单细胞转录组测序溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的免疫细胞分子特征

doi:10.12307/2023.740

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (33): 5357-5362.doi: 10.12307/2023.740

• 干细胞基础实验 basic experiments of stem cells • 上一篇下一篇

单细胞转录组测序溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的免疫细胞分子特征

张诗静1，黄卓健1，陶屈源1，侯江涛2，彭彬3，罗泳欣1，李燕舞4，李辉标2，钟嘉敏1，陈新林1

1广州中医药大学基础医学院，广东省广州市 510006；2广州中医药大学第一附属医院，广东省广州市 510400；3广州中医药大学第一临床医学院，广东省广州市 510400；4广州中医药大学科技创新中心，脾胃研究所，广东省广州市 510400

收稿日期:2022-10-10 接受日期:2022-11-25 出版日期:2023-11-28 发布日期:2023-03-30
通讯作者: 陈新林，教授，博士生导师，广州中医药大学基础医学院，广东省广州市 510006
作者简介:张诗静，女，1992年生，广东省茂名市人，汉族，2022年广州中医药大学毕业，硕士，主要从事中医大数据统计分析研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(81774451)，项目负责人：陈新林

Molecular characteristic of immune cells in ulcerative colitis patients with spleen deficiency and dampness syndrome based on single-cell RNA sequencing

Zhang Shijing1, Huang Zhuojian1, Tao Quyuan1, Hou Jiangtao2, Peng Bin3, Luo Yongxin1, Li Yanwu4, Li Huibiao2, Zhong Jiamin1, Chen Xinlin1

1School of Basic Medical Science, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China; 2First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510400, Guangdong Province, China; 3First Clinical Medical College, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510400, Guangdong Province, China; 4Science and Technology Innovation Center, Pi-Wei Institute, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510400, Guangdong Province, China

Received:2022-10-10 Accepted:2022-11-25 Online:2023-11-28 Published:2023-03-30
Contact: Chen Xinlin, Professor, Doctoral supervisor, School of Basic Medical Science, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
About author:Zhang Shijing, Master, School of Basic Medical Science, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, No. 81774451 (to CXL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

单细胞转录组测序：是在单个细胞水平对mRNA进行高通量测序的一项新技术，原理是将分离的单个细胞中微量的mRNA通过扩增后再进行高通量测序，能够揭示单个细胞的基因结构和基因表达状态，反映细胞间的异质性，被广泛应用于生物和医学的各种领域，极大促进了相关研究和应用。
分子特征：是基于细胞的生物大分子水平所表现出的特征，可以依靠单细胞转录组测序，根据相应的特异性基因表达量对单种细胞进行分类，分出不同类型的亚群。

背景：免疫细胞介导的组织破坏对溃疡性结肠炎的发生和发展至关重要，但其机制尚未阐明，同时溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者缺乏客观的生物标志物。
目的：基于单细胞转录组测序技术探讨溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的免疫细胞分子特征，寻找溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的生物标志物，为其临床诊断及治疗提供参考依据。
方法：临床获取2例溃疡性结肠炎患者和2例健康对照者的结肠活检组织，建库后进行单细胞转录组测序，并对单细胞转录组测序数据进行聚类和降维分析、细胞类型注释、差异表达分析和细胞通讯分析等。

结果与结论：①单细胞转录组测序数据聚类鉴定出29个细胞亚群，组成9种细胞类型；②对比健康对照组，溃疡性结肠炎组CD4+细胞毒性T细胞、初始 CD8+T细胞、生发中心、S100AhighB细胞、活化B细胞、NK_C2细胞和单核细胞的表达增高(P < 0.05)；溃疡性结肠炎患者的Tfh细胞、NKT细胞和NK细胞的表达减少(P < 0.05)；③差异表达基因的功能富集显示，溃疡性结肠炎患者的免疫调控增加，NK细胞、浆细胞和Th17细胞存在代谢重编程；④细胞通讯分析共鉴定了14种细胞之间的相互作用，以单核细胞和内皮细胞为主；⑤两组人群的免疫细胞分子特征存在较大差异，这些细胞亚群可能与溃疡性结肠炎的发生和发展有关，可能是溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的生物标志。

https://orcid.org/0000-0002-2650-8051 (陈新林)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 溃疡性结肠炎, 单细胞转录组测序, 免疫细胞, 脾虚湿蕴, 分子特征, 生物标记

