胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子与微血管密度

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.07.012

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (7): 1051-1056.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.07.012

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胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子与微血管密度

杨波，梁清华，吴丹，熊新贵

中南大学湘雅医院中西医结合研究所，湖南省长沙市 410008

修回日期:2013-12-02 出版日期:2014-02-12 发布日期:2014-02-12
通讯作者: 梁清华，教授，博士生导师，中南大学湘雅医院中西医结合科，湖南省长沙市 410008
作者简介:杨波，女，1976年生，湖南省长沙市人，汉族，2006年中南大学毕业，博士，主治医师，主要从事中西医结合风湿免疫病及脑血管病的临床与实验研究。
基金资助:
国家教育部博士点新教师基金(20090162120064)；国家自然科学基金(30371833)；湖南省中医药管理局项目(210046)；中南大学青年教师助推项目(2011QNZT137)

Correlation between the expression of vascular endothelial growth factor and microvessel density in collagen-induced arthritis rats

Yang Bo, Liang Qing-hua, Wu Dan, Xiong Xin-gui

Institute of Combined Traditional Chinese Medicine and Western Medicine, Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410008, Hunan Province, China

Revised:2013-12-02 Online:2014-02-12 Published:2014-02-12
Contact: Liang Qing-hua, Professor, Doctoral supervisor, Institute of Combined Traditional Chinese Medicine and Western Medicine, Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410008, Hunan Province, China
About author:Yang Bo, M.D., Attending physician, Institute of Combined Traditional Chinese Medicine and Western Medicine, Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410008, Hunan Province, China
Supported by:
the Ph.D. Programs Foundation of Ministry of Education of China, No. 20090162120064; the National Natural Science Foundation of China, No. 30371833; the Projects of Hunan Province Administration of Traditional Chinese Medicine, No. 210046; Young Teacher Boosting Project of Central South University, No. 2011QNZT137

摘要/Abstract

摘要：

背景：目前发现的促进血管增生活性最强的是血管内皮生长因子，其在类风湿关节炎滑膜细胞呈现强表达。
目的：观察对胶原诱导性关节炎大鼠不同时间点滑膜血管内皮生长因子表达和微血管计数的变化，探讨血管内皮生长因子和微血管在类风湿关节炎发病机制中的作用及其相关性。
方法：采用Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂诱导SD大鼠实验性关节炎模型，采用免疫组织化学方法观察实验性关节炎大鼠不同时间点滑膜组织血管内皮生长因子的表达水平和新生血管计数，并同时观察发病时间与关节炎指数积分、血管内皮生长因子及滑膜新生血管数之间的关系。用直线相关分析法分析血管内皮生长因子表达与滑膜新生血管数之间的关系，用等级相关分析法分析关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达及滑膜新生血管数之间的关系。
结果与结论：随着实验性关节炎发病时间的延长,滑膜新生血管逐渐增多，滑膜增厚，关节炎指数积分逐渐增加，血管内皮生长因子表达水平和微血管数也随之升高；其关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达水平呈正相关关系(r=0.535、P < 0.05)，血管内皮生长因子表达水平与微血管计数呈显著正相关关系(r=0.860，P < 0.01) 。血管内皮生长因子参与了实验性关节炎大鼠滑膜血管翳的形成过程，血管内皮生长因子与微血管密度在类风湿关节炎的发病中具有重要意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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关键词: 组织构建, 血管内皮细胞, 类风湿关节炎, 血管内皮生长因子, 微血管密度, 滑膜, 大鼠, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Vascular endothelial growth factor is found the strongest to promote angiogenesis, which show strong expression in synovial cells in rheumatoid arthritis.
OBJECTIVE: To evaluate the relation between the expression of vascular endothelial growth factor and microvessel density in rheumatoid arthritis.
METHODS: Collagen II and complete Freund’s adjuvant were used to induce experimental arthritis in Sprague-Dawley rats. Synovium expression of vascular endothelium growth factor and microvessel density were assayed at different time points using immunohistochemistry method, and changes in new vessels, vascular endothelial growth factor expression and arthritis index were observed along the time course. The correlations between vascular endothelial growth factor expression and number of new blood vessels as well as between arthritis index and vascular endothelial growth factor expression were studied with linear correlation analysis and rank correlation analysis, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: With the time lasting, new blood vessels in the synovium proliferated, the synovium was thickened, and the arthritis index rose gradually as well as vascular endothelial growth factor expression and number of new microvessels were on the rise. Vascular endothelial growth factor expression was
positively correlated with arthritis index (r=0.535, P < 0.05) and significantly positively correlated with number of new microvessels (r=0.860, P < 0.01). Vascular endothelial growth factor is involved in the course of synovium pannus response, and vascular endothelial growth factor and microvessel density may play an important role in rheumatoid arthritis pathogenesis.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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Key words: arthritis, rheumatoid, collagen, vascular endothelial growth factors, synovial membrane, microvessels

