提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.07.020

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (7): 1251-1258.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.07.020

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提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率

曹锡梅¹，梁俊红²，张潮²，万东方²，蒙晓平²，郭大玮²

1山西医科大学组织学与胚胎学教研室，山西省太原市 030001
2山西医科大学法医学院，山西省太原市 030001

收稿日期:2012-07-24 修回日期:2012-08-27 出版日期:2013-02-12 发布日期:2013-02-12
通讯作者: 郭大玮，博士，教授，博士生导师，山西医科大学法医学院，山西省太原市 030001 guo8dawei@yahoo.com.cn
作者简介:曹锡梅★，女，1977年生，江苏省无锡市人，汉族，2003年山西医科大学毕业，硕士，讲师，主要从事发育生物学和真核生物基因转录调控方面的研究。 caoximei@163.com

Improving PCR efficiency in the promoter region of serum amyloid A-activating transcription factor

Cao Xi-mei¹, Liang Jun-hong², Zhang Chao², Wan Dong-fang², Meng Xiao-ping², Guo Da-wei²

1 Department of Histology and Embryology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
2 School of Forensic Medicine, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China

Received:2012-07-24 Revised:2012-08-27 Online:2013-02-12 Published:2013-02-12
Contact: Guo Da-wei, Doctor, Professor, Doctoral supervisor, School of Forensic Medicine, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China guo8dawei@yahoo.com.cn
About author:Cao Xi-mei★, Master, Lecturer, Department of Histology and Embryology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China caoximei@163.com

摘要/Abstract

摘要：

背景：血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高，常规聚合酶链式反应扩增不易成功。
目的：探索提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区富含鸟嘌呤和胞嘧啶的DNA模板聚合酶链式反应扩增方案及优化的扩增体系。
方法：提取THP-1细胞基因组DNA作为模板，通过97 ℃高温预变性及最佳退火温度的探索优化聚合酶链式反应的反应条件，在聚合酶链式反应扩增体系中添加不同浓度的增强剂二甲基亚砜改善反应体系。建立提高血清淀粉样蛋白A 转录激活因子基因富含鸟嘌呤和胞嘧啶的启动子区聚合酶链式反应扩增效率的方法，同时评估不同浓度二甲基亚砜对聚合酶链式反应扩增结果的影响。
结果与结论：97 ℃高温预变性使模板DNA充分解链，同时提高退火温度至60 ℃，有利于提高聚合酶链式反应扩增产率；反应体系中添加2%二甲基亚砜可以提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区聚合酶链式反应产物的特异性和产率，但是鸟嘌呤和胞嘧啶含量不同对增强剂的依赖不一样。结果证实，高温预变性和较高的退火温度可以保证充分解链的模板DNA与引物特异性结合，但是DNA模板鸟嘌呤和胞嘧啶含量的不同对增强剂二甲基亚砜的依赖有差异。

关键词: 组织构建, 组织构建细胞学实验, 组织工程基础实验, 血清淀粉样蛋白A转录激活因子, DNA, 启动子区, 鸟嘌呤, 胞嘧啶, 二甲基亚砜, 高温预变性, 退火温度, 聚合酶链式反应, 扩增效率, 国家自然科学基金, 组织构建图片文章

Abstract:

