有氧运动与黑枸黄酮干预酒精性肝损伤模型小鼠炎性因子的变化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0370

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (32): 5197-5202.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0370

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有氧运动与黑枸黄酮干预酒精性肝损伤模型小鼠炎性因子的变化

李娣1，陈锐1，陈嘉勤1，郑核2，周柏存1，毛海峰1，3，陈伊琳1，屈红林1，3，陈伟1，彭琪1，罗赤苗2

1湖南师范大学体适能与运动康复湖南省重点实验室，湖南省长沙市 410012；2邵阳市中心医院，湖南省邵阳市 422000；3宜春学院，江西省宜春市 336000

收稿日期:2018-04-18 出版日期:2018-11-18 发布日期:2018-11-18
通讯作者: 陈嘉勤，博士，教授，湖南师范大学体适能与运动康复湖南省重点实验室，湖南省长沙市 410012
作者简介:李娣，女，1992年生，湖南省邵阳市人，汉族，2018年湖南师范大学毕业，硕士，主要从事慢病与运动干预研究。
基金资助:
湖南省自然科学基金项目(2016JJ2084)；湖南省卫生厅科研计划课题(B2015-166)

Effect of the combination of aerobic exercise and flavonoids from Lycium ruthenicum Murr on the inflammatory cytokine levels in a mouse model of alcoholic liver injury

Li Di1, Chen Rui1, Chen Jia-qin1, Zheng He2, Zhou Bai-cun1, Mao Hai-feng1, 3, Chen Yi-lin1, Qu Hong-lin1, 3, Chen Wei1, Peng Qi1,Luo Chi-miao2

1Key Laboratory of Physical Fitness and Exercise Rehabilitation of Hunan Province, Hunan Normal University, Changsha 410012, Hunan Province, China; 2Central Hospital of Shaoyang, Shaoyang 422000, Hunan Province, China; 3Yichun University, Yichun 336000, Jiangxi Province, China

Received:2018-04-18 Online:2018-11-18 Published:2018-11-18
Contact: Chen Jia-qin, PhD, Professor, Key Laboratory of Physical Fitness and Exercise Rehabilitation of Hunan Province, Hunan Normal University, Changsha 410012, Hunan Province, China
About author:Li Di, Master, Key Laboratory of Physical Fitness and Exercise Rehabilitation of Hunan Province, Hunan Normal University, Changsha 410012, Hunan Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Hunan Province, No. 2016JJ2084; the Science Research Program of Health Department of Hunan Province, No. B2015-166

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
黑枸黄酮：是以黑果枸杞为原料制备的纯天然植物提取物，主要分布于中国青海、甘肃等地区的一种野生药用植物资源，安全可靠且无毒副作用。在免疫调节，降血脂、血糖等方面具有较广的应用价值。
酒精性肝损伤：是由长期大量饮酒造成的肝脏损伤，可诱发酒精性脂肪肝、酒精性肝纤维化及肝硬化等一系列损伤类疾病。在中国，酒精性肝病已经成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病类型。