中图分类号:

R318

杨波，梁清华，吴丹，熊新贵. 胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子与微血管密度[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(7): 1051-1056.

Yang Bo, Liang Qing-hua, Wu Dan, Xiong Xin-gui . Correlation between the expression of vascular endothelial growth factor and microvessel density in collagen-induced arthritis rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(7): 1051-1056.

图/表（结果） 4

2.1 一般情况观察 模型组30只大鼠在初次免疫后出现不同程度的关节红肿，再次免疫后关节红肿逐渐加重，后期部分大鼠可见负重困难、关节活动障碍。正常对照组未出现明显关节红肿。30只大鼠先后有26只出现关节炎症状，总发病率为86.7%。

2.2 病理形态学改变 采用苏木精-伊红染色光镜观察关节炎大鼠各时间点滑膜病理改变，结果显示：正常大鼠滑膜未见明显的血管增生新生及炎症细胞浸润，关节结构完整，软骨层较厚，表面光滑(图1A)；模型组免疫后第25天出现明显炎性细胞浸润、水肿，有明显血管增生、滑膜细胞增厚，随着关节症状的加重，广泛炎细胞浸润，大量新生血管形成(图1B-D)。

2.3 关节炎大鼠关节炎指数与发病时间的关系 随着炎症的发展，关节炎指数值逐渐增加。模型组大鼠初次免疫后第7天部分大鼠则出现足爪肿胀，表面发红，随着免疫时间的延长，关节炎症状逐渐加重，第21-45天关节病变最明显，免疫后第35天达到高峰，关节炎指数积分最高，第45天开始下降(图2)。

2.4 滑膜血管内皮生长因子表达、微血管计数与关节炎大鼠关节炎病变时间的关系 正常对照组滑膜中未见明显血管内皮生长因子阳性细胞表达，模型组血管内皮生长因子阳性

细胞表达较正常对照组明显增高，新生血管数量增加，而且血管内皮生长因子表达和新生血管随时间的延长、症状的加重而逐渐升高；血管内皮生长因子表达水平的变化与微血管计数呈正相关关系(r=0.860，P < 0.01，图3，表1)。

2.5 滑膜血管内皮生长因子表达、微血管计数与关节炎大鼠关节炎指数积分的关系 大鼠造模后，随着关节炎指数积分的增加，血管内皮生长因子、微血管数也随着升高，其关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达水平的变化、微血管计数呈正相关关系(r=0.535，P < 0.01)。

参考文献

[1] Miotla J, Maciewicz R, Kendrew J, et al. Treatment with soluble VEGF receptor reduces disease severity in murine collagen-induced arthritis. Lab Invest. 2000;80(8):1195-1205.

[2] Afuwape AO, Feldmann M, Paleolog EM. Adenoviral delivery of soluble VEGF receptor 1 (sFlt-1) abrogates disease activity in murine collagen-induced arthritis. Gene Ther. 2003 ;10(23): 1950-1960.

