3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1调控破骨细胞对骨质疏松小鼠骨密度的影响

doi:10.12307/2021.168

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (29): 4680-4684.doi: 10.12307/2021.168

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3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1调控破骨细胞对骨质疏松小鼠骨密度的影响

周佺1，张亚男1，白亦光1，张琼2，农海斌1，刘明富1，曾高峰2，宗少晖1

1广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科，广西壮族自治区南宁市 530000；2广西医科大学公共卫生学院，广西壮族自治区南宁市 530000

收稿日期:2020-11-18 修回日期:2020-11-21 接受日期:2020-12-24 出版日期:2021-10-18 发布日期:2021-07-22
通讯作者: 宗少晖，教授，主任医师，博士生导师，广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科，广西壮族自治区南宁市 530000 曾高峰，教授，博士生导师，广西医科大学公共卫生学院，广西壮族自治区南宁市 530000
作者简介:周佺，男，1986年生，黑龙江省牡丹江市人，汉族，广西医科大学在读硕士，主要从事脊柱外科学、骨组织工程方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81860402)，项目负责人：宗少晖；广西自然科学基金项目(2017GXNSFAA198073)，项目负责人：宗少晖；广西医学高层次骨干人才培养‘139’计划，项目负责人：宗少晖；广西高等学校高水平创新团队及卓越学者计划，项目负责人：宗少晖

Effect of 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 regulating osteoclasts on bone mineral density in osteoporotic mice

Zhou Quan1, Zhang Yanan1, Bai Yiguang1, Zhang Qiong2, Nong Haibin1, Liu Mingfu1, Zeng Gaofeng2, Zong Shaohui1

1Department of Spine Osteopathia, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; 2School of Public Health, Guangxi Medical University, Nanning 530000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China

Received:2020-11-18 Revised:2020-11-21 Accepted:2020-12-24 Online:2021-10-18 Published:2021-07-22
Contact: Zong Shaohui, Professor, Chief physician, Doctoral supervisor, Department of Spine Osteopathia, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China Zeng Gaofeng, Professor, Doctoral supervisor, School of Public Health, Guangxi Medical University, Nanning 530000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
About author:Zhou Quan, Master candidate, Department of Spine Osteopathia, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81860402 (to ZSH); the Natural Science Foundation of Guangxi Zhuang Autonomous Region, No. 2017GXNSFAA198073 (to ZSH); The “139” Plan for Cultivating High-level Medical Talents in Guangxi (to ZSH); the High-level Innovation Team and Excellent Scholar Program of Guangxi Colleges and Universities (to ZSH)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1：首先在胰岛素信号转导研究中发现，它作为AGC蛋白的上游分子可通过依赖磷脂酰肌醇3，4，5-三磷酸性方式激活蛋白激酶B 308位苏氨酸残基，因而得名。
骨质疏松症：是由于多种原因导致的骨密度和骨质量下降，骨微结构破坏，造成骨脆性增加，从而容易发生骨折的全身代谢性骨病。

背景：对于3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1，PDK1)的学术研究，国内外主要集中在内分泌和肿瘤学等学科领域，而在骨科学中关于调控破骨细胞对骨质疏松的改善尚未有系统研究与报道。
目的：探索PDK1调控破骨细胞对骨质疏松症发病的影响及分子机制，为临床防治骨质疏症提供新的药物靶点。
方法：提取PDK1基因条件性敲除型小鼠(PDK1-cKO)及野生型C57小鼠全骨髓细胞并诱导分化为破骨细胞，将诱导的破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色，观察两组破骨细胞的数量及形态变化，蛋白免疫印迹法检测PDK1基因敲除后调控破骨细胞分化相关蛋白的表达。构建两组小鼠卵巢切除模型，采用Micro-CT扫描、抗酒石酸酸性磷酸酶染色来观察PDK1基因敲除对骨质疏松症的影响。
结果与结论：①抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果：相比较于野生型组，PDK1-cKO组破骨细胞数量在第4，6天显著减少(P < 0.05)；②蛋白免疫印迹结果显示：PDK1-cKO组调控破骨细胞分化的关键蛋白AKT磷酸化水平下降(P < 0.05)；③Micro-CT扫描结果：PDK1-cKO组比野生型组骨质疏松情况明显减轻(P < 0.05)；④抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果：PDK1-cKO组胫骨远端破骨细胞较野生型组明显减少(P < 0.05)；⑤结果显示：PDK1基因可通过调控破骨细胞分化、优化骨代谢平衡来改善骨质疏松症状，有作为治疗骨质疏松疾病药物靶点的可能。
https://orcid.org/0000-0002-0769-5517 (周佺)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨质疏松, 破骨细胞, 基因敲除, PDK1, 小鼠, 抗酒石酸酸性磷酸酶, 骨重建

