人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡调节肠炎小鼠肠黏膜胶原的沉积

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2167

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
细胞外囊泡：是由体内多种细胞释放的具有双层膜结构的囊泡结构统称。细胞外囊泡可携带脂质、蛋白质、RNA等生物活性分子，这些物质可参与细胞间信息传递、细胞信号传导等。
炎症性肠病肠道纤维化：肠纤维化是炎症性肠病的常见并发症，在克罗恩病患者中表现更为明显，易形成肠腔狭窄。炎症性肠病肠道纤维化的发生机制不清楚，现研究认为引起肠道纤维化发生的主要因素有肠腔内因素和肠腔外因素，手术治疗仍然是大多数克罗恩病患者的重要选择。

背景：肠道纤维化是炎症性肠病的常见并发症，可导致肠道功能损害和肠梗阻。肠道纤维化发生主要与细胞外基质成分如胶原、纤连蛋白的沉积和降解失衡有关。有研究发现间充质干细胞通过旁分泌机制分泌可溶性生物活性物质如细胞外囊泡，具有显著的抗纤维化作用。
目的：探讨人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡对肠炎小鼠肠黏膜胶原沉积的影响。
方法：将24只BALB/c小鼠随机分为假手术组、模型组、细胞外囊泡组，每组8只。除假手术组外，其余两组使用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法诱导建立肠纤维化模型，每日1次，持续6周。实验第3周开始细胞外囊泡组尾静脉注射细胞外囊泡，模型组给予等体积PBS，每日1次，持续到第6周。实验第1-7周统计比较小鼠疾病活动度指数评分、结肠质量/长度比值以评价细胞外囊泡的治疗效果，取病变肠段进行组织学染色及Western blot、RT-PCR检测纤维化相关指标以评估肠纤维化程度。
结果与结论：①与模型组相比，细胞外囊泡组小鼠疾病活动度指数评分明显降低，结肠质量/长度比值明显降低，结肠病理表现明显改善；②与模型组相比，细胞外囊泡组小鼠结肠黏膜胶原沉积明显减轻，Ⅰ型、Ⅲ胶原及转化生长因子β1蛋白表达均明显下降；③与模型组相比，细胞外囊泡组小鼠结肠组织中基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶9表达水平均明显升高，而金属蛋白酶组织抑制因子1表达水平下降；④结果表明，人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡可明显改善小鼠结肠损伤严重程度及减少肠炎小鼠肠黏膜胶原沉积。

https://orcid.org/0000-0002-9243-1101(段丽芸)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 干细胞, 人胎盘间充质干细胞, 细胞外囊泡, 炎症性肠病, 肠纤维化, 胶原, 实验, 鼠

Abstract: BACKGROUND:Intestinal fibrosis is a common complication in inflammatory bowel disease and leads to functional damage and intestinal obstruction. Intestinal fibrosis is mainly related to the imbalance of deposition and degradation of extracellular matrix components, such as collagens and fibronectins. Studies have found that mesenchymal stem cells secreted soluble bioactive substance such as extracellular vesicles via paracrine action, which exerted marked anti-fibrosis effect.

OBJECTIVE: To investigate the effect of human placenta mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles on collagen deposition in mice with colitis.

METHODS: Totally 24 BALB/c mice were randomly divided into sham operation group, model group and extracellular vesicles group, with 8 mice in each group. Except the sham operation group, the remaining mice of model group and extracellular vesicles group were treated with trinitro-benzene-sulfonic acid to induce intestinal fibrosis, once a day for 6 weeks. The mice in the extracellular vesicles group and model group were administered with extracellular vesicles and phosphate-buffered saline, respectively, at 3 weeks, once a day for 6 weeks. The therapeutic effect of extracellular vesicles was evaluated by disease active index score and the colon weight/length ratio at 1-7 weeks. Diseased intestinal segment was subjected to histological staining. Western blot assay and RT-PCR were used to measure fibrosis related indicators so as to evaluate the degree of intestinal fibrosis.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the model group, disease active index score and the colon weight/length ratio were significantly reduced, and colonic pathology was significantly improved in the extracellular vesicles group. (2) Compared with the model group, collagen deposition in colon mucosa of mice was significantly reduced, and the expression of collagen I, collagen III and transforming growth factor-β1 decreased significantly in the extracellular vesicles group. (3) Compared with the model group, expression levels of matrix metalloproteinase 2 and matrix metalloproteinase 9 in mouse colon tissue were significantly increased, while the expression level of tissue inhibitor of metalloproteinase 1 was decreased in the extracellular vesicles group. (4) Results suggest that human placenta mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles can obviously improve the severity of colon injury and reduce the collagen deposition of intestinal mucosa in mice with enteritis.

