2.1   实验动物数量分析   参加实验小鼠数量为40只，随机分为4组，每组10只。40只小鼠均进入结果分析，中途无脱落。
2.2   鹿茸干细胞来源外泌体鉴定结果   透射电镜观察显示外泌体呈杯口状结构，符合外泌体的基本特征，见图1A。粒径分析仪测定结果显示外泌体的粒径分布在 30-150 nm 之间，峰尺寸在 140 nm 左右，见图1B。这些结果表明已成功分离出鹿茸干细胞来源外泌体。




2.3   鹿茸干细胞来源外泌体对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏指数及肝功能的影响    酒精灌胃后的小鼠体质量显著减轻(P < 0.000 1)，而肝脏指数并无显著变化(P > 0.05)，见图2A，B。酒精灌胃诱导了谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平显著升高(P < 0.000 1)，2个外泌体处理组均显著抑制了谷丙转氨酶水平的升高(P < 0.05，P < 0.000 1)，且鹿茸干细胞来源外泌体的抑制效果显著强于骨髓间充质干细胞来源外泌体(P < 0.000 1)，见图2C；同时，鹿茸干细胞来源外泌体还显著抑制了谷草转氨酶水平的升高(P < 0.000 1)，且抑制效果显著强于骨髓间充质干细胞来源外泌体(P < 0.000 1)，见图2D。这提示，鹿茸干细胞来源外泌体对急性酒精性肝损伤具有有效的预防性保护作用。



2.4   鹿茸干细胞来源外泌体对急性酒精性肝损伤小鼠血清及肝脏氧化还原指标的影响   分析小鼠血清及肝脏丙二醛水平，结果显示模型组丙二醛水平显著高于对照组(P < 0.000 1)，2个外泌体组均显著抑制了丙二醛水平的升高(P < 0.001，P < 0.000 1)，且鹿茸干细胞来源外泌体预防组的抑制效果显著强于骨髓间充质干细胞来源外泌体预防组(P < 0.001)，见图3，提示鹿茸干细胞来源外泌体可增强机体对氧自由基的清除，有效改善酒精性肝损伤小鼠的脂质过氧化。



分析小鼠血清及肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的水平，结果显示模型组谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶水平显著降低(P < 0.000 1)，2个外泌体组均显著促进了谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶水平的升高(P < 0.000 1)，且鹿茸干细胞来源外泌体预防组的促进效果显著强于骨髓间充质干细胞来源外泌体预防组(P < 0.05，P < 0.01)，见图3，提示鹿茸干细胞来源外泌体对肝脏组织的氧化损伤具有有效的保护作用，能提高肝脏的抗氧化能力，降低脂质过氧化水平，有效预防氧化应激的发生。
2.5   鹿茸干细胞来源外泌体对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏病理形态的影响   分析小鼠肝脏病理切片苏木精-伊红染色结果，对照组小鼠肝小叶结构清楚，肝细胞索呈放射状排列，胞浆内无脂质液泡分布，肝窦和肝细胞均未见异常病理改变；模型组小鼠肝小叶结构破坏，排列杂乱无章，细胞间隙模糊，大多数肝细胞肿胀，并且胞浆内有大量的脂质液泡，出现炎性细胞浸润现象(P < 0.000 1)，表明急性酒精对肝组织造成明显的损伤；骨髓间充质干细胞来源外泌体预防组和鹿茸干细胞来源外泌体预防组小鼠肝细胞病变程度相对模型组均有所减轻，但鹿茸干细胞来源外泌体预防组减轻程度更大一些，肝细胞坏死程度均相对较轻，肝细胞形态结构未见明显异常，肝细胞较完整，整体染色均一，间隙清晰，肝细胞肿胀及脂肪变性不明显，肝细胞内仅有极少的脂质液泡，少量炎性细胞浸润，肝损伤明显减轻(P < 0.000 1)，见图4。这些结果提示鹿茸干细胞来源外泌体预防组可以保护酒精性肝损伤小鼠的肝脏组织结构。