BACKGROUND: Higher levels of guanine and cytosine in the promoter region of serum amyloid A-activating transcription factor are apt to cause unsuccessful PCR reactions.
OBJECTIVE: To optimize the conditions and amplification system for PCR amplification in the promoter region of serum amyloid A-activating transcription factor with rich guanine and cytosine.
METHODS: THP-1 cell genomic DNA was extracted as a template, to optimize amplification conditions through 97 ℃ denaturation and the best annealing temperature. In addition, different concentrations of dimethyl sulfoxide as an enhancer were added to improve the PCR amplification system. The method of promoting PCR efficiency in the promoter region of serum amyloid A-activating transcription factor with rich guanine and cytosine was established, and meanwhile, the effects of different-concentration dimethyl sulfoxide on PCR results were assessed.
RESULTS AND CONCLUSION: During the PCR cycling, the denaturing temperature of 97℃ at which template DNA unlocked the double-stranded and the annealing temperature increased to 60℃ were critical for PCR amplification specificity and efficiency. The use of 2% dimethyl sulfoxide was shown to improve the yield and specificity of PCR products in the promoter region of serum amyloid A-activating transcription factor. However, templates with different guanine and cytosine content had different dependence on the enhancer. It has been aproved that, during the PCR cycling, high denaturing temperature and high annealing temperature at which the primers bind to their specific template DNA unlocking the double-stranded are critical for specificity and efficiency of the PCR amplification. Templates with different guanine and cytosine contents, however, depend on dimethyl sulfoxide in different manners.

Key words: tissue construction, cytology experiments in tissue construction, basic experiments in tissue engineering, serum amyloid A-activating transcription factor, DNA, promoter region, guanine, cytosine, dimethyl sulfoxide, heat denaturation, annealing temperature, polymerase chain reaction, amplification efficiency, the National Natural Science Foundation of China, tissue construction photographs-containing paper

中图分类号:

R318

曹锡梅，梁俊红，张潮，万东方，蒙晓平，郭大玮. 提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(7): 1251-1258.

Cao Xi-mei, Liang Jun-hong, Zhang Chao, Wan Dong-fang, Meng Xiao-ping, Guo Da-wei. Improving PCR efficiency in the promoter region of serum amyloid A-activating transcription factor[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(7): 1251-1258.

图/表（结果） 6

2.1 THP-1细胞的形态和基因组DNA的提取 THP-1细胞是最贴近天然巨噬细胞的一种体外诱导分化的巨噬细胞模型，培养过程中喜欢酸性环境。稳定传二三代后倒置显微镜下观察，细胞体积较大呈圆形，内有大而圆的细胞核，生长状态良好，见图2A，瑞氏染色示THP-1细胞胞膜光滑、胞核大占据细胞大部分、染色质分布均匀，见图2B。取生长状态良好的细胞计数后提取基因组DNA，紫外分光光度仪测定A260/A280在1.8-2.0，提示样品较纯。

2.2 THP-1细胞基因组DNA常规聚合酶链式反应扩增 以THP-1细胞基因组DNA为模板，退火温度从56-62 ℃分为7个组分别进行常规聚合酶链式反应扩增，5对引物并未见扩增出长度正确的DNA片段。退火温度58 ℃时的扩增产物电泳后凝胶成像见图3。

2.3 THP-1细胞基因组DNA优化反应条件后的聚合酶链式反应扩增 见图4，5。

优化反应条件后，实验中低于60 ℃的退火温度几乎没有扩增产物，将退火温度升至高于60 ℃时伴随扩增产物出现非特异性扩增，实验证实退火温度为60 ℃时扩增最理想。优化反应条件后，退火温度为60 ℃时的扩增产物电泳后凝胶成像可见图4，5。引物Stat3没有扩增产物，引物F1、B2均可见特异性扩增产物，引物B3扩增产物非常弱，引物e1A没有任何扩增产物。

2.4 THP-1细胞基因组DNA优化反应条件及优化反应体系后的聚合酶链式反应扩增 优化反应条件的同时，在聚合酶链式反应扩增体系中加入3种不同浓度的增强剂DMSO以优化反应体系，结果表明反应体系中添加5%或10%DMSO易生成非特异性扩增产物，添加2%DMSO能起到优化扩增效率的作用。添加5%DMSO的扩增产物电泳后凝胶成像见图6。

添加2%DMSO后扩增产物电泳后凝胶成像可见图4，5。优化反应条件的同时添加2%DMSO后，引物Stat3有特异性扩增产物，引物B3扩增产物清晰，引物F1、B2未见扩增产物，引物e1A有特异性扩增产物，但不清晰。

