川芎嗪对组织工程化神经桥接物生物学特性的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.03.008

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (3): 370-376.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.03.008

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川芎嗪对组织工程化神经桥接物生物学特性的影响

向飞帆¹，阳运康²

¹泸州医学院，四川省泸州市 646000；²泸州医学院附属医院骨与关节外科，四川省泸州市 646000

出版日期:2015-01-15 发布日期:2015-01-15
通讯作者: 阳运康，博士，硕士生导师，泸州医学院附属医院骨与关节外科，四川省泸州市 646000
作者简介:向飞帆，男，1990年生，四川省资阳市人，泸州医学院在读硕士，主要从事手显微外科与周围神经损伤与修复研究。
基金资助:
四川省科技厅项目(2014JY0248)；沪州医学院项目(20130449)

Effect of tetramethylpyrazine on biological properties of tissue-engineered acellular nerve allografts

Xiang Fei-fan¹, Yang Yun-kang²

¹Luzhou Medical College, Luzhou 646000, Sichuan Province, China; ²Department of Bone and Joint Surgery, Affiliated Hospital of Luzhou Medical College, Luzhou 646000, Sichuan Province, China

Online:2015-01-15 Published:2015-01-15
Contact: Yang Yun-kang, M.D., Master’s supervisor, Department of Bone and Joint Surgery, Affiliated Hospital of Luzhou Medical College, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
About author:Xiang Fei-fan, Studying for master’s degree, Luzhou Medical College, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
Supported by:
the Project of Sichuan Provincial Science and Technology Department, No. 2014JY0248; the Project of Luzhou Medical College, No. 20130449

摘要/Abstract

摘要：

背景：许多研究表明，川芎嗪对细胞及异体神经有一定的免疫抑制作用，能减轻炎症细胞的浸润程度，降低异体神经移植体的免疫排斥反应。

目的：观察川芎嗪对组织工程化神经桥接物生物学特性的影响。

方法：采用化学法萃取Wistar大鼠去细胞坐骨神经，构建种植基因修饰神经干细胞的组织工程化神经桥接物，分别于添加与未添加200 mg/L川芎嗪的完全培养基中培养1周，观察细胞分布与支架结构。取SD大鼠24只，随机均分为4组，分别于背部皮下植入 4 ℃保存1周的Wistar大鼠坐骨神经(异种神经组)、常规完全培养基培养的组织工程化神经(对照组)、含200 mg/L川芎嗪完全培养基培养的组织工程化神经(实验组)及同种异体SD大鼠坐骨神经(同种异体神经组)，7 d后取出各组神经行苏木精-伊红染色光镜观察及CD4⁺和CD8⁺细胞浸润数量检测。

结果与结论：去细胞神经基本无细胞成分，神经外膜和细胞基底膜结构均较完整；注射神经干细胞后，可见神经外膜下和束膜间有较多细胞成分，分布不均；培养1周后，两组培养基均有较多增殖与分化的神经细胞，以添加川芎嗪的完全培养基组效果更明显。皮下包埋后光镜下淋巴细胞浸润由多到少的顺序为：异种神经组、对照组、实验组、同种异体神经组。表明川芎嗪可降低组织工程化神经的免疫原性，但不破坏组织工程神经的三维结构。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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关键词: 生物材料, 材料相容性, 川芎嗪, 去细胞神经, 组织工程化, 神经干细胞, 周围神经缺损

Abstract:

BACKGROUND: Increasing studies have shown that tetramethylpyrazine can play certain immunosuppressive effects on cells and allogeneic nerves, reduce the infiltration of inflammatory cells, and reduce the body’s immune rejection to nerve allografts.

OBJECTIVE: To observe the effect of tetramethylpyrazine on the biological characteristics of tissue-engineered nerve bridging materials.

METHODS: Acellular sciatic nerves were extracted from Wistar rats using chemical method to construct gene-modified nerve allografts that were cultured in complete medium containing 200 mg/L tetramethylpyrazine or not for 1 week to observe the cell distribution and structure. Twenty-four healthy adult male Sprague-Dawley rats were enrolled and randomly divided into four groups: in nerve xenograft group, sciatic nerve segments from Wistar rats cultured at 4 ℃ for 1 week were implanted subcutaneously into the back of Sprague-Dawley rats; in control group, tissue-engineered nerve segments cultured in the complete medium were implanted; in experimental group, tissue-engineered nerve segments cultured in the complete medium containing 200 mg/L tetramethylpyrazine were implanted; in nerve allograft group, nerve allografts from Sprague-Dawley rats were implanted. After 7 days, nerve segments were taken out for hematoxylin-eosin staining under light microscope, and the number of CD4⁺ and CD8⁺ lymphocytes was counted.