Abstract: BACKGROUND: Immune-mediated tissue destruction is essential for the development and deterioration of inflammation in ulcerative colitis, but their roles remain unclear. Simultaneously, ulcerative colitis patients with spleen deficiency and dampness syndrome lack objective biomarkers.
OBJECTIVE: To investigate the molecular characteristics of immune cells in ulcerative colitis patients with spleen deficiency and dampness based on single-cell RNA sequencing so as to provide a basis for its clinical diagnosis and treatment.
METHODS: Colon tissues of two ulcerative colitis patients and two healthy controls were obtained. Single-cell RNA sequencing was performed. The following analyses were carried out for the single-cell RNA sequencing data: cluster analysis, dimensionality reduction analysis, cell type annotation, differential expression analysis and cell communication analysis.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) A total of 29 cell sub-types were identified according to clustering analysis in single cell transcriptome, which consisted of 9 cell types. (2) Compared with healthy controls, the ulcerative colitis patients with spleen deficiency and dampness syndrome had higher expression levels of CD4+ cytotoxic T cells, naive CD8+ T cells, germinal center, activated B cells, S100Ahigh B cells, NK_C2 cells and monocytes (P < 0.05). Compared with healthy controls, Tfh cells, NKT cells and NK cells decreased in patients with ulcerative colitis (P < 0.05). (3) Functional enrichment of differentially expressed genes showed that there were hyperinflammatory activation in immune cells and higher metabolic reprogramming of NK cells, plasma cells and helper T cells for ulcerative colitis patients. (4) Cell communication analysis identified 14 interactions among different cell types, mainly from monocytes and endothelial cells. (5) There are significant differences in molecular characteristics of immune cells between ulcerative colitis patients and healthy controls. These cell subsets may be related to the occurrence and development of ulcerative colitis, which may be a biomarker for ulcerative colitis patients with spleen deficiency and dampness syndrome.

Key words: ulcerative colitis, single-cell RNA sequencing, immune cell, spleen deficiency and dampness syndrome, molecular characteristic, biomarker

中图分类号:

张诗静, 黄卓健, 陶屈源, 侯江涛, 彭彬, 罗泳欣, 李燕舞, 李辉标, 钟嘉敏, 陈新林. 单细胞转录组测序溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的免疫细胞分子特征[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(33): 5357-5362.

Zhang Shijing, Huang Zhuojian, Tao Quyuan, Hou Jiangtao, Peng Bin, Luo Yongxin, Li Yanwu, Li Huibiao, Zhong Jiamin, Chen Xinlin. Molecular characteristic of immune cells in ulcerative colitis patients with spleen deficiency and dampness syndrome based on single-cell RNA sequencing[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(33): 5357-5362.

图/表（结果） 6

2.1 研究对象基本信息该研究共纳入4例研究对象，男3例，女1例，年龄39-66岁，溃疡性结肠炎患者2例，均为脾虚湿蕴证，健康对照者2例。表1展示了纳入对象的临床特征，图1展示了纳入对象的肠镜图片。