分析小鼠肝组织免疫组化病理切片，经全视野M8显微镜扫描整张切片，以细胞核颜色为深棕色、棕黄色和浅黄色判定为阳性，细胞核蓝色为阴性为依据，用Image J计算Ki67阳性表达结果，模型组表达量远低于对照组(P < 0.000 1)；骨髓间充质干细胞来源外泌体预防组与模型组间Ki67阳性表达量无统计学差异(P > 0.05)，但鹿茸干细胞来源外泌体预防组Ki67阳性表达量较模型组显著升高(P < 0.000 1)。骨髓间充质干细胞来源外泌体预防组与鹿茸干细胞来源外泌体预防组有显著性差异(P < 0.000 1)。这提示鹿茸干细胞来源外泌体在促进组织增殖方面也有显著效果，可以通过促进肝组织的增殖来修复补充受损的组织，保护肝脏，且效果显著优于骨髓间充质干细胞来源外泌体，见图4。
2.6   鹿茸干细胞来源外泌体对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏炎症因子表达的影响   分析小鼠肝脏中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α表达，结果显示模型组小鼠肝脏中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α表达远高于对照组 (P < 0.000 1)，相比模型组，鹿茸干细胞来源外泌体预防组炎症因子表达显著减少(P < 0.001)，见图5。这提示鹿茸干细胞来源外泌体能有效抑制酒精性肝损伤小鼠肝脏中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α等炎性因子的表达，这可能与其有效减轻酒精性肝损伤小鼠肝脏炎症反应的作用有关。



2.7   鹿茸干细胞来源外泌体对急性酒精性肝损伤小鼠p65、p-p65、IKB、p-IKB蛋白表达的影响   对p65、p-p65、IKB、p-IKB蛋白表达水平进行验证，结果显示，模型组4种蛋白的相对表达均远高于对照组(P < 0.000 1)，相比模型组，骨髓间充质干细胞来源外泌体预防组和鹿茸干细胞来源外泌体预防组4种蛋白均有所降低，但鹿茸干细胞来源外泌体预防组降低的更为显著(P < 0.000 1或P < 0.001)，提示鹿茸干细胞来源外泌体可以通过抑制NF-κB信号通路的激活，有效地减轻炎症反应，进而起到保护肝脏的作用，见图6。



2.8   生物相容性   外泌体经小鼠尾静脉注射(1次/d，持续7 d)；注射后，小鼠精神活跃，未见异常。酒精灌胃后小鼠出现醉酒状态，在灌胃后三四个小时逐渐苏醒恢复正常饮食及生理状态。实验过程中动物未出现死亡。

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酒精性饮品在人们的日常生活中不可或缺，而肝脏的诸多疾病即是来源于过度的酒精摄入，且以酒精性肝损伤最为显著[1]。酒精性肝损伤根据其演变阶段可分为单纯性脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化、酒精性肝硬化，严重者可导致肝细胞坏死、肝衰竭甚至是肝癌[1-2]。目前，酒精性肝损伤已成为威胁人类健康的一大严重问题。在中国，酒精性肝损伤已成为继病毒性肝炎后导致肝损伤的第二大病因[3]；在欧洲等发达国家，酒精性肝损伤则是肝硬化最主要的病因[4]。酒精性肝损伤发病率逐年上升，然而目前保护肝脏免受酒精损伤的方法却极为有限，主要是以戒酒为主，尚无有效防治药物。普遍认为大量的酒精摄入会损伤肠道黏膜，致使肠道内产生大量的有毒物质进入肝脏，导致肝脏脂质代谢异常、炎症浸润和氧化应激等生理反应[5]。研究发现NF-κB信号通路的激活是导致上述异常生理反应的主要因素之一。NF-κB是一种核转录因子，几乎存在于所有动物细胞类型中，静息状态下在胞浆中以无活性形式存在；细胞一旦受到刺激，则被激活，从而对炎症等生理活动发挥重要的调控作用[6-7]。
鹿茸是名贵的传统中药，被誉为“动物药之首”，具有强筋骨、提高免疫力、促进机体新陈代谢和延缓衰老等显著疗效。研究证实，鹿茸这些疗效与其本身的生物学特性高度相关。鹿茸是目前发现的唯一在失去后还能够周期性完全再生的哺乳动物器官；在快速生长期，鹿茸的生长速度可达
2.75 cm/d[8]，研究发现是鹿茸尖部的间充质细胞快速分裂导致了鹿茸超速生长[9]。作者所在团队前期研究发现，鹿茸间充质细胞兼具胚胎干细胞和成体干细胞双重属性，所以定义其为鹿茸干细胞[10]。鹿茸干细胞在治疗肝纤维化方面表现出了极强的优势，能够减少胶原纤维的沉积、脂肪变性、炎症发生，以及能促进肝实质细胞再生和增强肝功能等[11]。干细胞疗法已成为治疗肝损伤重要的手段[12]。同时，目前大多数认为干细胞主要是通过旁分泌效应发挥治疗作用，而非是细胞本身参与了损伤后修复组织的形成[13]。
该研究分离了鹿茸干细胞的主要旁分泌成分——外泌体(AnSC-derived exosomes，AnSC-exos)，并通过酒精性肝损伤小鼠模型检测了其预防效果，在此基础上探究其相关作用机制，为开发鹿茸这一特种经济动物资源和临床上实现酒精性肝损伤症状减轻甚至逆转提供科学依据和探索路径。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

