中国组织工程研究 ›› 2011, Vol. 15 ›› Issue (7): 1186-1190.doi: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.07.010
• 组织构建与生物活性因子 tissue construction and bioactive factors • 上一篇 下一篇
李 颖1,霍金龙2,潘伟荣2,曾养志2,王继华1
Li Ying1, Huo Jin-long2, Pan Wei-rong2, Zeng Yang-zhi2, Wang Ji-hua1
摘要:
背景:版纳微型猪近交系能较好的模拟人取皮区创面,构建动物模型,检测与创面愈合及瘢痕形成密切相关的转化生长因子的表达。 目的:观察创面愈合过程中转化生长因子β1基因的表达情况。 方法:利用版纳微型猪近交系4~6月龄猪构建了皮肤创面愈合动物模型,通过提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,对与创面愈合相关密切的转化生长因子β1基因进行了RT-PCR扩增。纯化目的片段并与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR。 结果与结论:建立的转化生长因子β1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法特异性较好,检测灵敏度可达103拷贝/µL,线性范围达103~109拷贝/µL,阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系(R2=0.988),扩增效率高(E=107.433%)。利用该检测体系检测了45份样品,效果良好,该方法可为研究TGF-β1基因在创面愈合过程中的作用机理奠定分子生物学基础。
中图分类号: