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汉族人群中新等位基因人类白细胞抗原-DPA1*01:11的鉴定

何柳媚，王大明，徐筠娉，邓志辉

中国组织工程研究 2012, 16 (53): 9994-9998. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.53.022

摘要（489）

PDF （414KB）（628）

背景：在群体遗传学研究中，发现一个样本人类白细胞抗原-DPA1位点结果异常，而国际上与人类白细胞抗原-DPA1等位基因相关的报道较少。
目的：鉴定一个人类白细胞抗原-DPA1*01相关的新变异等位基因。
方法：在群体遗传学研究中，采用PCR产物直接测序分型方法，对人类白细胞抗原-DPA1基因第2外显子进行双向测序。对出现异常分型结果的样本，进行分子克隆和单倍体测序。
结果与结论：发现一个样本的人类白细胞抗原-DPA1位点结果异常，经分子克隆和单倍体测序，检出了一个正常的人类白细胞抗原-DPA1*01:03和一个DPA1*01相关的新变异等位基因，该新等位基因的序列与DPA1*01:03的序列最接近，其差异是在第二外显子区域的242位碱基发生A>G的替换，并导致了相应的第50位密码子由CAA>CGA，编码的氨基酸残基由谷氨酰胺变成精氨酸。该等位基因为人类白细胞抗原新的等位基因，已被世界卫生组织人类白细胞抗原因子命名委员会正式命名为人类白细胞抗原-DPA1*01:11(提交序列号HWS10015443)。

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新等位基因HLA-A*11:97与HLA-B*44:127的确认

胡彬，迟晓云，冯智慧

中国组织工程研究 2012, 16 (53): 9999-10004. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.53.023

摘要（460）

PDF （373KB）（595）

背景：近几年来，随着分子生物学的发展及人类白细胞抗原分型技术的提高，人类白细胞抗原新等位基因不断被发现。
目的：识别并确认两个新的人类白细胞抗原等位基因。
方法：应用PCR-SBT、GSSP及单链测序基因分型技术对两份中华骨髓库供者样本进行人类白细胞抗原A，B，DRB1位点进行基因分型，对新等位基因进行DNA测序并与已知同源性最高的等位基因型进行序列比对。
结果与结论：两个样本各有一个位点与目前已知的相应人类白细胞抗原A、B等位基因序列均不一致，样本1与其同源性最高的A*11:01:01的差异表现在第2外显子区域中的193G>T，194C>T，导致第41位密码子由丙氨酸变为亮氨酸，样本2与其同源性最高的B*44:02比较差异表现在第2外显子区域中第320位碱基由G>A，导致编码的第83位密码子由精氨酸变为组氨酸。说明两个样本分别为人类白细胞抗原A 和B位点的新等位基因,并已被WHO 人类白细胞抗原因子命名委员会正式命名为人类白细胞抗原A*11:97和B*44:127。

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胰岛素样生长因子1拮抗高糖对植入前期鼠胚印迹基因H19/Igf-2的影响

罗文奇，袁衡，吴长初，赵品，李双容，程德华，邹海燕

中国组织工程研究 2012, 16 (53): 10005-10009. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.53.024

摘要（367）

PDF （467KB）（516）

背景：课题前期研究已证实100 μg/L胰岛素样生长因子1能拮抗体外30 mmol/L高糖毒性引起的凋亡，可改善高糖环境对孕母/胎儿的危害。但这一改善胚胎早期发育的营养环境的发生机制和分子机制却不甚清楚。
目的：结合前期工作基础，从表观遗传学角度入手，观察胰岛素样生长因子1拮抗早期高糖环境对小鼠胚胎印迹基因H19/Igf-2甲基化水平和表达的影响。
方法：通过建立孕娠糖尿病小鼠模型，取小鼠2细胞胚胎等分为实验组和对照组；对照组置于含30 mmol/L葡萄糖的KSOM培养基内进行体外高糖逆境培养，实验组额外添加100 μg/L胰岛素样生长因子1处理。体外发育至囊胚期，检测胚胎印迹基因H19，Igf-2的表达和印迹控制区DNA甲基化水平。
结果与结论：实时定量PCR分析表明，实验组桑椹胚H19，Igf-2的表达分别是对照组的5.9和5.2倍(P < 0.01)；实验组囊胚H19，Igf-2的表达分别是对照组的2.4和1.8倍(P < 0.01)。BSP测序法分析H19，Igf-2印迹控制区的甲基化水平发现，实验组桑椹胚、囊胚的甲基化率分别比对照组下降27.9%和20.9%(P < 0.01)。结果可见在高糖环境下胰岛素样生长因子1可部分降低H19/Igf-2印迹控制区DNA甲基化水平，使 Igf-2和H19基因表达增高，能拮抗高糖环境对小鼠早期胚胎发育的损伤。

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真核过表达载体共转染3个胰岛发育关键基因在小鼠胎肝细胞内的表达*★

于静雯，张振，徐艳花，陈容平，杨锐，陈宏

中国组织工程研究 2012, 16 (18): 3310-3313. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.18.018

摘要（303）

PDF （383KB）（327）

背景：大量文献表明，向肝脏细胞引入一个多个胰岛发育的关键因子(如Pdx1、MafA及Ngn3)可以使肝细胞向胰岛细胞的方向进行转化。
目的：构建以pcDNA3.1(+)为骨架的质粒载体并共同转染胰十二指肠同源框蛋白(Pdx1)、神经源素3(Ngn3)及V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)至小鼠胎肝细胞并检测其表达情况。
方法：以基因组或小鼠胰腺cDNA为模板扩增Pdx1、MafA及Ngn3三个目的基因，应用分子生物学技术，将3个目的片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中，构建小鼠系列真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafA ORF，pcDNA3.1(+)-Pdx-1 ORF，pcDNA3.1(+)-Ngn3 ORF通过Lipofectamine2000介导的脂质体转染小鼠胎肝细胞系BNL CL.2，用反转录PCR以及间接免疫荧光法检测3个目的基因的表达情况。
结果与结论：目的基因克隆正确,反转录PCR，间接免疫荧光法证实了脂质体转染后小鼠胎肝细胞中有Pdx1、Ngn3以及MafA的表达。结果表明，真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafA ORF，pcDNA3.1(+)-Pdx-1 ORF，pcDNA3.1(+)-Ngn3 ORF可成功构建，并能够将Pdx1、Ngn3以及MafA三个基因转至小鼠胎肝细胞进行表达。

关键词：胰十二指肠同源框蛋白；神经源素3；V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A；脂质体转染；BNL CL.2细胞株；胰岛细胞；基因表达
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.18.018

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吉林汉族人群HLA-A高分辨基因的多态性分析*

焦立新，杨帆，韩瑜，林乾飞，陈琳

中国组织工程研究 2012, 16 (18): 3345-3348. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.18.026

摘要（352）

PDF （267KB）（339）

背景：HLA与免疫遗传学、免疫生物学密切相关，其分型对于器官移植和非感染性疾病的易感性有重要意义。
目的：调查吉林汉族人群HLA-A位点基因多态性，分析不同人群HLA-A等位基因频率分布特征。
方法：采用基因测序技术检测2 196名吉林汉族人HLA-A位点第2、3、4外显子序列，软件分析得到分型结果，计算各等位基因频率并与不同人群进行比较。
结果与结论：共检测到42种HLA-A等位基因，其中3种等位基因频率≥5%，分别是HLA-A*02:01(8.5%)，HLA-A*11:01(8.2%)和HLA-A*24:02(7.3%)，这3种等位基因频率合计为24.0%。同时，检测到39种等位基因频率<0.5%的HLA-A等位基因，这39种等位基因频率合计为76.0%。吉林汉族人群HLA-A等位基因频率分布与美国亚裔人群、中国香港华人、日本人相比存在一定差异。提示吉林汉族人群HLA-A基因的分布有地域特征。

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造血干细胞移植56例人类白细胞抗原基因和单倍型分析

刘川，万华，邹叶青，李剑，李国良，傅颖媛

中国组织工程研究 2011, 15 (44): 8301-8304. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.44.033

摘要（340）

PDF （610KB）（313）

背景：收集56例欲行造血干细胞移植的供受者，均为无血缘关系的江西省汉族人群。了解个体的人类白细胞抗原基因型和单倍型。
目的：分析56例造血干细胞移植供受者的人类白细胞抗原基因频率，单倍型频率。
方法：收集56例欲行造血干细胞移植的供受者，均无血缘关系的江西省汉族人群。应用PCR-SSP的方法进行人类白细胞抗原(HLA)-A、B、DRB1基因分型，计算出HLA-A、B、DRB1各位点的基因频率和单倍型频率。
结果与结论：56例供受者测出HLA-A位点等位基因8种，HLA-B位点等位基因19种，HLA-DRB1位点等位基因13种，呈现出丰富的基因多态性。56例供受者两位点共224条等位基因中，A﹡02-B﹡46、A﹡11-B﹡40、B﹡46-DRB1﹡09单倍型的频率高于0.10。有10种A-B单倍型，4种B-DRB1单倍型呈现出显著的连锁不平衡。提示江西省汉族人群人类白细胞抗原基因具有较丰富的基因多态性。

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中国辽宁锡伯族群体3个短串联重复位点的遗传多态性分析

刘健，张威，尹娇杨，高兵，郭丽，祁荣，田秀荣

中国组织工程研究 2011, 15 (44): 8305-8307. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.44.034

摘要（269）

PDF （489KB）（334）

背景：对常染色体STR基因座的多态性的研究可为法医学亲权鉴定提供基础数据。
目的：探索辽宁锡伯族D16S539，THO1，D13S317 3个常染色体基因座的遗传多态性，建立锡伯族群体的遗传学基础数据。
方法：采集辽宁省沈阳市新城子区黄家乡锡伯族中小学的150名中小学生口腔黏膜细胞，Chelex 100法提取DNA，进行荧光标记PCR扩增，产物在Li-COR 4300基因分析仪上进行电泳，E-seq分析软件计算扩增产物片段相对大小，进行基因型分型。调查辽宁地区锡伯族群体 3个 STR基因座等位基因频率，进行遗传多态性分析。
结果与结论：辽宁锡伯族群体中3个STR基因座具有遗传多态性，其基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。辽宁锡伯族群体中3个STR基因座的杂合度分布在0.769~0.810；个人识别力分布在0.824~0.929，累积个人识别能力为0.999；多态信息量分布在 0.650~0.790；非父排除率分布在0.565~0.790，累积非父排除率为0.979。说明辽宁锡伯族群体3个常染色体STR基因座有较高的非父排除率和个体识别能力，可为法医学亲子鉴定和个体识别及移植配型等遗传学研究提供依据。

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应用完整外显子2/3序列解决HLA-DRB1座位基因分型的歧义结果

李桢，杨鹃，程良红，邹红岩

中国组织工程研究 2011, 15 (44): 8308-8312. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.44.035

摘要（360）

PDF （533KB）（423）

背景：人类白细胞抗原基因测序分型中，当等位基因的差异碱基位于测序范围之外或不同等位基因对的杂合序列相同时，无法得到清晰的结果。
目的：通过完整外显子2/3序列的测定，解决常规HLA-DRB1基因分型中的高比例歧义结果。
方法：初次分型采用常规的测序方法检测320份样本的HLA-DRB1外显子2第一高变区以外的序列，测序反应设置codon86。后期采用一次性扩增外显子2/3，测序反应针对外显子2设置组特异性引物：DRB1*04/07/09为一组，其它基因家族为一组，设置conden86，对初次分型后为歧义结果的样本重新分型。
结果与结论：初次分型有180份样本为歧义结果，占总样本数的56.25 %。其中A类为差异碱基位于测序范围之外，共114例；B类为等位基因对的杂合序列相同，共17例；C类为两种情况同时存在，有49例。3种类别的歧义等位基因数分别为119个、34个、98个，占等位基因总数的33.06%、9.44 %、27.22%。完整外显子2/3序列的测定使歧义结果比例从56.25%下降到14.37%，其中A类103例、B类8例、C类23例样本的等位基因得到确认。此次研究中发现了一个新等位基因，与跟它最相近的等位基因DRB1*110101相比，其外显子3的第381位碱基G>T，导致第98位氨基酸AAG(赖氨酸 Lys)>AAT(天冬酰氨 Asn)。序列已提交Genbank，编号HM807583，2010-08被世界卫生组织HLA因子命名委员会命名为HLA-DRB1*1197(编号HWS10010999)。提示，完整外显子2/3序列的测定能大幅降低歧义分型结果的比例。

