阳离子脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒转染骨骼肌卫星细胞

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.46.013

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (46): 8056-8061.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.46.013

• 组织构建细胞学实验 cytology experiments in tissue construction • 上一篇下一篇

阳离子脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒转染骨骼肌卫星细胞

许志锋，李敬来，韩振，冯钢，任明明

北京大学深圳医院心血管外科，广东省深圳市 518036

出版日期:2013-11-12 发布日期:2013-11-30
通讯作者: 李敬来，博士，主任医师，北京大学深圳医院心外科，广东省深圳市 518036 13510331661@139.com
作者简介:许志锋★，男，1982年生，广东省茂名市人，汉族，2009年汕头大学医学院毕业，硕士，主治医师，主要从事心血管外科方面的研究。 15813881823@139.com
基金资助:
深圳市科技计划项目[200404104]*

Cationic liposome-mediated enhanced green fluorescent protein plasmid transferred into skeletal muscle satellite cells

Xu Zhi-feng, Li Jing-lai, Han Zhen, Feng Gang, Ren Ming-ming

Department of Cardiovascular Surgery, Shenzhen Hospital, Peking University, Shenzhen 518036, Guangdong Province, China

Online:2013-11-12 Published:2013-11-30
Contact: Li Jing-lai, M.D., Chief physician, Department of Cardiovascular Surgery, Shenzhen Hospital, Peking University, Shenzhen 518036, Guangdong Province, China 13510331661@139.com
About author:Xu Zhi-feng★, Master, Attending physician, Department of Cardiovascular Surgery, Shenzhen Hospital, Peking University, Shenzhen 518036, Guangdong Province, China 15813881823@139.com
Supported by:
the Science and Technology Project of Shenzhen City, No. 200404104*

摘要/Abstract

摘要：

背景：骨骼肌卫星细胞是一种具有多向分化能力的全能干细胞，存在于骨骼肌间质中，对缺血、缺氧有一定的耐受力，是干细胞工程中重要来源细胞。
目的：为联合基因工程细胞心肌成形治疗初步探讨较为简便、经济的骨骼肌卫星细胞体外培养方法，建立一种简单、高效的转染骨骼肌卫星细胞的方法及探讨转染后基因表达的特点。
方法：分离、培养兔大腿骨骼肌卫星细胞，用CKK-8法测定其生长曲线。根据质粒和脂质体不同比例分组，用脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒(plasmid enhanced green fluorescent protein，pEGFP)转染骨骼肌卫星细胞。测定各组转染效率及目标基因表达特点。
结果与结论：成功分离培养骨骼肌卫星细胞及转染pEFGF。在合适的质粒和脂质体比例下，转染效率可达35%以上。目标蛋白在转染12 h内开始表达，48-72 h表达最强，1周后逐渐减弱，2周后仍可观察到其表达。阳离子脂质体可介导pEGFP高效转染骨骼肌卫星细胞，转染效率与质粒、脂质体比例密切相关，目标基因表达随时间改变。

关键词: 组织构建, 组织构建细胞学实验, 骨骼肌卫星细胞, 骨骼肌干细胞, 绿色荧光蛋白, 质粒, 阳离子脂质体, 转染

Abstract:

BACKGROUND: Skeletal muscle satellite cells are totipotential stem cells with multi-directional differentiation potential, locate in skeletal muscle interstitium, have a certain tolerance to ischemia and hypoxia, and are important cells in stem cell engineering.
OBJECTIVE: To establish a thrifty, convenient culture procedure and create a simple, efficient method to transfect skeletal muscle satellite cells, and investigate genetic expression after the transfection for cellular cardiomyoplasty.
METHODS: Skeletal muscle satellite cells were isolated from rabbit thigh and cultured. Their growth curves were determined by CKK-8 method. Grouped by different proportions of the plasmid and liposome, skeletal muscle satellite cells were transfered by the enhanced green fluorescent protein plasmid based on liposome. After transfection, the efficiency and character of target genetic expression was determined.
RESULTS AND CONCLUSION: Satellite cells were isolated, cultured and transfected successfully. In suitable ratio of plasmid and liposomes, the transfection efficiency reached up to above 35%. The target protein was expressed within 12 hours after transfection, reached maximum in 48-72 hours and decreased gradually after one week. The expression still could be observed two weeks latter. The enhanced green fluorescent protein plasmid conducted by cationic liposome could be transfered into skeletal muscle satellite cells efficiently. The transfection efficiency was correlated closely to the ratio of plasmid and lipofectamine. The change of target gene expression depended on time.

