免疫调控受体TIGIT在“怒”模型大鼠胸腺及外周血单个核细胞表达的意义

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2765

中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (26): 4183-4189.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2765

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免疫调控受体TIGIT在“怒”模型大鼠胸腺及外周血单个核细胞表达的意义

陈俊贤¹，李玮婷²，杨军平²，王莹²，金桂林²

¹江西中医药大学，江西省南昌市 330004；²江西中医药大学附属医院检验科，江西省南昌市 330004

收稿日期:2019-09-20 修回日期:2019-09-24 接受日期:2019-11-19 出版日期:2020-09-18 发布日期:2020-09-02
通讯作者: 杨军平，副教授，硕士生导师，江西中医药大学附属医院检验科，江西省南昌市 330004
作者简介:陈俊贤，男，1993年生，汉族，广东省江门市人，江西中医药大学在读硕士，主要从事中西医结合免疫学研究。
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(81860806)

The significance of immunoregulatory receptor TIGIT expression in thymus and peripheral blood mononuclear cells in an “anger” rat model

Chen Junxian¹, Li Weiting², Yang Junping², Wang Ying², Jin Guilin²

¹Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, Jiangxi Province, China;²Clinical Laboratory, Affiliated Hospital of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, Jiangxi Province, China

Received:2019-09-20 Revised:2019-09-24 Accepted:2019-11-19 Online:2020-09-18 Published:2020-09-02
Contact: Yang Junping, Associate professor, Master’s supervisor, Clinical Laboratory, Affiliated Hospital of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, Jiangxi Province, China
About author:Chen Junxian, Master candidate, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, Jiangxi Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81860806

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

TIGIT(T cell immunoglobulin and ITIM domain)：是2005年由Abbas等发现的由免疫球蛋白(IgV)样结构、Ⅰ型跨膜结构和免疫受体酪氨酸基序(ITIM)组成的跨膜分子，其胞内的ITIM基因序列，后来被研究组定义为具有负性免疫调节的基因结构，并证实了TIGIT分子具有直接或间接抑制T细胞活化的作用；TIGIT在人与啮齿动物的同源性为58%。

“怒”模型建立：“怒”动物模型的制备有多种方法，可采用刺激怒吼中枢的方法诱发怒反应、夹尾间接激怒法、颈部枷锁模具限制法、社会隔离与居住入侵法等。在复制精神心理应激“怒”模型方法中，尚未有明确的评断标准。实验通过孤立饲养及日夜颠倒改变模型大鼠的生存环境，提高了大鼠对环境应激因素的敏感性，旷场试验结果表明，随应激时间延长，模型大鼠水平和垂直活动活跃及修饰次数增多，说明大鼠心理焦虑度、紧张度升高，同时伴随攻击行为试验得分上升，提示大鼠处于易激易怒的应激状态，说明应激“怒”模型建立是有效的。

背景：既往研究表明，应激反应能引起机体免疫功能紊乱。免疫调控受体TIGIT能够抑制T细胞活性，促进T细胞凋亡及T细胞亚群分布失衡。应激反应的免疫反应机制是否与TIGIT的表达及作用相关，目前尚未明确。

目的：探讨免疫调控受体TIGIT在“怒”模型大鼠胸腺细胞及外周血单个核细胞中的表达情况及TIGIT与免疫功能的相关意义。

方法：将48只Wistar雄性大鼠随机分成空白组(正常大鼠)、模型7 d、14 d、21 d组，每组12只。除空白组外，其余各组以“社会隔离法”结合足底电击法进行“怒”模型大鼠复制。以旷场试验、攻击行为试验观察大鼠行为学变化，记录试验前后体质量变化及胸腺指数，应用免疫组织化学法观察各组大鼠胸腺及外周血单个核细胞中TIGIT阳性表达情况，流式细胞术测试外周血CD4⁺、CD8⁺ T细胞亚群表达水平，并进行胸腺细胞及外周血单个核细胞上TIGIT表达与外周血CD4⁺T/CD8⁺T淋巴细胞比值的相关性分析。实验方案经江西中医药大学动物实验伦理委员会批准。