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河南省骨髓库汉族捐献者HLA-A、B、DR高分辨基因多态性调查分析

王兆福，张伯伟，马茹，杜娟，孔大为

中国组织工程研究 2011, 15 (31): 5801-5804. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.31.024

摘要（319）

PDF （491KB）（477）

背景：2009年开始，中华骨髓库加大HLA高分检测的力度，可缩短配型检索周期，提高配型成功率。
目的：统计分析河南省骨髓捐献者HLA-A、B、DRB1高分辨基因多态性。
方法：河南省汉族造血干细胞志愿捐献者血样3 874人份，志愿捐献静脉血，EDTA抗凝。采用SSO HD 荧光微珠流式高分辨HLA-A、B、DRB1基因分型检测方法，对3 874份骨髓捐献志愿者血样进行高分辨分型检测，用PCR-SSP高分辨检测、SBT检测解决存在的模棱两可问题。等位基因计数法计算等位基因的基因频率。
结果与结论：共检出A 34个，B 84个，DRB1 50个，A位点基因频率处于前5位的有A*0201(0.160 9)、 A*1101(0.162 7)、 A*2402(0.160 2)、A*3001(0.080 8)、 A*3303(0.078 9)；B位点处于前5位的是B*1302(0.077 7)、B*4001(0.072 2)、B*5101(0.062 8)、B*4601(0.061 2)和B*0702(0.050 7)；DRB1位点处于前5位的是DRB1*1501(0.146 9)、DRB1*0901(0.131 8)、DRB1*0701(0.121 1)、DRB1*1202(0.061 2)、DRB1*0405(0.058 2)。

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精子发生相关基因及凋亡基因Dazl、Pgk2、Prm2、bax在卵巢异性移植小鼠睾丸、附睾组织中的表达

彭南妮，薛立群, 袁安文，杨青，凌理军，吴珊，邹红艳，吴方贵

中国组织工程研究 2011, 15 (31): 5831-5834. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.31.031

摘要（252）

PDF （1262KB）（439）

背景：Dazl、Pgk2、Prm2和细胞凋亡相关基因bax均参与了精子发生的调控，这些基因的表达异常和缺失常常影响精子的发生。
目的：探讨卵巢移植对异性受体精子发生相关基因表达的影响。
方法：将1 d龄小鼠卵巢移植入成年雄性受体鼠肾囊下，分激素处理或不做激素处理两个实验组；于卵巢移植后第21天观察卵巢移植体，选择卵泡发育良好的受体鼠分别采集雄鼠睾丸、附睾提取总RNA，采用半定量RT-PCR分析目的基因表达情况。对照组为未进行卵巢移植的同龄正常雄鼠。
结果与结论：各组间目的基因的表达除Prm2的相对表达量在激素处理移植组显著高于对照组外(P < 0.05)，其余各组间各基因的表达差异无显著性意义(P > 0.05)。初步证实在卵巢异性移植构建雌、雄性腺同体的生理环境中，卵巢移植体对受体雄鼠几种精子发生相关基因及凋亡基因的表达无明显影响。提示卵巢移植对雄性受体小鼠的精子发生在分子水平上无明显的损害作用。

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中国汉族人群人类白细胞抗原新等位基因A*1155的确认

周丹

中国组织工程研究 2010, 14 (44): 8241-8244. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.44.018

摘要（286）

PDF （314KB）（322）

背景：在国内发现的新等位基因中，大部分都是先采用人类白细胞抗原分型低分辨方法进行分型，如发现反应格局异常后，再进一步用基因测序或基因克隆方法进行确认，这样有可能导致一些新等位基因未被发现。基因测序分型方法被认为是人类白细胞抗原分型的金标准，它可得出精确的核苷酸序列。
目的：直接采用基因测序分型方法对中华骨髓库标本进行检测，识别和确认中国汉族人群中新发现的等位基因。
方法：应用中国造血干细胞捐献者测序结果可疑为新等位基因的重采血样5 mL，采用基因测序分型技术，发现一样本HLA-A位点的杂合结果HLA-A*030101/A*110101在外显子上有1个位置与数据库不符，为了区别哪一个为新等位基因，采用基因克隆(TOPO TA Cloning)技术对两个等位基因1-8外显子进行DNA双向测序，发现1个与HLA-A*110101序列相近的新等位基因，分析两者核苷酸序列的差异。并将测序结果与已知人类白细胞抗原等位基因序列比较分析。
结果与结论：通过克隆分离杂合等位基因，再进行测序确认发现新的序列与A*110101相比，在第2外显子第330碱基位置上C→G，密码子86AAC→AAG，发生了氨基酸的改变，由天冬酰氨变为赖氨酸。提示该等位基因为新的HLA-A等位基因，2009-10-31被世界卫生组织人类白细胞抗原因子命名委员会正式命名为HLA-A*1155。