[3] 张延辉,高春阳,李少华.骨性关节炎患者退变软骨及滑膜组织中细胞因子的表达[J].中国组织工程研究,2013,17(37):6671- 6675.

[4] Koch AE. The role of angiogenesis in rheumatoid arthritis: recent developments. Ann Rheum Dis. 2000;59 Suppl 1:i65-71.

[5] Yoo SA, Kwok SK, Kim WU. lammatory role of vascular endothelial growth factor in the pathogenesis of rheumatoid arthritis: prospects for therapeutic intervention. Mediators Inflamm. 2008;2008:129873.

[6] Yin H, Gao L, Shen B, et al. Kallistatin inhibits vascular inflammation by antagonizing tumor necrosis factor-alpha-induced nuclear factor kappaB activation. Hypertension. 2010;56(2):260-267.

[7] Wauke K, Nagashima M, Ishiwata T, et al. Expression and localization of vascular endothelial growth factor-C in rheumatoid arthritis synovial tissue. J Rheumatol. 2002;29(1): 34-38.

[8] Lu J, Kasama T, Kobayashi K, et al. Vascular endothelial growth factor expression and regulation of murine collagen-induced arthritis. J Immunol. 2000;164(11): 5922-5927.

[9] Sawaguchi Y, Hirata K, Suzuki R, et al. Suppression of murine collagen-induced arthritis by vaccination of synovial vascular endothelial cells. Life Sci. 2013;92(23):1125-1130.

[10] 梁清华,何金华,李霞玲,等.痹肿消汤对实验性关节炎大鼠滑膜VEGF表达水平的影响[J]. 湖南医科大学学报,2002,27(6): 491-494.

[11] The Ministry of Science and Technology of the People’s Republic of China. Guidance Suggestions for the Care and Use of Laboratory Animals. 2006-09-30.

[12] 杨波,梁清华,谢薇,等，胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究[J].中华风湿病学杂志,2006,10(8):474-477

[13] Sumariwalla PF, Cao Y, Wu HL, et al. The angiogenesis inhibitor protease-activated kringles 1-5 reduces the severity of murine collagen-induced arthritis. Arthritis Res Ther. 2003; 5(1):R32-39.

[14] Nataraj NB, Krishnamurthy J, Salimath BP. Treatment with anti-NAP monoclonal antibody reduces disease severity in murine model of novel angiogenic protein-induced or ovalbumin-induced arthritis. Clin Exp Immunol. 2013;171(2): 155-163.

[15] Venco vsk J, Pavelka K, Ospelt C, et al. Prospective new biological therapies for rheumatoid arthritis. Autoimmun Rev. 2009;9(2):102-107.

[16] Xi ZD，Zhang DQ. Clinical values and mechanism of angiogenesis in rheumatoid arthritis. For Med Sci(Sect Int Med). 2006;33(7):301-305.

[17] Belaidi E, Beguin PC, Levy P, et al. Delayed myocardial precon- ditioning induced by cobalt chloride in the rat: HIF-1 alpha and iN-OS involvement. Fundam Clin Pharmacol. 2012; 26(4):454-462.

[18] Ellabban AS, Kamel SR, Ahmed SS, et al. Receptor activator of nuclear factor kappa B ligand serum and synovial fluid level. A comparative study between rheumatoid arthritis and osteoarthritis. Rheumatollnt. 2012;32(6):1589-1596.

[19] 李香斌,连金饶,林娜,等. 类风湿关节炎滑膜血管生成和血管翳[J]. 医学综述,2010,16(1):7-9.

[20] 储永良,黄清春. 血管内皮生长因子及其受体与类风湿关节炎的相关性[J]. 中华风湿病学杂志,2005,9(6):359-362.

[21] 黄娴倩,陈勇,陈立斌,等. 类风湿关节炎患者血清血管内皮生长因子血管生成素-1和2的检测及其与关节滑膜病变的相关性研究[J]. 中华风湿病学杂志,2012,16(10):679-683.

