转化生长因子β3对成骨细胞增殖和成骨能力的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.3156

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (17): 2664-2669.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.3156

• 组织构建与生物活性因子 tissue construction and bioactive factors • 上一篇下一篇

转化生长因子β3对成骨细胞增殖和成骨能力的影响

艾力麦尔旦•艾尼瓦尔，王玲，古丽，迪丽达尔•塔西甫拉提，王珊，尹宏斌

新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)颌面外科门诊，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011

收稿日期:2020-03-16 修回日期:2020-03-21 接受日期:2020-05-30 出版日期:2021-06-18 发布日期:2021-01-08
通讯作者: 尹宏斌，副主任医师，新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)颌面外科门诊，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011
作者简介:艾力麦尔旦·艾尼瓦尔，男，1992年生，维吾尔族，硕士，医师，主要从事骨组织工程、口腔种植方面的研究。
基金资助:
新疆维吾尔自治区自然科学基金(2016D01C250)，项目负责人：王玲

Effect of transforming growth factor-beta3 on the proliferation and osteogenic capability of osteoblasts

Ailimaierdan·Ainiwaer, Wang Ling, Gu Li, Dilidaer•Taxifulati, Wang Shan, Yin Hongbin

Maxillofacial Surgery Clinic, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University (Affiliated Stomatological Hospital), Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China

Received:2020-03-16 Revised:2020-03-21 Accepted:2020-05-30 Online:2021-06-18 Published:2021-01-08
Contact: Yin Hongbin, Associate chief physician, Maxillofacial Surgery Clinic, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University (Affiliated Stomatological Hospital), Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
About author:Ailimaierdan·Ainiwaer, Master, Physician, Maxillofacial Surgery Clinic, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University (Affiliated Stomatological Hospital), Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region, No. 2016D01C250 (to WL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
转化生长因子β3：是转化生长因子β的亚型。转化生长因子β是一类具有多重效能的生长因子家族，参与调控机体胚胎发育、组织再生、免疫调节、血管再生和癌细胞增殖凋亡等，它是骨基质中含量丰富的生物因子，能与细胞膜表面特异的细胞靶点结合，参与调控细胞的生存、分化、增殖、黏附、代谢和功能调节。转化生长因子β3在软骨和纤维组织形成、组织创伤修复方面的研究比较成熟，其在间充质来源的干细胞增殖和成骨向分化方面的作用近年逐渐被证实，而转化生长因子β3的作用最佳浓度存在较大的差异。
Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2，Runx2)：是成骨分化和骨形成过程中的重要调节因子，出现在成骨分化的早期，可激活、启动下游包括碱性磷酸酶、骨钙素和Ⅰ型胶原蛋白等基因的转录和表达，在尚未成熟的成骨细胞中表达最高而随着成骨细胞的成熟其表达下降。

背景：转化生长因子β3对成骨细胞增殖和成骨能力的影响相关研究甚少。
目的：观察不同质量浓度的转化生长因子β3对成骨细胞生长增殖和成骨能力的影响。
方法：采用课题组前期方法改良酶消化法分离获得新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞，差速贴壁法纯化并鉴定。将成骨细胞分为对照组和实验组，对照组为常规培养的成骨细胞，实验组为分别含0.1，1 ，10 ，100 μg/L的转化生长因子β3培养。各组每天观察细胞生长情况；培养1，3，5，7，9，11，13 d采用 MTT法检测各组细胞增殖情况并绘制细胞生长曲线；培养1，3，5，7，9，11，13，15 d检测各组碱性磷酸酶水平；培养第7，14天用RT-qPCR法检测各组胶原蛋白1A1、Runx-2和骨钙素基因表达情况；培养21d茜素红染色法检测各组细胞矿化能力。实验方案经新疆医科大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准。
结果与结论：①成功分离培养、纯化并鉴定成骨细胞；②10 μg/L 转化生长因子β3组细胞增殖活性明显高于对照组(P < 0.05)；10 ，100 μg/L 转化生长因子β3组碱性磷酸酶水平高于对照组(P < 0.05)；③10 μg/L 转化生长因子β3组胶原蛋白1A1、Runx-2和骨钙素基因表达量始终高于对照组(P < 0.05)，100 μg/L 转化生长因子β3组胶原蛋白1A1，Runx-2和骨钙素基因表达量在第7天时高于对照组(P < 0.05)；④10，100 μg/L 转化生长因子β3组矿化结节较对照组大且多，其中10 μg/L 转化生长因子β3组的矿化结节数明显多于对照组(P < 0.05)；⑤结果说明，转化生长因子β3在10-100 μg/L范围内可促进成骨细胞的增殖和成骨能力，其中10μg/L质量浓度的转化生长因子β3效果最佳。
https://orcid.org/0000-0002-7564-2169 (艾力麦尔旦·艾尼瓦尔)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨, 生长因子, 成骨, 成骨细胞, 细胞增殖, 碱性磷酸酶, 基因

