淋巴管内皮细胞来源外泌体促进周围神经损伤后的轴突再生

doi:10.12307/2023.748

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (33): 5314-5319.doi: 10.12307/2023.748

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淋巴管内皮细胞来源外泌体促进周围神经损伤后的轴突再生

黄金生1，张葛毅1，李森瑞1，李江南1，路来金2，周南1

1郑州大学第一附属医院骨科，河南省郑州市 450000；2吉林大学第一医院手足外科，吉林省长春市 130031

收稿日期:2022-10-31 接受日期:2022-12-12 出版日期:2023-11-28 发布日期:2023-03-30
通讯作者: 周南，博士，副教授，郑州大学第一附属医院骨科，河南省郑州市 450000
作者简介:黄金生，男，2001年生，河南省商水县人，汉族，郑州大学第一附属医院在读硕士，主要从事外泌体与周围神经损伤相关研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(82071388)，项目负责人：周南；中国博士后科学基金会面上项目(2019M660175)，项目负责人：周南；河南省优秀青年科学基金(212300410077)，项目负责人：周南

Lymphatic endothelial cells-derived exosomes promote axonal regeneration following peripheral nerve injury

Huang Jinsheng1, Zhang Geyi1, Li Senrui1, Li Jiangnan1, Lu Laijin2, Zhou Nan1

1Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450000, Henan Province, China; 2Department of Hand and Foot Surgery, First Hospital of Jilin University, Changchun 130031, Jilin Province, China

Received:2022-10-31 Accepted:2022-12-12 Online:2023-11-28 Published:2023-03-30
Contact: Zhou Nan, MD, Associate professor, Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450000, Henan Province, China
About author:Huang Jinsheng, Master candidate, Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450000, Henan Province, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, No. 82071388 (to ZN); China Postdoctoral Science Foundation Program, No. 2019M660175 (to ZN); Henan Provincial Excellent Youth Science Foundation, No. 212300410077 (to ZN)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

淋巴管内皮细胞：是构成淋巴管壁的主要结构，参与维持体液平衡、调节淋巴细胞再循环和机体免疫反应等生理过程。此外，淋巴管内皮细胞还在伤口愈合、淋巴管水肿和炎症扩散等生理病理过程中起重要作用。
外泌体：是一类直径为30-150 nm的细胞外囊泡，作为细胞间交流的重要载体携带各种细胞成分如蛋白质、RNA等，参与多种生理和病理过程。不同细胞分泌的外泌体具有一定的特异性，在神经系统疾病的修复治疗中起着重要的调控作用。

背景：研究表明淋巴管系统参与调控神经再生进程，外泌体具有细胞间通讯功能及多种生物学特性，由此可见淋巴管系统来源外泌体在周围神经损伤疾病治疗中具有巨大潜力。
目的：探讨淋巴管内皮细胞来源外泌体促进周围神经损伤后轴突再生的作用及机制。
方法：①体外通过EdU细胞增殖实验探究淋巴管内皮细胞来源外泌体对施万细胞增殖能力的影响。②24只雄性SD大鼠，随机分为3组(n=8)，即假手术组、周围神经损伤组及淋巴管内皮细胞来源外泌体治疗组，假手术组仅显露右侧坐骨神经，其余2组右侧坐骨神经挤压后分别在神经外膜下注射PBS及淋巴管内皮细胞来源外泌体，所有大鼠左侧坐骨神经均未做处理。术后28 d取各组大鼠双侧腓肠肌测量肌肉湿质量比，取右侧坐骨神经，通过苏木精-伊红染色及Masson染色评价坐骨神经组织病理学变化及轴突排列情况，采用免疫荧光染色分析轴突再生情况。