2.2 单细胞聚类结果和细胞间相互作用对4个对象的18 178个原始细胞转录数据进行降维处理，细胞注释后，所有细胞被划分为9种细胞类型，见图2A，B：T细胞(7个细胞亚群)、B细胞(6个细胞亚群)、NK细胞(4个细胞亚群)、单核细胞(2个细胞亚群)、肥大细胞(2个细胞亚群)、平滑肌细胞(无细胞亚群)、上皮细胞(无细胞亚群)、纤维细胞(4个细胞亚群)和内皮细胞(2个细胞亚群)。溃疡性结肠炎患者的T细胞、单核细胞的表达高于健康对照组，而其他细胞的表达低于健康对照组，见图2C，D。通过iTALK检测到14个关键配体-受体，包括CD30、CD53、TFRC、CD74、CD44、B2M、PTGS2、IL1B、VIM、IL1R1、CAV1、ICAM1、HLA-F和APP，见图2E，细胞之间的相互作用以单核细胞和内皮细胞为主。各细胞亚群在两组之间的比较见图2F和图2G。

2.3 B细胞对B细胞进行注释后获得6个细胞亚群，见图3A，每个细胞亚群的标记基因，见图3B。溃疡性结肠炎患者的记忆B细胞、初始B细胞和浆细胞的百分比低于健康对照组，见图3C，D。溃疡性结肠炎患者的生发中心、S100AhighB细胞和活化B细胞的百分比高于健康对照组。S100AhighB细胞的GO富集分析显示，生物学过程的富集项主要包括干扰素γ相关的信号通路，细胞组分主要富集在细胞的黏附与连接，分子功能主要富集在钙黏附蛋白与泛素化酶蛋白连接，见图3E。浆细胞的GO富集分析显示：生物学过程的高度富集项包括中性粒细胞活化参与免疫反应、ATP代谢过程，细胞组分富集在线粒体内膜，分子功能富集在钙黏附蛋白，见图3F。KEGG通路分析显示S100AhighB细胞主要富集在EB病毒感染、病毒致癌作用、辅助性T细胞分化、糖酵解/糖异生等通路，见图3G；浆细胞主要富集在多种神经退行性变通路、氧化磷酸化和活性氧等通路，见图3H。

2.4 T细胞聚类分析得到T细胞的7个细胞亚群，见图4A，注释后得到T细胞亚群的标记基因，见图4B。通过计算细胞亚群的细胞比例发现，溃疡性结肠炎组CD4+ 细胞毒性T细胞和初始CD8+T细胞的表达显著高于健康对照组。溃疡性结肠炎组CD4+记忆T细胞、NKT细胞、效应记忆型T细胞、辅助性T细胞(Tfh和Th17)的表达低于健康对照组，见图4C，D。两组人群NKT细胞亚群差异表达基因分析结果显示：生物学过程主要富集在中性粒细胞脱粒、T细胞激活、ATP代谢过程，细胞组分主要富集在细胞的黏附与连接，分子功能主要富集于钙黏附蛋白，见图4E。Th17细胞差异表达基因：生物学过程主要富集在病毒基因表达、膜蛋白的翻译转移，细胞组分主要富集在细胞的黏附与连接、核糖体生成，分子功能主要富集在核糖体的结构组成，见图4F。NKT细胞KEGG通路主要富集在EB病毒感染、内吞作用通路、程序性坏死、HIF-1信号通路和糖酵解/糖异生通路等，见图4G。Th17细胞KEGG结果显示主要富集于糖酵解/糖异生和碳代谢信号通路，见图4H。

2.5 其他免疫细胞聚类分析还得到肥大细胞(Mast cells)、单核细胞(Monocytes cells)和自然杀伤细胞(NK cells)，进一步注释后计算不同细胞亚群的细胞比例，见图5A。研究发现，溃疡性结肠炎组单核细胞的数量显著高于健康对照组，而NK细胞低于健康对照组，见图5B。溃疡性结肠炎组的NK_C2细胞亚群显著高于健康对照组，见图5C。两组人群差异表达基因分析结果显示：①单核细胞主要富集在抗原呈递和免疫反应激活等生物过程，KEGG通路分析显示其富集在沙门氏菌感染、抗原加工和呈递、氨基酸的合成等通路，见图5D，E；②NK_C2细胞亚群则富集在T细胞激活、细胞因子生成和干扰素相关的信号通路，同时与EB病毒感染、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、抗原加工和呈递相关，见图5F，G。

