丹参酮ⅡA干预肝纤维化模型大鼠相关信号通路相关因子的表达

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.27.015

摘要/Abstract

摘要：

背景：肝纤维化是一种由多种病因导致的以细胞外基质过度沉积为特点的慢性活动性疾病，目前中药治疗肝纤维化具有显著优势。研究表明丹参治疗肝纤维化具有较好的疗效，但其作用机制尚需进一步研究。
目的：研究丹参酮ⅡA对肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β-Smads信号通路相关因子转化生长因子β，骨形态发生蛋白7及Smad6，7基因表达的影响。
方法：随机将SD大鼠分为正常对照组、模型组和丹参酮ⅡA治疗组，模型组和丹参酮ⅡA治疗组给予橄榄油稀释的体积分数10%四氯化碳5 mL/kg皮下注射，每周2次，共8周，建立肝纤维化模型。建模后第4周，丹参酮ⅡA治疗组给予丹参酮ⅡA治疗至第8周。正常对照组以同样方法皮下注射橄榄油。
结果与结论：Western印迹检测和RT-PCR检测显示，与正常对照组相比，模型组大鼠肝组织转化生长因子β的表达明显增加(P < 0.01)，而其抑制因子骨形态发生蛋白7和Smad6，7的表达明显减少(P < 0.01)，丹参酮ⅡA可明显逆转上述因子的表达(P < 0.01)。结果提示，丹参酮ⅡA治疗肝纤维化可能与其抑制转化生长因子β，增加其抑制因子骨形态发生蛋白7和Smad6，7的表达有关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

关键词: 实验动物, 消化系统损伤动物模型, 肝纤维化, 丹参酮ⅡA, 四氯化碳, 转化生长因子β, Smad, 信号通路, 辽宁省自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Liver fibrosis is a kind of chronic and active disease that is caused by various causes and characterized by the excessive accumulation of extracellular matrix. At present, use of Chinese herbs for the treatment of hepatic fibrosis has obvious advantages. Salvia miltiorrhiza has been shown to be highly effective in the treatment of hepatic fibrosis. However, the underlying mechanism needs further investigation.
OBJECTIVE: To investigate the effects of TanshinoneⅡA on the expression levels of transforming growth factor-β/Smads signaling pathway related factors transforming growth factor-β, bone morphogenetic protein 7, Smad6 and Smad7 in the liver tissue of rats with hepatic fibrosis.
METHODS: SD rats were randomly divided into three groups (n = 10): normal control, model and TanshinoneⅡA-treated groups. Rats in the model and TanshinoneⅡA-treated groups were subtaneously injected with olive oil-diluted 10% CCl4 ( 5 mL/kg) twice a week, 8 weeks in total, to build rat models of hepatic fibrosis. Four weeks after hepatic fibgrosis induction, rats in the TanshinoneⅡA-treated group received subtaneous injection of TanshinoneⅡA till eight weeks. Rats in the normal control group were subcutaneously injected with olive oil.
RESULTS AND CONCLUSION: Western blotting and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) detection showed that in the model group, the expression of transforming growth factor-β in the rat liver tissue was significantly increased (P < 0.01) and the expression of bone morphogenetic protein-7, Smad6 and Smad7 was significantly decreased (P < 0.01) compared with the normal control group. TanshinoneⅡA could obviously reverse the expression of those factors above-mentioned (P < 0.01). The results suggest that TanshinoneⅡA can be used for treatment of hepatic fibrosis by decreasing the expression of transforming growth factor-β and increasing the expression of bone morphogenetic protein-7, Smad6 and Smad7.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

中图分类号:

R318

张彩华，李骢，李华军，郭连英，贾玉杰. 丹参酮ⅡA干预肝纤维化模型大鼠相关信号通路相关因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(27): 4345-4350.

Zhang Cai-hua, Li Cong, Li Hua-jun, Guo Lian-ying, Jia Yu-jie. Effects of TanshinoneⅡA on expression of transforming growth factor-β/Smads signaling pathway related factors in the liver tissue of rats with hepatic fibrosis [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(27): 4345-4350.