结果与结论：①模型14 d组、21 d组大鼠旷场试验水平活动、垂直活动得分，修饰动作次数较空白组升高(P < 0.05，或P < 0.01)；②模型7 d组、14 d组、21 d组攻击行为试验的攻击隐藏时间较空白组明显缩短(P < 0.01)，攻击次数和攻击累计时间明显增多(P < 0.01)，体质量和胸腺指数明显下降(P < 0.05，或 P < 0.01)；③模型7 d组、14 d组胸腺及外周血单个核细胞中TIGIT表达较空白组明显升高(P < 0.01)；④模型7 d组、14 d组大鼠外周血T细胞亚群CD4⁺/CD8⁺比值较空白组明显下降(P < 0.05, 或P < 0.01)；⑤大鼠外周血T细胞亚群CD4⁺/CD8⁺比值与胸腺T细胞上TIGIT表达呈负相关(r²=0.627 0，P < 0.00 01)，与单个核细胞上TIGIT表达呈负相关(r²=0.624 4，P < 0.000 1)；⑥结果提示，模型大鼠处于应激“怒”状态，动物行为学发生明显改变，应激大鼠出现胸腺萎缩及外周血T淋巴细胞亚群CD4⁺/CD8⁺比值水平异常，免疫功能出现紊乱，此现象可能与胸腺及外周血单个核细胞TIGIT表达水平相关，但其具体作用机制需进一步研究。

ORCID: 0000-0001-9886-5835(陈俊贤)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: TIGIT, 应激, T淋巴细胞, 胸腺, “怒”模型, 动物模型, 免疫调控受体

Abstract:

BACKGROUND: Previous studies have shown that stress response can cause immune dysfunction in the body. T cell immunoglobulin and ITIM domain (TIGIT) is an immunoregulatory receptor that can inhibit T cell activity, promote T cell apoptosis and promote T cell subgroup distribution imbalance. Whether the immune response mechanism of stress response is related to the expression and function of TIGIT is still unclear.

OJECTIVE: To investigate the expression of immunomodulatory receptor TIGIT in thymus cells and peripheral blood mononuclear cells in an anger rat model and its significance to immune function.

METHODS: Forty-eight Wistar male rats were randomly divided into normal group, 7-, 14- and 21-day model groups, with 12 rats in each group. In addition to the blank group, social isolation method with plantar electric shock method was used to establish rat anger models in the other groups. The behavioral changes of rats were observed by open-field test and aggressive behavior test, and the changes in body mass and thymus index before and after the test were recorded. The positive expression of TIGIT in thymus and peripheral blood mononuclear cells of rats in each group was observed by immunohistochemistry, and the expression levels of CD4⁺ and CD8⁺ T cells in the peripheral blood were measured by flow cytometry. The correlation between TIGIT expression in thymus and peripheral blood mononuclear cells and the CD4⁺/CD8⁺ ratio of T cell subsets in the peripheral blood was analyzed. An ethical approval for the study was obtained from the Animal Ethics Committee of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine.

RESULTS AND CONCLUSION: In the 14- and 21-day model groups, the scores of horizontal and vertical activities in the open-field test of rats were higher than the control group (P < 0.05 or P < 0.01). In the 7-, 14- and 21-day model groups, the attack hiding time of the attack behavior test was significantly shortened (P < 0.01), the number of attacks and the cumulative attack time were significantly increased (P < 0.01), and the body mass and thymus index were significantly decreased compared with the control group (P < 0.05 or P < 0.01). In the 7- and 14-day model groups, the expression level of TIGIT in thymus and peripheral blood mononuclear cells was significantly higher than the control group (P < 0.01), while the CD4⁺/CD8⁺ ratio level of the peripheral blood T cell subsets was significantly lower than the control group (P < 0.05 or P < 0.01). The CD4⁺/CD8⁺ ratio of T cell subsets in the peripheral blood of random samples of rats was negatively correlated with the expression level of TIGIT in T cells of thymus (r²=0.627 0, P < 0.000 1) and in mononuclear cells (r²=0.624 4, P < 0.000 1). These results indicate that the model rats in the stress-induced anger state have obvious changes in animal behavior, present with thymus atrophy and abnormalities in peripheral blood T lymphocyte subsets CD4⁺/CD8⁺ ratio and immune function. This phenomenon may be related to the thymus and peripheral blood mononuclear cells TIGIT expression level, but the specific mechanism needs to be elucidated further.