Abstract: BACKGROUND: Less is reported on the effect of transforming growth factor-β3 (TGF-β3) on the proliferation and osteogenic capability of osteoblasts till now.
OBJECTIVE: To investigate the ability of TGF-β3 in different doses on the proliferation and osteogenic capability of osteoblasts.
METHODS: We isolated osteoblasts from the calvarium of neonatal New Zealand white rabbit according to our previous method, purified and identified the cells using differential attachment method. The osteoblasts were divided into a control group and an experimental group. The osteoblasts in the control group were cultured with conventional culture medium, and those in the experimental group were cultured in the medium containing separately 0.1, 1, 10, and 100 μg/L TGF-β3. The morphology and growth of osteoblasts were observed daily. Cell proliferation was detected by MTT assay and the growth curve was drawn at 1, 3, 5, 7, 9, 11, and 13 days of culture. Alkaline phosphatase activity was measured at 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, and 15 days of culture. The expression levels of collagen 1A1, Runt related transcription factor 2 (Runx-2) and osteocalcin genes were measured by RT-qPCR at 7 and 14 days of culture. Alizarin red S staining was carried out to testify mineralized matrix productivity of each group at 21 days of culture. The study was approved by the Animal Experimental Ethics Committee of the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University.
RESULTS AND CONCLUSION: The osteoblasts were isolated, purified and identified successfully. MTT assay results showed that the cell proliferation activity of 10 μg/L TGF-β3 group was higher than that in the control group (P < 0.05). The alkaline phosphatase activity of 10 and 100 μg/L TGF-β3 groups was higher than that in the control group (P < 0.05). RT-qPCR results revealed that the mRNA expressions of collagen 1A1, Runx-2 and osteocalcin in the 10 μg/L TGF-β3 group were always higher than those in the control group (P < 0.05). The mRNA expressions of collagen 1A1, Runx-2 and osteocalcin in the 100 μg/L TGF-β3 group were higher than those in the control group at 7 days of culture (P < 0.05). Alizarin red S staining showed that the mineralized nodules of the 10 and 100 μg/L TGF-β3 groups, especially in the 10 μg/L TGF-β3 group (P < 0.05), were bigger and more than those in the control group. To conclude, 10-100 μg/L TGF-β3 can improve the proliferation and osteogenic capability of osteoblasts and these effects are more obvious when the concentration of TGF-β3 is 10 μg/L.

Key words: bone, growth factor, osteogenesis, osteoblast, cell proliferation, alkaline phosphatase, gene

中图分类号:

艾力麦尔旦•艾尼瓦尔, 王玲, 古丽, 迪丽达尔•塔西甫拉提, 王珊, 尹宏斌. 转化生长因子β3对成骨细胞增殖和成骨能力的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(17): 2664-2669.

Ailimaierdan·Ainiwaer, Wang Ling, Gu Li, Dilidaer•Taxifulati, Wang Shan, Yin Hongbin. Effect of transforming growth factor-beta3 on the proliferation and osteogenic capability of osteoblasts[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(17): 2664-2669.