RESULTS AND CONCLUSION: The acellular nerve segments with no cellular constituents had intact epineurium and basement membrane. After injection of nerve cells, there were more cellular components that distributed unevenly beneath the epineurium and between the perineurium. After 1 week of culture, more nerve cells proliferated and differentiated in the complete medium containing 200 mg/L tetramethylpyrazine or not, especially in the complete medium containing 200 mg/L tetramethylpyrazine. Under the light microscope, the degree of lymphocyte infiltration ranged from more to less: nerve xenograft group, control group, experimental group, nerve allograft group. These findings indicate that tetramethylpyrazine can reduce tissue-engineered nerve immunogenicity, but cannot destroy the three-dimensional structure of tissue-engineered nerves.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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Key words: Tissue Engineering, Drugs, Chinese Herbal, Neural Stem Cells

中图分类号:

R318

向飞帆，阳运康 . 川芎嗪对组织工程化神经桥接物生物学特性的影响[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(3): 370-376.

Xiang Fei-fan, Yang Yun-kang. Effect of tetramethylpyrazine on biological properties of tissue-engineered acellular nerve allografts[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(3): 370-376.

图/表（结果） 9

2.1 去细胞神经去细胞神经外观呈淡乳白色圆柱状，略透亮，其外径及长度约为化学萃取前的80%(图2)。牵拉去细胞神经，其延展性较化学萃取前略增加。显微镜下行神经外膜缝合，感其弹韧性与新鲜神经基本一致，可在无张力下行常规的神经吻合。

苏木精-伊红染色后光镜下观察去细胞神经的纵切片上均无任何细胞，红染的神经内膜呈波浪状纵形排列，神经纤维结构消失而形成管柱状空隙，仅存许旺细胞基底膜；其横切片上可见神经外膜和神经束膜形成的圆形结构，其内部为松散的胶原成分，髓鞘及细胞成分基本消失(图3)。

超薄切片透射电镜观察去细胞神经的髓鞘、细胞等结构均消失，整个视野由神经纤维间基质、神经内膜和基底膜包绕的不规则圆形空腔组成，偶见极少量的髓鞘崩解碎片；新鲜神经则有较粗的神经纤维及许旺细胞包裹轴突形成的排列规则、电子密度较高的髓鞘，髓鞘厚薄基本相同(图4)。

2.2 组织工程神经荧光显微镜观察注射神经干细胞后，纵切片上可见Ⅲ组神经外膜下和束膜间有较多发光细胞成分，分布不均(图5A)。培养1周后Ⅰ组、Ⅱ组均有较多增殖与分化的神经细胞，细胞有互相平行排列的趋势及呈放射状或网状分布的特征(图5 B，C)，Ⅱ组较Ⅰ组更明显(P < 0.05)。

苏木精-伊红染色光镜观察注射细胞后，纵切片上可见神经外膜下和束膜间有较多细胞成分，分布不均，有的成团，有的整齐排列，神经干细胞呈规则圆形或椭圆形，核内染色质均匀，膜表面光整(图6)。培养1周后，Ⅰ组、Ⅱ组均有较多增殖与分化的神经细胞，Ⅱ组较Ⅰ组更多更明显(P < 0.05)，红染的神经内膜排列也更整齐、连续性较好(图7)。

2.3 组织工程神经皮下包埋后的苏木精-伊红染色光镜观察光镜下见蓝色淋巴细胞浸润依次减少，异种神经组、对照组、实验组组间差异均有显著性意义，实验组、同种异体神经组间差异无显著性意义，异种神经组、对照组神经膜排列较混乱，实验组、同种异体神经组则排列较整齐(图8)。