Abstract: BACKGROUND: Global researches on 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 (PDK1) are mainly carried out in the fields of endocrine and oncology. There is no systematic research and report on whether the regulation of osteoclast improves osteoporosis in osteology.
OBJECTIVE: To explore the effect and molecular mechanism underlying the PDK1 regulation of osteoclasts in the pathogenesis of osteoporosis, so as to provide a new drug target for the clinical treatment of osteopenia.
METHODS: Osteoclasts were induced from whole bone marrow cells of PDK1 conditional knockout mice (PDK1-cKO) and wild-type mice. The induced osteoclasts were stained with tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP), and the changes in the number and morphology of osteoclasts in the two groups were observed. Western blot assay was used to detect the expression of proteins related to regulation of osteoclast differentiation after PDK1 gene knockout. A mouse model of ovariectomy was established to observe the effect of PDK1 knockout on osteoporosis using Micro-CT scanning and TRAP-stained sections.
RESULTS AND CONCLUSION: TRAP staining results indicated that the number of osteoclasts with positive TRAP staining in the PDK1-cKO group was significantly reduced on the 4th and 6th days compared with the wild-type group (P < 0.05). Western blot results showed that the phosphorylation level of protein kinase B, a key protein regulating osteoclast differentiation, was decreased in the PDK1-cKO group (P < 0.05). After ovariectomy model was detected by Micro-CT scan in the two groups of mice, it was concluded by various metrological analyses that osteoporosis was significantly alleviated in the PDK1-cKO group compared with the wild-type group (P < 0.05). TRAP staining results revealed that TRAP-positive osteoclasts in the distal tibia of PDK1-cKO mice were significantly reduced compared with the wild-type group (P < 0.05). In conclusion, PDK1 gene can improve osteoporosis symptoms by regulating osteoclast differentiation and optimizing bone metabolism balance, which may be used as a drug target for the treatment of osteoporosis.

Key words: osteoporosis, osteoclasts, gene knockout, PDK1, mouse, tartrate-resistant acid phosphatase, bone remodeling

中图分类号:

周佺, 张亚男, 白亦光, 张琼, 农海斌, 刘明富, 曾高峰, 宗少晖. 3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1调控破骨细胞对骨质疏松小鼠骨密度的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(29): 4680-4684.

Zhou Quan, Zhang Yanan, Bai Yiguang, Zhang Qiong, Nong Haibin, Liu Mingfu, Zeng Gaofeng, Zong Shaohui. Effect of 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 regulating osteoclasts on bone mineral density in osteoporotic mice[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(29): 4680-4684.

图/表（结果） 4

2.1 破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果 PDK1-cKO组及野生型组的骨髓巨噬细胞在巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体诱导下，第2天开始出现伪足并有融合趋势，但两组之间在形态和数量上并无差异，见图1A；诱导培养至第4天，可见圆形破骨细胞形成，但细胞核数量较少且细胞体积偏小，PDK1-cKO组抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞较野生型组少，差异有显著性意义(P < 0.001)，见图1B，C；诱导培养至第6天，破骨细胞数量和体积达到高峰，野生型组有大量抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性多核破骨细胞，而PDK1-cKO组破骨细胞分化较少，体积偏小，差异有显著性意义(P < 0.001)，见图1D，E。

2.2 蛋白免疫印迹检测结果 PDK1-cKO组的PDK1蛋白表达量对比野生型组明显降低，但并不完全消失，见图2A，B。PDK1作为PI3K/PDK1/AKT通路上的重要基因，在敲除PDK1表达后可以有效减少AKT在308位点的磷酸化水平，对比野生型组差异有显著性意义(P < 0.001)，见图2C-E。

2.3 Micro-CT扫描及三维重建结果与野生型组对比，PDK1-cKO组骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量增多，而骨小梁间隔明显减少，差异有显著性意义(P < 0.001)，结果表明在骨质疏松模型中，PDK1基因减少可有效保护模型小鼠的骨量丢失，见图3。

2.4 组织形态学切片结果野生型组骨小梁表面及生长板下排列有大量的抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞，而PDK1-cKO组小鼠胫骨骨小梁表面的抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞数量明显减少，差异有显著性意义(P < 0.001)，这一结果表明条件性敲除PDK1后能通过抑制破骨细胞的生成，从而减少骨吸收，有效平衡了切除卵巢后雌激素减少造成的骨稳态失衡，见图4。

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(责任编辑：MZH，ZN，SX)

