甲基化测序和转录组整合分析黄韧带肥厚的分子机制

doi:10.12307/2025.291

中国组织工程研究 ›› 2025, Vol. 29 ›› Issue (5): 1013-1020.doi: 10.12307/2025.291

• 肌肉肌腱韧带组织构建 tissue construction of the muscle, tendon and ligament • 上一篇下一篇

甲基化测序和转录组整合分析黄韧带肥厚的分子机制

何杨1，唐步源1，卢昌怀2

1湖南中医药大学，湖南省长沙市 410208；2常德市第一中医医院骨伤科脊柱二病区，湖南省常德市 415000

收稿日期:2024-01-12 接受日期:2024-03-13 出版日期:2025-02-18 发布日期:2024-06-04
通讯作者: 卢昌怀，博士，主任医师，常德市第一中医医院骨伤科脊柱二病区，湖南省常德市 415000
作者简介:何杨，男，1998年生，湖南省常德市人，汉族，湖南中医药大学在读硕士，医师，主要从事脊柱退变与微创研究。
基金资助:
湖南省自然科学基金面上项目(2021JJ30049)，项目负责人：卢昌怀；湖南省研究生科研创新项目(2022CX201)，项目负责人：何杨

Molecular mechanisms of ligament flavum hypertrophy: analysis based on methylation sequencing and transcriptome integration

He Yang1, Tang Buyuan1, Lu Changhuai2

1Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, Hunan Province, China; 2No. 2 Spinal Ward, Department of Orthopedics and Traumatology, the First Hospital of Traditional Chinese Medicine in Changde, Changde 415000, Hunan Province, China

Received:2024-01-12 Accepted:2024-03-13 Online:2025-02-18 Published:2024-06-04
Contact: Lu Changhuai, MD, Chief physician, No. 2 Spinal Ward, Department of Orthopedics and Traumatology, the First Hospital of Traditional Chinese Medicine in Changde, Changde 415000, Hunan Province, China
About author:He Yang, Master candidate, Physician, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, Hunan Province, China
Supported by:
Natural Science Foundation of Hunan Province (General Program), No. 2021JJ30049 (to LCH); Postgraduate Research Innovation Project of Hunan Province, No. 2022CX201 (to HY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
DNA甲基化：是广泛存在于真核生物体内的生物学过程和表观遗传修饰，是储存表观遗传信息的最主要形式，也被认为是表观遗传的核心，与许多生物学现象如衰老、疾病、肿瘤发生和死亡等有密切联系，通过检测正常和肥厚黄韧带组织中甲基化水平差异的位点，可以初步判断调控黄韧带肥厚的潜在基因。
黄韧带肥厚：是在人体衰老过程中黄韧带出现的一种退行性改变，主要表现为黄韧带弹性纤维降解、胶原纤维大量增生、纤维结构改变，最终发生纤维化和瘢痕形成，受老化、机械应力和活动水平等多项因素的影响，是引起腰椎管狭窄的决定性因素之一。

背景：黄韧带肥厚是腰椎管狭窄症的最主要病因，是多个病理因素共同作用的结果，目前黄韧带肥厚的分子机制、作用通路尚不明确，缺乏有效的非手术治疗方案。
目的：使用甲基化测序和转录组整合分析方法，研究黄韧带肥厚发生发展的分子机制。
方法：收集5个正常黄韧带组织和5个肥厚黄韧带组织，采用甲基化测序记录异常甲基化位点和甲基化状态，采用转录组整合分析记录异常表达的基因，取二者交集中甲基化水平与表达水平负相关的基因。采用GO和KEGG富集分析研究差异基因表达的主要功能通路和分子功能。使用PPI互作分析筛选调控黄韧带肥厚的关键基因。
结果与结论：对两组黄韧带行甲基化测序发现高甲基化位点37 173个，低甲基化位点10 583个，转录组整合分析发现异常表达基因720个，其中463个上调基因、257个下调基因。两者重叠基因383个，其中192个基因甲基化水平与表达水平负相关。GO功能通路分析结果显示分子功能富集到10个条目，细胞组分富集到15个条目，生物学途径富集到30个条目。KEGG通路富集分析结果显示，192个基因主要富集到PI3K-Akt信号通路、Rap1信号通路、Focal adhesion信号通路、信号通路等9条通路。PPI互作分析筛选出PPARG、EGFR、CNR1、TNF和COL11A2 5个基因可能是调控黄韧带肥厚的关键基因，主要通过调控组织纤维化、细胞增殖分化、炎症因子水平、胶原纤维表达水平等途径影响黄韧带肥厚的发生发展。

https://orcid.org/0009-0009-9167-7757(何杨)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 黄韧带肥厚, 甲基化测序, 转录组整合分析, 腰椎管狭窄症, DNA甲基化

Abstract: BACKGROUND: Ligament flavum hypertrophy is the main cause of lumbar spinal stenosis, which is the result of multiple pathological factors working together. Currently, the molecular mechanism and pathway of action of ligament flavum hypertrophy are unclear, and there is a lack of effective non-surgical treatment options.
OBJECTIVE: To investigate the molecular mechanisms of ligament flavum hypertrophy using methylation sequencing and transcriptome integration analysis methods.
METHODS: Five normal ligament flavum tissue samples and five hypertrophic ligament flavum tissue samples were collected. Abnormal methylation sites and methylation status were recorded by methylation sequencing and abnormally expressed genes were recorded by transcriptome integration analysis.
The genes that showed a negative correlation between methylation level and expression level at the intersection of the two were selected. GO and KEGG enrichment analyses were used to study the major functional pathways and molecular functions of differentially expressed genes. Key genes regulating ligamentum flavum hypertrophy were screened using protein-protein interaction analysis.
RESULTS AND CONCLUSION: Methylation sequencing of the two groups of the ligament flavum showed 37 173 hypermethylation sites and 10 583 low methylation sites. Transcriptome integration analysis found 720 abnormally expressed genes, of which 463 were upregulated and 257 were down-regulated. There were 383 overlapping genes, of which 192 genes showed a negative correlation between the methylation level and the expression level. GO functional pathway analysis results showed that molecular function was enriched to 10 terms, cellular component was enriched to 15 terms, and biological process (BP) was enriched to 30 terms. The results of KEGG pathway enrichment analysis showed that 192 genes were mainly enriched to 9 pathways, such as PI3K-Akt signaling pathway, Rap1 signaling pathway, and focal adhesion signaling pathway. The protein-protein interaction analysis identified five genes, PPARG, EGFR, CNR1, TNF and COL11A2, which may be the key genes that regulate ligamentum flavum hypertrophy, and they can influence the occurrence and development of ligamentum flavum hypertrophy mainly through the regulation of tissue fibrosis, cell proliferation and differentiation, inflammatory factor levels, and collagen fiber expression.

Key words: Iigamentum flavum hypertrophy, methylation sequencing, transcriptome integration analysis, lumbar spinal stenosis, DNA methylation

中图分类号:

何杨, 唐步源, 卢昌怀. 甲基化测序和转录组整合分析黄韧带肥厚的分子机制[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(5): 1013-1020.

He Yang, Tang Buyuan, Lu Changhuai. Molecular mechanisms of ligament flavum hypertrophy: analysis based on methylation sequencing and transcriptome integration [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2025, 29(5): 1013-1020.