Key words: TIGIT, stress, T lymphocyte, thymus, “Anger” model, animal model, immunoregulatory receptor

中图分类号:

陈俊贤, 李玮婷, 杨军平, 王莹, 金桂林. 免疫调控受体TIGIT在“怒”模型大鼠胸腺及外周血单个核细胞表达的意义[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(26): 4183-4189.

Chen Junxian, Li Weiting, Yang Junping, Wang Ying, Jin Guilin.

The significance of immunoregulatory receptor TIGIT expression in thymus and peripheral blood mononuclear cells in an “anger” rat model [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2020, 24(26): 4183-4189.

图/表（结果） 8

2.2 一般情况及胸腺指数空白组大鼠精神状态良好，行为活跃，毛色整齐光泽以及体质量平稳；模型组大鼠出现易激易怒状态，在入侵鼠干扰期间，出现嘶咬、鸣叫、对峙、攀压等行为，对外界声响、动作反应高度敏感，随应激时程延长，模型大鼠活动减少，精神倦怠，皮毛凌乱缺少光泽，比较空白组大鼠，体质量明显下降 (P < 0.01)，胸腺指数明显下降(P < 0.05或P < 0.01)。见表1。

2.3.1 旷场试验结果实验前1 d，模型7 d组、14 d组、21 d组各参数与空白组比较，差异均无显著性意义；实验后，模型21 d组较空白组，水平活动、垂直活动、修饰次数得分均有明显上升(P < 0.01)；水平及垂直得分，空白组呈下降趋势(P < 0.05或P < 0.01)，而模型组呈先下降后上升趋势(P < 0.05或P < 0.01)。见表2。

2.3.2 攻击行为试验结果实验前1 d，模型7 d组、14 d组、21 d组攻击隐藏时间、攻击次数、攻击累积时间、总得分与空白组比较，差异均无显著性意义；实验结束后，模型7 d组、14 d组、21 d组较空白组攻击隐藏时间明显降低(P < 0.01)，攻击次数、攻击累积时间明显升高(P < 0.01)，总得分差异无显著性意义。见图1，2。

2.4 胸腺及外周血单个核细胞免疫调控受体TIGIT免疫组织化学法(SP法)检测结果在400倍高倍镜视野下观察结果显示，与空白组相比，模型7 d组、14 d组大鼠胸腺细胞和外周血单个核细胞TIGIT表达均呈强阳性，TIGIT表达上升，模型7 d组达到最高值(P < 0.01)；模型21 d组大鼠胸腺细胞和外周血单个核细胞TIGIT表达均呈弱阳性，TIGIT表达水平高于空白组，但差异无显著性意义。见表3，图3。

2.5 外周血CD4⁺T、CD8⁺T细胞亚群表达水平流式细胞技术检测结果与空白组比较，模型7 d组、14 d组大鼠外周血CD4⁺T淋巴细胞百分比明显下降(P < 0.05)，模型7 d组为最低值(P < 0.01)，模型21d组差异无显著性意义；模型7 d组外周血CD8⁺T淋巴细胞百分比较空白组明显上升 (P < 0.05)，模型14 d组、21 d组差异均无显著性意义；模型7d组、14 d组CD4⁺/CD8⁺比值较空白组明显降低(P < 0.01或P < 0.05)，模型7 d组为最低值(P < 0.01)，21d组差异均无显著性意义。见表3，图4。