引言

全球人口正在向着老龄化飞速发展，而现代医疗系统对随年龄增长而发病率增高的很多种疾病并没有完善的预防和治疗措施，这其中包括骨科常见疾病——骨质疏松症[1]。骨质疏松症是多种原因导致的骨微小结构受损、全身骨量减少，进而导致骨的密度、韧性降低，最终骨强度变小，从而骨折风险增高的一种代谢性骨科常见疾病[2-3]。世界卫生组织预计，在2025年，全世界骨质疏松症的患者将达到2.21亿，老年人、绝经后妇女是骨质疏松症的主要发病人群并且每年发病都呈递增趋势[4]。据文献报道，约1/2的绝经后女性会至少经历过一次骨折，其原因是因为雌激素分泌减少或丧失而导致的骨质疏松症，此类患者行手术治疗或保守治疗后，愈合时间及预后都远远低于未患骨质疏松症的骨折患者[5-7]。一些行关节置换手术的患者，如果同时患有骨质疏松症，则植入假体部位非常容易发生无菌性松动，是造成人工假体脱落失效、翻修的主要原因[8-9]。
虽然治疗骨质疏松症已有双膦酸盐、甲状旁腺激素等相对成熟的临床用药，并已取得了不错的疗效，但相关报道其具有严重并发症，如双膦酸盐类药物的不良反应可能导致肾功能受损、颌骨病变、食管癌等严重后果。骨质疏松症患者治疗时间长、并发症多、费用高、患者基数庞大、不良反应强，对于患者及患者家庭来说经济、心理负担加重，对于社会也造成很大的经济损失，因此寻找新的有效治疗方案是十分迫切的[10]。3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1，PDK1)在肿瘤及内分泌领域被广泛研究，但骨科领域研究报道较为匮乏。作为PI3K/PDK1/AKT通路中的重要基因，PDK1可以通过激活308位点的AKT磷酸化调控破骨细胞的生成与分化，使破骨细胞增多从而导致骨质疏松症的发生。该研究条件性敲除PDK1基因以调控破骨细胞的分化，从而减轻小鼠骨质疏松的症状，并研究其产生的分子机制，为临床上骨质疏松症的预防和治疗提供新参考位点。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计 PDK1-cKO小鼠及野生型小鼠体内及体外实验，独立样本t检验。
1.2 时间及地点 2018年12月至2020年7月在广西医科大学科技楼和实验动物中心完成。
1.3 材料采用Cre-LoxP重组酶系统原理，在培育出 PDK1flox/flox小鼠后，用特殊的Cre小鼠进行交配，最后得出PDK1-cKO小鼠12只，6周龄及12周龄各6只，体质量(20± 5) g，SPF级；野生型C57小鼠12只，6周龄及12周龄各6只，体质量(20±5) g，为SPF级。饲养条件：独立通气笼(IVC笼)，每天光照、黑暗各12 h，自由进食标准饲料和淡水。所有实验用小鼠饲养、处理均符合动物伦理学标准。
胎牛血清、α-MEM完全培养基(Gibco公司)；一抗：PDK1抗体、AKT抗体、p-AKT抗体、GAPDH抗体(CST公司)；抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒(Sigma公司)；抗体稀释液、牛血清白蛋白(碧云天公司)；蛋白质提取试剂盒(索莱宝公司)；巨噬细胞集落刺激因子、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)(R&D公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 破骨细胞的诱导和培养 6周龄PDK1-cKO小鼠和野生型雄性小鼠各6只，麻醉后颈椎离断，双下肢用体积分数75%乙醇消毒，切除长骨，冲洗骨髓腔提取全骨髓细胞，提取的全骨髓细胞在37 ℃下用含30 μg/L巨噬细胞集落刺激因子、体积分数10%胎牛血清、100 mg/L青霉素、100 mg/L链霉素的α-MEM培养基培养，每2 d换液1次，4 d后可见骨髓来源的单核巨噬细胞贴壁生长，用10 mL 1×PBS洗2遍，胰蛋白酶消化，离心，重悬，计数，以6×103个/孔种植于96孔板，置于37 ℃，体积分数5%CO2培养箱中培养，24 h后用含30 μg/L巨噬细胞集落刺激因子、30 μg/L核因子κB受体活化因子配体、体积分数10%胎牛血清的α-MEM完全培养基进行培养，每天观察细胞的生长情况及其形态变化，每2 d换液1次待用。