Key words: stem cells, human placenta mesenchymal stem cells, extracellular vesicles, inflammatory bowel disease, intestinal fibrosis, collagen, experiment, mice

中图分类号:

段丽芸, 曹晓沧. 人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡调节肠炎小鼠肠黏膜胶原的沉积[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1026-1031.

Duan Liyun, Cao Xiaocang. Human placenta mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles regulate collagen deposition in intestinal mucosa of mice with colitis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(7): 1026-1031.

图/表（结果） 6

2.1 细胞外囊泡的表征普通显微镜下观察人胎盘来源间充质干细胞呈纺锤形，见图1A。透射电镜下观察细胞外囊泡呈一侧凹陷的半球形，见图1B；应用广角动/静态激光散射仪检测细胞外囊泡粒径分布，见图1C，其粒径主要分布在100 nm；Western blot检测细胞外囊泡CD63、CD9、Alix蛋白表达呈阳性，见图1D。

2.2 实验动物数量分析实验选用24只BALB/c雄性小鼠，分为3组，实验过程中无脱落，全部进入实验结果分析阶段。
2.3 各组小鼠大体表现各组小鼠进行疾病活动指数评分，见图2A。与模型组相比，细胞外囊泡组小鼠疾病活动指数评分降低(P < 0.05)。各组小鼠结肠外观：假手术组小鼠肠壁完整光滑，无粘连；模型组小鼠肠壁变硬，肠道充血水肿，周围有粘连，结肠长度缩短；细胞外囊泡组小鼠肠道无明显充血水肿，部分周围有粘连，结肠长度较模型组明显增长，见图2B。各组小鼠结肠质量/长度的比值：假手术组小鼠结肠质量/长度比值最低，细胞外囊泡组小鼠结肠质量/长度比值较模型组明显下降，差异有显著性意义 (P < 0.05)，见图2C。

2.4 各组小鼠病理组织学表现结肠组织行苏木精-伊红染色，结果见图3。假手术组组织结构完整，黏膜无水肿，极少量的炎性细胞浸润；模型组黏膜层破化明显，腺体减少，并伴有大量的炎细胞浸润；细胞外囊泡组黏膜层组织结构相对较完整，腺体相对较少，隐窝结构基本正常，周围无明显的炎性细胞浸润。以上结果表明人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡可明显改善实验小鼠肠道损伤。

2.5 结肠组织胶原沉积评估各组小鼠结肠组织行Masson染色及天狼猩红染色，观察胶原沉积情况。Masson染色结果见图4A-C，假手术组黏膜及黏膜下层有少量蓝色胶原沉积，模型组肠壁黏膜层、黏膜下层及肌层均有显著的蓝色胶原沉积，细胞外囊泡组各层胶原沉积情况较模型组明显减轻。天狼猩红染色见图4D-F，细胞外囊泡组黏膜及黏膜下层红色胶原沉积明显比模型组减少，进一步证实了人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡可以减少结肠炎小鼠肠黏膜胶原沉积。

2.6 Western blot检测结肠组织转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达与假手术组相比，模型组小鼠结肠组织中转化生长因子β1蛋白表达水平明显升高(P < 0.01)；与模型组相比，细胞外囊泡组转化生长因子β1蛋白表达水平明显降低(P < 0.05)，见图5A，B。与假手术组相比，模型组小鼠结肠组织中Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达水平明显增加(P < 0.01)；与模型组相比，细胞外囊泡组Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达水平显著下降(P < 0.05)，见图5C，D。以上结果进一步证明，细胞外囊泡可减少肠炎小鼠肠黏膜胶原沉积。