Key words: satellite cells, skeletal muscle, plasmids, green fluorescent proteins, transfection, cations, liposomes

中图分类号:

R318

许志锋，李敬来，韩振，冯钢，任明明. 阳离子脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒转染骨骼肌卫星细胞[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(46): 8056-8061.

Xu Zhi-feng, Li Jing-lai, Han Zhen, Feng Gang, Ren Ming-ming. Cationic liposome-mediated enhanced green fluorescent protein plasmid transferred into skeletal muscle satellite cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(46): 8056-8061.

图/表（结果） 5

2.1 骨骼肌卫星细胞形态学观察及鉴定 刚分离的骨骼肌卫星细胞呈圆形，折光性强。其贴壁生长缓慢，分离48 h后始见少量细胞贴壁，96 h后细胞才基本贴壁完全，呈平行排列走向，见图1。

培养至5 d时卫星细胞可伸出一个或者数个突起。随培养时间的延长，卫星细胞增殖、迁移沿一个方向平行的排列，连接成网状。当延迟分瓶或使用分化培养基，相邻的细胞会融合成一长条形的肌管。分离的细胞经Desmin免疫组化染色鉴定，细胞纯度达95%以上，见图2。

传代细胞贴壁迅速，6 h左右细胞基本贴壁完全，细胞形态比原代细胞呈更加一致，呈排列一致的梭形。传代细胞至8代左右开始出现老化现象，倒置显微镜下表现为细胞形态呈多样性，细胞边缘不规则，突起明显增多，胞浆出现大量颗粒。CKK-8法描绘生长曲线提示细胞贴壁后2 d内处于生长缓慢的潜伏期， 3 d左右进入对数期，细胞生长旺盛，数量呈倍数增长。6 d后进入平台期，生长曲线平直。8 d左右进入凋亡期，部分细胞死亡，生长曲线开始下降，转染前后细胞生长曲线差异无显著性意义。见图3。

2.2 脂质体介导pEGFP质粒转染骨骼肌卫星细胞 不同浓度比例质粒和脂质体组合转染骨骼肌卫星细胞，其转染效率差异性较大：质粒与阳离子脂质体比例为0.40 μL∶0.15 μg、0.50 μL∶0.15 μg、0.60 μL∶ 0.15 μg时骨骼肌卫星细胞生存良好但转染效率低，约10%左右，其中以0.60∶0.15时最低。质粒与阳离子脂质体比例为0.60 μL∶0.15 μg、0.60 μL∶0.20 μg、 0.60 μL∶0.25 μg组有较多细胞死亡，转染效率亦低，不到15%。质粒与阳离子脂质体比例为0.50 μL∶ 0.20 μg、0.60 μL∶0.20 μg时细胞存活良好，转染效率高，其中以0.50 μL∶0.25 μg组最高，转染效率达35%-40%，见图4。

荧光显微镜下联系2周观察显示，转染12 h左右骨骼肌卫星细胞胞浆内开始有转染基因绿色荧光蛋白表达，见图5；24 h后转染基因表达强度逐渐增强， 60-72 h最强，见图6，7。1周后，转染基因表达逐渐减少，持续表达至少2周。