结果与结论：①与对照组相比，淋巴管内皮细胞来源外泌体显著增强了施万细胞的增殖能力，差异有显著性意义(P < 0.05)。②术后28 d，淋巴管内皮细胞来源外泌体治疗组肌肉湿质量比显著高于周围神经损伤组，差异有显著性意义(P < 0.05)；与周围神经损伤组相比，淋巴管内皮细胞来源外泌体治疗组轴突排列更加致密且有序，损伤所致轴突崩解和空泡变性现象较少；与周围神经损伤组相比，淋巴管内皮细胞来源外泌体治疗组NF200及 S100β荧光强度显著增高，差异有显著性意义(P < 0.05)。结果表明，淋巴管内皮细胞来源外泌体通过促进施万细胞的增殖，提高NF200及 S100β的蛋白表达来促进周围神经损伤后轴突再生。

https://orcid.org/0000-0001-9869-1409(周南)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 淋巴管内皮细胞, 外泌体, 施万细胞, 周围神经再生, 周围神经淋巴管

Abstract: BACKGROUND: The lymphatic system is involved in the regulation of nerve regeneration. Exosomes have intercellular communication functions and various biological characteristics. Exosomes derived from the lymphatic system have great potential in the treatment of peripheral nerve injury diseases.
OBJECTIVE: To investigate the role and mechanism of lymphatic endothelial cells-derived exosomes on axonal regeneration after peripheral nerve injury.
METHODS: (1) The effect of lymphatic endothelial cells-derived exosomes on the proliferation ability of Schwann cells was detected by EdU cell proliferation assay. (2) Twenty-four male SD rats were randomly divided into three groups with 8 rats in each group, including the sham operation group, peripheral nerve injury group and lymphatic endothelial cells-derived exosomes treatment group. The right sciatic nerves of rat models in the sham operation group were exposed without injury. For the rat models in the peripheral nerve injury group and lymphatic endothelial cells-derived exosomes treatment group, the right sciatic nerves were injected with PBS and lymphatic endothelial cells-derived exosomes under the epineurium of the nerve respectively following sciatic nerve crush. All left sciatic nerves of rats were not treated. The rats in each group were sacrificed 28 days following the operation. The bilateral gastrocnemius muscles were removed to measure the muscle wet-weight ratio. Right sciatic nerves were removed. Histopathological changes and axon arrangement of the sciatic nerve were evaluated by hematoxylin-eosin staining and Masson staining, and axonal regeneration was analyzed by immunofluorescence staining.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the control group, lymphatic endothelial cells-derived exosomes significantly enhanced the proliferation ability of Schwann cells, and the difference was statistically significant (P < 0.05). (2) At 28 days following the operation, the wet-weight ratio of muscles was significantly higher in the lymphatic endothelial cells-derived exosomes treatment group than that in the peripheral nerve injury group (P < 0.05). Axons in the lymphatic endothelial cells-derived exosomes treatment group were arranged more closely and orderly than those in the peripheral nerve injury group and the axon disintegration and vacuolation caused by injury were less. The NF200 and S100β fluorescence intensities in the lymphatic endothelial cells-derived exosomes treatment group were significantly higher than that in the peripheral nerve injury group, and the difference was statistically significant (P < 0.05). Our findings indicated that lymphatic endothelial cells-derived exosomes could enhance the proliferation ability of Schwann cells to promote axonal regeneration following peripheral nerve injury by elevating the protein expression of NF200 and S100β.

Key words: lymphatic endothelial cell, exosome, Schwann cell, peripheral nerve regeneration, peripheral nerve lymphatic vessel

中图分类号:

黄金生, 张葛毅, 李森瑞, 李江南, 路来金, 周南. 淋巴管内皮细胞来源外泌体促进周围神经损伤后的轴突再生[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(33): 5314-5319.