2.7 RT-PCR检测结肠组织基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9、金属蛋白酶组织抑制因子1的mRNA表达基质金属蛋白酶可以促进胶原的降解，金属蛋白酶组织抑制因子1可以阻碍这一进程，两者之间的平衡在纤维化发生发展中发挥重要作用。与模型组相比，细胞外囊泡组小鼠结肠组织中基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶9表达明显升高(P < 0.05)；与模型组相比，细胞外囊泡组小鼠结肠组织中金属蛋白酶组织抑制因子1表达明显降低(P < 0.05)，见图6。

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引言

肠纤维化是炎症性肠病的常见并发症，在超过30%的克罗恩病患者和约5%的溃疡性结肠炎患者中可发生，易形成肠腔狭窄[1-3]。有研究报道超过1/3的克罗恩病患者至少接受过一次外科手术，而70%纤维化狭窄表型患者在疾病进展10年内需要行肠管部分切除，手术1年后有70%-90%的患者发生复发且超过50%的患者会形成新的狭窄，需要再次手术治疗[4]。纤维化是器官或组织慢性损伤后的共同不良结局，也是最终引起器官功能障碍的主要病理生理基础，肠道纤维化一旦形成后就很难逆转。
炎症性肠病发生肠壁纤维化的主要机制是肠道组织在多种因素作用下发生局部慢性炎症的结果，其特征是慢性炎症可刺激间充质细胞活化并增殖，导致细胞外基质产生过多。肠道间充质细胞主要包括成纤维细胞、肌成纤维细胞和平滑肌细胞，被认为是肠纤维化发生的主要效应细胞。成纤维细胞活化是肠壁发生纤维化过程的重要环节，是产生细胞外基质的主要细胞[5-6]。胶原蛋白是细胞外基质的主要组成成分，包括Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白。在炎症性肠病发病初期，成纤维细胞增殖、活化，可对受损肠道组织起到修复作用，但发病后期成纤维细胞过度增殖活化，产生大量胶原蛋白沉积于肠壁，可导致肠壁纤维化的发生。间充质细胞可以通过多种途径被激活，包括细胞因子、趋化因子、转化生长因子及来自邻近细胞的生长因子等，其中转化生长因子在激活间充质细胞过程中具有关键性作用[7]。转化生长因子β1是一种促纤维化细胞因子，有研究发现肠壁发生纤维化可能是转化生长因子β1激活间质细胞促进胶原蛋白的大量产生，导致肠壁胶原沉积[5，8]，还有研究发现转化生长因子β1促进肠壁发生纤维化，主要是通过激活TGF-β1/Smad信号通路[9]。基质金属蛋白酶及基质金属蛋白酶抑制剂的平衡对胶原生成及降解发挥重要作用，也是肠道发生纤维化的主要机制[10-11]。一般情况下，肠道组织中的基质金属蛋白酶、基质金属蛋白抑制剂具有协同作用，使肠壁间胶原的生成与降解处于动态平衡，一旦此平衡破坏后，胶原生成增加，降解下降，导致肠壁发生胶原沉积。目前临床上仍缺乏有效的诊断和治疗肠道纤维化的手段。手术仍然是大多数肠道纤维化患者的最终治疗方法，但手术治疗不能延缓患者纤维化复发的概率。因此，临床上迫切需要一种新的可以抑制肠道纤维化的治疗方法。
间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，具有自我更新、自我复制、多向分化潜能等特点[12]。间充质干细胞在慢性炎症性纤维化和纤维化疾病治疗中发挥重要作用[13]。研究发现，间充质干细胞可通过旁分泌机制分泌可溶性生物活性因子发挥治疗作用[14]。细胞外囊泡是间充质干细胞旁分泌可溶性因子中的主要成分，可参与细胞间传递、细胞信号传导等[14]。细胞外囊泡是间充质干细胞在生理或者病理状态下分泌的直径在30-200 nm的同质性囊泡，含有大量且种类繁多的蛋白质、脂质、mRNA和miRNA等生物活性物质[15]。研究发现间充质干细胞来源细胞外囊泡(MSCs-EVs)具有抑制组织发生纤维化、促进血管新生、参与组织修复再生等功能[16]。然而，间充质干细胞来源细胞外囊泡对肠道纤维化的作用仍缺乏研究。为此，该实验采用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导小鼠肠道纤维化模型，通过尾静脉注射间充质干细胞来源细胞外囊泡，以观察其对小鼠肠道纤维化的影响。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计对比观察动物实验。
1.2 时间及地点实验于2019年5至12月在南开大学医学院实验室和天津医科大学总医院消化内科实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物雄性 BALB/c小鼠24只，8-10周龄，体质量(22±3) g，由中国医学科学院实验动物研究所提供。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。小鼠进食常规饲料及自由饮水，饲养室温度为(23.0±1.0) ℃，湿度30%-60%。
1.3.2 实验试剂 2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS，Sigma公司)，与无水乙醇按1∶1比例配成2，4，6-三硝基苯磺酸灌肠剂；苏木精-伊红染色试剂盒(中山金桥公司)；Masson 染色试剂盒(吉美生物技术有限公司)；天狼猩红染色试剂盒(中山金桥公司)；Alix多克隆抗体(中国沈阳万类公司)；CD63和CD9多克隆抗体(美国Abcam公司)；转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原多克隆抗体(美国Abcam公司)；β-actin单克隆抗体(美国Abcam公司)；HRP标记的山羊抗兔IgG及HRP标记的山羊抗小鼠IgG(美国Abcam公司)；PCR引物(上海生工生物工程技术服务有限公司合成)。
1.4 实验方法
1.4.1 人胎盘来源间充质干细胞的培养及鉴定