2.4 皮下包埋后神经内CD4⁺和CD8⁺淋巴细胞浸润数量的比较神经内CD4⁺和CD8⁺淋巴细胞浸润数异种神经组最多，同种异体神经组最少，异种神经组、对照组与同种异体神经组间比较差异均有显著性意义(P < 0.05)。实验组、同种异体神经组间则无显著差异(表1，图9)。

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引言

周围神经损伤是临床常见病、多发病，目前修复手段仍相当有限，尤其是对于3-5 cm以上长节段的周围神经缺损，临床尚缺乏除自体神经之外的可靠修复材料，使缺损神经达到理想的解剖和功能恢复。目前，周围神经桥接技术包括导管桥接和神经移植两大类。神经导管分两大类，一类是生物膜、静脉^[1]、动脉、骨骼肌^[2-3]、神经外膜管、透明质酸管、羊膜^[4]、人发角蛋白等天然材料，另一类是硅胶管、聚乙醇酸、聚羟基乙酸管等合成材料^[5-11]，但它们均不含具有趋化性作用的三维网管状结构及趋化介质，或者趋化作用距离有限。研究表明，单纯的神经导管桥接物只适用于修复≤3 cm的周围神经缺损，且修复效果有限^[10-11]，多处于实验阶段，少有临床应用^[12]。一般认为硅胶管具有取材方便、不塌陷、具有一定趋化作用等特点，是合成材料中较理想的神经导管，但移植后常会产生神经卡压现象及炎性刺激，需再次手术取出，不适合临床应用。也有研究表明，仅在3-10 mm距离时，硅胶管有明显促趋化性再生作用^[13]，对于3 cm以上的神经缺损，神经移植仍然是目前临床上能够运用的惟一可靠的治疗方法^[14-15]。

众所周知，自体神经移植是修复周围神经长段缺损的金标准，然而自体神经存在来源有限、(皮)神经直径偏小、供区并发症多等缺点，也极大地限制了其临床应用范围^[16-17]。作为天然材料，异体神经在结构上接近自体神经，具有正常神经的三维结构，有其他任何移植替代材料不可比拟的优势^[18-19]，并且来源广泛，保存相对容易，应该能成为理想的移植供体，但免疫排斥反应问题给同种异体神经移植带来巨大的阻碍。改良化学法脱细胞神经是采用化学试剂去除异体神经中的许旺细胞、髓鞘、轴突，以及神经束膜和外膜的细胞，以清除供体神经的免疫原性，使其剩余的主要成分为以许旺细胞基膜管为主，神经束膜和外膜的基质为外套的完整三维立体支架，保留了对轴突生长有促进作用的基底膜板层素，以修复损伤周围神经。研究表明，改良化学法萃取的去脱细胞神经免疫原性显著降低，是相对无抗原性的移植物，在结构上又接近自体神经，具有正常神经的三维结构，有其他任何移植替代材料不可比拟的优势^[20]。神经干细胞具有低免疫原性，多向分化潜能，能进行自我更新，作为种子细胞有巨大的潜能来修复周围神经损伤。

众多研究表明川芎嗪具有广泛的药理作用，如抗炎、抗氧自由基、拮抗胞内钙离子超载、抑制细胞凋亡、减轻缺血缺氧及再灌注损伤等^[21-22]。川芎嗪可能通过调控在启动移植排斥反应中发挥关键作用的两个重要分子ICAM-1和MHC Ⅱ，减轻移植排斥反应，改善移植物预后^[23]。

将种子细胞植入合适的载体支架，可以构建具有生物活性及相应功能的组织工程神经，这种方法已成为周围神经修复重建研究领域的重要内容^[24]。以脱细胞神经作为载体支架，再种植活性细胞作为种子细胞构建的复合体是一种较理想的组织工程神经，具有重大的研究应用价值^[25-26]。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程
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材料方法

设计：观察性实验。

时间及地点：于2012年10月至2014年4月在重庆医科大学附一院神经病学重点实验室完成。

材料：

实验动物：SPF级Wistar大鼠12只，体质量200-250 g；SPF级SD大鼠26只，体质量180-200 g，雌雄不拘；孕14-16 d SD大鼠1只，SPF级，体质量250-300 g，均由重庆医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(渝) 2007-0001。