Huang Jinsheng, Zhang Geyi, Li Senrui, Li Jiangnan, Lu Laijin, Zhou Nan. Lymphatic endothelial cells-derived exosomes promote axonal regeneration following peripheral nerve injury[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(33): 5314-5319.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析参加实验的大鼠数量共30只，进入结果分析数量30只，中途无脱落。
2.2 淋巴管内皮细胞鉴定及LECs-EXO表征显微镜下显示淋巴管内皮细胞呈铺路石状贴壁生长，细胞形态不规则。免疫荧光图像示淋巴管内皮细胞特异性表达内皮细胞标志物vWF。透射电镜下观察LECs-EXO呈典型圆盘状双层膜结构，粒径分析结果示LECs-EXO平均粒径大小为90.06 nm，LECs-EXO平均Zeta电位为-10.21 mV，见图1。

2.3 LECs-EXO细胞摄取及对施万细胞增殖能力的影响 DiO标记LECs-EXO被用于研究施万细胞摄取LECs-EXO效率，DiO标记LECs-EXO与施万细胞孵育24 h后荧光图像示施万细胞胞质中均匀分布绿色荧光信号，表明LECs-EXO被施万细胞高效摄取。EdU细胞增殖实验用于评估LECs-EXO对施万细胞增殖能力的影响，实验结果显示：不同质量浓度(10，50，100 μg/mL)LECs-EXO处理24 h后EdU阳性细胞百分比分别为(50.67±1.53)%，(62.00±3.00)%，(63.67±2.08)%，均高于对照组(40.67±3.06)%，差异有显著性意义(P < 0.05)。上述结果表明，LECs-EXO可增强施万细胞的增殖能力，且这种促增殖能力具有浓度依赖性，当LECs-EXO为50 μg/mL时施万细胞的增殖能力显著增强，见图2。后续动物实验以此浓度继续研究LECs-EXO对周围神经损伤后轴突再生的影响。

2.4 LECs-EXO坐骨神经标记及对大鼠肌肉湿质量比和神经修复的影响 DiO标记LECs-EXO被用于研究EXO在坐骨神经内分布情况，荧光图像示：术后28 d坐骨神经切片中可见均匀分布绿色荧光，表明LECs-EXO有良好的神经相容性，且能长期存在于坐骨神经中。LECs-EXO治疗组肌肉湿质量比(0.71±0.03)显著高于周围神经损伤组(0.53±0.04)，差异有显著性意义(P < 0.05)，表明LECs-EXO可抑制坐骨神经损伤后腓肠肌萎缩。坐骨神经苏木精-伊红染色及Masson染色结果显示，LECs-EXO治疗组坐骨神经轴突更加致密，分布均匀且有序；周围神经损伤组坐骨神经轴突排列紊乱无序且可见大量空泡状变性，见图3。

2.5 LECs-EXO对于轴突再生及再髓鞘化的影响坐骨神经免疫荧光双重染色示：LECs-EXO治疗组NF200及S100β荧光强度(NF200：232 964±31 566；S100β：142 763±21 834)均显著高于周围神经损伤组(NF200：124 809±10 455；S100β：66 461±10 074)，差异有显著性意义(P < 0.05)，表明LECs-EXO在周围神经损伤后可促进施万细胞增殖及轴突再生，见图4。