1.4.2 细胞外囊泡的分离人胎盘来源间充质干细胞在无细胞外囊泡的DMEM/F12培养基中培养24 48 h，收集上清，4 ℃ 300×g条件下离心10 min，除去细胞碎片；将离心后上清液移至超速离心管中，4 ℃ 12 000×g离心20 min，进一步去除细胞及碎片；使用0.22 μm滤器过滤，去除大于200 nm的粒子；过滤后上清于另一超速离心管中，4 ℃ 100 000×g离心70 min；弃上清，无菌滤纸吸净管壁液体，管底即为细胞外囊泡，加入PBS，-80 ℃保存待用。
1.4.3 肠纤维化模型建立与分组干预健康雄性BALB/c小鼠24只随机分为3组，每组8只，分别为假手术组、模型组、细胞外囊泡组。模型组、细胞外囊泡组根据参考文献[17]造模，所有小鼠禁食不禁水24 h后，腹腔注射4%水合氯醛
(350 mg/kg)使其充分麻醉，使用直径为2 mm的硅胶管经直肠缓慢进入，进入约5 cm后给予2，4，6-三硝基苯磺酸/乙醇溶液100 µL，持续给药6周，每周1次，第1-6周2，4，6-三硝基苯磺酸的给药剂量分别为1.5，1.5，2.0，2.0，2.5，2.5 mg，假手术组相同时间点灌注等量PBS，给药后倒置造模小鼠约1 min，以防止药物流出。造模后第3周开始，每次给予2，4，6-三硝基苯磺酸之后细胞外囊泡组通过尾静脉注射细胞外囊泡100 μg，持续到第6周，模型组给予相同剂量的PBS。造模后小鼠可放置加热垫至自然清醒。造模前及造模后每天记录小鼠的体质量、大便、精神状态等。
1.4.4 一般情况评估及疾病活动指数评分每日观察并记录小鼠的体质量变化、大便性状改变、便血情况，按MURTHY等[18]提出的炎症性肠病疾病活动指数评分标准进行评分。疾病活动指数=(体质量下降分数+大便性状分数+便血分数)/3。
1.4.5 组织学染色造模第7周获取各组小鼠结肠组织，放入体积分数为10%甲醛固定缓冲液中固定过夜，从低体积分数到高体积分数乙醇脱水后置于二甲苯中透明替换出组织块中的乙醇，石蜡浸入后包埋，制成6 μm厚的石蜡包埋切片，脱蜡染色，将负载组织的载玻片放在载玻片架上置于染色盒，按照染色试剂盒步骤进行苏木精-伊红染色、Masson胶原三色染色及天狼猩红染色。
1.4.6 Western blot及RT-PCR实验取结肠组织100 mg，置于1.5 mL离心管中，用剪刀将组织剪碎，加入1 mL蛋白酶裂解液冰上裂解30 min，4 ℃预冷离心机12 000 r/min离心15 min，取上清用BCA蛋白定量试剂盒检测蛋白质浓度。SDS-PAGE凝胶的配置，按计算的浓度推算上样量，电泳，转膜，5%脱脂牛奶封闭，一抗孵育过夜[兔抗小鼠转化生长因子β1多克隆抗体(1∶1 000)、兔抗小鼠Ⅰ型胶原多克隆抗体抗体(1∶1 000)、兔抗小鼠Ⅲ型胶原多克隆抗体抗体(1∶1 000)、小鼠β-actin单克隆抗体(1∶1 000)]，次晨洗膜15 min后二抗孵育2 h [HRP标记的抗兔IgG(1∶1 000)及HRP标记的抗小鼠IgG(1∶1 000)]，洗膜后显色、曝光，使用图像处理软件Image J进行蛋白条带灰度分析。
取结肠组织50 mg，用TRIzol提取总RNA，反转录得cDNA，按照RT-PCR体系添加反应成分，合成的引物序列见表1，以β-actin为内参照。在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