1.1    设计   体外细胞培养及体内预防实验，首先对鹿茸干细胞外泌体进行提取和鉴定，再将外泌体通过尾静脉注射的方式注入小鼠体内(连续7 d)，再通过酒精灌胃的方法建立小鼠急性肝损伤模型，对比各组之间肝损伤的程度。两个样本比较用t检验，不同组间比较采用单因素方差分析。
1.2   时间及地点   实验于2021年8月至2022年5月在长春科技学院鹿茸科学与产品技术研究所完成。
1.3   材料
1.3.1   实验仪器   H-7650透射电镜(日本日立)；HS-1000自动组织脱水机(浙江华速)；BN-802A石蜡包埋机(湖北贝诺)；RM2255石蜡切片机(德国Leica)；BN-803A生物组织摊片烤片机(湖北贝诺)；MY-CD5026P电压力锅(佛山美的)；Evos XL Core倒置显微镜(美国Invitrogen)；M8数字扫描显微成像系统(德国Precipoint)；DNM-9602酶标分析仪(北京普朗新)；VORTEX-1漩涡震荡仪(济南欧莱博)；3K15冷冻离心机(美国Sigma)。
1.3.2   实验试剂   40 g/L多聚甲醛(合肥Biosharp，BL539A)；DMEM基础培养基(美国Gibco，C11995500BT)；血清谷丙转氨酶检测盒(南京建成，COO9-1-1)；谷草转氨酶检测盒(南京建成，CO10-1-1)；谷胱甘肽过氧化物酶检测盒(南京建成，A005)；总超氧化物歧化酶检测盒(南京建成，A001)；丙二醛试剂盒(南京建成，A003-1)；石蜡(德国Leica，39601006)；苏木精-伊红染色试剂盒(北京Solarbio，G1120)；免疫组化试剂盒(合肥迈新，Kit-9710)；反转录试剂盒(日本Takara，RR047A)；RIPA裂解液(上海Beyotime，P0013)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京Solarbio，PC0020)；30%丙烯酰胺混合液(上海Beyotime，ST003)；10×SDS-PAGE电泳液(上海Beyotime，P0014D)；5×蛋白上样缓冲液(上海Beyotime，P0015)；10×TBST(北京Solarbio，T1081)；10×电转液(北京Solarbio，D1060-500)；NF-κBp65抗体(CST，Rabbit mAb#8242)；p-p65抗体(CST，Rabbit mAb#3033)；IKBα抗体(CST，Mouse mAb#4814)；p-IKBα抗体(CST，Rabbit mAb#2859)。
1.3.3   实验动物   40只7周龄C57BL6雌性小鼠，体质量(22±2) g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，许可证号：SCXK(辽)2020-0001。实验方案和程序均在长春科技学院实验动物伦理委员会监督下开展(批准号：CKARI202104)。
1.4    实验方法   
1.4.1    细胞分离及培养

(1)鹿茸干细胞：采集二杠期鹿茸间充质组织(取样方法见文献[14])，使用实验室自制小切刀(ZL 201420335401.8)将组织切成0.7 mm的薄片，然后在200 U/mL的Ⅰ型胶原酶中消化30 min，显微镜下可见组织出现毛边。将组织于DMEM完全培养基(含体积分数为10%胎牛血清)中进行原代细胞培养(37 ℃、体积分数为5% CO2)，待细胞由贴壁组织块周边爬出时，更换培养液，待细胞密度长至70%时，用0.25%的胰蛋白酶消化1 min后，离心收集细胞(1 000 r/min，5 min)，然后在DMEM完全培养基中进行传代培养[15]。