2.6 胸腺细胞及外周血单个核细胞上TIGIT表达水平与外周血CD4⁺T/CD8⁺T淋巴细胞比值的相关性分析根据每只动物各选取胸腺石蜡切片、外周血单个核细胞涂片各1张，经免疫组织化学法处理，400倍高倍镜视野下各随机选取4个视野，以计算出每只动物TIGIT阳性图像的平均吸光度，得出数据各48例。外周血CD4⁺T、CD8⁺T细胞亚群比值48例。采用Pearson相关分析，分析结果显示，实验大鼠外周血单个核细胞TIGIT表达水平与CD4⁺/CD8⁺比值呈负相关(r²=0.624 4，P < 0.000 1，见图5A)，实验大鼠胸腺细胞TIGIT表达水平与CD4⁺/CD8⁺比值呈负相关(r²=0.627 0，P < 0.000 1，见图5B)。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点实验于2019年4至7月在江西中医药大学生命科学院基础实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物及分组雄性SPF级Wistar大鼠48只，雄性SPF级SD大鼠12只，均为8周龄，体质量在180-200 g之间；2种品系的大鼠均由济南鹏悦实验动物繁育有限公司提供。动物合格证号：SCXK(鲁)2014-0007。购置后，随机分笼适应性饲养7 d，饮食不限，环境湿度35%-45%，温度(20±4)℃，采用自动明暗系统(7：00照明，19：00熄灯)；7 d后，Wistar大鼠随机分为4组，空白组、模型7 d组、14 d组、21 d组，每组各12只，空白组每6只1笼，模型各组分别单笼(50 cm×30 cm×20 cm)独立饲养。SD大鼠作为入侵干扰鼠，每6只1笼，实验结束后放弃不用。空白组Wistar大鼠与SD大鼠放置于同一饲养房间，模型组Wister大鼠放置于另外一个饲养房间。

1.3.2 实验主要试剂与仪器动物专用Ficoll分离液(Beijing Solarbio Science公司，批号P4350)；D-Hanks液(Beijing Solarbio Science公司，批号H1045)；Ig和ITIM域蛋白T-细胞免疫受体(TIGIT)多克隆抗体(U.S.A cloud clone corp公司，批号PAN056Ra)；单克隆荧光抗体PE/Cy 7 anti-rat CD4、PE anti-rat CD8a及相应同型对照(U.S.A Biolegend公司)；通用SP-Streptavidin-HRP(DAB)一体化试剂盒(Beijing Solarbio Science公司，批号SP0041)。Cytomics FC500流式细胞仪(U.S.A Beckman Coulter公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 大鼠精神应激“怒”模型制备参照文献[10-11]方法，采用“社会隔离法”结合足底电击法对独立饲养Wistar大鼠复制精神应激“怒”模型。社会隔离法：制造昼夜颠倒的生存环境，每晚19：00点开灯，上午7：00点熄灯，饮食不限，持续14 d(空白组大鼠与入侵鼠在正常光照节律房间饲养)；在第15天开始，于每天13：30-15：30进行入侵鼠干扰(随机选取1只入侵鼠放入独立饲养笼中接触模型大鼠，持续15 min)；电击法：在第15天开始，于每天16：00- 17：30进行不可避免的足底电击(电击棒4 000 V/<0.5 mA，脉冲15 s，持续15 min)。结合性刺激分别持续7，14，21 d。空白组大鼠不进行任何刺激。

1.4.2 一般情况观察实验期间观察各组大鼠精神状态、毛色等情况，记录实验前后体质量。

1.4.3 动物行为学测试

(1)旷场试验：参照文献[12]制备旷场试验箱并按照方法进行：各组大鼠分别在实验前1 d和实验结束后进行旷场试验，为适应大鼠活跃度，全程在暗室进行，旷场实验箱规格：1 m×1 m×0.5 m，箱内壁四周为黑色，底面以荧光线划分成25个等面积方格，四周一圈为外周格，剩余为中央格。操作者将大鼠置于试验箱最中央，启动摄像仪器记录大鼠3 min内行为变化，然后计算以下得分：①水平得分：爬越格子数(以3爪进入为准)；②垂直得分：站立或两前爪离地次数；③修饰次数：洗脸、抓痒等动作；④中央格停留时间。每次测试结束，清理场地气味以避免对待测大鼠造成干扰。结果评测定采用盲法：3位专家观看录像，3人评分均值一致性高(>0.95)为准。

(2)攻击行为试验：参照文献[13]方法，各组大鼠分别在实验前1 d和实验结束后进行攻击行为试验，实验者启动摄像仪器记录入侵鼠干扰模型大鼠期间的行为变化，然后计算以下得分：①攻击隐藏时间：发动第1次攻击之前的时间；②攻击次数；③攻击累积时间，包括厮咬、攀压、威胁对立的总时间；④总得分=攻击次数+攻击隐藏时间×0.2+攻击累积时间×0.2。结果评测定采用盲法：3位专家观看录像，3人评分均值一致性高(>0.95)为准。

1.4.4 计算胸腺指数造模后7，14，21 d麻醉后处死大鼠并摘取胸腺，以PBS清洗血液等杂质，再用滤纸吸干水分，电子秤称质量读数。胸腺指数=胸腺净质量/体质量(mg/g)。