图/表（结果） 5

2.1 细胞形态观察在倒置显微镜下观察，原代培养48 h后可观察到有细胞从组织块周围呈放射状爬出(图1A)，贴壁生长并包绕组织块聚集生长呈多个细胞团块，细胞形态多呈三角形、梭形、多角形，7-10 d细胞生长满培养皿80%-90%，进行差速贴壁法纯化和传代，随培养时间和代数增加细胞形态趋于单一(图1B)并可见复层生长情况。

2.2 成骨细胞鉴定结果成骨细胞分离培养并纯化后呈典型的成骨细胞形态，表达成骨细胞的典型标志物碱性磷酸酶，并表达成骨标志基因胶原蛋白1A1、Runx-2和骨钙素，常规培养21 d后出现矿化结节，呈现出典型的矿化能力。以上结果均说明分离培养的成骨细胞具有典型的成骨细胞特征。
2.3 MTT测定结果成骨细胞增殖潜伏期约为3 d，随后进入对数增长期，约在第9天细胞增殖达到平台期；10 μg/L 转化生长因子β3组成骨细胞增殖能力明显高于对照组(P < 0.05)；1，100 μg/L 转化生长因子β3组成骨细胞增殖能力在培养前7 d高于对照组(P < 0.05)，其余时间与对照组无明显差别(P > 0.05)；10 μg/L 转化生长因子β3组成骨细胞增殖能力第9天以后仍高于对照组(P < 0.05)，说明细胞在对数增长期后仍保持良好的细胞增殖能力(图2)。

2.4 碱性磷酸酶活性测定结果对照组碱性磷酸酶水平约在培养第9天达到高峰随后下降(图3)，表示成骨细胞分泌的碱性磷酸酶随着成骨细胞增殖分化而增加，随后细胞进入矿化成熟期，碱性磷酸酶分泌随之减少；10，100 μg/L 转化生长因子β3组碱性磷酸酶活性均大于对照组(P < 0.05)；1 μg/L 转化生长因子β3组初期碱性磷酸酶活性与对照组无明显差别，而第9天后高于对照组(P < 0.05)。

2.5 RT-qPCR结果 10 μg/L转化生长因子β3组胶原蛋白1A1、Runx-2、骨钙素基因表达量始终高于对照组(P < 0.05)；1，100 μg/L 转化生长因子β3组第7天时胶原蛋白1A1水平高于对照组(P < 0.05，P < 0.01)；100 μg/L 转化生长因子β3组Runx-2基因表达量始终高于对照组(P < 0.05)，第7天时 1 μg/L 转化生长因子β3组Runx-2基因表达量高于对照组(P < 0.05)，10 μg/L 转化生长因子β3组Runx-2基因表达量明显高于对照组(P < 0.01)；100 μg/L 转化生长因子β3组骨钙素基因表达量始终高于对照组(P < 0.05)，1 μg/L 转化生长因子β3组14 d时骨钙素基因表达量高于对照组(P < 0.05)，10 μg/L 转化生长因子β3组14 d时骨钙素基因表达量明显高于对照组(P < 0.01)(图4)。

2.6 茜素红染色结果各组细胞培养第21天均可见细胞汇合成块并且局部聚集成灶，大体观察可见白色结节，茜素红染色即可见多个大小不等的矿化结节(图5A)，其中10 μg/L 转化生长因子β3组矿化结节多且明显(图5B)。矿化结节数分别为：对照组2.63±0.42，0.1 μg/L 转化生长因子β3组2.54±0.37，1 μg/L 转化生长因子β3组2.81±0.39，10 μg/L 转化生长因子β3组3.32±0.54，100 μg/L 转化生长因子β3组2.93±0.48，其中10 μg/L 转化生长因子β3组与对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。