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自行构建人类白细胞抗原DQA1位点基因分型寡核苷酸芯片性能评价：100例样本与PCR-SSP法的比较

王彤，王天骄，彭莉，王杰

中国组织工程研究 2010, 14 (44): 8245-8248. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.44.019

摘要（292）

PDF （380KB）（348）

背景：人类白细胞抗原等位基因分型对器官移植和法医鉴定等有重要意义。目前的分型方法难以实现高通量和集成化，准确性和重复性也不理想。
目的：比较自行构建的寡核苷酸芯片与序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with sequence-specific primers，PCR-SSP)两种方法用于人类白细胞抗原DQA1基因分型的结果，以评价寡核苷酸芯片的性能。
方法：纳入2006-01/2009-03于中国医科大学附属第一医院血液科门诊就诊的患者100例。分别用等位基因特异的PCR-SSP和自行构建的寡核苷酸芯片对患者的人类白细胞抗原DQA1进行分型。寡核苷酸芯片分型采用荧光标记的组间特异性引物扩增基因组DNA，扩增后的产物与分型芯片的探针杂交，由杂交产生的荧光信号确定人类白细胞抗原DQA1位点基因型。比较两种方法分型所获得的结果，不吻合的样本经第三方测序验证。
结果与结论：100例临床样本经寡核苷酸芯片和PCR-SSP分型全部成功。分型结果的吻合率为94%。不吻合样本6例，其中4例PCR-SSP定型为杂合子，芯片分型全部为纯合子。经第三方验证，证实芯片的分型全部正确。另外2例不吻合的样本经测序，证实SSP分型错误1例，芯片分型错误1例。芯片的重复率为95%。说明自行构建的寡核苷酸芯片的特异性和灵敏度都能满足基因分型的需要，且稳定性较好。

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HLA新等位基因HLA-B*5145的确认

鞠瑞青，陈琳，林乾飞，杨帆，韩瑜，焦立新，任海波，马秀杰

中国组织工程研究 2010, 14 (44): 8249-8252. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.44.020

摘要（305）

PDF （375KB）（362）

背景：作者在用美国onelamba 试剂公司生产的HLA低分辨试剂进行分型实验时，将反应结果导入HLA数据分析软件，发现HLA-B位点反应格局异常，且阴性磁珠和阳性磁珠反应情况良好，但是分析软件并未给出相应结果，怀疑有新基因的可能。
目的：发现和认定1个HLA新等位基因。
方法：采集中华骨髓库造血干细胞捐献者血样，应用PCR-SSO基因分型技术筛选可能的新等位基因，PCR产物测序和DNA基因克隆测序，分析基因序列。
结果与结论：PCR-SSO基因分型显示，供者HLA-A位点基因型为 A*02XX，A*33XX ；HLA-DRB1位点基因型为DRB1*1202，DRB1*1302，HLA-B位点反应格局异常，不能指定任何HLA-B位点的等位基因，提示B*44XX,B*53XX;90FN,91FP,调整不合理，故进一步用其他试剂(Dynal,PCR-SSO) 分型方法进行分析，也显示无法判定的结果。等位基因HLA-B*5145是HLA-B*5106的变异体，该基因和B*5106的差异在第3 外显子的339位碱基A→G，引起相应编码氨基酸113位上的N(天冬酰胺，Asn)→D(天冬氨酸,Asp),346位碱基A→C，引起相应编码氨基酸115位上的Y(酪氨酸,Tyr)→S(丝氨酸，Ser)，362位碱基A→G，则不引起相应编码氨基酸120位上的K(赖氨酸，Lys)的变化。该基因为新等位基因，2006-10被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名HLA-B*5145。

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