摘要
背景：目前，针对酒精性肝损伤的治疗仍未得以较好的解决，研究发现黑果枸杞提取物在免疫调节，降血脂、血糖，抗氧化，心血管疾病的预防及治疗，肿瘤治疗等方面具有较广的应用价值。
目的：验证有氧运动联合黑果枸杞黄酮对酒精性肝损伤的干预效果并分享抗炎性的损伤机制。
方法：40只健康雄性昆明(KM)小鼠构建酒精性肝损伤模型，随机分为模型组、黑枸黄酮组、有氧运动组和有氧运动联合黑枸黄酮组。各干预组于建模成功后第1天开始进行有氧运动和黑枸黄酮灌胃干预。6周干预后，小鼠禁食过夜，随后分离出肝组织。苏木精-伊红染色、组织病理评分；生物化学分析法检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和总胆红素含量；实时荧光定量(Realtime-PCR)技术检测肝组织和血液中肿瘤坏死因子α、核转录因子κB、白细胞介素6及白细胞介素10 mRNA表达水平。
结果与结论：①苏木精-伊红染色和组织病理变化：模型小鼠肝索结构排列紊乱、小叶结构损坏严重、胞质疏松内充满大小不一的脂肪空泡并伴有炎性细胞浸润；有氧运动组、黑枸黄酮组的小鼠肝组织破坏有不同程度的改善(P < 0.05)；有氧运动联合黑枸黄酮组小鼠肝细胞坏死和脂肪蓄积得以改善，炎细胞浸润明显减少 (P < 0.01)；②血液生化：有氧运动联合黑枸黄酮组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素水平较模型组显著降低(P < 0.01)，有氧运动组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素水平也有所下降(P < 0.05)；③Real-time PCR 检测结果：3个干预组炎性细胞因子肿瘤坏死因子α、核转录因子κB及白细胞介素6在肝组织和血液中表达均明显低于模型组(P < 0.05)，其中有氧运动联合黑枸黄酮组各炎性细胞因子的表达水平最低(P < 0.01)；干预组白细胞介素10表达显著高于模型组；并且肿瘤坏死因子α、核转录因子κB、白细胞介素6和白细胞介素10 在肝组织和血液中的表达呈正相关；④结果说明，有氧运动、黑枸黄酮能有效降低炎性细胞因子的表达。作为一种微创性早期检测手段，推测以血浆中炎性因子的循环RNA检测可以作为酒精性肝损伤筛查诊断、观察及预后监测中一个重要标志物。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0002-0461-3862(李娣)

关键词: 黑果枸杞黄酮, 组织构建, 酒精性肝损伤, 有氧运动, 炎性细胞因子, 循环血RNA

Abstract:

BACKGROUND: There is still a lack of an effective treatment method for alcoholic liver injury. Extracts from Lycium ruthenicum Murr have been shown to play a role in immunoregulation, reducing blood lipid and glucose, antioxidation, prevention and treatment of cardiovascular disease and tumor.
OBJECTIVE: To investigate the effect of aerobic exercise combined with flavonoids from Lycium ruthenicum Murr on alcoholic liver injury and its anti-inflammatory mechanism.
METHODS: Forty healthy male Kunming mice were used to construct alcoholic liver injury models. The rat models were randomly divided into model, flavonoids, aerobic exercise and aerobic exercise + flavonoids from Lyceum ruthenicum Murr (combination) groups. Aerobic exercise and intragastrical administration of flavonoids from Lyceum ruthenicum Murr were given at 1 day after modeling for 6 weeks. Afterwards, the mice were fasted overnight and then the liver tissues were removed. Hematoxylin-eosin staining and histopathological scoring were conducted. The serum contents of glutamic pyruvic transaminase, glutamic oxaloacetic transaminase and total bilirubin were tested by biochemical analysis, and the mRNA expression levels of tumor necrosis factor α, nuclear factor κB, interleukin 6 and interleukin 10 in the liver tissues and blood were determined by real-time PCR.
RESULTS AND CONCLUSION: Hematoxylin-eosin staining and histopathological changes: in the model group, the hepatic cord arranged in disorder, hepatic lobules were damaged severely, and there were abundant uneven fat vacuoles and inflammatory cells in the cytoplasm. The damage degree of liver tissues was significantly lowered in the flavonoids and aerobic exercise groups (P < 0.05). The necrotic hepatocytes, fat vacuoles and inflammatory cell infiltration were significantly decreased in the combination group (P < 0.01). Compared with the model group, the serum contents of glutamic pyruvic transaminase, glutamic oxaloacetic transaminase and total bilirubin in the combination (P < 0.01) and aerobic exercise (P < 0.05) groups were significantly reduced. Real-time PCR results: compared with the model group, the mRNA expression levels of tumor necrosis factor α, nuclear factor κB, interleukin 6 in the liver tissues and blood in the three treatment groups were significantly reduced (P < 0.05), especially in the combination group (P < 0.01), and the mRNA expression level of interleukin 10 was significantly increased. Our findings manifest that aerobic exercise and flavonoids from Lycium ruthenicum Murr can effectively reduce the expression levels of inflammatory cytokines. As a minimally invasive early detection method, circulating RNA detection of plasma inflammatory factors is an important marker in the screen, observation and prognosis of alcoholic liver injury.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Hepatitis, Alcoholic, Lycium, Cytokines, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

李娣，陈锐，陈嘉勤，郑核，周柏存，毛海峰，陈伊琳，屈红林，陈伟，彭琪，罗赤苗 . 有氧运动与黑枸黄酮干预酒精性肝损伤模型小鼠炎性因子的变化[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(32): 5197-5202.