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引言

血清淀粉样蛋白A转录激活因子(serum amyloid a-activating transcription factor, SAF)或称myc基因相关锌指蛋白在多种炎症反应基因转录调控中发挥重要作用。这些被调控的基因包括基质金属蛋白酶1和血清淀粉样蛋白A等；后者与风湿性关节炎、淀粉样变性病、胆固醇及高密度脂蛋白代谢障碍等密切相关^[1-4]。因此，明确调控血清淀粉样蛋白A转录激活因子本身的转录和血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因转录与前体信使RNA选择性剪接的关系对进一步揭示心脏疾病、风湿性关节炎等的发病机制具有重要意义。

近年研究表明，血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因的产物至少有血清淀粉样蛋白A转录激活因子1、血清淀粉样蛋白A转录激活因子2和血清淀粉样蛋白A转录激活因子3三种，三者均含有锌指DNA结合结构域、多聚脯氨酸和多聚丙氨酸区，但是由于肽链一级结构的差异使三者的转录活性各异^[1-2]。三者肽链一级结构的差异主要源于血清淀粉样蛋白A 转录激活因子基因中不同位置的启动子激活和转录后前体信使RNA的选择性剪接，而且血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因转录/剪接子的表达在不同条件下不一致。血清淀粉样蛋白A 转录激活因子1的转录基本不受炎性因子刺激调控，在基础转录条件下和炎性刺激条件下均表达；血清淀粉样蛋白A转录激活因子2的表达在基础转录条件下低于血清淀粉样蛋白A转录激活因子1，炎性因子的刺激抑制血清淀粉样蛋白A转录激活因子2的转录；血清淀粉样蛋白A转录激活因子3在基础转录条件下转录水平很低，炎性因子的刺激提高其转录水平^[1-2]。然而血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高，常规聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增不易成功，给聚合酶链式反应检测不同条件下血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因转录/剪接子带来困难。Ray等^[2]学者采用巢式聚合酶链式反应(nested, PCR)通过两轮聚合酶链式反应反应，使用两套引物扩增血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶含量偏高的特异性的DNA片断。但是巢式聚合酶链式反应进行第二次聚合酶链式反应扩增引起交叉污染的概率比较大。

为解决血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区DNA模板常规聚合酶链式反应扩增的难题，实验选用THP-1细胞(人单核白血病细胞系，TCHu57)为研究对象。目前THP-1细胞源性巨噬细胞被广泛应用于巨噬细胞相关的多种病理过程和疾病的研究，如动脉粥样硬化^[5-8]。THP-1细胞在形态上具有变形、伪足形成等特点，而且在分子结构、受体表达等方面被认为是最贴近天然巨噬细胞的一种体外诱导分化的巨噬细胞模型。实验提取THP-1细胞基因组DNA作为模板，通过优化聚合酶链式反应扩增条件和添加增强剂二甲基亚砜(DMSO)改善反应体系，建立提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因富含鸟嘌呤和胞嘧啶的启动子区DNA模板聚合酶链式反应扩增效率的方法，同时评估不同浓度DMSO对聚合酶链式反应扩增结果的影响。通过实验获得提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应扩增效率的稳定条件和优化的反应体系，为后期开展其分子生物学研究奠定基础。

材料方法

设计：基因学体外细胞实验。
时间及地点：于2011年9月至2012年5月在山西医科大学法医学院分子生物学实验室完成。
材料：
聚合酶链式反应扩增实验所用细胞：THP-1细胞(人单核白血病细胞系，TCHu57)，中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心提供。
优化血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应扩增实验所用主要试剂及仪器：
Main reagents and instruments:

方法：
细胞培养和基因组DNA的提取：用含体积分数10%胎牛血清、100 U/mL青链霉素混合液的RPMI 1640培养液，37 ℃、体积分数5% CO₂培养箱培养THP-1细胞，稳定培养传二三代后倒置显微镜下观察细胞的形态，并做瑞氏染色再在倒置显微镜下观察。提取细胞基因组DNA之前，首先0.4%锥虫蓝染液对THP-1细胞进行染色，并计数，大约5×10⁶细胞。依照E.Z.N.A.®Tissue DNA Kit (D3396)说明书提取细胞基因组DNA，紫外分光光度仪测定A260/A280以评估DNA的纯度，-20 ℃保存备用。
引物设计：实验中涉及的血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因序列均来自于GenBank。采用Allele ID6对序列进行分析，设计适合于启动子区Stat3和e1A的特异性上、下游引物(Stat3和e1A的位置见图1 )，同时在Stat3位点前后随机设计3对引物F1、B2和B3作为对照。

为避免聚合酶链式反应扩增过程中产生发夹结构、引物二聚体等，实验中设计的引物长度介于17-24 bp之间，引物序列见表1。所用引物均委托上海英骏公司合成。

常规聚合酶链式反应扩增：聚合酶链式反应总反应体系为20 μL，包括10×Ex Taq Buffer(Mg2⁺ Plus)2 μL、dNTP Mixture 1.6μL、热启动酶TaKaRa Ex Taq HS 0.1 μL、10 μmol/L上下游引物各 0.2 μL、THP-1细胞基因组DNA 0.5 μL、ddH2_O补齐余体积。聚合酶链式反应扩增仪运行，反应条件如下：
第1阶段(聚合酶链式反应扩增阶段)：将总反应体系中所有试剂在94 ℃变性30 s，退火30 s，7个不同组的退火温度分别为56 ℃、57 ℃、58 ℃、59 ℃、60 ℃、 61 ℃和62 ℃， 72 ℃延伸1 min；共30个循环。
第2阶段(产物延伸阶段)：72 ℃再延伸5 min。
扩增产物电泳后凝胶成像系统扫描保存。
优化反应条件的聚合酶链式反应：通过高温预变性及最佳退火温度的探索优化聚合酶链式反应反应条件。聚合酶链式反应总反应体系如上，区别在于热启动酶TaKaRa Ex Taq HS0.1 μL在反应开始之前不加入，而是在预变性结束之后加入。聚合酶链式反应扩增分三阶段进行，反应条件为：
第1阶段(充分预变性阶段)：将总反应体系中除热启动酶TaKaRa Ex Taq HS之外所有试剂在97 ℃高温预变性10 min；然后每20 μL反应体系加0.1 μL热启动酶TaKaRa Ex Taq HS。
第2阶段(聚合酶链式反应扩增阶段)：94 ℃变性 30 s，退火30 s，7个不同组的退火温度分别为56 ℃、57 ℃、58 ℃、59 ℃、60 ℃、61 ℃和62 ℃，72 ℃延伸1 min；共30个循环。
第3阶段(产物延伸阶段)：72 ℃再延伸5 min。
扩增产物电泳后凝胶成像系统扫描保存。
优化反应条件的同时优化其反应体系的聚合酶链式反应：在采用如上优化聚合酶链式反应的反应条件的同时，分3组每20 μL反应体系中分别加入3种不同浓度的增强剂DMSO进行扩增，DMSO的浓度分别为2%，5%，10%。分别配制优化的聚合酶链式反应扩增体系，每组反应体系见表2。

热启动酶TaKaRa Ex Taq HS0.1μL在反应开始之前不加入，而是在预变性结束之后加入。聚合酶链式反应扩增分3阶段进行，反应条件为：
第1阶段(充分预变性阶段)：将总反应体系中除热启动酶TaKaRa Ex Taq HS之外所有试剂在97 ℃高温预变性10 min；然后每组反应体系加0.1 μL热启动酶TaKaRa Ex Taq HS。
第2阶段(聚合酶链式反应扩增阶段)：94 ℃变性 30 s，退火30 s，7个不同组的退火温度分别为56 ℃、57 ℃、58 ℃、59 ℃、60 ℃、61 ℃和62 ℃，72 ℃延伸1 min；共30个循环。
第3阶段(产物延伸阶段)：72 ℃再延伸5 min。
扩增产物电泳后凝胶成像系统扫描保存。
主要观察指标：倒置相差显微镜观察高倍镜下细胞的形态；紫外分光光度仪测定A260/A280，评估DNA的纯度；不同的聚合酶链式反应扩增产物电泳后凝胶成像系统扫描。