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引言

溃疡性结肠炎是一种局限于肠黏膜的慢性特发性炎性疾病[1]。它是一个慢性反复发作的过程，同时具有较高的致癌风险，严重影响了患者的生活质量[2]。中医认为，溃疡性结肠炎致病因素以湿邪为主，兼夹痰浊、热毒等，基本病机为脾虚健运失司，湿热蕴结肠道[3]。脾虚湿蕴证是溃疡性结肠炎的常见证候，特别是临床缓解期的溃疡性结肠炎患者[4]。辨证论治是中医药治疗溃疡性结肠炎的常用方法，中医师根据患者的临床表现和自身经验进行辨治。目前，学者运用生物信息学技术主要探讨中药对溃疡性结肠炎的治疗机制或溃疡性结肠炎的发病机制[5-8]。很少研究者使用生物信息学关注溃疡性结肠炎中医分型的分子特征。
单细胞转录组测序是在单个细胞水平对mRNA进行高通量测序的一项新技术，原理是将分离的单个细胞中微量的mRNA通过扩增后再进行高通量测序，获得单个细胞的表达值，从而从细胞水平反映其总体特征[9-10]。单细胞转录组测序可用于研究细胞异质性，确定不同表型的分子特征，鉴定细胞分型及其标记物，预测细胞分化与研究发育轨迹等，被广泛应用于生物和医学的各种领域[11-13]。作者所在团队开展溃疡性结肠炎的单细胞转录组测序和流式细胞研究，结果发现活动期溃疡性结肠炎的免疫特征表现为CD38+TNF+EM T调节细胞、CXCR3+CCR4+幼稚B细胞、HLA-DR+CD14+IL21+单核细胞、HLA-DR+CCR7+树突状细胞和CD8A+IFNG+cNK细胞的增加[14]。
溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者缺乏客观的生物标志。该研究使用单细胞转录组测序技术比较溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者和健康对照者的细胞种类和基因特征，寻找溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的生物标志，深入探讨溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的免疫细胞分子特征，希望为其临床诊断及治疗提供参考依据。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计单细胞转录组测序分析。
1.2 时间及地点实验于2021年6-10月在广州中医药大学第一附属医院与广州中医药大学基础医学院完成。
1.3 对象 2021年6-10月纳入广州中医药大学第一附属医院脾胃科就诊的溃疡性结肠炎患者2例，健康对照者2例。该研究获得广州中医药大学第一附属医院伦理委员会批准(编号：ZYYECK[2019]160)。所有对象均签署知情同意书。
溃疡性结肠炎患者纳入标准：①诊断为溃疡性结肠炎；②中医诊断为脾虚湿蕴证；③年龄大于18岁。溃疡性结肠炎的西医诊断标准遵循中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组发布的《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2018年，北京)》[15]。根据溃疡性结肠炎的临床表现、实验室检查、腹部影像学检查、消化内镜检查和组织病理学表现进行综合分析，排除感染性和其他非感染性结肠炎的可能后进行诊断。脾虚湿蕴证的诊断参考《溃疡性结肠炎中医诊疗专家共识意见(2017)》[16]。具体如下：主症：①黏液脓血便，白多赤少，或为白冻；②腹泻便溏，夹有不消化食物；③脘腹胀满。次症：①腹部隐痛；②肢体困倦；③食少纳差；④神疲懒言。舌脉：①舌质淡红，边有齿痕，苔薄白腻；②脉细弱或细滑。证候诊断：主症2项，次症2项或3项，参考舌脉，即可诊断。健康对照者主要通过次症和舌脉进行判断。上述诊断均由2名脾胃科主治医师或副主任医师进行独立诊断，如有争议则由1名主任医师作出最终判断。