实验方法：

组织工程化神经的制备：

去细胞神经的制备与观察：采用Sondell法与Hudson法结合的改良化学脱细胞法^[27-28]。①取健康成年Wistar大鼠12只，戊巴比妥钠麻醉后切取双侧坐骨神经(共24条，每条长约25 mm，图1)，清除神经干表面疏松的纤维组织至坚硬光滑的神经外膜，生理盐水冲洗。取20条神经段放入特制的盒内，其余4条4 ℃保存备用。②向盒内加入 0.05 mol/L Tris-HCl(pH=7.4)缓冲液，并加入蛋白酶抑制剂，4 ℃下恒温振荡约24 h。③再将盒内液体换成内含TritonX-100的磷酸盐(pH=7.4)缓冲液及蛋白酶抑制剂， 4 ℃下恒温振荡24 h后，用蒸馏水浸浴12 h再连续冲洗3次。④放入4%脱氧胆酸钠中，室温下振荡24 h后无菌蒸馏水清洗3次。⑤重复③④步骤2次。⑥蒸馏水充分冲洗后，将制备的去细胞大鼠坐骨神经放入PBS(pH=7.4)中，4 ℃保存备用。

取去细胞神经2条，石蜡包埋切片行常规苏木精-伊红染色后镜下观察细胞及神经结构。取去细胞神经上中下段各截取3 mm，3%戊二醛固定，环氧树脂包埋硬化，在超薄切片机上横行切成超薄切片，双氧化铀-枸橼酸铅双重电子染色，透射电子显微镜下观察神经的结构。同法将2条新鲜 Wistar大鼠坐骨神经行超薄切片后在透射电子显微镜下观察并与前者比较。

神经干细胞与去细胞神经体外共培养：将SD孕鼠麻醉消毒后剖腹获取鼠胚胎，经胚鼠头端背部矢状切开，以神经管为辨认标志获取鼠胚室管膜组织，用酶消化法获得单细胞悬液，以无血清的DMEM/F12 (1∶1)为基础培养基，按浓度5×10⁸L^-1接种到25 mL培养瓶中，加入碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和B27，培养在体积分数5%CO₂、37 ℃恒温培养箱中。培养后每三四天离心换半液，7-10 d传代1次，采用离心后机械吹打分离神经球的方法。第1次传代后即用N₂(1∶100)代替B27。然后分别采用荧光及DAB显色行神经干细胞鉴定。同时将病毒包装细胞PT67传代培养，扩增并提取PLEGFP质粒，用含EGFP基因的PLEGFP质粒转染PT67细胞，离心后收集病毒上清备用。再用PLEGFP病毒上清对培养鉴定的神经干细胞进行转染。再培养7 d形成神经球离心吹打成单细胞悬液，添加DMEM培养基至细胞浓度为1×10⁹L^-1备用。

川芎嗪粉剂均在使用当天用DMSO溶解，以DMEM/F12培养基稀释，并使DMEM/F12培养基中川芎嗪工作质量浓度分别为50，100，200，300 mg/L，且DMEM/F12培养基中DMSO浓度始终≤0.1%。将神经干细胞置于各组培养液中，通过MTT比色法检测各组神经干细胞活力和锥虫蓝染色检测各组神经干细胞增殖能力，可发现随着川芎嗪质量浓度增加，改善细胞凋亡的效应更加明显，但200 mg/L组与300 mg/L组相比差异无显著性意义 (P > 0.05），故选择200 mg/L川芎嗪进行下一步实验。

用微量注射器吸取15 μL EGFP反转录病毒基因修饰的神经干细胞(1×10⁹L^-1)悬液，分别从两端注入化学萃取后的各条去细胞神经内，每端各7.5 μL，共12条，制成组织工程化神经，其中5条定为Ⅰ组，置入普通DMEM完全培养液中；另5条定为Ⅱ组，置入加有200 mg/L川芎嗪的DMEM完全培养基中，均放于37 ℃、体积分数5%CO₂孵箱中培养1周；另2条定为Ⅲ组，直接用于观察。取上述3组神经各2条切取1/2直接冰冻切片，荧光显微镜下观察细胞分布情况。将上述另1/2神经支架用体积分数10%甲醛固定，常规石蜡包埋，行横切片和纵切片，甩染色，进行观察。