(2)小鼠骨髓间充质干细胞：作者所在实验室冻存，培养条件同鹿茸干细胞。
1.4.2   外泌体提取与鉴定   将传3-5代的鹿茸干细胞和骨髓间充质干细胞于DMEM完全培养基中培养，待细胞密度长至90%时，更换为UltraCULTURE无血清培养基(含200 mmol/L的L-谷氨酰胺)，72 h后收集上清液，采用滤膜过滤的方式去除细胞碎片和凋亡体，然后按照上海翌圣的外泌体分离试剂盒操作方法获得鹿茸干细胞来源外泌体和骨髓间充质干细胞来源外泌体[16-17]。所得外泌体进一步进行透射电镜和粒径分析仪(NanoSight NS300，Malvern Instruments，UK)分析确认。
1.4.3   动物分组及模型制备   将40只C57BL6雌性小鼠随机分为4组，每组10只，对照组和模型组分别经尾静脉注射PBS，骨髓间充质干细胞来源外泌体预防组(BMSC-exos)经尾静脉注射骨髓间充质干细胞来源外泌体(50 μg/只)，鹿茸干细胞来源外泌体预防组(AnSC-exos)经尾静脉注射鹿茸干细胞来源外泌体(50 μg/只)，连续给药7 d。末次处理2 h后，给予体积分数为50%的酒精(15 mL/kg)灌胃1次(对照组除外)，建立急性酒精性肝损伤模型。灌胃后24 h眼球取血(用于分离血清)，处死小鼠摘取肝组织(分别固定和冻存)。称量肝质量，计算肝指数，肝指数=肝脏质量(g)/体质量(g)×100%。
1.4.4   肝损伤指标检测   将所取全血于室温静置2 h，然后3 000 r/min 离心10 min分离血清，按照试剂盒所述步骤检测谷草转氨酶和谷丙转氨酶水平。
1.4.5   氧化还原指标检测   按照试剂盒的说明分别检测血清中丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶水平。称取肝脏相同部位的肝组织0.2 g，加入9倍量生理盐水制成10%肝组织匀浆，3 000 r/min 离心10 min，取上清液，按试剂盒说明检测丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶水平。
1.4.6   苏木精-伊红染色   取小鼠肝组织，于体积分数为10%甲醛中固定，梯度乙醇脱水，经二甲苯处理使组织透明；石蜡包埋后切片(厚5 μm)，进行苏木精-伊红染色，于显微镜下观察并拍照。
1.4.7   免疫组化染色   石蜡切片脱蜡后用柠檬酸抗原修复液修复10 min恢复至室温；PBS洗涤后滴加阻断内源性过氧化物酶，室温放置10 min；洗涤后滴加非特异染色阻断剂，室温放置10 min；弃去液体直接滴加Ki67抗体，4 ℃孵育过夜；洗涤后滴加生物素标记的 IgG 聚合物，室温放置 10 min；洗涤后加入链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶，室温放置10 min；洗涤后滴加 DAB显色液显色，苏木精复染，中性树脂封固，于显微镜下观察并拍照。
1.4.8   实时荧光定量PCR(qRT-PCR)   将冻存的组织于液氮中研磨后置于RNase-free的离心管中，加入Trizol(1 mL)混匀提取总RNA，然后Takala反转录试剂盒合成cDNA。利用qPCR Master Mix(12.5 μL)、Forward primer(0.8 μL)、Reverse primer(0.8 μL)、RNase inhibitor(8.5 μL)、ddH2O nuclease-free(0.4 μL)、Tap DNA polymase(2 μL)、cDNA(2.5 μL)、Total volume(25 μL)反应体系进行qRT-PCR检测。其中白细胞介素1β引物序列为：5’-ATG GCA GAA GTA CCT AAG CTC-3’，3’-TTA GGA AGA CAC AAA TTG CAT GGT GAA CTC AGT-5’；白细胞介素6引物序列为：5’-ATG AAC TCC TTC TCC ACA AGC-3’，3’ -CTA CAT TTG CCG AAG AGC CCT CAG GCT GGA CTG-5’；肿瘤坏死因子α引物序列为：5’-ATG AGC ACT GAA AGC ATG ATC-3’，3’-TCA CAG GGC AAT GAT CCC AAA GTA GAC CTG CCC-5’；GAPDH引物序列为：5’-TGC CCC CAT GTT TGT GAT G-3’，3’-TGT GGT CAT GAG CCC TTC C-5’。使用2-ΔΔCt的方法计算mRNA的相对表达量，实验重复3次。
1.4.9   蛋白质免疫印迹(Western blot)   取各组小鼠肝组织，加入含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的 RIPA 裂解液，裂解后12 000 r/min离心5 min，取上清即为蛋白。将适量蛋白加入buffer煮好后按顺序进行凝胶电泳、浓缩胶(80 V 30 min)、分离胶(120 V 60 min)、转膜(80 V 120 min)，5%脱脂奶粉4 ℃封闭过夜，清洗后加入p65、p-p65、IKB、p-IKB、GAPDH一抗室温孵育2 h，清洗后加入二抗(羊抗小鼠IGg-HRP和羊抗兔IGg-HRP)室温下孵育1 h，ECL曝光，曝光条带用Image J软件分析。实验重复3次。
1.5   主要观察指标   ①小鼠体质量和肝脏指数；②小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶水平；③小鼠肝组织丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶水平；④苏木精-伊红染色观察小鼠肝组织病理病变；⑤免疫组化法检测小鼠肝组织Ki67表达；⑥Western blot检测小鼠肝组织p65、p-p65、IKB、p-IKB蛋白的表达；⑦qRT-PCR检测小鼠肝组织白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α的mRNA水平。
1.6   统计学分析   实验数据采用Prism Graphpad软件进行统计学分析。两个样本比较用t检验，不同组间比较采用单因素方差分析；结果以x±s的形式表示，P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经通过长春科技学院统计学专家审核。