1.4.5 外周血CD4⁺、CD8⁺T细胞亚群检测提取外周血单个核细胞，采用流式细胞技术检测。简略步骤：暴露大鼠腹股沟静脉，用EDTA管采血，取5 mL离心管加入抗凝血2 mL，按照动物专用Ficoll试剂盒说明书严格进行：稀释、分层、离心，然后吸取白膜层(外周血单个核细胞层)，再经过稀释、离心，调整得到细胞浓度为1.0×10⁹L^-1的悬细胞液；设阴性对照管和样品管，分别向2只流式管中加入外周血单个核细胞悬液50 μL，分别加入PE/Cy 7 anti-rat CD4、PE anti-rat CD8a及相应同型各10 μL，充分混匀，在37 ℃温箱避光孵育30 min；加入250 μL溶血素，避光孵育20 min；加入250 μL鞘液，避光孵育10 min；上机检测，采集细胞数最少为20 000个，CXP分析软件分析结果。

1.4.6 胸腺、外周血单个核细胞TIGIT水平采用免疫组织化学(SP法)检测。简略步骤：制备胸腺石蜡切片；细胞涂片：吸取10 μL外周血单个核细胞悬液加到防脱载玻片，再加入20 μL PBS进行稀释、涂片、潮干再放入无水乙醇固定15 min。然后参照DAB试剂盒说明书严格进行。结果判定：胞膜、胞质呈棕黄色为阳性细胞；每个样本选取一张切片，随机选取4个视野，高清显微摄像系统采集图像，以Image-Pro Plus6.0图像分析系统进行平均吸光度计算，分析TIGIT阳性表达水平。

1.5 主要观察指标 ①大鼠一般情况及胸腺指数；②大鼠动物行为学分析；③胸腺及外周血单个核细胞免疫调控受体TIGIT免疫组织化学法(SP法)检测结果；④外周血CD4⁺T、CD8⁺T细胞亚群表达水平流式细胞技术检测结果；⑤胸腺细胞及外周血单个核细胞上TIGIT表达水平与外周血CD4⁺T/CD8⁺T淋巴细胞比值的相关性分析。

1.6 统计学分析用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计量资料以x(_)±s表示，组织比较采用单因素方差分析；2组间比较用独立样本t 检验；相关关系采用Pearson相关分析。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

在复制精神心理应激“怒”模型方法中，尚未有明确的评断标准。实验通过孤立饲养及日夜颠倒改变模型大鼠的生存环境，提高了大鼠对环境应激因素的敏感性，旷场试验结果表明，随应激时间延长，模型大鼠水平和垂直活动活跃及修饰次数增多，说明大鼠心理焦虑度、紧张度升高，同时伴随攻击行为试验得分上升，提示大鼠处于易激易怒的应激状态，说明应激“怒”模型建立是有效的。

胸腺细胞正常成熟、分化是维持免疫稳态必不可少的因素之一，其中90%以上发育中的胸腺细胞为DP表型，即双阳性CD4⁺CD8⁺T细胞，经“免疫自身限制”的组织相容性复合体及其分子进行识别、筛选后分化为SP表型的单阳性CD4⁺或CD8⁺T细胞^[14]。研究发现，慢性固化应激会致使大鼠胸腺出现萎缩现象，胸腺的DP细胞绝对计数下降，对外周T细胞的输出减少，从而促进机体选择胸腺外途径进行“代偿性”分化，使外周血DP细胞、CD8⁺T细胞计数随应激时间延长而升高，CD4⁺T细胞计数降低，出现T细胞亚群分布失衡而造成的免疫紊乱现象^[15-17]。根据此次实验结果，“怒”模型各组大鼠的胸腺指数较空白组均明显降低，说明“怒”应激致使大鼠胸腺发生萎缩，促进胸腺T细胞凋亡；在外周血CD8⁺T细胞的百分比计数呈先升高后下降的趋势，在应激7 d达到最高值，而CD4⁺T细胞百分比计数呈先下降后回升趋势，在应激7 d达到最低值，此结果与胸腺外途径的“代偿性”分化现象有所契合，说明“怒”应激导致T细胞亚群分化失衡而造成免疫紊乱，但在应激21 d，T细胞亚群分化趋于正常，其T细胞亚群的“回升现象”与关素珍等^[17]、王一赫等^[18]进行的慢性应激实验结果相似，其原因可能随应激时间延长、应激源固定化，促进机体进行“免疫稳态”修复，通过激活外周幼稚T细胞或记忆T细胞库的分化，并可独立于固有的TCR活化通路进行激活信号的传导，使免疫功能逐渐恢复平衡^[19-20]。

