中国组织工程研究 ›› 2010, Vol. 14 ›› Issue (2): 258-261.doi: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.02.016
• 组织构建与生物活性因子 tissue construction and bioactive factors • 上一篇 下一篇
曲华伟,张阳德,陈玉祥,赵劲风,廖明媚,何剪太
Qu Hua-wei, Zhang Yang-de, Chen Yu-xiang, Zhao Jin-feng, Liao Ming-mei, He Jian-tai
摘要:
背景:已有研究发现RNA干扰可通过抑制血管内皮生长因子基因表达抑制肿瘤细胞增殖,但目前关于应用RNA干扰胆囊癌血管内皮生长表达的研究国内外尚无相关报道。 目的:构建并筛选靶向血管内皮生长因子的shRNA,观察RNA干扰血管内皮生长因子的效果及对胆囊癌细胞增殖的影响。 方法:设计VEGF-shRNA片段,连接到pCYU6/GFP/Neo-shRNA质粒载体上。shRNA转染胆囊癌细胞。建立裸鼠胆囊癌模型,随机分成空白组、阴性对照组、实验组(干扰pShRNA-VEGF2),每组6只。瘤内注射shRNA。荧光显微镜观察细胞生长状态,半定量反转录-聚合酶链反应法与实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰效果,观察胆囊癌裸鼠模型肿瘤体积变化。 结果与结论:RNA干扰血管内皮生长因子后,胆囊癌细胞细胞变圆,皱缩,部分细胞死亡脱落。shRNA片段血管内皮生长因子2、血管内皮生长因子1均可抑制VEGF mRNA表达,抑制率可达86%,82%。裸鼠肿瘤模型中实验组肿瘤与对照组、阴性组相比明显变小,且生长缓慢(P < 0.05),而对照组和阴性组在肿瘤大小及生长趋势上没有明显的差别。实验构建的hVEGF-shRNA质粒表达载体通过抑制血管内皮生长因子的表达,抑制胆囊癌细胞增殖,从而达到间接治疗肿瘤的目的。
中图分类号: