骨痹通消颗粒干预激素性股骨头坏死小鼠模型的作用及机制

doi:10.12307/2024.285

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (16): 2599-2604.doi: 10.12307/2024.285

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骨痹通消颗粒干预激素性股骨头坏死小鼠模型的作用及机制

方祥1，2，周正新3，朱磊3，芮仞1，许茂玉1，朱彩玉1

1安徽中医药大学，安徽省合肥市 230038；2安徽医科大学庚玖临床学院，安徽省合肥市 230041；3安徽中医药大学第一附属医院骨科，安徽省合肥市 230038

收稿日期:2022-08-26 接受日期:2023-03-21 出版日期:2024-06-08 发布日期:2023-07-31
通讯作者: 周正新，博士，主任中医师，安徽中医药大学第一附属医院骨科，安徽省合肥市 230038
作者简介:方祥，男，1993年生，安徽省肥东县人，汉族，2020年安徽中医药大学毕业，硕士，主治医师，主要从事中西医结合治疗骨关节疾病的研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(81373664)，项目负责人：周正新；安徽省自然科学基金面上项目(KJ2020A0403)，项目负责人：朱磊

Effect of Gubitongxiao granules in a mouse model of steroid-induced necrosis of the femoral head

Fang Xiang1, 2, Zhou Zhengxin3, Zhu Lei3, Rui Ren1, Xu Maoyu1, Zhu Caiyu1

1Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230038, Anhui Province, China; 2Gengjiu Clinical College of Anhui Medical University, Hefei 230041, Anhui Province, China; 3Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230038, Anhui Province, China

Received:2022-08-26 Accepted:2023-03-21 Online:2024-06-08 Published:2023-07-31
Contact: Zhou Zhengxin, MD, Chief physician, Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230038, Anhui Province, China
About author:Fang Xiang, Master, Attending physician, Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230038, Anhui Province, China; Gengjiu Clinical College of Anhui Medical University, Hefei 230041, Anhui Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81373664 (to ZZX); the Natural Science Foundation of Anhui Province (General Program), No. KJ2020A0403 (to ZL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

激素性股骨头坏死：长期或大剂量应用糖皮质激素，致使股骨头内血供受损，骨细胞变性坏死，最终发展为股骨头塌陷变形，被公认为是非创伤性股骨头坏死最主要的病因。
骨痹通消颗粒：安徽省中医院周正新教授总结国家级名老中医丁锷教授临床治疗股骨头坏死的经验及学说思想，在骨蚀宁方基础上祛除虫类药物，降低毒副作用，增加活血化瘀及补肾壮骨药物研制出治疗股骨头坏死的协定方。

背景：研究发现，糖皮质激素可抑制甲状旁腺素1受体(parathyroid hormone typeⅠreceptor，PTH1R)/蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)信号轴中关键基因表达，干扰骨髓间充质干细胞向成骨、成血管方向分化，导致骨内血供、骨组织结构的破坏。课题组前期研究结果表明骨痹通消颗粒可诱导血管形成、抑制成骨细胞凋亡，对激素性股骨头坏死具有一定的防治作用，其机制尚未明确。

目的：观察骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死模型小鼠的治疗效果，从PTH1R/PKA信号轴探讨其作用机制。
方法：采取腹腔注射脂多糖和臀肌注射醋酸泼尼松龙建立激素性股骨头坏死模型，将造模成功的60只C57小鼠随机分成模型组、骨痹通消颗粒组和通络生骨胶囊组，每组20只，另选取12只健康小鼠作为正常对照组，分别灌胃相应药物12周后，苏木精-伊红染色观察股骨头组织形态学变化，酶联免疫吸附测定法检测血清中骨碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽、甲状旁腺激素、骨钙素、碱性磷酸酶水平，Western blot和RT-qPCR法检测股骨头组织中PTH1R、PKA、MEF2、SOST、GNAS的蛋白及基因表达水平。