[22] 彭勇,陈勇,邬秀娣,等. HIF-1α及 VEGF 在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义[J]. 浙江医学,2013,18(34): 1628-1631.

[23] Walsh DA, McWilliams DF, Turley M J, et al. Angiogenesis and nerve growth factor at the osteochondral junction in rheumatoid ar- thritis and osteoarthritis. Rheumatology (Oxford). 2010;49(10):1852-1861.

[24] 张征,郭发金,任俊红,等. 早期类风湿关节炎患者外周血管病变和内皮功能的超声研究[J]. 中国心血管杂志,2013,17(2): 103-106.

[25] 达古拉,李鸿斌. 血管内皮细胞生长因子与类风湿关节炎发病机制及其治疗的相关性[J]. 中华临床免疫和变态反应杂志,2012, 6(1):55-59.

[26] 王伟东,陈如平,肖鲁伟,等.雷公藤甲素对类风湿关节炎滑膜新生血管中血管内皮生长因子、白细胞介素-6抑制机理的探讨[J]. 中医正骨,2012,24(2):3-5.

[27] 吕嘉,向川,卫小春,等. 血管内皮生长因子及水通道蛋白1与类风湿关节炎滑膜血管生成的相关性分析[J].中华风湿病学杂志, 2012, 16(3):200-202.

[28] 陈勇,黄娴倩,陈立斌,等. 类风湿关节炎患者超声评估滑膜病变与血清血管内皮生长因子检测的相关性研究[J]. 现代实用医学,2011,23(9):973-976.

[29] 王志文,丁春菊,张爱国,等. 麝香乌龙丸对佐剂性关节炎大鼠滑膜病理形态及血管内皮生长因子、内皮抑素表达的影响[J]. 中国实验方剂学杂志,2011,17(19):241-244.

[30] 王艳娇,李琳芸,彭长华,等. 类风湿关节炎患者血清炎性因子、ANCA水平与血管内皮损伤标志物的相关性分析[J]. 微循环学杂志,2012,22(1):49-51.

[31] 朱尚玲,彭蔚湘,罗敏琪,等. 类风湿关节炎滑膜血管内皮细胞中Smoothened的表达及其意义[J]. 中国病理生理杂志,2013, 29(2):225-230.

[32] 谢庆云,魏萌,张波,等. 外周血炎性细胞因子与类风湿关节炎[J]. 中国组织工程研究,2012,16(42):7945-7950.

[33] 严瀚,刘恩志,周汉城,等. 类风湿关节炎中巨噬细胞移动抑制因子对内皮细胞功能及血管内皮生长因子的影响[J]. 中华关节外科杂志(电子版),2013,7(3):67-70.

[34] 王一凡,韦登明. 雷公藤内酯醇治疗类风湿关节炎分子机制的研究进展[J]. 中华风湿病学杂志,2005,9(10):628-630.

[35] Szekanecz Z, Besenyei T, Szentpétery A,et al. Angiogenesis and vasculogenesis in rheumatoid arthritis. Curr Opin Rheumatol. 2010;22(3):299-306.

[36] Kawashiri S,Kawakami A,Iwamoto N,et al.The power Doppler ultrasonography score from 24 synovial sites or 6 simplified synovial sites,including the metacarpophalangeal joints,reflects the clinical disease activity and level of serum biomarkers in patients with rheumatoid arthritis. Rheumatology. 2011;50(5):962-965.

[37] Clavel G, Bessis N, Lemeriter D et al. Angiogenesis markers(VEGF, soluble receptor of VEGF and angiopoictin-1 in very early arthritis and their association with inflammation and joint destruction. Clin Immunol. 2007;124(2):158-164.

[38] 赵绵松,夏蓉晖,王玉华,等. 骨关节炎与类风湿关节炎患者膝关节滑膜中血管内皮生长因子及血管形态的特征[J]. 北京大学学报:医学版,2012,44(6):927-931.