Li Di1, Chen Rui1, Chen Jia-qin1, Zheng He2, Zhou Bai-cun1, Mao Hai-feng1, 3, Chen Yi-lin1, Qu Hong-lin1, 3, Chen Wei1, Peng Qi1,Luo Chi-miao2. Effect of the combination of aerobic exercise and flavonoids from Lycium ruthenicum Murr on the inflammatory cytokine levels in a mouse model of alcoholic liver injury[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(32): 5197-5202.

图/表（结果） 2

2.1 实验动物数量分析实验选用KM小鼠40只，建模过程中各小鼠均无意外死亡情况发生。

2.2 一般情况随着肝损伤程度的加深，模型组小鼠出现行动迟缓、食欲减退、皮毛暗淡无光易脱落、精神萎靡、体质量增长缓慢等变化；有氧运动组、黑枸黄酮组小鼠比模型组情况稍好，活动、饮食、体质量增长较为正常、皮毛柔顺有光泽，精神状态较好；有氧运动联合黑枸黄酮组小鼠较模型组和单纯干预组恢复最佳，以上不良症状明显减轻，且在跑台运动全过程中均能坚持到结束。

2.3 肝组织形态学观察结果受试小鼠肝脏的病理改变以肝细胞脂肪变性为主(表2)。其中模型组小鼠肝小叶界限模糊，部分细胞的胞核消失，肝细胞肿胀且胞质疏松，肝索排列紊乱，脏器内可见脂肪变性和部分细胞坏死，充满大小不一的脂肪空泡且伴有炎性细胞浸润(图1A)。黑枸黄

酮组、有氧运动组小鼠脂肪变性程度和炎性浸润等相对减弱(图1B、C)。有氧运动联合黑枸黄酮组肝小叶结构趋于完整，肝索呈放射状排列，肝细胞坏死和脂肪蓄积得以改善，炎性细胞浸润明显减少，相比与模型组其病理改变程度明显减轻(图1D)。模型组与各干预组比较，呈现明显的肝脏损伤,脂肪变性评分经统计学检验，各组之间差异有显著性意义(P < 0.01，表3)。

2.4 血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素的变化从表4中可以看出，模型组小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶及总胆红素浓度最高，有氧运动组血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶及总胆红素水平较模型组降低明显，差异有显著性意义(P < 0.05)，黑枸黄酮组、有氧运动联合黑枸黄酮组血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶及总胆红素水平与模型组比较差异有显著性意义(P < 0.01)。

2.5 核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10 mRNA在肝组织和血液中的表达表5显示，模型组小鼠核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6 mRNA的表达量最高，白细胞介素10 mRNA的表达量最低。各单纯干预组较模型组相比，均可使小鼠肝组织中核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6 mRNA表达显著下降，白细胞介素10 mRNA表达显著上升(P < 0.01；P < 0.05)，其中有氧运动组的作用与黑枸黄酮组的作用相类似；联合干预组对比模型组显示，各因子的表达量均有变化，差异有非常显著性意义(P < 0.01)，且联合干预组较之于单纯干预组，其在肝组织的表达也具有相关统计学意义(P < 0.05，P < 0.01)。

与模型组比较，一定强度的有氧运动可使小鼠血液中的肿瘤坏死因子α mRNA表达有所下降(P < 0.05)，白细胞介素6 mRNA表达更为明显(P < 0.01)；而灌服等剂量的黑枸黄酮后，肿瘤坏死因子α、白细胞介素6 mRNA也有所改善(P < 0.05)；各单纯干预组和联合干预组相比，联合干预下各细胞因子mRNA在小鼠血液中的表达差异也有显著性意义(P < 0.05)。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点实验于2016年3月至2017年3月在湖南师范大学体育学院动物实验室及邵阳中心医院实验室完成。