结果与结论：骨痹通消颗粒可能通过降低小鼠血清甲状旁腺激素水平，抑制PTH1R/PKA信号轴的激活，进一步上调SOST、MEF2的表达，提高骨碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽、骨钙素、碱性磷酸酶水平，从而改善股骨头坏死情况，与通络生骨胶囊干预效果相当，推测骨痹通消颗粒可能通过调节PTH1R/PKA信号轴发挥防治激素性股骨头坏死的作用。

https://orcid.org/0000-0001-7560-5870(方祥)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨痹通消颗粒, 通络生骨胶囊, 激素性股骨头坏死, PTH1R, PKA, 甲状旁腺激素

Abstract: BACKGROUND: Glucocorticoids can inhibit the expression of hub genes in the parathyroid hormone type I receptor (PTH1R)/protein kinase A (PKA) signaling axis and interfere with the osteogenic and angiogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells, leading to the disruption of blood supply in bone and bone tissue structures. Previous studies of the research team showed that Gubitongxiao granules can induce blood vessel formation and inhibit osteoblast apoptosis, which has a certain effect on the prevention and treatment of steroid-induced femoral head necrosis.
OBJECTIVE: To observe the therapeutic effect of Gubitongxiao granules in a mouse model of steroid-induced femoral head necrosis, and to explore its mechanism from the PTH1R/PKA signaling axis.
METHODS: An animal model of steroid-induced necrosis of the femoral head was established by intraperitoneal injection of lipopolysaccharide and gluteal muscle injection of prednisolone acetate. After identification by nuclear magnetic resonance method, 60 mice that were successfully modeled were divided into model group, Gubitongxiao granule group and Tongluo Shenggu capsule group, with 20 mice in each group. Another 12 normal mice were used as control group. The corresponding groups were intragastrically given the corresponding drugs for 12 weeks, and then the samples were taken under anesthesia. Histomorphology of femoral head samples was observed by hematoxylin-eosin staining. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the serum levels of bone alkaline phosphatase, type I amino-terminal extension peptide, parathyroid hormone, osteocalcin and alkaline phosphatase. Western blot and RT-qPCR were used to detect PTH1R, PKA, myocyte enhancer factor 2, sclerostin and guanylate-binding protein activity-stimulating peptide at protein and gene expression levels, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: Gubitongxiao granules may reduce the serum PTH level in mice, inhibit the activation of the PTH1R/PKA signal axis, further up-regulate the protein expressions of sclerostin and myocyte enhancer factor 2, and increase the levels of bone alkaline phosphatase, type I amino-terminal extension peptide, osteocalcin and alkaline phosphatase in mice, thus improving femoral head necrosis, which is comparable to the intervention effect of Tongluo Shenggu capsules. It is speculated that Gubitongxiao granules may prevent and treating hormonal femoral head necrosis by regulating the PTH1R/PKA signaling axis.

Key words: Gubitongxiao granule, Tongluo Shenggu capsule, steroid-induced necrosis of the femoral head, PTH1R, PKA, parathyroid hormone

中图分类号:

方祥, 周正新, 朱磊, 芮仞, 许茂玉, 朱彩玉. 骨痹通消颗粒干预激素性股骨头坏死小鼠模型的作用及机制[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(16): 2599-2604.

Fang Xiang, Zhou Zhengxin, Zhu Lei, Rui Ren, Xu Maoyu, Zhu Caiyu. Effect of Gubitongxiao granules in a mouse model of steroid-induced necrosis of the femoral head[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(16): 2599-2604.

图/表（结果） 5

2.1 激素性股骨头坏死小鼠模型的建立实验动物造模后进行影像学核磁共振检查，核磁共振射片横断面中箭头所示小鼠左侧髋部高信号为股骨头坏死区，见图1。

2.2 股骨头组织形态学与正常对照组比较，模型组小鼠股骨头组织软骨细胞与成骨细胞数量均减少，骨细胞萎缩，细胞核出现固缩，骨小梁排布稀疏，数量较少，部分骨小梁明显变细，甚至断裂，多见空骨陷窝；与模型组比较，骨痹通消颗粒组和通络生骨胶囊组小鼠股骨头组织软骨细胞与成骨细胞数量明显增加，骨细胞形态正常，骨小梁排列较为规则，空骨陷窝较少，见图2。