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引言

周围神经损伤是临床常见疾病，可导致患者感觉、运动功能障碍，致残率高[1]。中枢神经淋巴系统行使多种生物学功能，如脑脊液引流、代谢废物排出、免疫监视和免疫反应调节[2]。相较中枢神经系统，现阶段对周围神经淋巴系统认识不充分。BOUVRÉE等[3]发现小鼠坐骨神经损伤后7 d淋巴管标志物LYVE1和Prox1表达水平显著升高，Prox1参与新生淋巴管形成，提示淋巴管在神经损伤后可消除神经组织水肿，促进轴突再生及功能恢复。FRUEH等[4]认为周围神经损伤后淋巴管功能障碍可致神经组织持续肿胀，造成神经功能损害；淋巴管再生对于周围神经损伤区域碎片清除至关重要，可有效减轻神经损伤早期组织肿胀及局部炎症反应，降低神经内纤维化风险，促进神经功能恢复。然而，周围神经淋巴管在周围神经损伤后对轴突再生的作用及机制尚不明确。
外泌体是细胞外囊泡的一种，存在于多种体液中，是细胞旁分泌的主要形式[5]。外泌体可搭载脂质、蛋白质、mRNA和miRNA等生物活性物质，在细胞间物质交换和信息传导中起重要作用[6]。外泌体因其细胞来源不同而具有多种特异性功能，可有效干预周围神经再生过程，包括加快轴突再生、减轻炎症反应、促进神经内血管再生以及改善神经再生微环境等[7]。当前研究多集中于干细胞来源外泌体，对其他类型细胞来源外泌体的研究较少。淋巴管内皮细胞是构成周围神经淋巴管壁的主要成分，参与体液平衡维持、淋巴细胞再循环和免疫反应调节等过程，而淋巴管内皮细胞来源外泌体(lymphatic endothelial cells derived exosomes，LECs-EXO)在其中可发挥重要作用[8]。该研究旨在探索LECs-EXO对周围神经损伤后施万细胞增殖和轴突再生的作用，为周围神经淋巴管通过外泌体途径调控周围神经损伤后再生提供新的理论依据。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计体外细胞学实验，组间比较采用单因素方差分析；体内动物实验，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。
1.2 时间及地点实验于2021年3月至2022年9月在郑州大学医学科学院国家重点实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 30只6-8周龄雄性SD大鼠(其中24只用于损伤模型构建，6只用于外泌体神经组织内标记)，体质量180-220 g，购自浙江维通利华实验动物技术有限公司，实验动物许可证号：SCXK(浙)2019-0001。
实验方案经郑州大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准，审批号为2020-KY-187。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2 实验细胞人淋巴管内皮细胞(上海赛百慷生物技术有限公司)，RSC96细胞(大鼠施万细胞，中国科学院细胞库)。
1.3.3 主要试剂及设备 DMEM、胎牛血清、双抗(青霉素/链霉素溶液)；0.25%胰蛋白酶(Gibco，美国)；无外泌体血清(SBI，美国)；96孔细胞培养板(Corning，美国)；超速离心机(Himac，日本)；透射电镜(Hitachi，日本)；纳米颗粒分析仪(ZetaView，德国)；DiO荧光探针(碧云天，中国)；100 kD孔径透析袋(源叶生物，中国)；EdU细胞增殖实验试剂盒(瑞博，中国)；戊巴比妥钠(科丰，中国)；OCT组织包埋剂(Leica，德国)；一抗：Anti-S100β Rabbit pAb、
Anti-NF200 Mouse mAb(Abcam，美国)；二抗：CY3标记山羊抗小鼠、FITC标记山羊抗兔、DAPI(塞维尔，中国)；正置荧光显微镜(Olympus，日本)；倒置相差显微镜(Olympus，日本)；共聚焦激光扫描显微镜(Zeiss，德国)；钛合金显微器械包(泗洪同辉医疗器械，江苏)；杜蒙特5号钳(Dumont，瑞士)；Hamilton微量注射器(Hamilton，瑞士)；33G微量注射器针头(Hamilton，瑞士)等。
