:全骨髓贴壁法分离、培养供体大鼠骨髓间充质干细胞,用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒(Lv-eGFP)转染骨髓间充质干细胞。受体大鼠用气管内注入法染尘,再随机分为经静脉组和经气管组,将转染Lv-eGFP的骨髓间充质干细胞分别经静脉、气管途径注入大鼠体内,在移植后的第1,2,3,4周处死大鼠,取心、肝、脾、肺、肾、脑组织进行冰冻切片,荧光显微镜下观察荧光,图文分析软件计算荧光强度。 结果与结论:两组大鼠肺组织均可见强烈、分布广泛且持续的绿色荧光,尤以气管、血管周围明显;两组荧光强度均随时间延长呈轻度减低趋势,但两组每周的荧光强度差异无显著性意义(P > 0.05)。两组大鼠其余各脏器早期也均可见荧光,其中肝、脾、心脏组织荧光强、分布广,肾、脑组织荧光相对较弱、分布较稀疏;随时间推移,各组织荧光均逐渐减弱,面积逐渐减少,到后期仅肝、脾组织可见到较弱、散在荧光分布,脑组织荧光几乎不可见。在同一时间点,两组除第1周脑组织荧光强度差异有显著性意义(P < 0.05)外,其余差异均无显著性意义(P > 0.05)。提示骨髓间充质干细胞经静脉和气管两种途径植入染矽尘大鼠体内归巢至受损肺部的效率相当。 中国组织工程研究杂志出版内容重点:干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程
中图分类号:
黄 明,周永梅,燕 玲,李 斌,吴奇峰,梁伟辉. 不同方式移植骨髓间充质干细胞在染矽尘大鼠体内的归巢[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(28): 4562-4566.
Huang Ming, Zhou Yong-mei, Yan Ling, Li Bin, Wu Qi-feng, Liang Wei-hui . In vivo homing of bone marrow mesenchymal stem cells transplanted through different ways in rats exposed to silica dust[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(28): 4562-4566.
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设计:随机对照动物实验。
时间及地点:实验于2014年10月至2015年2月在南方医科大学南方医院动物实验中心完成。
材料:
实验动物:健康SPF级SD雄性大鼠购自南方医科大学动物实验中心。骨髓间充质干细胞供体大鼠3只,4-6周龄,雄性,体质量120-150 g;受体大鼠8只,7-8周龄,雄性,体质量180-220 g。
骨髓间充质干细胞在染矽尘大鼠体内归巢实验所用主要试剂和仪器:
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试剂和仪器
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来源
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SiO2粉尘
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Sigma公司
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特级胎牛血清、DMEM-LG培养基、胰酶
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Gibco公司
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Lv-eGFP试剂盒
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Cyagen公司
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CCK-8试剂盒
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日本同仁化学试剂研究所
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Jung冰冻包埋剂、恒温箱冷冻机
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Leica公司
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倒置相差荧光显微镜
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Olympus公司
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实验方法:
骨髓间充质干细胞分离培养:参照课题组前期实验全骨髓贴壁培养法取供体大鼠进行骨髓间充质干细胞分离培养、传代和鉴定[2]。
Lv-eGFP转染骨髓间充质干细胞:按课题组前期实验方法转染骨髓间充质干细胞[1,3],并对间充质干细胞进行细胞活力、增殖能力检测。
动物造模、分组:受体大鼠参照文献[4]方法,经气管内注入40 g/L的无菌SiO2粉尘混悬液1 mL造模,再将大鼠随机分为经静脉组和经气管组,每组4只。
骨髓间充质干细胞移植:造模后第2日按不同分组,分别经静脉和经气管途径将细胞浓度为5×109 L-1的Lv-eGFP转染的骨髓间充质干细胞0.5 mL注入到大鼠体内。
组织荧光观察:两组大鼠分别于植入Lv-eGFP转染骨髓间充质干细胞后第1,2,3,4周,统一放血处死大鼠,取肺、肝、脾、心、肾和脑组织经冰冻包埋剂包埋,保存于液氮管中,恒温箱冷冻机对各组织多部位快速冰冻切片,荧光显微镜下观察各组织切片的荧光表达。
荧光强度检测:荧光显微镜下随机选取5个视野,采集图像,Image-pro plus 6.0图文分析软件计算各组织的荧光光密度(即吸光度,A)值。
主要观察指标:绿色荧光表达的强度。
统计学分析:计量资料经正态性检验均符合正态分布,结果用x(_)±s表示。采用SPSS 19.0软件统计,析因设计资料采用析因设计方差分析;两组组间均数比较采用独立样本t检验;多组组间均数比较采用单因素方差分析,检验水准α=0.05。
实验将转染绿色荧光蛋白基因的间充质干细胞分别通过静脉、气管途径植入到染矽尘大鼠体内,通过荧光显微镜动态观察细胞在大鼠体内主要组织的分布情况,为找到更适合的间充质干细胞移植途径提供实验依据。 中国组织工程研究杂志出版内容重点:干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程
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