2.3 生物学指标 ELISA结果显示，与正常对照组比较，模型组血清甲状旁腺激素水平升高，而血清骨碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽、骨钙素、碱性磷酸酶水平降低，差异均有显著性意义(P < 0.01)。与模型组比较，骨痹通消颗粒组和通络生骨胶囊组血清甲状旁腺激素水平下降，血清骨碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽、骨钙素、碱性磷酸酶水平升高，差异均有显著性意义(P < 0.01)。骨痹通消颗粒组与通络生骨胶囊组各项指标升高或降低效果相当(P > 0.05)，见图3。

2.4 PTH1R/PKA信号轴相关指标的蛋白与基因水平 Western blot和RT-qPCR检测结果显示，与正常对照组比较，模型组的PTH1R、PKA、GNAS蛋白及基因表达水平显著升高，SOST和MEF2蛋白和基因表达水平显著下降，差异均有显著性意义(P < 0.01)；与模型组比较，骨痹通消颗粒组和通络生骨胶囊组PTH1R、PKA、GNAS蛋白及基因表达水平显著下降，MEF2和SOST蛋白和基因表达水平显著升高，差异均有显著性意义(P < 0.01，P < 0.05)；骨痹通消颗粒组与通络生骨胶囊组各指标升高和下降效果相当(P > 0.05)，见图4，5。