1.4 实验方法
1.4.1 LECs-EXO提取与鉴定淋巴管内皮细胞(1×106个)培养于无外泌体血清配置的DMEM完全培养基中，24 h后收集细胞培养液并于4 ℃下800×g离心10 min以去除淋巴管内皮细胞，4 ℃下5 000×g离心10 min以去除细胞碎片，取上清在0.22 μm滤膜中过滤，4 ℃下100 000×g离心2 h分离外泌体，PBS重悬底部透明沉淀，BCA定量外泌体蛋白浓度，透射电镜下观察外泌体形态，通过粒径分析检测外泌体大小和分布并测量Zeta电位。
1.4.2 LECs-EXO标记和细胞摄取 LECs-EXO用DiO荧光探针在37 ℃避光标记30 min，然后将DiO标记的LECs-EXO悬浮液在100 kD孔径透析袋中透析12 h，以去除残留荧光染料。将1×105个施万细胞接种在20 mm细胞培养皿中，并与DiO标记的LECs-EXO孵育24 h，用DAPI对细胞核进行染色，在共聚焦激光扫描显微镜下观察施万细胞摄取LECs-EXO情况。以PBS处理施万细胞为对照组。
1.4.3 EdU细胞增殖实验施万细胞消化重悬后，以每孔5 000个细胞接种于96孔板，待细胞贴壁后，更换含有不同质量浓度LECs-EXO(10，50，100 μg/mL)的DMEM完全培养基培养24 h，去除培养液，PBS清洗，加入含有EdU试剂的DMEM完全培养基孵育2 h，取出96孔板，PBS清洗，按照EdU细胞增殖实验试剂盒说明对施万细胞进行后续处理，EdU标记的施万细胞核呈红色，所有施万细胞核由DAPI标记蓝色，最终每组细胞在荧光显微镜下选取3个视野进行拍照，使用Image J进行细胞计数。
1.4.4 实验动物模型制作及分组健康雄性SD大鼠24只，随机分为3组，每组8只，使用2.5%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉，俯卧位无菌环境下暴露右侧坐骨神经，其中假手术组右侧坐骨神经显露后不做处理，左侧坐骨神经也不进行处理，周围神经损伤组及LECs-EXO组在距大鼠右侧坐骨神经分叉近端5 mm处使用杜蒙特5号钳挤压3次，10 s/次，间隔30 s，左侧坐骨神经不进行处理。周围神经损伤组坐骨神经挤压后于损伤部位远端神经外膜下多点注射20 μL PBS，LECs-EXO组于损伤部位远端神经外膜下多点注射20 μL质量浓度为50 μg/mL LECs-EXO。注射完成后留置针头5 min，防止药物外漏。各组大鼠依次缝合肌肉、皮肤，乙醇消毒后常规饲养。
1.4.5 肌肉湿质量比和坐骨神经切片染色术后28 d，麻醉后处死各组大鼠，取双侧腓肠肌并称质量，以右侧腓肠肌质量和左侧腓肠肌质量比值计算肌肉湿质量比；以损伤部位为中心取长约5 mm坐骨神经组织，常规固定包埋，进行纵切面连续切片，切片厚度为5 μm，行苏木精-伊红染色、Masson染色及免疫荧光染色，并使用倒置相差显微镜及共聚焦激光扫描荧光显微镜进行图片采集，相应图片使用Image J进行分析。
1.4.6 LECs-EXO坐骨神经标记为了进一步探究LECs-EXO在坐骨神经中的分布，制备DiO标记LECs-EXO溶液，在100 kD孔径透析袋中透析12 h以去除残余荧光染料。取健康雄性SD大鼠6只，分为2组，每组3只，按照1.4.4所述方法麻醉并显露大鼠右侧坐骨神经，使用微量注射器在实验组大鼠坐骨神经外膜下多点注射20 μL DiO标记的LECs-EXO(质量浓度为50 μg/mL)，对照组大鼠坐骨神经外膜下注射20 μL PBS。术后28 d时，麻醉后处死大鼠并取出坐骨神经制成冰冻切片，细胞核用DAPI染色，切片在共聚焦激光扫描显微镜下观察。
1.5 主要观察指标 ①细胞实验：LECs-EXO被施万细胞摄取内化情况；各组施万细胞的增殖能力；②动物实验：LECs-EXO在大鼠坐骨神经组织内的分布；各组大鼠腓肠肌湿质量比；各组大鼠神经组织苏木精-伊红染色，Masson染色及NF200/S100β免疫荧光染色情况。
1.6 统计学分析采用GraphPad Prism 8进行数据分析，数据以x±s表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经通过郑州大学医学院生物统计学专家审核。