1.5 主要观察指标各组小鼠的大体表现、病理组织学表现以及结肠黏膜胶原沉积现象。
1.6 统计学分析实验数据采用Graphpad 5.0进行统计分析。所有数据以均数±平均误表示。多组间均数比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，两组间均数比较采用小样本t 检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

炎症性肠病在欧美国家比较常见，但近年来在发展中国家的发病率呈上升趋势。临床用药主要包括5-氨基水杨酸类制剂、糖皮质激素和免疫抑制剂，这些药物需要长期维持治疗，且疗效欠佳。由于这些药物主要是在炎症活动期起抗炎作用，长期慢性炎症导致的肠壁纤维化仍不可避免。肠道纤维化患者肠狭窄的治疗最终还是基于外科手术或者内镜治疗，但术后复发率比较高，因此临床上急需一种有效改善肠道纤维化的治疗手段。该实验发现人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡可以缓解肠道损伤并减轻小鼠肠道纤维化的发生，细胞外囊泡可通过调节胶原蛋白生成和降解之间的平衡来显著减少肠炎小鼠肠黏膜胶原沉积。
随着对间充质干细胞的不断研究，研究者认为间充质干细胞可能是多种疾病的潜在治疗手段，包括纤维化疾病[12]。CHOI等[19]发现间充质干细胞可以通过阻断Rho/ MRTF/SRF途径，抑制人原发性肠肌成纤维细胞中转化生长因子β1诱导的肠道纤维化活化。研究发现间充质干细胞移植可明显减轻CCl4诱导的肝纤维化程度，模型小鼠肝脏组织中的胶原沉积明显减少[20]。间充质干细胞具有旁分泌特性，可分泌多种生物活性因子，主要为细胞外囊泡。研究发现间充质干细胞可通过分泌细胞外囊泡促进受损组织修复[21]，调节免疫反应[22]，包括抗纤维化作用[20，23]。间充质干细胞来源细胞外囊泡可以改善疾病模型小鼠的纤维化，主要通过抑制肝脏上皮间质的转化，抑制胶原蛋白的产生，通过下调转化生长因子β1抑制肝纤维化发生[20，24-25]。间充质干细胞来源细胞外囊泡在皮肤伤口愈合中也起到抑制纤维化的作用，主要通过抑制转化生长因子β/Smad2途径降低皮肤成纤维细胞中转化生长因子β诱导的α-SMA表达[26]。间充质干细胞来源细胞外囊泡可缓解以肌肉纤维化为特征的杜氏肌营养不良纤维化的形成，主要通过降低肌成纤维细胞中胶原1A1和胶原1A2的表达[27]。以上研究可表明间充质干细胞来源细胞外囊泡具有抗纤维化作用。此外，研究发现间充质干细胞释放的细胞外囊泡具有与间充质干细胞相似的功能[28-29]。间充质干细胞及其释放的细胞外囊泡目前在多种疾病动物模型上进行了大量的研究，且间充质干细胞对克罗恩病患者发生肠瘘的治疗已经进入临床试验[30-31]。