[39] Margolin K,Gordon MS,Holmgren E,et al.Phase Ib trial of intravenous recombinant humanized monoclonal antibody to vascular endothelial growth factor in combination with chemotherapy in patients with advanced cancer:Pharmacologic and long-term safety data.J Clin Oncol.2001;19(10):851-856.

[40] de Bandt M,Meriem H,Mahdi B ,et al. Blockade of vascular Endothdial. Growth Factor Receptor 1 (VEGF-RI), but not VEGF-RII, Suppresses Joint Destruction in the K/BxN Model of Rheumatoid Arthritis. TheJournalofImmunology. 2003;171(9): 4853-4859.

引言

材料方法

设计：动物实验，对照观察。

时间及地点：实验于2010年10至12月在中南大学湘雅医院中西结合实验室完成。

材料：

实验动物：健康SD大鼠(清洁级) 40只SD大鼠，体质量(150±30) g，鼠龄45-50 d，雌雄各半，由中南大学湘雅医学院实验动物学部提供。在自由饮食、光/暗周期为12 h/ 12 h(光照时间为6：00-18：00)、背景噪声为(40±10) db、温度(20±3) ℃条件下饲养1周以适应环境。实验对动物的的处理方法符合中华人民共和国科技部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》^[11]。

主要试剂：牛Ⅱ型胶原、完全福氏佐剂购于Sigma公司；血管内皮生长因子试剂盒购自北京中山生物制剂公司；DAB显色剂购自武汉博士德公司。

方法：

大鼠胶原性关节炎模型建立：40只大鼠随机分为正常对照组(n=10)、胶原性关节炎模型组(n=30)。模型复制参照文献[12]的方法并改良，采用牛Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂)混合注射诱导SD大鼠关节炎模型。健康40只大鼠在室温20 ℃，湿度70%左右的动物房适应性饲养1周后，将 10 mg牛Ⅱ型胶原与5 mL CFA 研磨均匀后，以每只100 µL从大鼠尾根部皮下注射免疫，于7 d后按上述方法和剂量再次重复免疫。正常对照组大鼠注射生理盐水100 µL/只。

关节炎症状评分：于初次免疫后第7，14，21，35，45天进行评估，采用关节炎指数(arthritis index，AI)积分法。关节炎指数算参照文献^[13-14]，根据关节炎发病大鼠的关节红肿程度和范围以及关节肿大和变形情况，按0-4级进行评分。0分：无关节炎；1分：有红色斑点或轻度肿胀；2分：关节部位中度肿胀；3分：关节严重肿胀；4分：关节严重肿胀且不能负重。关节指数积分越高，关节症状越严重。

病理学及血管内皮生长因子免疫组织化学法检测(SP法)：模型组大鼠分别于初次免疫后第25，35，45天处死大鼠，正常对照组大鼠于初次注射生理盐水后第45天处死，取大鼠膝关节进行指标检测。将膝关节去除皮毛及肌腱组织，浸泡于体积分数10%甲醛溶液中固定24 h；取滑膜组织，石蜡包埋，切片后行苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色。实验前石蜡切片于60 ℃烤箱过夜，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，免疫组化方法(SP法)具体步骤按试剂盒操作。结果判断：血管内皮生长因子染色后的显色反应，阳性结果为滑膜组织细胞质染成棕黄色，每张切片至少观察5个视野，计数阳性细胞数所占的比例(以百分比表示)。

滑膜微血管检测：体积分数10%甲醛溶液固定处理后的膝关节，用5%硝酸脱钙2-4 d，脱钙后移入5%硫酸钠水液中和48 h，然后水洗24 h，脱水浸蜡包埋，切片 4.0-5.0 µm(纵切)，常规蜡至水，苏木精-伊红染色，中性树脂封固，镜检。每一标本在10×10倍光镜下随机抽取5个视野作毛细血管计数，以5个视野计数的均值作为每一标本的血管计量指标。微血管密度结果判定：先在低倍镜下找到病灶中微血管最密集(热点)的3个区，在高倍镜(400倍)计数该3个区的微血管数或微淋巴数，取3个高倍镜下的微血管数平均值。