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引言

激素性股骨头坏死是由于长期或大剂量糖皮质激素使用，致股骨头内的血供受损，骨细胞变性坏死[1]，最终发展为股骨头塌陷变形，被公认为是非创伤性股骨头坏死最主要的病因[2]。该疾病发病隐匿，早期因症状并不显著，往往不能引起患者的重视，疾病发展至中晚期时出现关节疼痛、活动受限，严重影响患者的活动能力和生活质量[3-4]，因此，激素性股骨头坏死成为骨科致残率较高的疑难症之一[5]。根据最新的诊疗指南，主要根据其临床症状选用增加纤溶、降脂、抗凝、扩血管等药物联合治疗，虽临床效果肯定，亦无法逆转或延缓股骨头塌陷变形[6]。病情进展至晚期，需行手术治疗，费用贵、创伤大、并发症多等缺点不可避免。因此，仍需探寻更安全、有效的治疗方法。近年来，有研究者发现中医药治疗股骨头坏死疗效明确，可有效缓解疼痛，提高生活质量[7-8]。
甲状旁腺素1受体(parathyroid hormone typeⅠ receptor，PTH1R)是成骨细胞、骨细胞和肾小管上皮细胞表面外显子基因编码的G蛋白偶联受体，PTH1R分泌可致蛋白激酶A (protein kinase A，PKA)信号轴激活，过度激活的PKA信号通路增加成骨细胞数量，促进骨形成的同时可提高破骨细胞的活性，促进骨吸收，最终发挥调节骨重塑的作用[9]。研究表明，硬化蛋白(sclerostin，SOST)在成人骨细胞中的表达由肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor-2，MEF2)介导，因此，MEF2与SOST是骨细胞中表达所必需的因素[10]。而长期应用糖皮质激素的患者成骨细胞增殖受到抑制，释放至血清中的碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽和骨钙素降低，这也表明了激素性股骨头坏的发生机制可能与骨代谢异常密切相关[11-14]。
骨痹通消颗粒是安徽中医药大学第一附属医院周正新教授总结国家级名老中医丁锷教授临床治疗股骨头坏死的经验及学说思想[15]，在骨蚀宁方基础上祛除虫类药物，降低毒副作用，增加活血化瘀及补肾壮骨药物研制出治疗股骨头坏死的协定方。课题组前期研究结果表明，骨痹通消颗粒在改善血流灌注、抗血小板凝集等微循环方面的功效显著，从而整体调节机体的内环境，减轻患者的术后疼痛与并发症[16-17]，并通过体内动物实验发现骨痹通消颗粒减少细胞凋亡与改善骨空陷窝效果明显[18]。相关研究表明，激素性股骨头坏死模型动物体内甲状旁腺激素水平明显高于正常值[19]，且甲状旁腺激素可以影响股骨头骨代谢，促进破骨细胞溶骨，但关于其发挥作用机制的相关通路研究较少。因此，该实验采用具有活血化瘀、补益肝肾作用的骨痹通消颗粒为干预手段，同时选取目前临床公认对激素性股骨头坏死治疗具有显著疗效的通络生骨胶囊作为对照组[20-21]，以造模成功的激素性股骨头坏死小鼠为实验对象，从甲状旁腺激素作用于骨代谢机制进行研究，通过检测骨性标志物和PTH1R/PKA信号轴相关指标的表达水平进一步探讨骨痹通消颗粒防治激素性股骨头坏死的作用机制。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物(C57小鼠)实验。
1.2 时间及地点实验于2019年4-12月在安徽中医药大学第一附属医院8楼动物房及新安楼国家重点实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物选择体质量为20-23 g、7周龄的SPF级C57雌性小鼠90只，购于安徽医科大学实验动物中心，小鼠生产许可证号：scxk(皖)2017-001。实验通过安徽中医药大学第一附属医院实验动物中心伦理审批(动物伦理批号为AHUCM-mice-2020020)。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2 药物骨痹通消颗粒(四川新绿色药业科技发展股份有限公司)组方：川芎10 g、丹参15 g、赤芍12 g、当归10 g、淫羊藿10 g、补骨脂15 g、何首乌15 g、肉桂6 g、土鳖虫10 g、川断10 g、甘草6 g。中药购于安徽中医药大学第一附属医院中药房。通络生骨胶囊，规格：每粒装0.5 g，批号：Z20040001，厂家：浙江弘盛药业有限公司。