讨论

血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因在多种炎症反应基因转录调控中发挥重要作用，这些被调控的基因包括基质金属蛋白酶1和血清淀粉样蛋白A等；后者与风湿性关节炎、淀粉样变性病、胆固醇及高密度脂蛋白代谢障碍等密切相关^[1-3]。近年研究表明，血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因的产物至少有血清淀粉样蛋白A转录激活因子1、血清淀粉样蛋白A转录激活因子2和血清淀粉样蛋白A转录激活因子3三种，其中血清淀粉样蛋白A转录激活因子1为血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因转录子前体中的4个内含子(i1b、i2、i3和i4)被切除，形成e1B/e1C、e2、e3、e4A和e5五个外显子相互连接的肽段。若该基因前体信使RNA的选择性剪接过程中，位于第4内含子内的外显子e4B被保留，其剪接子为血清淀粉样蛋白A转录激活因子2。该剪接子由于外显子e4B内含有终止密码子，因此形成C端缺失的短肽链[1]。血清淀粉样蛋白A转录激活因子3的转录始于血清淀粉样蛋白A转录激活因子1转录起始点的上游、血清淀粉样蛋白A转录激活因子1启动子内，因此其第1外显子DNA序列位于血清淀粉样蛋白A转录激活因子1第1外显子的5’端上游非编码区内。并且，原先血清淀粉样蛋白A转录激活因子1第1外显子的5’端部分(e1B)在前体信使RNA选择性剪接过程中被切除^[2](见图1)。然而血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因的3种转录/剪接子在基础转录条件下和炎性刺激条件下的表达并不一致，为进一步明确该基因本身的转录和转录与前体信使RNA选择性剪接的关系，检测血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因不同转录/剪接子首选聚合酶链式反应技术。

聚合酶链式反应技术可以在短时间内实现对基因或特定核酸序列的体外扩增，已经在人类基因组研究和疾病病因、诊断及治疗等方面得到广泛的应用^[9-12]。运用聚合酶链式反应技术检测基础转录条件和炎性因子刺激下血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因的不同转录/剪接子，并明确调控血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因转录与前体信使RNA选择性剪接的关系对进一步揭示心脏疾病、风湿性关节炎等的发病机制具有重要意义。然而常规聚合酶链式反应技术也有一定的局限性，如扩增过程中可能产生“假突变”或“非特异性”产物^[13-15]。当DNA模板鸟嘌呤和胞嘧啶含量较高或含有二级结构时，DNA模板在常规94 ℃变性温度下往往变性不完全，聚合酶链式反应效率会显著降低，甚至无法扩增出靶基因产物^[16-17]。

在扩增过程中退火温度或称复性温度也是聚合酶链式反应扩增成功与否的关键因素之一，其决定着引物和模板的结合特异性^[18-21]。此外为提高常规聚合酶链式反应的扩增效率反应体系中还可以添加不同的增强剂如二甲基亚砜、甘油、甲酰胺等，使富含鸟嘌呤和胞嘧啶的DNA变性、减少DNA二级结构对聚合酶链式反应的影响^[22-25]。