主要观察指标： 胶原诱导性关节炎大鼠膝关节滑膜组织病理形态学改变，不同时间滑膜血管内皮生长因子表达和微血管计数的变化及相关性表达。

统计学分析：采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理。结果中所有数据以x(_)±s表示，组间比较用t 检验，相关分析用直线回归相关分析等。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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讨论

类风湿关节炎是常见的自身免疫性疾病，致残率高，是造成人群丧失劳动力和致残的主要疾病之一，严重影响患者的生活质量，其发病与遗传、自身免疫和环境因素有关。类风湿关节炎主要病理特点是在炎症刺激下，各种炎性细胞增生、浸润，关节滑膜充血、水肿，组织疏松，毛细血管通透性增高，浆液和纤维素渗出到关节腔中，关节滑膜细胞合成肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和血管内皮生长因子等多种细胞因子，促进关节滑膜成纤维细胞增殖和微血管新生^[15-16]，形成破坏性很强的血管翳；血管翳呈类肿瘤样侵袭性生长，侵及下层软骨和骨，导致关节软骨和骨质破坏，造成关节重构，是类风湿关节炎的关键病理过程^[17-18]。

李香斌等^[19]也认为血管翳的形成是类风湿关节炎的重要病理过程，是引起关节病变、软骨破坏的主要原因及病理基础，而滑膜血管增生是血管翳形成的主要病理特点。储永良等^[20]认为血管内皮生长因子通过与其受体结合发挥生物学作用，可增加血管通透性，提高炎性渗透，促进内皮细胞生长、迁移和新生血管形成，有助于滑膜血管翳形成。而血管翳形成则是构成滑膜炎症、骨质破坏乃至整个类风湿关节炎疾病进展的一部分。黄娴倩等^[21]实验检测了类风湿关节炎患者血清血管内皮生长因子、血管生成素1与血管生成素2的水平，超声评估关节滑膜病变的相关性，结果认为血清血管内皮生长因子和血管生成素1水平可能作为反映类风湿关节炎滑膜增厚及血管翳存在的有用指标，而血清血管生成素2水平可能作为疗效观察的指标之一。血清血管内皮生长因子、血管生成素1与血管生成素2可能通过相互影响及相互促进，介导类风湿关节炎滑膜增厚及血管翳形成，是滑膜炎症发生发展的重要因子。彭勇等^[22]研究类风湿性关节炎患者滑膜细胞在体外常氧和缺氧培养条件下缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子表达的差异性及意义,对类风湿性关节炎患者及骨关节炎患者的关节滑膜细胞在体外常氧和缺氧条件下分别进行培养，根据培养条件分为常氧组、缺氧6 h组及缺氧12 h组进行观察，结果与常氧组相比，缺氧6 h及12 h的类风湿性关节炎和骨关节炎患者滑膜细胞的缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子的表达均显著增加(P < 0.05)。同时类风湿性关节炎和骨关节炎患者缺氧12 h组滑膜细胞缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子的表达高于缺氧6 h组(P < 0.05)。类风湿性关节炎和骨关节炎患者3组滑膜细胞的缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子的表达均呈正相关(P < 0.05)。结果说明在缺氧条件下类风湿性关节炎患者滑膜细胞缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达显著升高且密切相关，可能缺氧-缺氧诱导因子1α-血管内皮生长因子这一信号途径在类风湿性关节炎的发生、发展中起着重要作用。