健康对照者纳入未患慢性疾病的健康人。
1.4 方法
1.4.1 样品采集和制备在结肠镜下，收集所有对象乙状结肠相同部位新鲜组织样本，PBS冲洗干净，将组织样本转移至预热的含有2 mg/mL胶原酶P(Roche，美国)和10 U/μL DNaseⅠ的DMEM培养基(Gibco，美国)中。将样本制备成单细胞悬液，之后进行细胞计数和细胞活率检测，若细胞活率≥80%，则将细胞浓度调整为1×109 L-1，交付华大基因公司进行单细胞转录组测序。
1.4.2 单细胞转录组测序文库制备及测序将组织样本37 ℃消化60 min，过滤并400×g离心5 min，然后采用荧光激活细胞分选术选择活细胞，人工选择活单细胞。根据制造商的指南，将细胞清洗并制备成单细胞悬液，随后进行上机前细胞计数和细胞活率检测，若细胞活率≥80%，则将细胞浓度调整为(7-12)×108 L-1。利用微流控芯片将制备好的细胞悬液包裹在液滴中，随后细胞破裂形成单细胞油包水的乳滴(GEMs)结构，最后根据10x基因组学方案制备单细胞文库。单细胞转录组测序文库在HiSeq4000(Illumina)上进行测序[17]。
1.4.3 单细胞转录组测序数据预处理和质量控制使用CellRanger版本50.0对FASTQ文件进行解复用，将它们与hg19人类参考转录组对齐，并提取它们的细胞和UMI条形码。该管道的输出是每个样本的数字基因表达矩阵，它记录了与每个细胞条形码相关的每个基因的UMI数量。过滤数字基因表达基质以去除低质量细胞，定义为检测到少于200个不同基因或者大于最大基因数90%的细胞。同时将线粒体比例从小到大进行排序，过滤掉后15%的细胞。为了解释细胞间测序深度的差异，通过每个细胞的UMI总数进行标准化UMI计数，并转换为每10 000个转录本。
1.4.4 聚类和降维分析对预处理后的单细胞转录组测序对象进行主成分分析，并通过t分布随机邻居嵌入(t-distributed stochastic neighbor embedding，tSNE)算法对数据进行降维分析[18]。
1.4.5 细胞类型注释该研究结合手动和自动注释2种方法对细胞类型进行注释。使用无监督分类法鉴定细胞大类，再取各细胞大类的子集进行鉴定，综合多个参考集与肠黏膜细胞特异表达基因对细胞小类进行注释[19]。
1.4.6 差异表达分析使用Seurat的FindConservedMarkers函数比较溃疡性结肠炎患者和正常人各细胞群的基因表达情况[20]。使用Seurat的FindMarkers函数比较各细胞群在溃疡性结肠炎组与健康对照组的基因表达情况，得到差异表达基因。差异表达基因定义为logFC绝对值> 0.5且校正P值< 0.05的基因。随后将细胞亚组的差异表达基因进行富集分析，并从生物学过程、细胞组分、分子功能3个层面解释基因的生物学功能。
1.4.7 细胞信号通讯分析结肠黏膜包括多种类型的细胞，细胞之间各种活动的协调需要建立通讯网络。例如免疫细胞的生长发育和分化，细胞维持各种生理活动的协调，都需要细胞之间的交流和通讯[21]。为了研究细胞群之间的配体-受体相互作用，使用iTALK包来推断不同细胞间的交流和通讯[22]。
1.5 主要观察指标 ①细胞类型；②两组之间的基因特征；③特异性基因在亚群中表达量分布。
1.6 统计学分析采用R 4.0.3(https://www.r-project.org/)软件分析。通过Wilcoxon秩和检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