图/表（结果） 6

2.1 实验动物数量分析所有大鼠30只均进入结果分析，未出现大鼠死亡或脱落现象。造模流程图见图1。

2.2 丹参酮ⅡA对大鼠肝组织病理学的影响模型组大鼠可见肝小叶结构紊乱，大量纤维组织增生，部分包绕分割肝细胞形成假小叶，肝细胞肿大，脂肪变性明显，部分有坏死，提示纤维化动物模型复制成功(图2B)。与模型组相比，丹参酮ⅡA治疗组大鼠肝小叶结构明显改善，肝细胞水肿好转，脂肪变性明显改善，胶原纤维增生明显减轻，纤维间隔变细(图2C)。各组肝组织纤维化程度评分见表2。

2.3 丹参酮ⅡA对大鼠干组织转化生长因子β mRNA表达水平的影响正常对照组大鼠肝组织转化生长因子β mRNA水平较低；模型组大鼠肝组织转化生长因子β mRNA水平明显高于正常对照组(P < 0.01)；丹参酮ⅡA治疗组大鼠肝组织转化生长因子β mRNA水平较模型组明显下调(P < 0.01)，而与正常对照组比，差异无显著性意义(P > 0.05，图3)。

2.4 丹参酮ⅡA对大鼠肝组织骨形态发生蛋白7蛋白和mRNA表达的影响 Western-Blot和RT-PCR检测结果显示，正常对照组大鼠肝组织中有骨形态发生蛋白7蛋白和mRNA的表达，模型组骨形态发生蛋白7蛋白和mRNA表达明显降低(P < 0.01)；丹参酮ⅡA治疗组骨形态发生蛋白7蛋白表达较模型组明显上调(P < 0.01；图4)。

2.5 丹参酮ⅡA对大鼠肝组织Smad6，7 mRNA表达水平的影响 RT-PCR检测结果显示，正常大鼠肝脏中Smad6，7 mRNA均有表达，模型组中二者的表达水平明显下降(P < 0.01)，丹参酮ⅡA治疗组二者的表达含量较模型组明显上调(P < 0.01；图5)。

参考文献

[1] Tsukada S, Parsons CJ, Rippe RA. Mechanisms of liver fibrosis. Clin Chim Acta. 2006;364(1-2):33-60.

[2] Schuppan D, Kim YO. Evolving therapies for liver fibrosis. J Clin Invest. 2013;123:1887-1901.

[3] Castera L. Assessing liver fibrosis. Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 2008;2:541-552.

[4] Ikeda H, Yatomi Y. Autotaxin in liver fibrosis. Clin Chim Acta. 2012;413:1817-1821.

[5] Mann J, Mann DA. Transcriptional regulation of hepatic stellate cells. Adv Drug Deliv Rev. 2009;61:497-512.

[6] Miao CG, Yang YY, He X, et al. Wnt signaling in liver fibrosis: progress, challenges and potential directions. Biochimie. 2013;95:2326-2335.

[7] 张彩华,姜妙娜,李骢,等.肝复康药物血清对肝星状细胞核因子-κB及I、Ⅲ型胶原表达的影响[J].中西医结合肝病杂志,2012, 21(2):100-103.

[8] Roderburg C, Luedde M, Vargas Cardenas D, et al. miR-133a mediates TGF-β-dependent derepression of collagen synthesis in hepatic stellate cells during liver fibrosis. J Hepatol. 2013;58(4):736-742.

[9] Arauz J, Zarco N, Segovia J, et al. Caffeine prevents experimental liver fibrosis by blocking the expression of TGF-β. Eur J Gastroenterol Hepatol. 2014;26(2):164-173.

[10] Li F, Ma N, Zhao R, et al. Overexpression of miR-483-5p/3p cooperate to inhibit mouse liver fibrosis by suppressing the TGF-β stimulated HSCs in transgenic mice. J Cell Mol Med. 2014;18(6):966-974.

[11] Margoni A, Fotis L, Papavassiliou AG. The transforming growth factor-beta/bone morphogenetic protein signalling pathway in adipogenesis. Int J Biochem Cell Biol. 2012; 44(3):475-479.

[12] Lee HS, Son WC, Ryu JE, et al. Standardized salvia miltiorrhiza extract suppresses hepatic stellate cell activation and attenuates steatohepatitis induced by a methionine- choline deficient diet in mice. Molecules. 2014;19:8189-8211.