讨论

3.1 周围神经淋巴管参与周围神经损伤后神经修复的过程在周围神经损伤早期，损伤远端即出现瓦勒变性，包括轴突变性、坏死、脱髓鞘改变等，该过程中免疫系统协助清除轴突及髓鞘碎片，这是周围神经系统具有再生能力的关键因素[9]。大量研究证实淋巴管具有器官特异性功能，中枢神经淋巴系统包括胶质淋巴通路和脑膜淋巴管通路，是脑脊液和间质液间分子交换、大脑代谢产物清除、免疫细胞在中枢与周围淋巴系统交互的重要途径，起到重要免疫监视和免疫调节作用[10]。此外，脊柱周围也存在高度有序的淋巴管，与周围感觉神经节和交感神经节相连，形成连通淋巴结、胸导管的分节脊柱淋巴回路；脊髓损伤后脊柱淋巴管发生广泛重塑，损伤局部出现血管内皮生长因子C诱导脊柱淋巴管生成并加剧炎症反应、T细胞浸润和脱髓鞘改变[11]。现阶段对神经相关淋巴系统的研究仍以中枢神经系统为主，对周围神经淋巴系统的认识尚不充分。VOLPI等[12]通过对人尸体腓肠神经免疫组化分析发现神经周围存在D2-40阳性淋巴管；LIM等[13]发现Netrin-1a/DCC可介导运动神经元轴突导向，进而影响淋巴管生成，提示神经、淋巴管和血管系统可共享相同的轴突导向因子；BOUVRÉE等[3]证实淋巴管表达Sema3A，Sema3A/Nrp1/PlexinA1 信号通路对小鼠淋巴瓣膜形成、淋巴管出芽发挥重要作用；TAKAMATSU等[14]研究表明 Sema3A/ PlexinA1 介导树突状细胞进入淋巴管，并诱导肌球蛋白收缩促进树突状细胞在淋巴管内迁移。因此，周围神经淋巴管可能参与周围神经损伤后局部神经组织间隙肿胀、炎症反应及碎片清除等一系列反应。HROMADA等[15]证实了小鼠内周围神经淋巴管的存在，并发现自体神经移植物在阶段性损伤后含有更多淋巴管，首次描述了周围神经损伤和修复后增加的淋巴管新生，阐明了淋巴管内皮细胞和施万细胞之间的相互作用。该研究从淋巴管内皮细胞来源外泌体入手，进一步探究周围神经淋巴管在神经损伤后对施万细胞及轴突再生的调节作用。
3.2 外泌体可介导周围神经淋巴管对周围神经损伤后轴突再生的促进作用周围神经损伤后，外泌体可通过细胞膜表面的相互作用以及内容物中的蛋白质、mRNA、miRNA在细胞间的信息交换来实现多种功能，包括神经再生、变性和保护作用[16]。在神经系统发育、突触生长以及受损神经修复过程中都有外泌体参与。间充质干细胞作为组织再生及修复相关的重要细胞类型，其分泌的外泌体在神经损伤修复过程中发挥积极作用，对神经元有保护作用。LOPEZ-VERRILLI等[17]研究发现间充质干细胞来源外泌体能够促进轴突生长，可通过介导miRNA、神经营养因子在细胞间运输来诱导轴突生长。LI等[18]报道了脂多糖预处理间充质干细胞来源外泌体具有强大的免疫调节和抗炎功能，其在神经损伤部位可将促炎巨噬细胞转变为促再生巨噬细胞，进而促进轴突再生及再髓鞘化，加快功能恢复。LOPEZ-LEAL等[19]发现施万细胞来源外泌体中含有P75NTR，可以通过调节Rho来调节生长锥，进而有助于周围神经损伤修复。LIU等[20]报道电针刺激促进损伤神经中miRNA-21的积累，进而上调了施万细胞来源外泌体中miRNA-21的表达，有效地促进了周围神经损伤后轴突再生及神经功能恢复。ZHAN等[21]发现M2表型巨噬细胞所分泌外泌体可增强施万细胞的增殖、迁移能力，此外，巨噬细胞来源外泌体还可以上调施万细胞源性神经生长因子和层粘连蛋白表达，这种对施万细胞表型的影响与miRNA-223上调相关。现阶段周围神经再生相关外泌体的研究仍以干细胞、施万细胞、巨噬细胞等为主，内皮细胞来源外泌体对周围神经再生的影响研究有限。GAO等[22]发现脑内皮细胞来源外泌体在保护神经元免受缺氧损伤中起着重要作用，这种神经元保护作用与miRNA-126-3p的上调相关。ZHANG等[23]发现人脐静脉内皮细胞来源外泌体可促进神经干细胞增殖，抑制其凋亡，保持其多向分化潜能。JIANG等[24]发现人脐静脉内皮细胞来源外泌体通过抑制miRNA-21-3p而保护神经元免受缺氧再灌注损伤。内皮细胞来源外泌体在神经损伤后的再生过程中发挥关键作用，作者推测周围神经淋巴系统可通过外泌体途径参与到神经损伤后的再生修复过程，其中LECs-EXO在周围神经再生过程中的作用尚无相关报道。