1.3 材料实验选用6-8周龄雄性KM小鼠40只，体质量18-22 g，适应性喂养1周。将建模成功后的KM小鼠随机分成模型组、黑枸黄酮组、有氧运动组和有氧运动联合黑枸黄酮组4组，分笼饲养，每笼10只。保持23-25 ℃的室内温度、40%-60%的相对湿度，国家标准啮齿类动物饲料饲养，自由饮食。实验动物和饲料均由湖南省斯莱克景达实验动物中心提供，许可证号SCXK(湘)2003-003。黑果枸杞由青海诺木洪农场提供。

1.4 实验方法

1.4.1 动物模型构建参照关光玉等^[2]所采用的酒精性脂肪肝造模方法加以改进，自行构建慢性酒精性肝损伤模型。具体操作：购入小鼠适应性喂养1周后，每天下午 14：30-16：30灌服含体积分数50%乙醇的谷酒王10 μL/g，并在1周内逐渐增加至20 μL/g；对照组灌服等体积的蒸馏水，连续灌胃6周构建酒精性肝损伤动物模型。

建模期间，体外观察发现小鼠食欲、精神状态逐渐变差，毛色无光泽易脱落，不喜活动。苏木精-伊红染色显示，小鼠肝脏病理变化有脂肪变性、空泡样变化且伴有大量炎性细胞浸润等。生化检测小鼠血清内肝损伤的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素表达量明显升高，表明肝内细胞有炎症产生，由此可推断该实验小鼠酒精性肝损伤模型构建成功。

1.4.2 运动方案及给药有氧运动采用跑台训练(速度：10 m/min，坡度：0°)，第1-3天适应性跑步30 min，第4-6天每天增加10 min，递增至60 min，保持此运动强度，持续6周，每周训练6 d。采用改进的超声波与微波等高效提取工艺，并分离纯化黑果枸杞果实中黄酮等主要活性成分。黑枸黄酮组和有氧运动联合黑枸黄酮组小鼠，建模成功第1天后给予黑果黄酮灌胃(200 mg/kg溶于生理盐水 0.5 mL^[3])，1次/d，每周6 d，共6周。

1.4.3 行为学观察建模成功后每天观察小鼠生活情况，所有动物每隔2 d称体质量记录，观察并记录动物的活动情况、食欲、毛色、精神状态、体质量、死亡情况等。

1.4.4 样品采集与处理 6周干预后，各组小鼠禁食过夜，腹腔内注射麻醉(60 mg/kg戊巴比妥钠)，摘眼球取血并于 5 mL离心管内静置后，500×g、4 ℃离心10 min，谨慎吸取上层血清500 μL，分装至各离心管并-20 ℃冷冻保存。取腹部正中切口，剖开胸腹腔，小心快速取出肝组织，切取直径5 mm³置于1 mL Trizol中-20 ℃冷冻保存，切取直径8 mm³肝组织用100 g/L多聚甲醛(0.1 mol/L，pH=7.4)固定，剩余肝组织分装于10 mL离心管中-80 ℃保存。

1.4.5 血清学相关指标的检测血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和总胆红素浓度用生物化学分析法(分光光度法)检测，仪器购于北京瑞利分析仪器公司(型号：UV-9200)，试剂盒购于南京建成生物工程研究所(批号：20161012)，均按试剂盒说明书操作。

1.4.6 病理学观察将已固定肝组织脱水，石蜡包埋，切片，进行常规苏木精-伊红染色，光学显微镜(×200)下观察肝损伤组织病理学变化情况。分级标准：0级表示肝细胞内脂滴散在，稀少，基本正常，评分为0分；Ⅰ级表示肝细胞脂滴量不超过1/4，评分为1分；Ⅱ级表示肝细胞脂滴量不超过1/2，评分为2分；Ⅲ级表示肝细胞脂滴量不超过3/4，评分为3分；Ⅳ表示肝组织几乎被脂滴代替，评分为4分。

1.4.7 Real-time PCR技术检测核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及白细胞介素10的表达

(1)肝组织总RNA提取：将置于1 mL Trizol中的小鼠肝组织，匀浆器进行彻底匀浆，运用trizol法提取肝组织总RNA并纯化^[4]，紫外分光光度法测定总RNA浓度和纯度。

(2)血液总RNA提取：采用血液样品总RNA抽提试剂盒(GenePharma^TM磁珠法总RNA提取试剂盒)，通过磁珠法提取血液总RNA，提取步骤按照试剂盒说明书操作。