[13] Guan CW, Jin J, Li J, et al. Tanshinone IIA protects against triptolide-induced liver injury via Nrf2/ARE activation. Yao Xue Xue Bao. 2013;48(9):1397-1402.

[14] 牛雪花,华海涌,郭文建,等.丹参酮IIA磺酸钠治疗晚期血吸虫病肝纤维化的效果观察[J].中国血吸虫病防治杂志,2013,25(2): 137-140.

[15] 毛忠懿,肖敏,吴雄健,等.丹参酮ⅡA、苦参素联合治疗对慢性乙型肝炎患者肝功能及肝纤维化指标的影响[J].实用临床医学, 2014,(2):21-23.

[16] Huang W, Li L, Tian X, et al. Astragalus and Paeoniae radix rubra extract inhibits liver fibrosis by modulating the transforming growth factor-β/Smad pathway in rats. Mol Med Rep. 2015;11(2):805-814.

[17] Zhang CH, Wang YF, Chen H, et al. Protective effect of the herbal medicine Gan-fu-kang against carbon tetrachloride- induced liver fibrosis in rats. Mol med report. 2013;8(3):954-962.

[18] Lou JL, Jiang MN, Li C, et al. Herb medicine Gan-fu-kang attenuates liver injury in a rat fibrotic model. J Ethnopharmacol. 2010;128:131-138.

[19] Li CX, Luo J, Li L, et al. The collagenolytic effects of the traditional Chinese medicine preparation, Han-Dan-Gan-Le, contribute to reversal of chemical- induced liver fibrosis in rats. Life Sci. 2003;72:1563-1571.

[20] Dijksterhuis JP, Petersen J, Schulte G. WNT/Frizzled signaling: receptor-ligand selectivity with focus on FZD-G protein signaling and its physiological relevance. Br J Pharmacol. 2014;171(5):1195-1209.

[21] Watson MR, Wallace K, Gieling RG, et al. NF?kappaB is a critical regulator of the survival of rodent and human hepatic myofibroblasts. J Hepatol. 2008;48:589?597.

[22] Ji L, Xue R, Tang W, et al.Toll like receptor 2 knock-out attenuates carbon tetrachloride (CCl4)-induced liver fibrosis by downregulating MAPK and NF-κB signaling pathways. FEBS Lett. 2014;588(12):2095-2100.

[23] Tang LX, He RH, Yang G, et al. Asiatic acid inhibits liver fibrosis by blocking TGF-beta/Smad signaling in vivo and in vitro. PLoS One. 2012;7(2):e31350.

[24] Xu TT, Jiang MN, Li C, et al. Effect of Chinese traditional compound, Gan-fu-kang, on CCl(4)-induced liver fibrosis in rats and its probable molecular mechanisms. Hepatol Res. 2007;37:221-229.

[25] Zeng S, Chen J, Shen H. Controlling of bone morphogenetic protein signaling. Cell Signal. 2010;22(6):888-893.

[26] Nishinakamura R, Sakaguchi M. BMP signaling and its modifiers in kidney development. Pediatr Nephrol. 2014;29(4):681-686.

[27] Zeisberg M, Kalluri R. Reversal of experimental renal fibrosis by BMP7 provides insights into novel therapeutic strategies for chronic kidney disease. Pediatr Nephrol. 2008;23(9): 1395-1398.

[28] Freedman BI, Bowden DW, Ziegler JT, et al. Bone morphogenetic protein 7 (BMP7) gene polymorphisms are associated with inverse relationships between vascular calcification and BMD: the diabetes heart study. J Bone Miner Res. 2009;24(10):1719-27.

[29] Weiskirchen R, Meurer SK.BMP-7 counteracting TGF-beta1 activities in organ fibrosis. Front Biosci (Landmark Ed). 2013; 18:1407-1434.

[30] 何培元,王明娟,张聪,等.BMP-7/Smad6信号通路在酒精性肝损伤大鼠模型中的调节作用[J].临床和实验医学杂志,2014,13(17): 1393-1396.

[31] Zimmermann A. Regulation of liver regeneration. Nephrol Dial Transplant. 2004;19(Suppl 4):S6-S10.