3.3 施万细胞促进周围神经损伤后神经修复微环境的形成施万细胞是周围神经中的神经胶质细胞，在神经元轴突周围形成髓鞘，对于动作电位的传递和保护神经纤维完整性至关重要[25]。周围神经内的施万细胞具有显著的再生潜力，其具有促进多种组织修复的能力，包括周围神经间隙桥接、皮肤伤口愈合、指尖修复及牙齿再生[26-29]。MIN等[30]发现神经损伤后，来自损伤部位近端及远端的施万细胞迁移到神经损伤部位，形成施万细胞索以引导轴突再生，而神经损伤部位施万细胞索的形成是神经损伤后成功修复周围神经的关键。HANWRIGHT等[31]设计了一种新型纳米颗粒递送系统，该系统可以释放具有生物活性的胰岛素生长因子，靶向到损伤神经部位及去神经支配的肌肉组织，通过改善去神经诱导的肌肉萎缩和施万细胞衰老以及增强轴突再生来促进神经功能恢复。施万细胞是高度可塑性的细胞，损伤后被重编程为一种专门促进修复的细胞表型，这些修复表型施万细胞迁移到神经损伤部位，支持损伤轴突的存活，提供促进轴突再生的生化信号和空间线索，清除组织髓鞘碎片，并形成引导轴突再生的施万细胞索[32-34]。这一类施万细胞促进神经损伤后修复微环境的形成，其不同于施万细胞谱系中的其他细胞(髓鞘及非髓鞘类型)，这一类具有特殊修复支持表型的施万细胞称为修复施万细胞[35-37]。LIU等[38]研究表明，施万细胞可以感知外部磁驱动的机械力，并将其转化为细胞内的生化信号，通过诱导和维持施万细胞的修复表型来促进神经再生。SHEN等[39]发现miRNA-29a-3p负调节外周髓磷脂蛋白22并抑制施万细胞向修复表型的转变，延缓轴突延长及髓鞘形成，延缓受损神经的功能恢复。SUZUKI等[40]通过转录组分析发现修复施万细胞的分子特征与非修复施万细胞明显不同，修复施万细胞上调与炎症、修复和再生相关的基因，而非修复施万细胞上调与髓磷脂维持、衰老相关的基因，修复施万细胞具有更强的黏附特性，在周围神经损伤后促进轴突再生的能力更强。施万细胞对神经损伤后的轴突再生及功能恢复发挥关键作用，通过调节施万细胞增殖活性以促进轴突再生也是治疗周围神经损伤疾病的重要策略。该研究通过探索淋巴管内皮细胞来源外泌体对施万细胞增殖能力的影响，进而阐述周围神经淋巴管对周围神经损伤后轴突再生的调节作用及相应机制。
该研究通过体外实验证实LECs-EXO可被施万细胞有效内化并增强施万细胞的增殖能力；体内实验发现LECs-EXO拥有良好的神经相容性，可长期存在于坐骨神经中，进而抑制坐骨神经损伤后腓肠肌萎缩，促进轴突再生及再髓鞘化。综上所述，LECs-EXO在周围神经损伤修复过程中具有促进作用，为周围神经淋巴管通过外泌体途径参与周围神经再生过程提供了新的理论基础和实验依据。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

淋巴管内皮细胞来源外泌体促进周围神经损伤后的轴突再生

Lymphatic endothelial cells-derived exosomes promote axonal regeneration following peripheral nerve injury

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