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引言

材料方法

1.1 设计细胞学体外实验
1.2 时间及地点实验于2019年3月至9月在新疆医科大学第一附属医院科技楼干细胞研究实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物清洁级新西兰大白兔幼兔3只，1周龄，体质量70-90 g，雌雄不限，由新疆医科大学实验动物中心提供，使用许可证编号：SYXK(新)2010-0001；生产许可证号：SCXK(新)2011-0004。
1.3.2 实验用试剂与仪器胎牛血清(fetal bovine serum， FBS)、磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)、青链霉素、胰蛋白酶、高糖DMEM培养基 (Hyclone，美国)，转化生长因子β3(Peprotech，美国)，碱性磷酸酶活性测定试剂盒(南京建成，中国)，甲基噻唑基四唑(MTT)、茜素红S(Sigma-Aldrich，美国)，定量PCR仪(Bio-Rad，美国)，5%CO2恒温孵箱、离心机、酶标仪(Thermo，美国)，倒置显微镜(Leica，德国)。
1.4 实验方法
1.4.1 成骨细胞分离培养并差速贴壁法纯化将幼兔断颈处死，无菌条件下取出颅盖骨，剔除骨块表面骨膜、血管和结缔组织等，参照课题组前期研究介绍的改良酶解组织块法分离获得成骨细胞[4]，获得的细胞每两三天换液1次，待原代细胞长满培养皿80%-90%后，根据前期研究方法用差速贴壁法纯化以得到高纯度的成骨细胞[4]，有效去除原代成骨细胞内成纤维细胞等混杂细胞，纯化后的细胞每两三天换液1次，待细胞长满培养皿80%-90%后传代，培养至第3代细胞后用于后续实验。原代细胞和传代后的细胞每日在倒置显微镜下观察细胞生长情况及细胞形态并拍照。

1.4.2 成骨细胞的鉴定参照课题组前期研究方法[4]，分离培养并纯化的第3代成骨细胞培养每日显微镜下观察细胞形态，培养前15 d隔日行碱性磷酸酶活性检测；培养第7，14天采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法行成骨标志基因胶原蛋白1A1，Runt相关骨形成蛋白2(Runt-related transcription factor-2，Runx-2)以及骨钙素的检测；培养21 d行茜素红染色检测成骨细胞矿化能力以评估所分离纯化细胞的成骨细胞特性。
1.4.3 实验分组分离培养并纯化的第3代成骨细胞分为实验组和对照组，实验组分为4组，分别为0.1，1，10，100 μg/L的转化生长因子β3组，即含体积分数10%FBS，1%双抗的DMEM高糖培养液中加入质量浓度分别为0.1，1，10，100 μg/L的转化生长因子β3；对照组为常规培养的成骨细胞组，即含体积分数10%FBS，1%双抗的DMEM高糖培养液培养的成骨细胞。
1.4.4 MTT法检测各组细胞增殖活性取第3代成骨细胞，计数后以2×106 L-1细胞浓度接种于7块96孔板中，每组设5个复孔(其中一孔为空白对照)，细胞完全贴壁后随机分组开始实验，连续培养1，3，5，7，9，11，13 d后，分别取一块培养板用MTT法酶标仪测490 nm处各孔吸光度(A)值，取各组平均值，以细胞培养时间为横轴，A值为纵轴绘制生长曲线。
1.4.5 碱性磷酸酶水平测定取第3代成骨细胞，6×103 L-1细胞浓度接种于8块24孔板中，细胞贴壁后每块24孔板上的细胞均随机分为5组开始实验，各组培养1，3，5，7，9，11，13，15 d各取一块培养板按照碱性磷酸酶试剂盒说明书进行操作，490 nm处酶标仪测A值并根据计算公式计算碱性磷酸酶活性(金氏单位)，以培养时间为横坐标，A值为纵坐标绘制曲线。
1.4.6 RT-qPCR检测胶原蛋白1A1、Runx-2、骨钙素基因表达取第3代细胞以1×106/孔密度接种于6孔板中，待细胞贴壁后随机分为5组培养，每两三天换液1次，培养第7，14天，各取一块培养板用Trizol法提取细胞mRNA，第一链cDNA反转录试剂盒合成第一链cDNA模板，以β-actin为内参对照。引物由广州天一辉远公司设计合成(引物序列见表1)，PCR反应条件：50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s ，40循环。最终数据以2-∆∆Ct进行分析，用GraphPad Prism7.0软件统计分析并绘图。