参考文献

[1]Mesires NT, Doumit ME，et al. Satellite cell proliferation and differentiation during postnatal growth of porcine skeletal muscle. Am J Physiol Cell Physiol. 2002;282(4):C899-906.
[2]Fujimaki S, Machida M, Hidaka R, et al. Intrinsic ability of adult stem cell in skeletal muscle: an effective and replenishable resource to the establishment of pluripotent stem cells.Stem Cells Int. 2013;2013:420164.
[3]Kao GW, Lamb EK, Kao RL. Skeletal muscle stem cells. Methods Mol Biol. 2013;1036:19-32.
[4]Ye L, Haider HKh, Tan R, et al. Angiomyogenesis using liposome based vascular endothelial growth factor-165 transfection with skeletal myoblast for cardiac repair. Biomaterials. 2008;29(13):2125-2137.
[5]王立新,高长青.自体骨骼肌星状细胞心肌成形的实验研究[J]. 中华医学杂志,2002,82(2):100-3.
[6]Lamb EK, Kao GW, Kao RL. Cellular cardiomyoplasty: its past, present, and future. Methods Mol Biol. 2013;1036:1-17.
[7]Tamaki T, Uchiyama Y, Okada Y, et al. Clonal differentiation of skeletal muscle-derived CD34(-)/45(-) stem cells into cardiomyocytes in vivo.Stem Cells Dev. 2010;19(4): 503-512.
[8]Xiang G, Yang Q, Wang B, et al. Lentivirus-mediated Wnt11 gene transfer enhances Cardiomyogenic differentiation of skeletal muscle-derived stem cells.Mol Ther. 2011;19(4): 790-796.
[9]Forte E, Chimenti I, Barile L, et al. Cardiac cell therapy: the next (re)generation. Stem Cell Rev. 2011;7(4):1018-1030.
[10]Kuliszewski MA, Kobulnik J, Lindner JR, et al. Vascular gene transfer of SDF-1 promotes endothelial progenitor cell engraftment and enhances angiogenesis in ischemic muscle. Mol Ther. 2011;19(5):895-902.
[11]Koning M, Werker PM, Schaft DW,et al. MicroRNA-1 and microRNA-206 improve differentiation potential of human satellite cells: a novel approach for tissue engineering of skeletal muscle. Tissue Eng Part A. 2012;18(9-10):889-898.
[12]Usas A, Huard J. Muscle-derived stem cells for tissue engineering and regenerative therapy. Biomaterials. 2007; 28(36):5401-5406.
[13]Ye L, Haider HKh, Tan R, et al. Angiomyogenesis using liposome based vascular endothelial growth factor-165 transfection with skeletal myoblast for cardiac repair. Biomaterials. 2008;29(13):2125-2137.
[14]徐青,徐敏,张加吉.壁虎骨骼肌卫星细胞的原代培养与鉴定[J].交通医学,2011,25(2):110-112.
[15]Mau M, Oksbjerg N, Rehfeldt C. Establishment and conditions for growth and differentiation of a myoblast cell line derived from the semimembranosus muscle of newborn piglets. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2008;44(1-2):1-5.
[16]Smith J, Merrick D. Embryonic skeletal muscle microexplant culture and isolation of skeletal muscle stem cells. Methods Mol Biol. 2010;633:29-56.
[17]Swedlow JR, Goldberg l, Brauner E, et al. Informatics and quantitative analysis in biological imaging. Science. 2003; 300(5616):100-102.
[18]KoningMM, GhoBC, VanKlaarwaterE, et al. Rapid ventricular pacing produces myocardial protection by nonischemic activation of KATP channels. Circulation. 1996;93 (1):178.
[19]Malatesta M, Giagnacovo M, Cardani R, et al. Human myoblasts from skeletal muscle biopsies: in vitro culture preparations for morphological and cytochemical analyses at light and electron microscopy. Methods Mol Biol. 2013;976: 67-79.
[20]Perruchot MH, Ecolan P, Sorensen IL, et al. In vitro characterization of proliferation and differentiation of pig satellite cells. Differentiation. 2012;84(4):322-329.
[21]陈静静,沈志森,巩长凤.骨骼肌卫星细胞的培养及其在骨骼肌组织工程研究中的应用[J].中国生物医学工程学报,2011,30(6): 955-960.
[22]杨成,周树夏,刘彦普,等. 肌肉组织工程的研究-高纯度卫星细胞培养方法[J].中国美容医学,2004,13(1):7-9.
[23]吕萍,马景涛.骨骼肌卫星细胞的分离和培养[J].河北医科大学学报,2006,27(4):305-307.
[24]Usas A, Huard J. Muscle-derived stem cells for tissue engineering and regenerative therapy. Biomaterials. 2007; 28(36):5401-5406.
[25]Qu Z, Balkir L, van Deutekom JC, et al. Development of approaches to improve cell survival in myoblast transfer therapy. J Cell Biol. 1998;142(5):1257-1267.
[26]夏家红,谢艾妮,徐磊,等. 大鼠骨骼肌卫星细胞体外培养的实验研究[J].中华实验外科杂志.2005;22(22):214-215.
[27]Ye L, Haider HKh, Tan R, et al. Angiomyogenesis using liposome based vascular endothelial growth factor-165 transfection with skeletal myoblast for cardiac repair. Biomaterials. 2008;29(13):2125-2137.
[28]Sato M, Ito A, Akiyama H, et al. Effects of B-cell lymphoma 2 gene transfer to myoblast cells on skeletal muscle tissue formation using magnetic force-based tissue engineering. Tissue Eng Part A. 2013;19(1-2):307-315.
[29]Sato M, Ito A, Kawabe Y, et al. Enhanced contractile force generation by artificial skeletal muscle tissues using IGF-I gene-engineered myoblast cells.J Biosci Bioeng. 2011;112(3): 273-278.
[30]姚茂金. 阳性脂质体在基因治疗中的前景[J]. 国外医学：遗传学分册,2003,26(5):251-253.
[31]陈彦祥,乔卫红,刘栋良,等. 阳离子脂质体的转染机制及转染效率影响因素[J]. 生物工程学报,2007,23(5):776-780.