异种组织工程化神经皮下包埋免疫反应检测：取SD大鼠24只，随机均分为4组，依次在背部皮下包埋4 ℃保存 1周的Wistar大鼠坐骨神经(异种神经组)、Ⅰ组组织工程化神经(对照组)、Ⅱ组组织工程化神经(实验组)及同种异体SD大鼠坐骨神经(同种异体神经组)，每只均为1/2条，各约 1 cm。同系SD大鼠坐骨神经为临时切取。7 d后取出各组移植神经行苏木精-伊红染色光镜观察及CD4⁺和CD8⁺淋巴细胞浸润数量检测。

主要观察指标：去细胞坐骨神经的结构；川芎嗪对组织工程化神经桥接物生物学特性的影响。

统计学分析：使用SPSS 16.0统计软件包。数据以x(_)±s 表示，组间比较采取单因素方差分析(ANOVA)，如差异有显著性意义，则进一步采取LSD-t 检验行两两比较。P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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讨论

3.1 同种异体神经的价值与免疫原性较长时间以来，同种异体神经移植一直受到神经修复领域学者的关注，并被认为是临床上替代自体神经移植治疗长段周围神经缺损的有效方法^[29-31]。从某种角度上说，同种异体神经移植具有神经来源广泛、无供区并发症、无需二次手术等优势。然而，异体神经活性细胞的免疫排斥反应、可能存在的成瘤性和诱导毒性等副作用又极大地限制了其临床应用^[32-33]。众所周知，免疫排斥的核心是主要组织相容性复合物，主要组织相容性复合物的表达产物主要存在于细胞膜表面，构成了多种细胞的膜抗原，这是产生移植免疫的主要原因^[34]。新鲜同种异体神经的主要抗原成分是许旺细胞、组织间隙细胞及髓鞘，其中许旺细胞的抗原性最强。神经干的其他组成部分，包括胶原组成的神经外膜、束膜和内膜，糖蛋白组成的许旺细胞基底板层，神经纤维周围的无细胞基质及神经干周围的筋膜组织共同构成神经的基底膜成分，抗原性则非常弱^[35-36]。武雷^[37]、Dubovy等^[38]研究发现，基底膜在神经再生过程中意义重大，其免疫原性在同物种之间非常微弱。因此，进行同种异体神经移植的必要条件是有效而最大限度地去除许旺细胞并保留其基底膜成分，同时尽可能去除组织间隙细胞和髓鞘。

3.2 去细胞神经的价值理想的组织工程神经支架材料应该具有以下特质：良好的生物相容性与降解性；具有三维立体多孔结构；良好的可塑性和一定的机械强度；良好的材料-细胞界面。本实验制备的去细胞神经保留了较完整的基底膜成分且几乎无免疫原性，基本具备了上述特征。基底膜在神经轴突的再生过程中意义重大，它能提供有效的三维空间结构及良好的生物学性能^[39-40]。

研究发现，理想的去细胞神经移植物应达到以下要求^[41]：①清除所有细胞、髓鞘及其崩解碎片，以降低抗原性。②保留由神经外膜、束膜和内膜组成的胶原性管状结构，成为良好的轴突再生通道。③保留基底膜，以诱导和增强宿主许旺细胞迁移及轴突再生^[38^，^42]。

采用化学脱细胞法处理异体神经能在有效降低异体神经免疫原性的同时，又清除掉异体神经中的细胞、髓鞘崩解碎片，保留较完整的基底膜成分及正常神经的三维空间结构，获得去细胞神经^[43]。本实验采用的改进化学脱细胞法是一种较理想的脱细胞神经制备方法，能获得较理想的去细胞神经。其中，剪去神经表面的结缔组织有利于药物渗透和细胞内容物的洗脱，蒸馏水浸浴及反复漂洗可使细胞和髓鞘在低渗液体中膨胀，部分细胞胀破，也可洗脱已溶解的细胞成分；TritonX-100 作为一种化学消化剂可破坏细胞膜，使细胞和髓鞘完全破裂，并降解和脱出部分崩解碎片；而脱氧胆酸钠则是一种效力较强的化学消化剂，可进一步破坏细胞和髓鞘, 溶解细胞中的脂类、蛋白质等，消化降解细胞碎片。