图/表（结果） 13

2.1 甲基化位点原始数据质控及处理
2.1.1 过滤以及标化甲基化数据使用BMIQ(Beta Mlxture Quantile dilation)方法对检测后得到的甲基化位点进行beta值的标准化处理，用beta值的密度图来看图上是否有异常样本(图1)，用箱式图(图2)来验证数据标化的情况。结果显示，样本都正常，标化后样本数据整齐。
2.1.2 甲基化数据主成分分析与奇异值分解通过降维度以及奇异值分解来看数据集中变异情况以及它的重要组成部分的来源(图3，4)，可以看出如果用全部样本，黄韧带肥厚组与黄韧带正常组之间距离不大，而且它们的主要差异并非来源于组别。为了得到差异来源于组别，选取了比较集中在一起的样本B1，B3，B5以及A1，A3，A5，再做主成分分析和奇异值分解(图5，6)，可以看出当只选取B1，B3，B5与A1，A3，A5样本时，组别距离大，差异来源主要是组别差异。
2.2 甲基化测序结果使用P < 0.01筛选出47 756个差异的探针位点，其中高甲基化位点37 173个，低甲基化位点10 583个。使用火山图展示差异结果，见图7。
2.3 转录组整合分析结果筛选阈值为P < 0.01和|logFC |> 1。一共找到720个差异表达基因，其中463个上调基因，257个下调基因。使用火山图展示差异结果，见图8。
2.4 差异甲基化基因与差异表达基因四象分析及富集通路分析两者之间重叠的基因有383个，其中192个基因的mRNA表达水平与其甲基化水平负相关，见图9。针对重叠基因中呈负相关的192个基因进行GO、KEGG功能通路富集分析，筛选条件为P < 0.05。GO功能分析结果表明，GO的分子功能(molecular function，MF)富集到10个条目，细胞组分(cellular component，CC)富集到15个条目，生物学途径(biological process，BP)富集到30个条目，见图10。KEGG通路富集分析结果表明，192个基因主要富集到PI3K-Akt信号通路、Rap1信号通路、Focal adhesion信号通路、FoxO 信号通路等9条通路，见图11。
2.5 PPI互作分析筛选调控黄韧带肥厚的关键基因。通过Strings数据库进行PPI互作网络分析，将degree≥ 2的基因导入 Cystocape进行可视化，见图12。进一步采用degree法、Stress法和MCC法计算出Top=10的基因并可视化分析，其中有5个重叠基因(PPARG、EGFR、CNR1、TNF和COL11A2 )，这5个基因可能是调控黄韧带肥厚的关键基因，见图13。

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引言

材料方法

1.1 设计生物信息学分析。
1.2 时间及地点实验于2021年9月至2022年9月在湖南中医药大学生物学实验室完成。
1.3 材料选取常德市第一中医医院骨伤科脊柱二病区5例腰椎间盘突出伴黄韧带肥厚患者及5例单纯腰椎间盘突出不伴黄韧带肥厚患者在内镜下行腰椎间盘髓核切除手术取出的黄韧带组织(术前影像学检查鉴定黄韧带肥厚程度，术后取标本使用显微镜观察黄韧带肥厚情况及其他病理改变)，分别为黄韧带肥厚组和黄韧带正常组，见表1。排除腰椎管狭窄症、腰椎滑脱、黄韧带骨化的患者。腰椎黄韧带肥厚诊断标准，正常组≤ 4 mm，肥厚组> 4 mm[11]。

实验方案中使用的肥厚及正常的黄韧带组织均来自于常德市第一中医医院脊柱二科患者椎间孔镜手术中采集，已取得患者知情同意，经过伦理委员会审核(医院伦理批件号2021-018-01)，不涉及任何伦理问题。
1.4 方法
1.4.1 过滤以及标化甲基化数据用亚硫酸氢钠测序法和双探针实时定量PCR法检测两组黄韧带组织的甲基化位点和甲基化水平。使用R语言中的ChAMP包加载EPIC的原始idat文件，然后按以下条件过滤样本：①detP > 0.01；②在≥5%样本中beadcount < 3的探针；③包含单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)的位点；④映射多个位置的非特异性探针；⑤X，Y染色体上的甲基化探针，之后使用BMIQ(Beta Mlxture Quantile dilation)方法进行beta值的标准化处理。
1.4.2 甲基化数据主成分分析与奇异值分解为了探究样本间的相似度以及保证后续差异分析的差异性来自样本，通过降维度以及奇异值分解来看数据集中变异情况，以及它的重要组成部分的来源。
1.4.3 甲基化位点差异分析使用R语言的limma包建立线性模型从而计算出差异甲基化位点的P值，采用Benjamini & Hocheberg方法进行多重检验纠正P值筛选出差异甲基化位点。
1.4.4 转录组整合分析在NBCI中下载GSE113212表达矩阵，使用了R语言的limma包计算正常与肥厚黄韧带组织中表达基因的P值和logFC，并采用Benjamini & Hocheberg方法进行多重检验纠正P值筛选出失调基因(差异表达基因)。
1.4.5 整合分析对相对甲基化水平差异的基因和相对mRNA表达差异的基因取交集，针对其中两者呈负相关的基因使用R语言的clusterProfiler包进行GO、KEGG功能通路富集分析，筛选出基因的主要富集通路。
1.4.6 PPI互作分析针对相对甲基化水平和相对mRNA表达水平呈负相关的基因进行PPI互作分析，筛选调控黄韧带肥厚的关键基因。
1.5 主要观察指标观察记录正常和肥厚黄韧带组织中甲基化水平存在差异的基因位点，统计整合数据库中正常和肥厚黄韧带中表达水平存在差异的基因。