1.3.3 主要试剂与仪器醋酸泼尼松龙注射液(批号：H33020824，浙江仙琚制药股份有限公司)；脂多糖(批号：L2630，Sigma)；RIPA裂解液(批号：P0013B，Beyotime)；Beta-Actin(Mouse Monoclonal Antibody)(1∶1 000)(批号：TA-09，Zsbio)；Goat anti-Mouse IgG(H+L)(批号：ZB-2305，Zsbio)；Goat anti-Rabbit IgG(H+L)(批号：ZB-2301，Zsbio)；Eppendorf 5424R台式高速冷冻离心机(Eppendorf生命科学公司)；754PC分光光度计(上海菁华科技仪器公司)；iQTM5多重实时荧光定量PCR仪(Biorad公司)；JY300C通用电泳仪电源及mini 型蛋白转膜仪(北京君意东方电泳设备有限公司)；NMTC-100水平旋转仪(泰州诺米医疗科技有限公司)。
1.4 方法
1.4.1 造模选择90只7周龄C57小鼠适应性喂养1周，随机选取78只小鼠用于造模，予以腹腔注射脂多糖(10 μg/kg)，连续2 d后重复相同剂量，左侧臀肌注射醋酸泼尼松龙注射液(100 mg/kg)，连续3 d后重复相同剂量[22-23]。将剩余的12只小鼠设为正常对照组，同时间段腹腔及臀肌注射等剂量的生理盐水。末次注射醋酸泼尼松龙注射液后4周，通过核磁共振判断60只小鼠造模成功[24]。
1.4.2 干预方法将造模成功的60只小鼠随机分为模型组、骨痹通消颗粒组和通络生骨胶囊组，每组20只。参照《药理实验方法学》中人与小鼠体表面积换算[25]，骨痹通消颗粒组按剂量为3.0 g/(kg·d)灌胃骨痹通消颗粒，通络生骨胶囊组按剂量为2.40 g/(kg·d)灌胃通络生骨胶囊，模型组与正常对照组灌胃等剂量生理盐水，1次/d，连续灌胃12周。于第12周末予以3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉后取材。
1.4.3 生物学指标每组随机抽取10只小鼠，断尾取血2 mL，室温静置1 h，离心20 min(转速：2 000-3 000 r/min)，收集上清，保存。按ELISA试剂盒说明书操作，测定450 nm波长处的吸光度值，计算小鼠血清中甲状旁腺激素、骨碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽、骨钙素、碱性磷酸酶水平。
1.4.4 苏木精-伊红染色观察组织学形态变化取小鼠股骨头组织1块(体积约为1 cm3)于多聚甲醛液中固定，清洗后予以脱钙、脱水、包埋、切片与染色处理，染色后用中性树胶封固，显微镜观察股骨头骨组织的形态学改变。
1.4.5 PTH1R/PKA信号轴相关指标的蛋白水平取小鼠股骨头样本100 mg，加入RIPA细胞裂解液1 mL，离心后提取蛋白；将蛋白煮变性后保存备用。经过灌胶、加样电泳、转膜(β-Actin转膜50 min；PTH1R转膜50 min；PKA转膜50 min；GNAS转膜50 min；MEF2转膜50 min；SOST转膜40 min)；转膜结束后用5% 脱脂奶粉室温摇床上摇动封闭2 h；参考一抗的说明书稀释至合适的比例(1∶2 000)，4 ℃缓慢摇动孵育过夜；PBST洗3次，参考二抗的说明书用PBST稀释至适当浓度(1∶10 000)室温孵育1 h，用PBST在室温下摇床上洗3次，每次10 min；最后利用试剂盒通过化学发光，显影，定影的步骤测得蛋白的表达水平。