血管生成是类风湿关节炎早期滑膜病理改变特征之一，也是产生和维持类风湿关节炎血管翳的主要因素^[23-24]。类风湿关节炎有显著的血管增生，滑膜炎中最早观察到的现象之一即是新生血管形成。类风湿关节炎新生血管的形成有赖于多种促血管生成因子的表达，其中血管内皮生长因子及其受体在类风湿关节炎中的表达尤为重要^[25-26]。类风湿性关节炎的发病机制和病理改变与血管内皮生长因子密切相关，类风湿性关节炎患者滑膜液中血管内皮生长因子高表达，活动期滑膜液中血管内皮生长因子的表达量要高于稳定期的表达量，阻断血管内皮生长因子表达作为选择治疗类风湿性关节炎的靶点有潜在意义^[27-29]。

目前研究认为，血管内皮生长因子是在滑膜血管翳中高度表达、促进血管翳形成并维持其生物状态的重要因子。血管内皮生长因子又称为血管通透因子，属血小板生长因子家族，它通过与其受体相结合，一方面能使血管内皮细胞变形、迁移、分裂、增殖，诱导血管增生；另一方面具有促进炎症滑膜组织形成新生血管及血管内物质外渗，加重滑膜组织炎症及血管翳形成，从而加重类风湿关节炎的临床症状，进一步导致关节畸形^[30-32]。

在类风湿关节炎滑膜中表达血管内皮生长因子的细胞主要为巨噬样滑膜细胞和成纤维样滑膜细胞，而血管内皮生长因子过度表达可能是导致类风湿关节炎滑膜血管翳形成、滑膜炎症持续存在并导致软骨破坏的关键因子；这可能也是类风湿关节炎病程缠绵难愈、治疗困难的主要原因。严瀚等^[33]探讨巨噬细胞移动抑制因子对类风湿关节炎滑膜内皮血管生成的影响和作用机制，通过免疫组化检查到巨噬细胞移动抑制因子在类风湿关节炎滑膜组织中有表达，认为其可通过提高血管内皮细胞生长因子而促进类风湿关节炎滑膜血管生成而发挥重要的生理作用。实验结果证明巨噬细胞移动抑制因子或许是治疗类风湿关节炎进展的药物靶点，有望通过抑制类风湿关节炎患者中巨噬细胞移动抑制因子的表达从而延缓疾病的进展，改善患者的生活质量。

实验结果发现，造模后模型组大鼠出现不同程度的关节红肿，随着免疫时间的延长，关节炎症逐渐加重，第21-45天的关节病变最明显，第35天达到高峰，关节炎指数积分最高；组织病理学结果显示，滑膜出现大量炎症细胞浸润，血管增生、滑膜增厚；滑膜表达血管内皮生长因子明显增强，新生血管逐渐增多，血管内皮生长因子表达和新生血管随时间的延长、症状的加重而逐渐升高，与文献[34-35]报道一致。同时滑膜血管内皮生长因子表达水平、新生血管数与关节炎指数积分呈明显正相关关系，提示血管内皮生长因子在类风湿关节炎滑膜炎症和血管生成过程中起重要作用；而且滑膜血管内皮生长因子的表达水平与新生血管数亦呈正相关关系^[36]，提示类风湿关节炎滑膜血管内皮生长因子的过度表达可促进血管密度明显增加，血管内皮生长因子可能是促进滑膜血管翳形成的重要因素。表明血管内皮生长因子在类风湿关节炎滑膜炎症及血管翳的形成过程中可能起充当恶性循环网络的调控作用^[37]。

赵绵松等^[38]将类风湿关节炎患者滑膜组织分为滑膜衬里层、血管周围及衬里下基质组织进行研究，采用原位杂交及免疫组织化学方法检测类风湿关节炎与关节炎患者膝关节滑膜组织各层血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达，结果发现在滑膜衬里层、血管周围及衬里下层基质组织，血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达在骨关节炎与类风湿关节炎患者之间差异均有显著性意义。骨关节炎滑膜衬里层血管内皮生长因子蛋白表达与直行血管走行方式呈正相关，骨关节炎衬里下层基质组织血管内皮生长因子蛋白表达与滑膜纤维素增生程度呈正相关；类风湿关节炎滑膜衬里层血管内皮生长因子蛋白表达与血管形态、弯曲血管走行方式及血管密度均呈正相关。结果验证了滑膜组织各层血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达在骨关节炎及类风湿关节炎患者之间均存在差异，血管内皮生长因子表达与部分炎症指标及关节镜下滑膜血管形态呈正相关。