(3)反转录及Real-time PCR：反转录反应条件：①42 ℃ 5 min，4 ℃ 5 s；②37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，4 ℃ 5 s；按照说明书将RNA反转录为cDNA。

根据Gene Bank核酸数据库中各因子cDNA序列，核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10基因引物均购买、设计合成于上海生工生物工程技术服务有限公司。RT-PCR仪器：ABI 7900 HT，试剂：SYBR^® Premix Ex Taq™Ⅱ(Takara)试剂盒。根据针对引物的预实验设计反应程序：95 ℃ 30 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40个循环。将各样本值代入公式计算其相对表达量，表达量=2^-^??Ct，??Ct=[(样本Ct-样本内参Ct)-(校正Ct-校正内参Ct)]。引物合成序列见表1：

表1 qRT-PCR引物序列

Table 1 Primer sequences for qRT-PCR

基因		引物序列(5'-3')
核转录因子κB	Up stream	CAG GTC CAC TGT CTG CCT CT
	Down stream	GGA AGG ATG TCT CCA CAC CA
肿瘤坏死因子α	Up stream	CAC CAC CAT CAA GGA CTC AA
	Down stream	GAG ACA GAG GCA ACC TGA CC
白细胞介素6	Up stream	CGG AGA GGA GAC TTC ACA GAG
	Down stream	CAT TTC CAC GAT TTC CCA GA
白细胞介素10	Up stream	TGC ACT ACC AAA GCC ACA AG
	Down stream	TGA TCC TCA TGC CAG TCA GT
GAPDH	Up stream	GTT TCC TCG TCC CGT AGA CA
	Down stream	AAT CTC CAC TTT GCC ACT GC

表注：GAPDH为看家基因。

1.5 主要观察指标 ①小鼠一般情况；②肝组织形态学观察结果；③血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素的变化；④核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10 mRNA在肝组织和血液中的表达。

1.6 统计学分析采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计量数据资料均采用x(_)±s表示，数值间比较采用单因素方差分析，两两比较采用双侧t 检验，方差不齐时采用多个独立样本非参数检验，以P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

3.1 KM小鼠酒精性肝损伤造模的结果分析酒精性肝损伤的主要原因是由于酒精摄入过量。该研究参考关光玉等^[2]酒精性脂肪肝建模方法，利用酒精灌胃6周建立了雄性小鼠酒精性肝损伤模型。建模期间，体外观察发现小鼠食欲、精神状态逐渐变差，毛色无光泽易脱落，不喜活动。建模6周后，随机选取正常小鼠与模型小鼠6只，取动物肝脏进行病理组织学检查，血清进行生化检测。苏木精-伊红染色显示，正常小鼠肝脏组织结构、细胞大小基本正常，胞质均匀；模型组小鼠肝脏病理变化有脂肪变性、空泡样变化且伴有大量炎性细胞浸润等。另一方面，酒精灌胃可引起小鼠血清内肝损伤的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素表达量明显升高，表明肝内细胞有炎症产生，由此可推断该实验小鼠酒精性肝损伤模型构建成功。

3.2 炎性细胞因子对酒精性肝损伤的影响 RNA-seq技术分析是一种研究酒精肝基因表达的新方法，有研究表明小鼠的非干预组与运动干预组在许多基因的mRNA水平表达有差异^[5]，其中核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10这些炎性细胞因子与肝损伤的发生和发展过程有着密切的关系。核转录因子κB转录因子在诱导许多细胞因子和免疫效应基因中发挥核心作用，被认为是炎症治疗的关键靶点^[4^，^6]。当细胞发生酒精性肝损伤时，急剧升高的内毒素激活kupffer细胞，活化核转录因子κB进入细胞核，诱导促炎细胞因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等的上调^[7-8]。而肿瘤坏死因子α和白细胞介素6作为细胞外刺激信号，又可激活核转录因子κB，进一步放大炎症反应。促炎细胞因子在肝损伤的炎性发病机制的起始和增殖中起关键作用。白细胞介素10是一种有效的抗炎因子，其在体内的一个关键功能就是限制炎症反应。作为对刺激物的反应，与其抑制单核细胞和巨噬细胞产生的功能一致，白细胞介素10可抑制核转录因子κB激活，也能使肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等基因表达下调^[9]。