1.4.6 PTH1R/PKA信号轴相关指标的基因水平液氮速冻小鼠股骨头样本100 mg后将其研磨成粉末并加入1 mL的Trizol溶液，匀浆后提取RNA并测量其浓度和纯度；每组取质量为1 µg RNA反转录成cDNA；以β-Actin为内参，按照实验指导书分子克隆进行基因表达水平的检测。PCR的反应条件：预变性温度95 ℃，时间60 s；变性温度为95 ℃，时间20 s，退火温度是60 ℃，时间60 s，40个循环。利用2-ΔΔCt计算相对表达量。引物序列见表1。

1.5 主要观察指标 ①股骨头组织学形态；②血清骨碱性磷酸酶、Ⅰ型氨基端延长肽、甲状旁腺激素、骨钙素、碱性磷酸酶水平；③股骨头组织PTH1R、PKA、MEF2、SOST和GNAS基因和蛋白表达。
1.6 统计学分析采用SPSS 23.0软件对数据进行处理，实验数据采用x±s表示，数据行正态分布和方差齐性检验，组间比较用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行 Tamhane’s t检验。文章统计学方法已经通过安徽中医药大学生物统计学专家审核。

讨论

激素性股骨头坏死属中医“骨蚀”“骨痹”范畴，其致病原因与缺乏文明的生活方式或过食肥甘、宿酒蓄毒、劳倦伤损等方面关系密切。中医认为气血对骨骼的滋养是骨骼维持正常形态和功能的关键，一旦瘀血阻滞，脉络不通，股骨头便失去气血滋养，必然坏死。肾主骨生髓，肾气亏虚，骨失所养，亦可发生坏死。因此目前公认的病机一是血瘀，二是肾虚，病程总体可分为瘀血期和修复期2个阶段。治疗股骨头缺血性坏死的基本原则是活血化瘀，补肾壮骨，瘀血期破瘀通络，修复期补肾活血。在“瘀去-新生-骨合”理论和“髓病理论”的支持及指导下[26-27]，骨痹通消颗粒选用具有活血化瘀、行气止痛的丹参、川芎、当归、赤芍和补肝肾、强筋骨作用的川断、何首乌，加以温肾助阳的淫羊藿、补骨脂，引火归元的肉桂，破血逐瘀通络之土鳖虫等组成，诸药合用，共奏补肾活血通络之功。
研究表明，糖皮质激素可直接与破骨细胞结合[28]，破骨细胞在组织中的存活时间延长、活性增加，导致股骨头出现骨代谢紊乱现象，重塑失衡，引起骨量减少以及骨稳态的破坏，最终导致股骨头塌陷。目前激素性股骨头坏死的发病机制尚未完全明确，学术界主流认同脂质代谢紊乱学说、血管内凝血学说、骨质疏松学说等[29]。有文献报道，骨碱性磷酸酶、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽和PTH1R/PKA信号轴在调控骨内平衡、维持骨骼完整等方面也发挥重要作用[30-33]，这表明激素性股骨头坏死的发生机制可能与PTH1R/PKA信号轴调节骨代谢密切相关。
甲状旁腺激素可以调控骨的合成与代谢、增加骨质的积累，使得骨皮质的厚度和骨小梁的数量进一步增加，进而达到增加骨量的目的[34]，在骨转换过程中发挥着重要的调节作用。袁普卫等[19]通过实验发现，长期使用糖皮质激素可诱导家兔体内甲状旁腺激素水平升高，破骨细胞存活时间延长，发生早期骨丢失，活血化瘀药物可降低家兔体内甲状旁腺激素水平，达到防治股骨头坏死的目的。骨碱性磷酸酶、碱性磷酸酶密切反映机体的骨骼代谢状况[35-36]，Ⅰ型前胶原氨基端延长肽和骨钙素由机体的成骨细胞合成分泌而来，根据水平高低可以反映成骨细胞活性，体现机体骨更新和转换的情况[37-38]。根据磁共振影像学及组织形态学表现，可见小鼠激素性股骨头坏死造模成功，给予活血化瘀、补益肝肾的中药复方治疗，结果可见骨痹通消颗粒组和通络生骨胶囊组骨小梁排布较好，空骨陷窝较少，血清甲状旁腺激素水平明显降低，血清骨碱性磷酸酶、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽和碱性磷酸酶、骨钙素水平明显升高，由此可见治疗组小鼠血清中成骨细胞活跃，骨形成占主导，股骨区皮质骨更新、转换快，骨量等进一步增加，可明显改善股骨头坏死情况。骨痹通消颗粒组和通络生骨胶囊组的生物学指标变化差异无显著性意义，说明两者在调节骨量生成和代谢方面效果相当。
在对骨量的调控上，目前有研究者认为甲状旁腺激素特异性结合骨细胞、成骨细胞表面的PTH1R，可激活该通路中细胞因子G蛋白α亚基Gs亚型，与其靶点结合传递信号下行，同时通路中MEF2的表达会进一步被抑制，激活的Gs/PKA信号通路也会抑制SOST的表达[39]。LEE等[40]通过实验发现，大剂量、连续性甲状旁腺激素也可通过激活Gs/PKA信号通路，增加破骨细胞生成，而GNAS基因过表达则会提高腺苷酸环化酶水平，从而调控成骨分化。该实验结果显示，经骨痹通消颗粒和通络生骨胶囊干预治疗后，PTH1R、PKA、GNAS蛋白和基因水平均下降，MEF2、SOST蛋白和基因水平均升高，结果提示2种药物可能对GNAS基因和蛋白的表达以及PTH1R/PKA信号轴具有抑制作用，从而促进成骨分化，提高成骨细胞活性，抑制破骨细胞功能，减少骨吸收，促进坏死组织的修复，而2种药物升高或者降低PTH1R/PKA信号轴相关指标差异无显著性意义，提示2种药物均可能通过调节PTH1R/PKA信号轴相关指标发挥其治疗作用，且效果相当。
此次研究结果表明骨痹通消颗粒可能通过降低激素性股骨头坏死小鼠血清甲状旁腺激素水平和升高血清骨碱性磷酸酶、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽和碱性磷酸酶、骨钙素水平，下调PTH1R/PKA信号轴的表达，上调MEF2、SOST的表达从而促进成骨细胞分化成熟，抑制破骨细胞功能，减少骨质破坏，促进骨的合成与恢复，从而达到防治激素性股骨头坏死的目的。
不足与展望：首先，该研究中的中药复方是基于骨痹痛消颗粒的整体实验研究，并未揭示复方有效成分及药物之间的相互作用；其次，该研究已初步证实骨痹痛消颗粒对糖皮质激素诱导的骨坏死小鼠股骨头破坏的修复作用，但其具体机制有待进一步研究；最后，由于客观条件的原因，骨痹痛消颗粒的临床疗效观察试验是令人满意的，但还需要进一步的客观指标来明确实际的临床效果，从而促进研究成果的实际转化，更好地为患者服务。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

骨痹通消颗粒干预激素性股骨头坏死小鼠模型的作用及机制

Effect of Gubitongxiao granules in a mouse model of steroid-induced necrosis of the femoral head

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