讨论

黄韧带是脊柱后柱的重要组成部分，其包绕硬脊膜的后外侧，连接各椎体，起保护脊髓神经的作用[12]。黄韧带肥厚是腰椎管狭窄发生的重要因素之一，而肥厚和纤维化是黄韧带退变的主要病理基础。此前的研究中已经提出黄韧带退变的分子机制有炎症细胞因子、基质金属蛋白酶、微小mRNA、纤维化相关因子等[13]。该研究中KEGG功能通路富集分析和GO分子功能分析结果提示黄韧带增生肥厚是由多个不同功能分子、多个生物途径和多通路调节的过程，通过甲基化测序和转录整合分析进一步明确黄韧带肥厚的分子机制，对于早期诊断黄韧带肥厚和预见腰椎管狭窄的发生有极大价值。
对肥厚和正常的黄韧带组织共同进行了甲基化测序和转录组整合分析，在保证其差异来源于组别的情况下，筛选出重叠的差异甲基化位点与差异表达基因共383个，针对其中甲基化水平和表达水平负相关的192个基因进行GO功能分析和KEGG通路分析。KEGG通路富分析结果表明，192个基因主要富集在PI3K-Akt信号通路、Rap1信号通路、Focal adhesion信号通路、FoxO信号通路等9条通路，其中在PI3K-Akt 信号通路富集最为丰富，PI3K-Akt参与调控细胞分化、增殖、凋亡等多个重要生物过程，已有研究指出该信号通路可以显著加速细胞周期过程以促进细胞增殖[14]，其他研究者也证明了此通路在黄韧带肥厚的发生发展中发挥显著作用[15]。Rap1信号通路、Focal adhesion信号通路则是主要控制以细胞黏附为主的多个生物进程，而细胞黏附在细胞增殖分化、基因表达、细胞存活等生物过程中起重要作用。FoxO信号通路则主要与细胞凋亡与周期控制相关，中枢调节机制也与Akt相关，因此这一部分通路主要与细胞增殖分化、细胞周期相关。而KEGG分析结果中的内源性大麻素信号通路已被报道对多个脏器的炎性反应起调节作用[16]，同时有文献报道内源性大麻素在心纤维化、肝硬化及肾脏纤维化过程中起抗纤维化作用[17-18]。根据KEGG富集分析结果可以推断，黄韧带肥厚的生理过程主要与黄韧带细胞的增殖分化、细胞周期延长、炎症反应水平以及纤维化水平密切相关。
对PPI互作网络中的基因采用3种方法计算，取其前10的基因分析，得到了5个重叠基因，结果表明PPARG、EGFR、CNR1、TNF和COL11A2 这5个基因可能是调控黄韧带肥厚的关键基因。
过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor，PPAR)家族是影响脂肪细胞分化和脂质代谢的主要核内转录受体，在其3种亚型(α、β、γ)中PPARγ即PPARG是目前唯一所知在脂肪组织中高表达的转录因子，在调节脂肪细胞分化中起重要作用，PPARG可以降低脂肪组织中一些细胞因子的表达从而促进脂肪生长，其中包括转化生长因子β，也有研究将其直接作为抗纤维治疗的靶点[19]。在此前的文章中有研究者已经提出了转化生长因子β1诱导黄韧带增生的机制，并进一步探究对结缔组织生长因子表达的影响[20]。因此，可以推测PPARG基因低表达时，对转化生长因子β表达的抑制作用降低，转化生长因子β高表达进而诱导了黄韧带的增生。
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一种专一的酪氨酸激酶受体，是人体中功能最广泛的信号单位之一，可以与多种相关的生长因子结合，在调节细胞的分化、增殖、存活、发育过程中起重要作用[21]。转化生长因子与表皮生长因子一样可以与EGFR结合，使自身磷酸化，进而激活细胞内酪氨酸激酶活性，经过一系列催化作用，启动并维持细胞生长、增殖等一系列过程[22]。EGFR在肥厚的黄韧带中异常表达，推测EGFR通过与类似的生长因子结合启动黄韧带细胞的增殖和分化以调控黄韧带增生的过程。