另一方面，TIGIT的表达可能是导致T细胞亚群分化失衡的主要原因之一。作为一种共抑制性分子，TIGIT向多种免疫细胞传递负性信号，其一，通过下调T细胞自身活化通道上游的TCRα链和TCR复合体分子，直接抑制T细胞活化的信号转导；其二，又可通过与APC抗原提呈细胞表面的配体CD155结合，增强负性细胞因子白细胞介素10的分泌间接干扰Th细胞的分化，导致CD4⁺T细胞减少^[21]。另有研究表明TIGIT亦表达于调节性T细胞(Treg细胞)，通过诱导纤维蛋白原样蛋白2表达来促进Treg细胞对Th细胞的抑制作用而降低免疫应答^[22]，上述表明TIGIT对CD4⁺T细胞亚群的分化、成熟有较为明显的抑制性作用。

临床研究发现HIV感染者的外周血CD4⁺T、CD8⁺T细胞表面的TIGIT表达水平均明显高于正常人，但仅仅是CD4⁺T细胞百分比计数降低并与TIGIT表达水平呈负相关关系，而CD8⁺T细胞的百分比计数反而升高，其认为是机体出现CD4⁺T细胞免疫缺陷，会代偿性提升CD8⁺T细胞对病毒的杀伤作用而出现增殖^[23-24]。实验结果发现，应激7 d组、14 d组大鼠胸腺T细胞及外周血单个核细胞(90%-95%为T细胞)的TIGIT表达明显升高，并与前述外周血CD8⁺T细胞亚群百分比计数趋势契合，与CD4⁺/CD8⁺比值呈负相关关系，结果提示TIGIT的高表达与胸腺T细胞凋亡、T细胞亚群分布失衡相关，说明心理应激可激活TIGIT的表达对CD4⁺T细胞分化进行抑制性调控，在应激 7 d最为明显，而应激21 d趋于正常，提示TIGIT的表达阈值可能与应激源固化、应激时间或“免疫稳态”等因素相关。此外，从结果分析，TIGIT对CD8⁺T细胞分化的抑制作用并不明显，相关研究YU等^[25]发现TIGIT在CD8⁺T细胞上虽有表达但其活化后表达并无明显上升，与CD4⁺T细胞上TIGIT活性恰好相反。GILLIET等^[26]研究发现CD8⁺T细胞增多可能是免疫负调节的机制之一，原始CD8⁺T受树状突细胞2(DC2)诱导分化成CD8⁺Tr细胞，其分泌负性因子白细胞介素10抑制T细胞活化；此外CD8⁺T进一步分化成CD28-CD8⁺T细胞，通过接触方式抑制APC抗原提呈细胞活性，间接降低T细胞活化信号。上述说明TIGIT可能通过联合CD8⁺T细胞进行免疫负调节，共同发挥对T细胞分化抑制性调节的作用，但其反应机制需进一步明确。

综上所述，精神心理应激可通过激活TIGIT在胸腺T细胞及外周血T细胞上的表达，促进T细胞亚群分化失衡，对免疫系统功能有着负调节作用，进一步说明TIGIT与胸腺内源性凋亡密切相关，为探讨TIGIT在精神心理应激中的免疫调控作用机制提供新的研究契机。然而实验存在一定不足：由于试剂缺乏，未能进行TIGIT在CD4⁺、CD8⁺T细胞亚群表面标记，不利于观察TIGIT在不同T细胞亚群的表达情况；其次在后续实验计划对相关的细胞因子进行检测，进一步扩大研究范围，深入相关反应机制的研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

免疫调控受体TIGIT在“怒”模型大鼠胸腺及外周血单个核细胞表达的意义

The significance of immunoregulatory receptor TIGIT expression in thymus and peripheral blood mononuclear cells in an “anger” rat model

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