引言

材料方法

设计：细胞形态学观察。

时间及地点：实验于2009年10月至2010年6月在北京大学深圳医院中心实验室完成。

材料：

实验动物：健康成年新西兰大白兔12只，雄性，2月龄，1.5 kg左右，实验动物由中山大学动物实验室提供，动物许可证号SYXK(粤)2009-0020，实验过程中对动物的处置符合医学伦理学标准。

实验方法：

卫星细胞分离培养、生长曲线绘制及鉴定：按Usas 等^[12-14]的方法并加以改进。取兔大腿骨骼肌2 cm× 2 cm×2 cm左右，将所取组织块移入细胞培养超净台，在培养皿内用D-Hank’s液冲洗组织块三四次，加入适量的青霉素和链霉素预防污染。挑除脂肪、纤维组织，再用D-Hank’s液冲洗初步去掉血细胞及其他杂质。将组织块放入已消毒的青霉素小瓶内，剪成1 mm³或更小的碎块后转移到15 mL离心管中，加入D-Hank’s液约8 mL，400×g离心1 min，弃上清，重复2次。然后加入相当于组织块5倍体积左右的0.1%Ⅰ型胶原酶，37 ℃温水浴消化20-45 min(中间摇晃数次)。450×g离心5 min，弃上清，DMEM/F12液体悬浮，重复1次。加入0.25%的胰蛋白酶，37 ℃下消化15-25 min(其间摇晃数次)。肉眼观察肌肉组织呈云絮样散开，显微镜下观察肌纤维成束状分散时用等体积的含血清生长培养基(DMEM//F12，体积分数20%胎牛血清，100 U/mL青霉素-链霉素)终止消化。轻柔反复吹打后用200目的筛网过滤，滤液用540×g离心10 min，收集试管底部的细胞团，计数，用DMEM/F12重悬，300×g离心冲洗2次，最后用3 mL DMEM/F12重悬混匀^[15-16]。配置Percol溶液，在离心管中从管底向上依次加入3 mL 60%Percoll、3 mL 20% Percol、3 mL细胞悬液。离心后收集60%Percoll与20% Percoll分界面处细胞。用细胞培养基(DMEM/F12+体积分数20%胎牛血清+72 mg/L谷氨酰胺+100 U/mL青霉素、链霉素100 g/L+碱性成纤维细胞生长因子5 µg/L)培养，三四天首次换液，以后隔天换液1次。待细胞均匀增殖至培养面70%-80%或局部增殖过度密集时，以1∶3的比例传代培养。收获生长旺盛的第2代卫星细胞，接种于96孔板，以吸光度(A值)为纵坐标，时间(d)为横坐标，用CKK-8法连续测定9 d，绘制生长曲线。采用免疫细胞学ABC法，用Desmin抗兔一抗对分离培养的细胞进行免疫细胞学鉴定。

脂质体介导pEGFP转染骨骼肌卫星细胞：按照Axygen质粒提取试剂盒说明提取纯化pEGFP质粒，测定浓度，备用。

按不同浓度比例将质粒与阳离子脂质体(Lipofectin2000)混合，室温温育15 min，形成脂质体- DNA复合物，见表1。与此同时，取传代培养骨骼肌卫星细胞计数后均匀接种在96孔板上，并加入100 µL DMEM/F12无血清培养基。将上述质粒脂质体-DNA复合物分别滴加到各细胞培养孔中进行基因转染，转染5 h后除去含脂质体-DNA复合物的DMEM/F12无血清培养基，更换完全培养基进行细胞培养。

于转染后的12，24，48，72 h连续2周显微镜下观察。每个孔随机取2个高倍镜视野，分别在普通光学显微镜镜及荧光显微镜下拍照，通过图像分析系统计算转染效率，筛选出最佳转染条件^[17]。