内源性大麻素与内源性大麻素1受体(cannabinoid receptor 1，CNR1)及相关酶共同组成内源性大麻素系统。此前针对CNR1的研究发现其抑制炎性细胞分泌细胞因子，减轻炎性反应，并且抑制血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶等表达，并可以降解胶原纤维，在多种脏器纤维化疾病中发挥抗纤维化作用[19]。弹性纤维减少、胶原纤维大量增生是增生黄韧带的共同特征[20]，已有研究表明抑制炎性细胞因子及基质金属蛋白酶的表达可以抗黄韧带肥大[23]，因此应用内源性大麻素激活CNR系统可能在黄韧带退变过程中发挥抗纤维化作用，从而抑制黄韧带增生肥厚，延缓退变程度，以降低腰椎管狭窄症的发病率。课题组下一步就内源性大麻素系统调控黄韧带肥厚的机制为题展开研究，拟采用细胞实验，在传代培养的黄韧带细胞中分别加入CNR1和CNR2的激动剂与拮抗剂，再采用qRT-PCR法、ELISA法和Western blot法检测各基因及炎症因子的表达情况，以期证实内源性大麻素系统参与调控黄韧带肥厚的分子机制。
肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)是一种炎性细胞因子，在以往的研究中被用于反映组织当前炎症水平[24]。目前普遍认为，炎性反应造成的纤维化和瘢痕形成是黄韧带增生的主要病理机制，而炎症细胞因子已被认为是黄韧带纤维化最重要的条件之一[25]。早期研究发现，TNFα在肥厚黄韧带患者中的表达水平明显高于单纯腰椎间盘突出的患者[26]。炎症细胞因子中TNFα及白细胞介素1β可以通过促进基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶6的表达参与调控黄韧带增生的过程，并提出抗炎治疗可能是黄韧带增生的潜在治疗方案。TNFα与白细胞介素1β还可以促进其他细胞因子的释放，产生连锁反应，扩大炎症影响[27]，因此TNF在黄韧带增生过程中起重要作用，并可进一步研究其在抗炎治疗中的应用。
胶原蛋白Ⅺ编码基因-α2链(collagen type XI alpha 2 chain，COL11A2)是编码Ⅺ型胶原蛋白的2条α链之一，既往的研究多指向其在椎间盘变性中的意义，包括椎间盘纤维环和髓核中的Ⅺ型胶原蛋白在不同胶原分子之间联系中有重要作用，有助于稳定胶原纤维网络[28]。研究指出，该基因与椎间盘的发育相关[29-30]。目前尚未有文献明确指出COL11A2的表达与黄韧带肥厚之间的联系，该研究发现肥厚的黄韧带组织中COL11A2异常表达，其机制尚不明确，因此推测在黄韧带退变过程中COL11A2高表达产生Ⅺ型胶原蛋白，参与调节胶原组织增多并沉积的过程，能加强各胶原分子之间的联系，在胶原纤维排列组合的过程中发挥作用。有文献指出COL11A2在软骨中大量表达，其突变会产生大量Ⅱ型胶原蛋白[31]，YOSHIDA等[32]在形态学及免疫组化观察中发现Ⅱ型胶原增殖引起的纤维软骨改变是黄韧带肥大的发病机制之一。因此，COL11A2可能通过产生Ⅱ型、Ⅺ型胶原参与黄韧带肥大的病理过程。
综上所述，黄韧带肥厚的主要病理过程与EGFR基因表达相关的细胞增殖、分化过程相关，而PPARG、TNF基因与相关通路通过参与调控炎症因子水平影响黄韧带肥厚的慢性炎症过程，COL11A2与CNR1则与黄韧带肥厚过程中弹性纤维降解、胶原纤维增生相关，CNR1的表达有抗组织纤维化、抑制炎症因子等重要作用。
缺陷与不足：该研究虽已通过对正常及肥厚的黄韧带组织进行甲基化测序和转录组整合分析，预测出5个与调控黄韧带肥厚可能存在密切联系的关键基因，即PPARG、EGFR、CNR1、TNF和COL11A2，但尚未进一步研究验证肥厚黄韧带组织中这5个基因对黄韧带肥厚的影响。作者团队拟收集10例黄韧带肥厚组织样本和10例黄韧带正常组织样本，采用qMSP和RT-PCR法检测肥厚黄韧带组织和正常黄韧带组织中5个基因(PPARG、EGFR、CNR1、TNF和COL11A2)的甲基化水平和mRNA表达量变化。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