与间充质干细胞相比，其分泌的细胞外囊泡在发挥治疗作用方面具有如下优点：细胞外囊泡相对于间充质干细胞而言其体积更小，复杂性低且易于大量生产和存储；间充质干细胞来源细胞外囊泡没有细胞活性，因此不会发展成为癌细胞，不存在形成肿瘤的风险；间充质干细胞来源细胞外囊泡相对于间充质干细胞而言具有较低的免疫原性；间充质干细胞来源细胞外囊泡富含蛋白质、RNA及脂质等多种生物活性物质[32]。基于以上的优点，间充质干细胞来源细胞外囊泡将被视为一种潜在的和更为安全的治疗手段。研究报道间充质干细胞来源细胞外囊泡主要通过以下方式发挥生物学效应[33-36]：细胞外囊泡表面蛋白分子及脂质配体可以直接与靶细胞表面的相关受体结合，进一步激活靶细胞内的信号通路；细胞外囊泡可以通过与靶细胞发生融合或内吞作用，从而直接进入靶细胞内部，使其自身携带的蛋白质、脂质、核酸等生物活性物质带入靶细胞内，进一步调控靶细胞的功能并发挥治疗效果。
炎症性肠病发生肠道纤维化主要是由于肠道长期受炎症刺激使肠壁间质细胞过度增殖，细胞外基质沉积以及肠道肌层过度生长导致肠壁纤维化，所导致的狭窄是炎症性肠病的常见并发症之一[37]。该实验通过对受损结肠组织进行Masson
染色及天狼猩红染色，发现模型组发生明显的纤维化改变，从结肠外观表现可以发现肠壁变硬，部分肠腔可见狭窄。Western blot实验结果显示模型组小鼠肠壁间质Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达明显升高，细胞外囊泡组结肠纤维化程度相对减轻，肠壁稍变硬，无明显肠腔狭窄，细胞外囊泡组小鼠结肠组织中Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白水平较模型组显著下降。以上结果证实了间充质干细胞来源细胞外囊泡可以减少小鼠结肠黏膜胶原沉积。转化生长因子β1在肠道纤维化过程中起着重要的作用，是组织纤维化进程中重要的调节因子，可促进间质细胞转化为肌成纤维细胞，刺激细胞外基质的合成增加，同时抑制细胞外基质的降解，最终形成肠壁纤维化[10]。在肠道发生纤维化过程中细胞外基质的代谢失衡具有重要作用。该实验采用RT-PCR检测结肠组织中基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9、金属蛋白酶组织抑制因子1的mRNA表达，进一步证实了间充质干细胞来源细胞外囊泡可以减轻小鼠肠黏膜胶原的沉积。
综上所述，间充质干细胞来源细胞外囊泡可通过抑制转化生长因子β1蛋白的表达，减少胶原蛋白的生成，同时调控基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶抑制剂的平衡，促进胶原蛋白的降解，从而减轻肠壁胶原蛋白的沉积。间充质干细胞来源细胞外囊泡携带多种生物活性物质，具体是哪种物质通过何种方式发挥治疗作用，确切的分子机制还不清楚，需要进一步的研究明确。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程