[32] Cutroneo KR. TGF-beta-induced fibrosis and SMAD signaling: oligo decoys as natural therapeutics for inhibition of tissue fibrosis and scarring. Wound Repair Regen. 2007;15 Suppl 1: S54-S60.

引言

肝纤维化是指各种致病因素引起肝脏损伤和炎症，在肝脏修复过程中导致肝脏细胞外基质异常增多和过度沉积的病理过程^[1-3]。国内外的研究均证明肝纤维化是可以逆转的，有效的治疗肝纤维化可以防止各种慢性肝病向肝硬化发展。因此，研究其发生机制并有效地进行干预是治疗和逆转肝纤维化的重大课题。肝纤维化是十分复杂的病理过程，现在对其发生机制尚不明确，目前认为肝纤维化的发生发展与以下几种因素有关：氧化应激和免疫炎性反应、肝星状细胞的活化、细胞因子及其信号传导途径和细胞外基质的合成增多与降解减少^[4-7]。多种细胞因子参与了肝纤维化形成。近年来大量研究显示，转化生长因子β信号转导途径在肝纤维化的发生发展中起重要作用^[8-10]。转化生长因子β是肝星状细胞活化及产生细胞外基质的主要刺激因子。当转化生长因子β与Ⅱ型受体(TpR2)结合后其胞内段即被活化，引起转化生长因子Βri去磷酸化进而引起细胞质Smad转导子磷酸化，导致靶基因的转录^[11]。
近年来，肝纤维化的治疗并没有取得显著进展，西药因作用靶位单一，毒副作用大等缺点，治疗效果并不理想。因此，中医药抗肝纤维化治疗研究现正受到世界肝病学界的广泛重视。大量研究表明丹参具有抗炎、抗氧化、抑制细胞凋亡并促进细胞再生等功效，在抗纤维化方面也发挥着重要作用^[12]。其脂溶性部分有效成分丹参酮ⅡA，已被证明具有抗氧化，抗肿瘤及抗急慢性肝损伤等作用^[13-15]，但其具体作用的分子机制仍有待研究。实验观察了丹参酮ⅡA对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠的治疗作用，观察其对肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β-Smads信号通路相关因子转化生长因子β，骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein, BMP-7)及Smad6，7基因表达的影响，以期为临床肝纤维化治疗用药及中药开发提供理论依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

材料方法

设计：随机对照动物模型实验。
时间及地点：于2012年3月至2013年7月在大连医科大学病理生理学实验室完成。
材料：
实验动物：清洁级SD大鼠30只，雌雄各半，体质量180-220 g，由大连医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK(辽)2008-0002。标准的饲料喂养，正常饮水，同室喂养，环境模拟自然状态。

丹参酮ⅡA干预四氯化碳肝纤维化模型大鼠实验使用的主要试剂及仪器：
试剂及仪器	来源
丹参酮ⅡA，纯度98%	陕西昻盛生物医药科技有限公司
四氯化碳	天津石英钟厂霸州市化工分厂
橄榄油	国家集团化学试剂有限公司
Trizol ^TM试剂盒	美国Invitrogen公司
反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)两步法试剂盒	北京天根生物技术有限公司
溴化乙锭(EB)	美国Gibco公司
焦炭酸已二脂(DEPC)	美国Sigma公司
高效蛋白裂解液	碧云天生物技术有限公司
兔抗骨形态发生蛋白7多克隆抗体	北京博奥森生物技术有限公司
PVDF膜	美国Millipore公司
ECL发光液	美国赛默飞公司
PCR仪，垂直电泳槽和电泳仪	美国BIO-RAD公司
凝胶成像仪	美国UVP公司
可见光分光光度计	澳大利亚GBC科技仪器公司