酒精作为精神食粮在日常生活中必不可少，酒精进入人体后通过胃肠道吸收进入血液循环，吸收后的酒精超过95%要通过肝脏代谢，长期过量饮酒是造成肝脏疾病发生的主要原因，酒精性肝病己成为中国最主要的慢性肝脏疾病之一[18]。酒精及其代谢物可以直接或间接诱导炎症反应、氧化应激以及蛋白质营养失衡等多种病理生理过程，这些因素相互作用，最终导致酒精性肝病的发生[19-20]。
谷丙转氨酶和谷草转氨酶大量分布于机体组织细胞内，当肝脏受到酒精损害时，肝细胞被破坏，谷丙转氨酶和谷草转氨酶就会分散到血液中[21-22]。因此，血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性常作为判断肝损伤的指标[23]。该研究显示小鼠建模后可见血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平显著升高，而预先给予鹿茸干细胞来源外泌体小鼠的血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平明显降低，这一结果可以判断鹿茸干细胞来源外泌体对急性酒精性肝损伤具有一定的预防性保护作用。
肝脏组织病理学观察是评价肝脏损伤程度的金标准，在各类动物肝损伤模型中广泛应用[24]。酒精性肝损伤受试小鼠肝脏的病理变化以肝细胞脂肪变性为主[25-26]。将受试小鼠相同部位的肝脏进行苏木精-伊红染色发现建模后小鼠的肝脏出现了大面积的坏死现象，肝小叶结构紊乱，排列杂乱无章，可见大面积脂肪空泡和灶性坏死，细胞间隙模糊；而事先给予鹿茸干细胞来源外泌体的小鼠病变程度较轻，肝细胞形态结构未见明显异常，肝细胞较完整，整体染色均一，肝细胞肿胀及脂肪变性不明显，结合免疫组化Ki67表达结果显示给予鹿茸干细胞来源外泌体小鼠的Ki67表达率要远大于模型组和骨髓间充质干细胞外泌体预防组，仅次于对照组，这表明鹿茸干细胞来源外泌体不仅可以保护酒精性肝损伤小鼠肝脏组织结构，在促进肝组织增殖方面也有显著效果，可能是通过促进肝组织的增殖来修复和补偿受损的组织，进而保护肝脏。
丙二醛与机体脂类物质氧化应激代谢水平和自由基相关，超氧化物歧化酶主要清除体内多余氧化应激产物，丙二醛、超氧化物歧化酶可间接体现体内自由基及氧化应激产物含量[27]。丙二醛的测定常常与超氧化物歧化酶的测定相互配合，超氧化物歧化酶活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力，而丙二醛的高低又间接反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度[28]。谷胱甘肽过氧化物酶是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶，它特异的催化还原谷胱甘肽对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用[29]。该实验检测结果显示建模后丙二醛水平大幅度上升，尾静脉注射鹿茸干细胞来源外泌体预防组丙二醛水平明显下降，这提示鹿茸干细胞来源外泌体可增强机体对氧自由基的清除，对抗脂质过氧化有很好的效果。超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的数值可以看出鹿茸干细胞来源外泌体对肝脏组织的氧化损伤具有有效的保护作用，不仅能提高肝脏的抗氧化能力，降低脂质过氧化水平，还能有效预防氧化应激的发生。
除氧化应激外，炎症反应也是引起肝损伤的重要原因。酒精摄入会损伤肠道黏膜，导致肠道内大量有毒物质进入肝脏后激活NF-κB信号通路，诱导细胞活化并释放炎性因子，引起肝脏炎症[30]。白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α等炎症因子是导致肝脏炎症的重要因素，酒精会刺激库普弗(Kupffer)细胞产生白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α，造成肝细胞炎性损伤，加剧酒精性肝损伤的进展[31-32]。白细胞介素1β是白细胞介素1家族中的重要成员，由于其在炎症相关疾病中的重要作用而备受关注。白细胞介素1β的局部激活是介导促炎反应的中心环节，导致继发性炎症递质(包括白细胞介素6)的激活[33]。反过来，白细胞介素6系统性地作用于肝脏产生损伤[34]。与白细胞介素1β相似，肿瘤坏死因子α是一种多效性促炎细胞因子，属于肿瘤坏死因子配体超家族。肿瘤坏死因子α是机体内主要的炎症因子，它的过量产生能够刺激肝脏发生炎症反应，进而导致酒精性肝损伤[31-32]。qRT-PCR通过检测白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达量分析炎症反应的强弱。Western blot研究p65和IKB蛋白的表达量以及p65的磷酸化和IKB的磷酸化可以反映NF-κB的激活，该研究结果可见模型组p65、IKB、p-p65、p-IKB、白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α表达明显升高，而鹿茸干细胞来源外泌体预防组上述指标均显著降低，可见鹿茸干细胞来源外泌体可抑制NF-κB信号通路的激活进而抑制肝炎症的发生。
综上，鹿茸干细胞来源外泌体可显著预防小鼠急性酒精性肝损伤，而此功能的发挥可能是通过抑制NF-κB信号通路来阻止炎症的发生，以及提高机体抗氧化水平所实现的。该研究为临床上酒精性肝损伤的预防治疗提供了又一可行策略，同时也为鹿茸的开发利用开辟了新的途径。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