3.3 川芎嗪的应用价值川芎嗪是从中药伞形科藁本属植物川芎的根茎中提取的生物碱单体，现已可由人工合成。众多研究表明川芎嗪具有广泛的药理作用，如抗炎、抗氧自由基、拮抗胞内钙离子超载、抑制细胞凋亡、减轻缺血缺氧及再灌注损伤等^[44-46]。在中枢神经系统相关研究领域，有学者发现川芎嗪对缺血性脑、脊髓损伤均具有保护效应，能够减轻神经元凋亡、拮抗损伤后神经功能进一步恶化^[47]，且该保护效应可能与川芎嗪促进损伤区神经营养因子如神经生长因子、脑源性神经营养因子表达相关^[48]，也与调控脑组织内Bcl-2、Bax的表达及抑制Caspase的活化密切相关^[49]。

对于周围神经损伤，研究提示川芎嗪具有缓解周围神经性病理疼痛，减轻药物所致的外周神经耳毒性及有利于周围神经再生，促进神经功能恢复的作用^[50]。川芎嗪可能通过调控在启动移植排斥反应中发挥关键作用的两个重要分子ICAM-1和MHC Ⅱ，减轻了移植排斥反应，改善了移植物预后。本实验发现脱细胞神经种植神经干细胞后构建的组织工程神经，在含川芎嗪的培养液中继续培养后，相比没有在含川芎嗪培养液中培养的组织工程神经而言，其免疫原性明显下降，且与自体神经免疫原性相差不大，有较好的组织相容性，说明川芎嗪在降低异体神经免疫原性中起到了很大的作用。 3.4 含川芎嗪组织工程化神经的构建构建具有生物活性的组织工程化神经必须具备3要素：具备三维空间结构的支架；具有生物活性的种子细胞和(或)神经营养因子；两者良好接合。

将种子细胞与神经支架结合有两种方法：①细胞悬液立体定位注射。该法把种子细胞全部集中到病灶及其周边发挥治疗作用，但有容积占位效应，容易造成支架材料新的损伤。②吸附法。该法可使种子细胞与移植材料较好联合，同时解决容积占位效应，但该法结合量有限，耗时长，成功率不高。由此，本实验将大量活化的经过基因修饰的胎鼠神经干细胞作为种子细胞，分散注射入去细胞同种异体神经支架外膜下，并在体外共培养1周构建组织工程化神经，培养期间在培养基中添加具有维持细胞活性与降低组织免疫原性功能的川芎嗪(200 mg/L)，使种子细胞比较均匀地分布在神经支架内，比较直观科学地观察到了神经干细胞在组织化人工神经支架中的存活、增殖情况，以及迁移成行排列的特征，也为后续的体内移植实验提供了物质基础。本实验也直观证实了神经干细胞与脱细胞异体神经支架材料有较好的组织相容性，是一种较理想的神经缺损移植修复材料。 3.5 川芎嗪在组织工程化神经保存中的作用体外保存周围神经具有非常重要的现实意义及价值^[51]。对神经保存进行探讨，尽可能延长保存时间，保持组织工程化神经的细胞活性，降低其免疫原性，不仅有利于异体神经库的建立，也有利于临床应用的开展。许多研究表明，川芎嗪可提高细胞耐损伤能力，维持细胞活性，从而延长组织工程化神经的保存时间。川芎嗪也对细胞及异体神经有一定免疫抑制作用，能减轻炎症细胞的浸润程度，降低异体神经移植体的免疫排斥反应，进而一定程度上改善周围神经再生效果^[52-55]。本实验将在含川芎嗪培养液中培养的种植神经干细胞的脱细胞异体神经植入SD大鼠皮下，通过组织病理学观察发现其免疫原性非常弱，与不含川芎嗪的组织工程化神经有显著区别，与自体神经类似，有较好的组织相容性，为体内移植实验奠定了基础。总之，脱细胞天然神经桥接物的成功制备，为干细胞移植提供了有利于其生存的支架材料，在此基础上培养并种植高浓度、高纯度的神经干细胞，同时添加具有维持细胞活性与降低组织免疫原性功能的川芎嗪，共同构建的组织工程化神经是一种新型的周围神经缺损修复替代物，为神经缺损的修复开拓了一种新途径，对促进神经组织工程研究发展具有重大意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程
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川芎嗪对组织工程化神经桥接物生物学特性的影响

Effect of tetramethylpyrazine on biological properties of tissue-engineered acellular nerve allografts

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