故实验以RNA-seq技术为基础，分析了核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10 mRNA在肝组织和血液中表达的相关性。提示6周运动和药物干预，下调了核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6 mRNA的表达，上调白细胞介素10 mRNA的表达，减弱了小鼠炎症反应，可能与其上下游信号分子的结合减少有关。同时核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10 mRNA在肝组织和血液的表达均呈正相关，这一结果在一定程度上提示酒精性肝病患者的血液标本也许可以替代其肝组织检测相应炎性细胞因子mRNA的表达，这将显著提高个体化分子检测的方便性。当然，具体还需进一步实验来验证。

3.3 运动和药物干预酒精性肝损伤的效果分析在成功建模之后，作者采用中等强度的有氧运动(跑台训练)和经口灌胃等剂量的黑枸黄酮提取物进行干预处理，小鼠肝组织中炎性细胞浸润、脂肪空泡堆积和肝脏内细胞坏死等病理情况得到有效改善，提示运动和药物干预对由酒精引起的肝脏损伤具有保护作用。运动干预可使体内的炎症细胞因子的合成以及其他炎症指标的下调，缓解机体炎症反应^[10-13]。由于运动可以直接或者间接影响生物体的心输出量、血流对血管壁的剪应力、肾脏代谢、体液pH值、机体温度、激素水平等，对于药物疗效与药物代谢过程也起到良好的促进作用^[14]。

研究发现积极参与身体活动的个体与不积极参与身体活动个体比较，前者血浆中白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α、CRP等较低^[12^，^15-16]，而白细胞介素10和脂联素提高^[13]。提示科学的运动训练可对机体炎症反应起到预防作用。现代医学进行了大量研究，进一步发现黑果枸杞营养价值和药理活性等方面的多种新用途^[17-18]。张轲等^[19]通过研究发现，黑果枸杞可有效提升机体免疫力及应对各应激能力，促使抑炎因子白细胞介素10的表达、抑制促炎因子肿瘤坏死因子α等的分泌，从而保护因运动训练过量引发的肾脏缺血再灌注导致的损伤。朱敬生等^[20]采用药物输注以及有氧运动联合药物干预，可通过调节相应因子的表达，明显抑制小鼠皮下肿瘤的增殖，同时促进H22肝肿瘤细胞的凋亡，其中后者联合干预效果更为显著。

在该实验中，通过对比各单纯干预组和联合干预组的分析可见，有氧运动虽可在一定程度上缓解小鼠酒精性肝损伤，但相比有氧运动与黑枸黄酮联合干预所产生的效果有较大的差别。结果表明，6周的联合干预处理，小鼠肝组织的病理改变程度相比各单纯的干预明显减轻；小鼠肝和血液中的炎性因子核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和白细胞介素10的表达均有显著的变化，说明有氧运动联合黑枸黄酮可干预核转录因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的过表达，减弱核转录因子κB对肿瘤坏死因子α、白细胞介素6合成分泌的调节作用，同时增加白细胞介素10的表达。其机制可能与运动提高了机体免疫能力，促进体内免疫细胞的产生并加速了血液循环^[21]，促使血液中的免疫细胞和黑枸黄酮进入炎症组织部位，共同发挥其抗炎作用，从而达到抑制肝损伤的效果。

结论：实验结果显示6周的中等强度有氧运动训练和黑枸黄酮的连续灌胃干预，对小鼠酒精性肝损伤后的肝脏有较好的抗炎性修复作用，且二者联合干预的效应较单纯的单因素干预效应明显。其机制可能与这两种干预因素通过下调促炎因子及上调抗炎因子表达对酒精性肝损伤起到保护作用，确切的作用机制还有待进一步的深入研究。同时，该研究还发现，作为炎性通道的细胞因子在肝组织和血液中的表达呈现正相关，因而，可通过RNA在血浆中的表达水平，作为一种无创性早期检测手段，为酒精性肝损伤类疾病的诊断标志性分子的研究及其临床应用提供一种新的思路和途径。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

有氧运动与黑枸黄酮干预酒精性肝损伤模型小鼠炎性因子的变化

Effect of the combination of aerobic exercise and flavonoids from Lycium ruthenicum Murr on the inflammatory cytokine levels in a mouse model of alcoholic liver injury

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