1.4.2 抗酒石酸酸性磷酸酶染色将上述骨髓来源巨噬细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色并在倒置显微镜下观察第2，4，6天时的破骨细胞数目。按照说明书配置抗酒石酸酸性磷酸酶染色液，将骨髓来源巨噬细胞在诱导培养第2天、第4天及达到破骨细胞分化高峰的第6天进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色，首先吸出96孔板的培养液，1×PBS清洗2次，加入 40 g/L多聚甲醛固定10 min，再用1×PBS洗涤2次，向每孔中加入100 μL抗酒石酸酸性磷酸酶染色液，在37 ℃恒温箱孵育60 min，吸出染色液，1×PBS冲洗3次，在倒置显微镜下观察并计数抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性细胞数，进行统计学分析。
1.4.3 蛋白免疫印迹检测影响破骨细胞分化的关键蛋白表达量将PDK1-cKO小鼠及野生型小鼠的骨髓来源巨噬细胞以1×104个/孔的密度种植到6孔培养板上，用100 μg/L核因子κB受体活化因子配体刺激后，置于恒温培养箱中孵育24 h。蛋白的提取在冰上进行，用预冷1×PBS洗涤3遍，然后加入适量的含有PMSF和蛋白磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液(终浓度为1 μmol/L，现配现用)，在培养板中按每10 cm2加 100 μL裂解液的比例加入裂解液，充分裂解后转入EP管中，离心15 min，用BCA法测定蛋白浓度，加入5×电泳上样缓冲液，浴锅内煮沸10 min，保存备用。在电泳槽内加入配置好的电泳缓冲液，放入预制胶板，每孔加入等量蛋白进行上样，通电保持80 V恒压电泳至溴酚蓝跑出浓缩胶层，调整电压为120 V；当溴酚蓝迁移至距离分离胶下缘约1 cm 时，停止电泳；冰浴条件下进行恒温转膜，将蛋白从胶板转移至PVDF膜上；转膜后牛血清白蛋白封闭1 h；封闭结束后，用TBST清洗；按照抗体说明书推荐的稀释比稀释PDK1、AKT、p-AKT一抗抗体，摇床冰浴4 ℃孵育过夜；将膜用TBST再次清洗，然后摇床室温孵育二抗1 h；二抗孵育完成后将显色液滴加于膜上，曝光显影；最后用 Image J 软件对目的条带进行灰度值计算。
1.4.4 小鼠骨质疏松模型建立及取材 12周龄的PDK1-cKO和野生型雌性小鼠(n=6)用七氟烷麻醉后，给予青霉素(200 U/g)预防感染。小鼠取仰卧位，腹部剃毛后用0.5%碘伏给手术位置消毒，切除双侧卵巢，对相关包膜及输卵管进行缝合处理，每日观察小鼠状态，防止其撕咬伤口。如果术后小鼠行动自如，恢复良好，则不必继续使用抗生素，可以喂食灭菌后的瓜子补充营养。若小鼠出现食欲不振，精神萎靡，感染，则可给予青霉素200 U/g，每2 d腹腔注射1次，共计3次。手术中严格按照无菌原则进行操作，消毒范围广，手术切口小，轻拿轻放，注意复苏保暖则可有效避免小鼠的损失，小鼠预后良好，减少实验材料以及时间的浪费。在骨质疏松模型成功建立的第4周，麻醉后颈椎离断处死小鼠，取小鼠腰椎和胫骨备用。
1.4.5 Micro-CT扫描和三维骨重建取下的腰椎组织在保持完整，保证无折断和损毁的前提下，尽可能多的去除腰椎周围软组织结构。取材后的新鲜标本放在40 g/L多聚甲醛溶液中固定24-48 h，取出时用体积分数75%乙醇润洗1次，随后浸泡于体积分数75%乙醇，放入样品管中，进行Micro-CT扫描(SCANCO Medical AG，型号μCT100)。扫描参数为：电压70 kV，电流200 μA，分辨率10 μm。
1.4.6 组织病理学染色取下的胫骨在10%乙二胺四乙酸中脱钙2周，然后进行脱水，石蜡包埋，并用切片机切取5 μm厚石蜡切片，用配置好的抗酒石酸酸性磷酸酶染液染色，倒置显微镜下观察抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞数量及形态。
1.5 主要观察指标 ①PDK1-cKO小鼠及野生型小鼠破骨细胞诱导分化第2，4，6天进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色并计数阳性破骨细胞的数量及形态；②PDK1-cKO小鼠及野生型小鼠破骨细胞诱导分化第6天，蛋白免疫印迹法检测PDK1、AKT、p-AKT的蛋白表达量；③PDK1-cKO小鼠及野生型小鼠骨质疏松造模后第4周腰椎Micro-CT扫描和三维骨重建，分析小鼠腰3椎体的骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁间隔、骨小梁厚度；④PDK1-cKO小鼠及野生型小鼠骨质疏松造模后第4周，胫骨抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察阳性破骨细胞数量及形态。
1.6 统计学分析用SPSS 22.0软件进行统计分析，计量数据用x±s表示，采用独立样本t检验对数据进行分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