主要观察指标： ①骨骼肌卫星细胞形态学、细胞生长曲线。②免疫细胞化学检测。③脂质体转染骨骼肌卫星细胞后细胞活性及转染效率。

统计学分析：由第一作者采用SPSS 13.0应用行×列表资料的卡方检验方法用于多个率的比较分析，统计学软件由北京大学深圳医院信息中心提供。

讨论

3.1 骨骼肌卫星细胞的分离、纯化 骨骼肌卫星细胞是一种具有多向分化能力的全能干细胞，存在于骨骼肌间质中，在成年哺乳动物骨骼肌中占1.0%-4.5%^[18] ，对缺血、缺氧有一定的耐受力，是干细胞工程中重要来源细胞^[19-21] 。自1961年发现以来，骨骼肌卫星细胞原代取材培养的方法有很多种，如组织块法、三步消化法，以及在上述各方法基础上进行改良的方法^[22-23] 。但这些方法有的所得细胞产量不高，有的所得细胞纯度不高。本实验综合各种方法的利弊，采用酶消化联合两步纯化法来分离纯化骨骼肌卫星细胞，比较常规三步消化法(I型胶原酶，透明质酸酶，链蛋白酶)分离培养卫星细胞成本更低，耗更短、细胞损伤较小、细胞存活率高，有一定优势^[24] 。成纤维细胞是骨骼肌卫星细胞原代培养的主要污染细胞，如何去除生长迅速的成纤维细胞是骨骼肌卫星培养成功的关键。成纤维细胞贴壁生长较快而卫星细胞贴壁生长较慢，过去常根据这一特点利用差速贴壁法分离纯化细胞^[25] ，但工作量很大、耗时较长，最终纯度一般不超过70%。本实验根据成纤维细胞与卫星细胞悬浮密度不同特征，利用Percoll液分离纯化卫星细胞^[26-27] ，经免疫细胞学鉴定纯度可达95%以上，相对简便、省时，优势明显。
3.2 脂质体介导pEGFP转染骨骼肌卫星细胞 将质粒导入细胞内的方法很多，有磷酸钙法、DEAE-葡聚糖法、基因枪、电穿孔脂质体法等[^28-29] 。各有优缺点，但大都操作较复杂，转染效率较低，设备要求较高，较难普遍开展。本实验使用阳离子脂质体介导成功转染基因。其原理是，带正电脂质体通过静电作用与质粒DNA分子形成脂质体-DNA复合物，然后与带负电的细胞膜相互融合或经细胞胞吞作用进入细胞，最终经转录和翻译，产生目的基因编码的蛋白^[30-31] ，具有操作简便，转染效率高，适用范围广，重复性好，对细胞基本无毒副作用等优点。
影响脂质体转染因素主要有细胞因素(细胞的类型、大小、生长的时期、密度等)，外源DNA的浓度、形状，脂质体浓度，孵育时间，培养基类型等，其中脂质体浓度和质粒浓度比例尤为关键。本课题组在选取参数时综合参考了国内外研究，并结合自身实验室的实际情况而制定实验发现，脂质体浓度过低时，转染效率低，而浓度过高时，容易导致细胞死亡，转染效率也低。在合适的质粒和脂质体比例下，脂质体可高效的介导外源性质粒基因转染骨骼肌卫星细胞。外源性基因在转染1周内有较强的表达，并能持续表达2周以上。在设定的条件下，转染后卫星细胞的生长曲线，细胞周期分布与未进行转染的细胞相比较没有明显的变化。由此可见，脂质体介导外源性基因可以对骨骼肌卫星细胞进行基因改造，方法可行，对进一步利用基因工程为骨骼肌卫星细胞在乏血管区的良好生长提供了解决方案，从而为骨骼肌卫星细胞移植联合基因工程治疗缺血性心脏病等试验提供了依据。

文章快阅

延伸阅读

同类其他研究比较：
1.魏宽海;金丹;等．逆转录病毒介导人重组骨形态发生蛋白基因转染骨骼肌卫星细胞mRNA的表达．第一军医大学学报．2002．22(4)：312-315。
观察指标：探讨逆转录病毒介导重组人骨形态发生蛋白7（recombinant human bone morphogenetic protein7,rhBMP7)基因转染骨骼肌卫星细胞的可行性及目的基因的表达情况。
结论：采用逆转录病毒介导的方法可将rhBMP7转染至骨骼肌卫星细胞中，目的基因可在mRNA水平有效表达。
　　
2. 董少红;李江华;罗林杰;高虹;梁新剑;庞新利;张鹏．电穿孔介导外源性基因转染大鼠骨骼肌卫星细胞的可行性．中国组织工程研究与临床康复．2008．12(12)：2206-2210
观察指标：验证电穿孔法介导外源性基因转染大鼠骨骼肌卫星细胞的可行性和转染效率,以获得基因治疗自体移植的载体。
结论：电穿孔法介导外源性基因表达于大鼠骨骼肌卫星细胞具有较高的转染效率,操作简便,重复性好,且对卫星细胞生物学行为无明显影响。