实验方法：
分组、肝纤维化模型的建立及药物治疗：健康SD大鼠30只，正常喂养1周后，随机分为正常对照组、模型组和丹参酮ⅡA治疗组，每组10只。采用四氯化碳皮下注射法，参照参考文献[16-18]并略加改进造模。除正常对照组外，模型组和丹参酮ⅡA治疗组给予橄榄油稀释的体积分数10%四氯化碳5 mL/kg皮下注射，每周2次，共8周，其中丹参酮ⅡA治疗组于造模第4周后以21.3 mg/(kg•d)的浓度(溶于10 mL/kg生理盐水)的丹参酮ⅡA灌胃至8周；正常对照组以同样方法皮下注射橄榄油。
取材：造模8周后，各3组大鼠禁食10 h，乙醚麻醉后断头处死，迅速取出肝组织，称湿质量。从肝右叶中部切取肝组织2块，一块用体积分数10%甲醛固定，制备石蜡切片；另一块置于-70 ℃冰箱保存，备检。
肝组织病理学检查：石蜡切片，常规苏木精-伊红染色。组织学评分标准如下[19]：0，肝组织结构正常，无增生和胶原纤维形成；1+，中央静脉周围少量的胶原纤维形成；2+，胶原纤维明显扩展，但无纤维间隔；3+，假小叶形成；4+，肝脏结构破坏明显，纤维间隔增厚，假小叶增多。
肝组织骨形态发生蛋白7蛋白水平检测：采用Western Blot法检测，按照既定方法提取组织蛋白，考马斯亮蓝法测定蛋白浓度。取40 μg蛋白上样进行SDS-PAGE，用5%浓缩胶和12%分离胶和Tris-甘氨酸电泳缓冲液电泳，电压20 mA，PVDF膜进行半干式电转移40 min。将膜放入5%脱脂奶粉中封闭3 h，加入兔抗骨形态发生蛋白7多克隆抗体(1∶400，北京博奥森生物技术有限公司)4 ℃过夜，TBST漂洗10 min×3，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG (1∶5 000)，37 ℃孵育1 h，TBST漂洗10 min×3。采用化学发光法进行显色反应，重复3次。结果用以骨形态发生蛋白7/β-actin吸光度值比值表示骨形态发生蛋白7蛋白相对表达量。
肝组织转化生长因子β，骨形态发生蛋白7，Smad6，7 mRNA水平的检测：采用RT-PCR法。使用冰冻切片机将肝脏组织切成连续软薄片移入DEPC处理好的EP管中，按加入50-100 g/L的Trizol研磨匀浆以裂解细胞。加200 μL氯仿，剧烈震荡30 s，室温放置5 min后，12 000×g (4 ℃)离心 15 min，取上清液加入等体积异丙醇后震荡1 min，室温放置30-60 min沉淀；再次离心，12 000×g (4 ℃)，10 min。弃去上层水相，加入体积分数75%乙醇(预冷，DEPC水配) 1 mL混合震荡，10 000×g (4℃)离心5 min。弃去上清液，将EP管开盖倒扣于干净滤纸上，室温下静置干燥。加入适量DEPC水溶解RNA。测定RNA浓度并鉴定其纯度(琼脂糖凝胶电泳)，余样品-80 ℃冻存。
使用反转录试剂盒合成cDNA，分别取转化生长因子β，骨形态发生蛋白7，Smad6，7引物(20 μmol/L)各0.5 μL进行PCR扩增。引物：设置β-actin为参照，由大连TAKARA公司合成，引物序列见表1。反应条件：94 ℃预变性3 min，94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，30个循环，最后72 ℃延伸5 min。取5 μL扩增产物在TBE缓冲液中行2%琼脂糖凝胶电泳，分别以转化生长因子β，骨形态发生蛋白7，Smad6，7与β-actin吸光度值比值表示各基因mRNA相对表达量。

主要观察指标：Weatern Blot法检测各组肝组织骨形态发生蛋白7蛋白的表达水平；RT-PCR法检测肝组织转化生长因子β，骨形态发生蛋白7，Smad6和Smad7mRNA表达水平。
统计学分析：应用SPSS 19.0软件包(进行统计学处理。所有数据均用x±s表示，组间比较采用单因素方差分析和t 检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