骨骼在人体中具有保护、支持、造血、贮存及运动功能，是人体极为重要的组织。人体骨骼在不断更新，每天有3%-5%的骨骼溶解，又有3%-5%的新骨骼形成，保持骨代谢平衡转换[11-12]。人体正常的骨稳态是由于有破骨细胞和成骨细胞相协调，从而达到一种吸收与形成的动态平衡。当体内骨细胞破坏增多、雌激素水平下降，或者出现较严重的炎症反应时，破骨细胞的数量会增加，使得骨吸收大于骨形成，打破了这种动态平衡，最终发展成为骨质疏松[13-16]。因此，破骨细胞分化过度是导致骨质疏松的重要原因，如何抑制破骨细胞的活性已成为治疗骨质疏松症的关键所在。
以往研究发现BX-912通过抑制PDK1基因表达，从而抑制骨的重吸收，提示PDK1在骨质疏松症治疗上有巨大的可能性[17-18]。该实验选择了条件性敲除的方式敲除小鼠PDK1基因，在体外实验中用抗酒石酸酸性磷酸酶染色来观察小鼠骨髓来源单核巨噬细胞在巨噬细胞集落刺激因子及核因子κB受体活化因子配体诱导下破骨细胞的生成情况。实验发现，敲除了PDK1基因的PDK1-cKO组小鼠对比野生型组小鼠，破骨细胞生成数量明显减少，而破骨细胞是唯一一种可以进行骨吸收功能的细胞，过度分化可诱发骨质疏松症患病概率或加重骨质疏松症状[19]，这就更加确定了破骨细胞和骨质疏松症之间的关系受调控破骨细胞的PDK1基因影响很大[20]。PI3K/PDK1/AKT通路是导致骨质疏松症的经典通路，而PDK1作为这条通路上的重要基因，当PDK1被激活，其下游AKT也被识别并激活，在Thr308位点的AKT迅速磷酸化来激活下游mTORC1蛋白等，并激活mTOR通路。mTOR是一个丝氨酸/苏氨酸激酶，调节细胞生长、繁殖以及细胞代谢等重要的细胞活动。近几年的研究表明，mTORC1在骨代谢相关细胞的自噬过程中发挥重要功能，同时破骨细胞分化与骨吸收功能都依赖于mTORC1信号通路的激活[21-27]。在蛋白免疫印迹实验中发现，PDK1-cKO组小鼠因为选择性敲除了部分PDK1基因，导致PDK1基因表达减少，从而能够有效降低下游AKT磷酸化，从而使破骨细胞的诱导分化受到有效控制[28-30]。一些研究表明，小鼠和人类在绝经后骨质疏松症发生比例更高，这很可能是由于雌激素的功能丧失或减少所致[31-37]。在体内实验中通过摘除PDK1-cKO组及野生型组成熟雌性小鼠的卵巢来模拟雌激素功能丧失，随后在硬组织切片抗酒石酸酸性磷酸酶染色中发现两组小鼠胫骨中的破骨细胞数量同样对比明显，这与体外实验结果一致，证明了减少PDK1基因刺激破骨细胞分化在体内同样有实质性改变。最后，在小鼠卵巢摘除导致骨质疏松症模型基础上，用Micro-CT对PDK1-cKO组及野生型组小鼠的腰椎进行扫描，通过对比分析两组小鼠腰椎的骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量、骨小梁间隔，发现PDK1-cKO组小鼠椎体各项指标均优于野生型组，这也可以证明PDK1减少对骨质疏松症状有明显改善作用。
该研究数据确定了PDK1基因缺失可以抑制破骨细胞分化，并通过体内、体外实验及影像学观察印证了此观点。
从机制上讲，PDK1通过激活通路下游308位点的AKT，并可使部分AKT磷酸化诱导增强破骨细胞生成，因此，抑制PDK1可能为破骨细胞活化导致的骨科疾病(包括骨质疏松症、骨折、关节炎和骨坏死)提供特定的治疗干预。虽然实验证明了PDK1的重要性，但在动物模型的数量、相关机制及临床转化方面还欠缺着不足，后续会做出进一步研究。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1调控破骨细胞对骨质疏松小鼠骨密度的影响

Effect of 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 regulating osteoclasts on bone mineral density in osteoporotic mice

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