3 作者已发表文章：
[1] 许志锋;李敬来（审校）．自体骨骼肌源性干细胞心肌内移植治疗缺血性心脏病研究进展．罕少疾病杂志．2009(3)：51-53
[2] 李敬来;许志锋．bFGF转染自体骨骼肌卫星细胞对梗死心肌结构的影响．罕少疾病杂志．2008．15(4)：16-18
　　
拟发表文章：《中国组织工程研究》
主要观察指标： ①骨骼肌卫星细胞形态学、细胞生长曲线。②免疫细胞化学检测。③脂质体转染骨骼肌卫星细胞后细胞活性及转染效率。
结论：成功分离培养骨骼肌卫星细胞及转染pEFGF质粒。在合适的质粒和脂质体比例下，转染效率可达35%以上。目标蛋白在转染12小时内开始表达，48-72 h表达最强，1周后逐渐减弱，2周后仍可观察到其表达。阳离子脂质体可介导pEGFP质粒高效转染骨骼肌卫星细胞，转染效率与质粒、脂质体比例密切相关，目标基因表达随时间改变。

阳离子脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒转染骨骼肌卫星细胞

Cationic liposome-mediated enhanced green fluorescent protein plasmid transferred into skeletal muscle satellite cells

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 5

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	王晗月, 李富荣, 杨晓菲, 胡巢凤. 高效靶向激活肝细胞内源基因直接重编程为胰岛样细胞[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1056-1063.
[2]	王向, 韦朝俊, 王尧, 潘裕佳, 刘大男. 构建过表达FNDC5慢病毒载体抑制平滑肌细胞的增殖与迁移[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(35): 5670-5675.
[3]	郑维蓬, 胡伟坚, 赵国源, 魏合伟, 刘治军, 万雷, 陈胜, 廖志浩. 补肾健脾活血方含药血清干预过表达、沉默Beclin-1基因的MC-3T3-E1细胞增殖及碱性磷酸酶活性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(29): 4650-4655.
[4]	陈诗, 杜超, 何雪梅, 周翔宇. 原花青素干预缺血缺氧状态下骨骼肌卫星细胞的增殖和分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(26): 4130-4136.
[5]	路坦, 常耀辉, 尉娜. 脂氧素A4对脊髓缺血再灌注损伤模型大鼠的神经保护[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(26): 4175-4179.
[6]	郑峰, 张富财, 许喆. miR-98-5p促进成骨细胞增殖和分化的可能及机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(26): 4112-4117.
[7]	戴雅玲, 陈乐文, 何肖君, 林华伟, 贾微微, 陈立典, 陶静, 柳维林. miR-146b过表达慢病毒载体构建及对海马神经干细胞增殖的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(19): 3024-3030.
[8]	许国峰, 李学斌, 唐一钒, 赵寅, 周盛源, 陈雄生, 贾连顺. 人黄韧带细胞骨化发生过程中的自噬[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1174-1181.
[9]	周玉, 龙小安, 李宁, 王纯. 有限元法分析髌腱炎状态时的生物力学变化[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1280-1286.
[10]	刘浩, 刘军, 芮永军, 汤峰林, 陆淼, 丁涛. 成骨诱导因子Nell-1及Noggin短发卡RNA联合转染脂肪间充质干细胞的促成骨分化能力[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(31): 4966-4970.
[11]	王雯虹, 李言君, 崔彩云. 影响根尖牙乳头干细胞成牙本质方向分化的因素[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(31): 5071-5078.
[12]	王宁, 陈俊毅, 朱伦井, 段江涛, 王烨, 黎智君, 贝朝涌. 慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体联合神经生长因子过表达促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(25): 3988-3993.
[13]	邹刚, 张骏, 尤奇, 汤井沣, 金瑛, 杨继滨, 朱喜忠, 刘毅. Scleraxis慢病毒转染人羊膜间充质干细胞促进兔腱-骨愈合[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(13): 2080-2086.
[14]	宋旭东, 何云武, 李勇霖, 陈静, 胡君兰. 超声引导下椎旁神经阻滞治疗带状疱疹相关疼痛的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(11): 1797-1804.
[15]	徐慧君, 史东梅, 张咪, 吴赛璇, 董明, 陆颖, 牛卫东. Asxl1在炎性微环境中对成骨细胞增殖分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(1): 130-135.