综上所述，血管内皮生长因子是参与类风湿关节炎发病过程中的一个重要细胞因子，它可能与其他细胞因子一起构成一个复杂的网络共同促进炎症的发展，促使滑膜血管翳形成，因此，通过药物阻断血管内皮生长因子作用或干扰血管内皮生长因子信号转导途径等阻断类风湿关节炎血管新生，可达到控制类风湿性关节炎病程进展以及治疗类风湿性关节炎的最终目的^[39-40]；向关节腔注射血管内皮生长因子抗体及其受体拮抗药可明显减轻类风湿性关节炎症状，有效抑制滑膜血管翳的形成。所以，抑制血管新生可能会成为治疗类风湿关节炎的有效策略。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子与微血管密度

Correlation between the expression of vascular endothelial growth factor and microvessel density in collagen-induced arthritis rats

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[1]	曾祯, 胡经纬, 李璇, 唐琳梅, 黄志强, 李明星. 超声造影定量分析重度失血性休克再灌注模型大鼠复苏期的肾血流灌注[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1201-1206.
[2]	唐辉, 姚志浩, 罗道文, 彭双麟, 杨双林, 王浪, 肖金刚. 高脂高糖饮食结合链脲佐菌素建立2型糖尿病性骨质疏松症大鼠模型[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1207-1211.
[3]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[4]	伦志刚, 金晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[5]	邹刚, 徐志, 刘子铭, 李豫皖, 杨继滨, 金瑛, 张骏, 葛振, 刘毅. 人脱细胞羊膜支架促进Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞体外成韧带分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1037-1044.
[6]	刘青, 万碧江. 针刀治疗胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织Bcl-2/Bax的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 729-734.
[7]	黎永华, 冯强, 谭仁霆, 黄世福, 邱金龙, 尹恒. 杜仲活性成分抗膝骨关节炎滑膜炎病变分子机制的网络药理学阐述[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 765-771.
[8]	宋珊, 胡方媛, 乔军, 王佳, 张升校, 李小峰. 基于生物信息学途径认识骨关节炎滑膜的生物学标志物[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 785-790.
[9]	陈俊毅, 王宁, 彭称飞, 朱伦井, 段江涛, 王烨, 贝朝涌. 脱钙骨基质与慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体转染骨髓间充质干细胞构建组织工程骨[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 510-515.
[10]	马子越, 巨啸晨, 张磊, 孙荣鑫. 保留与不保留残端重建前交叉韧带后移植物腱骨愈合的比较[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 582-587.
[11]	徐晓明, 陈艳, 宋倩, 袁露, 顾加明, 张丽娟, 耿洁, 董坚. 人胎盘间充质干细胞凝胶促进SD大鼠放射性皮肤损伤的愈合[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3976-3980.
[12]	郝晓娜, 张英杰, 李玉云, 许涛. 过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3988-3993.
[13]	姜涛, 马磊, 李志强, 寿玺, 段明军, 吴硕, 马创, 魏琴. 血小板衍生生长因子BB诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3937-3942.
[14]	高坤, 陈大宇, 张勇, 刘伟东, 孙淑芬, 赖文强, 马笃军, 吴益宏, 林展鹏, 蒋鹰鹭, 余伟吉. 牛膝醇提物调控滑膜成纤维细胞外泌体抑制软骨细胞外基质降解[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3636-3640.
[15]	白胜超, 高扬, 王博, 李俊平, 王瑞元. 针刺干预大负荷运动损伤模型大鼠骨骼肌线粒体功能的动态变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(23): 3648-3653.