甲基化测序和转录组整合分析黄韧带肥厚的分子机制

Molecular mechanisms of ligament flavum hypertrophy: analysis based on methylation sequencing and transcriptome integration

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[1]	郭松, 李新华, 晏美俊, 刘彦斌, 刘中, 李克威, 刘鹏程, 张备挺, 付强. 脊柱内镜杂交技术与单轴脊柱内镜治疗双侧症状腰椎管狭窄症的减压效果对比[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(3): 517-523.
[2]	刘江, 张晗硕, 丁逸苇, 蒋强, 李土胜, 黄杰, 杨广南, 丁宇. 棘突间固定辅助内镜下椎间融合治疗重度腰椎管狭窄症的有限元分析[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(24): 3789-3795.
[3]	张景贺, 窦永峰, 许世东, 邢建强, 刘栋, 田霖, 戴国华. 有限元模拟单通道分体内镜下双侧腰椎管减压对腰椎生物力学的影响[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(12): 1849-1854.
[4]	王建业, 刘鑫, 田霖, 孙宁, 李岳飞, 毕经纬, 刘昌震, 孙兆忠. 构建腰椎三维模型测量腰椎管减压术区神经组织及骨性结构的位置关系[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(4): 539-546.
[5]	安河朋, 刘振腾, 李立新, 许雅芳, 樊国峰. 脑源性神经营养因子干预腰椎管狭窄症大鼠神经元活性、疼痛及相关因子的变化[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(26): 4120-4125.
[6]	肖士鹏, 郭辰, 李士春, 李钦亮, 许勇, 徐帅. 老年腰椎管狭窄症矢状位腰椎-骨盆序列的解析与重建[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(18): 2903-2909.
[7]	张晗硕, 丁宇, 蒋强, 卢正操, 练诗林, 李土胜. 脊柱内镜下椎板开窗减压与单侧入路双侧减压治疗腰椎管狭窄症的生物力学稳定性及有限元分析[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(13): 1981-1986.
[8]	田洋, 唐超, 廖烨晖, 唐强, 马飞, 钟德君. CT和MRI在腰椎管狭窄症中测量椎管面积的一致性和可重复性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(24): 3882-3887.
[9]	张春霖, 尚利杰, 严旭, 曹争明, 邵成龙, 冯阳. 后路双牵开摆动式椎间盘镜下单纯融合器置入治疗腰椎管狭窄并失稳症的中长期评估 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(3): 335-341.
[10]	姜树东, 任龙喜, 郭函, 梁得华, 张彤童, 刘正. 单侧减压机器人辅助微创经椎间孔腰椎间融合治疗影像学双侧腰椎管狭窄[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(24): 3797-3802.
[11]	何达，赵经纬，刘波，田伟. 长节段与短节段固定治疗伴有轻度退行性侧弯腰椎管狭窄症的比较[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(36): 5811-5817.
[12]	黄胱曦，刘炎，陈文治. 腰椎管狭窄症患者腰椎关节突关节退行性变化的MRI影像评估[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(24): 3852-3856.
[13]	肖永川，梁川东，许泽川，李育刚，常山. 腰椎棘突间撑开装置Coflex治疗退行性腰椎管狭窄症：研究进展及有限元分析[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(24): 3862-3867.
[14]	刘云涛，吐尔洪江•阿布都热西提，王艺，马良，朱松青，金格勒. 手术顺序是否为腰椎手术后切口感染的危险因素[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(31): 4955-4958.
[15]	李春亮，郭强，秦凤，严文琪，朱海勇，王凯. 全椎板切除脊柱内固定治疗老年退行性腰椎管狭窄症患者的腰腿疼痛：自身对照临床试验方案[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(15): 2345-2349.