目前，尽管溃疡性结肠炎的确切病因和发病过程仍不明确，但溃疡性结肠炎发病与肠道屏障功能障碍、遗传风险和生态失调免疫介导的组织破坏等密切相关，最终引起肠道炎症的发展和恶化[23-25]。该研究使用单细胞转录组测序技术探索溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者与健康人群的免疫细胞分子特征差异。
该研究确定了溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的免疫细胞特征。对比健康对照组，溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者CD4+细胞毒性T细胞、初始CD8+T细胞、生发中心、S100AhighB细胞、活化B细胞、NK_C2细胞和单核细胞的表达增高，而Tfh细胞、NKT细胞和NK细胞的表达减少。
《黄帝内经》提出“脾为之卫”，因脾主运化、主升清，可滋养卫气，使其布达皮肤、黏膜等部位，具防御之功，此与肠道免疫屏障功能相关[26]。脾虚运化失施，卫外不足，防御功能下降，致疾病发生；肠黏膜屏障免疫功能失调，致黏膜损伤，长久不愈。该研究发现对比健康对照组，溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的NKT细胞明显减少。该研究结果与孙莺[27]结果一致，其研究发现对比正常人，脾虚组人群的NKT细胞明显降低，其可能原因如下：KEGG富集分析显示NKT细胞上调了糖酵解和HIF-1信号通路，这可能影响其他细胞如调节性T细胞分化，导致炎症抑制或持续存在[28-29]。NKT细胞通过控制微生物定植和协调其他肠道细胞的功能，在宿主肠道防御和维持肠道屏障功能中发挥重要作用[30]。
溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的B细胞特征如下：①溃疡性结肠炎患者的生发中心和活化B细胞明显增多。生发中心是体液免疫发生的重要部位，是抗原特异性B细胞激活后大量增殖形成的结构。溃疡性结肠炎患者的生发中心和活化B细胞明显增多，说明受到炎症刺激后溃疡性结肠炎患者的B细胞被激活，从而增加了肠道的体液免疫[31]。②S100AhighB细胞增多。已有研究发现失调的S100 蛋白与人类恶性肿瘤有关，例如S100A1、S100A2 和 S100A11是结直肠癌潜在的预后标志物[32]。溃疡性结肠炎患者高发结直肠癌，提示S100AhighB细胞可能与“炎-癌转化”有关，该结果还待进一步的研究和验证[33]。
与健康对照组对比，溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的CD4+细胞毒性T细胞增多而Tfh细胞减少。在溃疡性结肠炎的状态下，肠道CD4+细胞毒性T细胞增加，导致炎症加重[34]。Tfh细胞减少可能与CD4+细胞毒性T细胞增多有关。已有研究表明Tfh和CD4+细胞毒性T细胞分化存在拮抗作用[35]。
该研究每组只纳入2例，其主要原因如下：①很多研究也纳入2例，并得到良好的结果。例如SOHNI等[36]利用单细胞转录组测序分析了2例能生育个体的睾丸细胞。PAULSON等[37]纳入2例默克尔细胞癌症患者，研究发现默克尔细胞在免疫治疗中出现抵抗或者耐药性，跟遗传性HLA的丢失存在关系；②虽然每组只有2例，但是每例的细胞数量都大于2 000个，其可以保证结果的稳定性。当然该研究没有开展实验进一步验证结果，是不足之处。为了展示更可靠的结果，希望纳入更多的患者，开展相应的实验研究进一步验证。
综上所述，溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者与健康者的免疫细胞分子特征存在较大差异，溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者表达较高的CD4+ 细胞毒性T细胞、初始 CD8+T细胞、生发中心、S100AhighB细胞、活化B细胞、NK_C2细胞和单核细胞；同时表达较低的Tfh细胞、NKT细胞和NK细胞。溃疡性结肠炎炎性结肠组织的免疫细胞构成和细胞代谢产物可能诱导溃疡性结肠炎发病和进展，这些差异可能与溃疡性结肠炎的发生发展有关，可能是溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的生物标志。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

单细胞转录组测序溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证患者的免疫细胞分子特征

Molecular characteristic of immune cells in ulcerative colitis patients with spleen deficiency and dampness syndrome based on single-cell RNA sequencing

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