相关研究还显示，Ray等^[2]学者采用巢式聚合酶链式反应通过两轮聚合酶链式反应，使用两套引物扩增血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶含量偏高的特异性DNA片断。Bachmann等^[26-27]学者则运用减速聚合酶链式反应成功扩增鸟嘌呤和胞嘧啶含量偏高的基因片段。巢式聚合酶链式反应和减速聚合酶链式反应是对常规聚合酶链式反应方法有益的补充。但是巢式聚合酶链式反应进行第二次聚合酶链式反应扩增容易引起交叉污染；减速聚合酶链式反应扩增较常规聚合酶链式反应消耗时间过长。基于常规聚合酶链式反应技术可以在短时间内实现对基因或特定核酸序列的体外扩增，为提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区DNA特异性扩增产物的扩增效率，本实验有必要从以下几方面优化聚合酶链式反应的反应条件及反应体系。

3.1 预变性及退火温度对聚合酶链式反应扩增效率的影响 高鸟嘌呤和胞嘧啶含量的模板在常规94 ℃变性温度下往往变性不完全，导致聚合酶链式反应效率降低^[17]。为使模板DNA充分解链，实验在聚合酶链式反应扩增前97 ℃高温充分预变性10 min，然后再添加热启动酶，以保证扩增全程中酶的有效性。同时在扩增过程中，退火温度对聚合酶链式反应的结果也影响很大，实验中低于60 ℃的退火温度几乎没有扩增产物，可能是由于鸟嘌呤和胞嘧啶含量偏高的DNA模板即使充分解链在较低的退火温度下又会和引物有非特异性结合，或形成复杂的引物二聚体。结果显示97 ℃充分预变性及提高退火温度至60 ℃是提高实验聚合酶链式反应扩增效率的必需条件。

3.2 增强剂DMSO对聚合酶链式反应扩增效率的影响实验中优化的反应条件可以明显提高聚合酶链式反应扩增效率，但是血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区的5对引物并没有全部扩增出特异性产物(见图4，5)。进一步优化反应体系，添加不同浓度的增强剂DMSO，结果发现反应体系中添加5%或10%DMSO会导致非特性扩增产物的生成(图6)，添加2%DMSO则有助于提高聚合酶链式反应扩增效率(见图4E和H泳道，图5B泳道)。2%DMSO足以减弱DNA模板二级结构的影响、有效地提高聚合酶链式反应扩增效率，也便于热启动酶的延伸，其他研究者的结果和本文的研究结果有一致性^[28-30]。但是图4显示，通过97 ℃高温预变性使DNA模板充分解链、退火温度提高至60 ℃便能够获得引物F1、B2特异性扩增产物时，添加DMSO反而会抑制聚合酶链式反应扩增，说明添加的DMSO可能影响到引物的解链温度和聚合酶的活性，故DNA模板鸟嘌呤和胞嘧啶含量的不同对增强剂DMSO的依赖会有差异。当模板DNA鸟嘌呤和胞嘧啶含量存在差异时需要采用不同的、优化的聚合酶链式反应扩增条件和扩增体系。

总之，研究中所得到的参数主要适合实验选定的血清淀粉样蛋白A转录激活因子目的基因，针对其他的DNA模板聚合酶链式反应扩增可使用这种扩增方案或摸索不同的最佳扩增条件和反应体系。

基金资助：本课题为国家自然科学基金(90606008)，山西省自然科学基金(2006011110)，高等学校博士学科点专项科研基金(20111417110003)，山西省研究生优秀创新项目(20113063)，山西医科大学校青年基金(02201007)和331科技培植基金计划(201234)。
作者贡献：第一作者实施实验撰写成文，通讯作者审核并对文章负责，第二、三、四、五作者参与部分实验。
利益冲突：课题未涉及任何厂家及相关雇主或其他经济组织直接或间接地经济或利益的资助。
伦理要求：没有与相关伦理道德冲突的内容。
作者声明：文章为原创作品，数据准确，内容不涉及泄密，无一稿两投，无抄袭，无内容剽窃，无作者署名争议，无与他人课题以及专利技术的争执，内容真实，文责自负。

提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率

Improving PCR efficiency in the promoter region of serum amyloid A-activating transcription factor

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