肝纤维化的成因是一个多因素多途径参与的复杂过程，涉及到多种细胞，细胞因子，信号通路间的相互作用，近年来，积极防治肝纤维化已经引起了人们的高度重视，从信号传导通路入手研究肝纤维化发生发展转化的过程已经成为了研究的热点^[20-22]。实验利用在大鼠皮下注射四氯化碳来制备大鼠的肝纤维化动物实验模型。研究显示模型组大鼠肝脏出现典型的纤维化改变：肝脏肿大，外观颜色呈暗红色，触之表面粗糙有结节，包膜紧张度增加，硬度增加。显微镜下亦呈现典型的纤维化改变，证明肝纤维化大鼠模型己经制备成功。
转化生长因子β/Smads信号通路是肝纤维化发生与发展的重要信号传导途径。转化生长因子β主要通过自分泌与旁分泌两种机制促进其自身的分泌，诱导肝星状细胞表型的转分化及永久活化，从而刺激纤维蛋白生成及细胞外基质的产生，同时，转化生长因子β在肝细胞损伤后再生过程中可诱导肝细胞的调亡，并且阻断其再生[23-24]。实验结果发现，模型组大鼠转化生长因子β表达比正常对照组明显升高，说明转化生长因子β通路被激活，而丹参酮ⅡA治疗组大鼠肝脏转化生长因子β表达较模型组明显下降,证明丹参酮ⅡA具有抑制该通路活化的作用。RT-PCR结果显示正常对照组对照组大鼠肝组织中有Smad6，7 mRNA表达，模型组大鼠3者mRNA表达比正常对照组明显下降，丹参酮ⅡA治疗组大鼠肝脏3者mRNA表达较模型组明显上调。上述结果证明转化生长因子β/Smads信号通路被激活，丹参酮ⅡA可以通过调节该通路发挥抗纤维化的作用。
骨形态发生蛋白是转化生长因子β超家族的主要构成组分^[25-26]，对多种基本发育过程和细胞增殖和分化具有广泛的调控作用，且此调控作用具有组织特异性和细胞发育阶段特异性。骨形态发生蛋白信号作用于受体，并将信号进一步传递到Smad通路，进而转位至细胞核内介导相应靶基因的转录，已观察到骨形态发生蛋白/Smad对转化生长因子β/Smads信号通路具有拮抗作用。骨形态发生蛋白7具有显著抗炎症和抗纤维化作用，如抑制肾纤维化，加速炎症性肠病的愈合，抗动脉粥样硬化，促进受损伤的角膜表面重建等^[27-30]。上述作用和抑制转化生长因子β/Smads信号通路以及拮抗上皮细胞向间充质细胞转化有关。实验采用免疫印迹及RT-PCR方法检测了各组大鼠肝组织中骨形态发生蛋白7蛋白和mRNA的表达情况，结果证明正常对照组大鼠肝组织中有骨形态发生蛋白7蛋白及骨形态发生蛋白7 mRNA的表达。模型组大鼠骨形态发生蛋白7蛋白mRNA表达比正常对照组明显下降，丹参酮ⅡA治疗组大鼠肝脏骨形态发生蛋白7蛋白和mRNA表达较模型组明显上调，表明丹参酮ⅡA可促进抑纤维化因子骨形态发生蛋白7的转录和翻译，从而达到拮抗肝纤维化的作用。
Smads蛋白是目前所知的最重要的Tβ受体胞内激酶的底物，根据其结构及功能的特点可分为3类：第1类为受体调节Smads，与调节信号通路的特异性有关,其中Smad 2，3介导转化生长因子β和活动素信号；Smad1，5，8介导骨形态发生蛋白信号。第2类为共用Smads，目前有Smad4，为肿瘤抑制基因DPC4的产物之一。第3类为抑制性Smads，具有抑制其他2类Smads表达的作用，目前为止发现有Smad6，7。其中Smad7被认为是转化生长因子β/Smad信号传导通路中最重要的负性调节因子之一。研究表明Smad7表达和转录的增多可能会阻碍肝星状细胞的转分化以及抑制实验大鼠肝内的纤维化^[31-32]。实验RT-PCR 结果显示正常对照组对照组大鼠肝组织中有Smad6，7 mRNA表达，模型组大鼠3者mRNA表达比正常对照组明显下降，丹参酮ⅡA治疗组大鼠肝脏3者mRNA表达较模型组明显上调且有显著性差异。上述结果与文献研究结果抑制，证明丹参酮ⅡA能够通过增加Smad6，7的表达，反向调节转化生长因子β/Smads信号通路，从而发挥抗纤维化的作用。
总之，实验研究结果显示丹参酮ⅡA可以通过激活骨形态发生蛋白/Smads通路从而拮抗转化生长因子β的表达，多靶点多途径缓解肝纤维化的发生和进展，具有良好的治疗前景。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程