文题释义：

鹿茸干细胞：鹿茸是目前发现的唯一在失去后还能够周期性完全再生的哺乳动物器官；在快速生长期，鹿茸的生长速度可达2.75 cm/d，研究发现是鹿茸尖部的间充质细胞快速分裂导致了鹿茸超速生长。作者所在团队前期研究发现，鹿茸间充质细胞兼具胚胎干细胞和成体干细胞双重属性，所以定义其为鹿茸干细胞。
外泌体：是指细胞分泌的小膜泡(30-150 nm)，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体中含有多种蛋白质、miRNA、长链非编码RNA、DNA和脂质体等成分，由于其特殊结构可通过胞吞进入细胞，在细胞间的通讯中发挥着关键作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

酒精性饮料在人们日常生活中不可或缺，而酒精摄入所致肝损伤的发病率逐年上升，但目前并没有特效药物进行预防。鹿茸干细胞已被证明对肝损伤具有显著的治疗效果。目前普遍认为干细胞的治疗作用主要是通过旁分泌效应产生的，而非是细胞本身参与了受损组织的修复。本研究分离了鹿茸干细胞的主要旁分泌成分——外泌体，并利用小鼠急性酒精性肝损伤模型，评价了鹿茸干细胞外泌体对肝损伤的预防作用，并探究了相关的作用机制。这为预防肝损伤，保护肝脏提供了一条新的途径，并为深度开发鹿茸这一中药资源提供了科学依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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