1.4.7 茜素红染色检测矿化结节形成情况取第3代成骨细胞，以2×106个/孔密度接种于六孔板，待细胞贴壁后随机分为5组开始实验，每两三天换液1次，分组培养第21 天取培养板弃培养液，PBS冲洗后用40 g/L多聚甲醛室温固定1 h，PBS冲洗3次，现配的1%茜素红染液1 mL室温孵育50 min后蒸馏水冲洗表面的染液，置于室温下的超净台内随其自然干燥，镜下观察矿化结节并拍照。每个孔随机选取中段5个视野计算其矿化结节数量和大小并分析各组之间的差异。
1.5 主要观察指标 ①原代成骨细胞的形态及鉴定；②成骨细胞的增殖；③细胞的碱性磷酸酶活性；④各组细胶原蛋白1A1、Runx-2、骨钙素基因的表达；⑤细胞茜素红染色结果。
1.6 统计学分析应用SPSS 25.0统计软件对结果数据进行统计学分析，计量资料以x±s表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

创伤、肿瘤、炎症以及牙源性、牙周源性疾病引起的各类颌面部骨缺损的修复重建是当今骨组织工程面临的重要问题[5]。虽然各类干细胞、生长因子以及支架材料的结合在骨再生领域的应用逐渐趋于成熟，但如何在尽可能短的时间内安全又便捷地修复骨缺损、促进骨形成仍然是目前骨组织工程的研究难点[1，6-7]。新西兰大白兔作为中型动物，与人类生物行为特征相似，而且性格温顺，易于饲养，是研究组织工程比较理想的动物。成骨细胞取材部位选择颅盖骨，颅盖骨来源的细胞易于获取，应用比较成熟和广泛，能够分离获得的细胞数目多[4，8]，而且颅盖骨源于原始间充质，与颌面部诸骨具有相同的来源，因此选取颅盖骨成骨细胞研究颌面部骨组织工程具有同源优越性。所以此次研究选择新西兰幼兔的颅盖骨作为细胞来源，成骨细胞的提取分离完全参照课题组前期的改良酶消化法并加用差速贴壁法消除成骨细胞里可能掺杂的成纤维细胞[4]、破骨细胞、骨生成细胞等混杂细胞，纯度高，保证了研究结果的准确性和说服力。
转化生长因子β是一类具有多重效能的生长因子家族，参与调控机体胚胎发育、组织再生、免疫调节、血管再生和癌细胞增殖凋亡等，它是骨基质中含量丰富的生物因子，能与细胞膜表面特异的细胞靶点结合，参与调控细胞的生存、分化、增殖、黏附、代谢和功能调节[2，9]。目前哺乳类体内发现3个转化生长因子β亚型，即转化生长因子β1、转化生长因子β2和转化生长因子β3。转化生长因子β对成骨细胞增殖和成骨能力的作用虽然存在分歧，但大多数研究结果证实其对成骨细胞的增殖存在促进作用，而且此作用存在时间和剂量依赖性，在成骨不同阶段转化生长因子β对成骨细胞的矿化能力影响不同[10]。有学者发现转化生长因子β1在5-10 μg/L 浓度范围内可促进成骨样细胞的增殖和Ⅰ型胶原蛋白的分泌；而
100 μg/L时则起抑制作用 [11]。转化生长因子β3作为较新被发现的亚型，其在软骨和纤维组织形成、组织创伤修复方面的研究比较成熟 [12-15]。转化生长因子β3在间充质来源的干细胞增殖和成骨向分化方面的作用近年逐渐被证实 [16-18]，而转化生长因子β3的作用最佳浓度存在较大的差异。
课题组前期研究证实80 μg/L的转化生长因子β3对兔牙髓干细胞的成骨向分化有促进作用[3，19]，其机制是通过提高碱性磷酸酶、胶原蛋白1A1、Runx-2、骨钙素和BSP基因的表达来实现并有Smad通路的参与。LI等[20]证实转化生长因子β3能够有效促进牙周膜干细胞的成骨向分化，其成骨能力在500 μg/L质量浓度的转化生长因子β3诱导时效果最佳。DENG等[21]发现25 μg/L转化生长因子β3能够诱导人骨髓间充质干细胞成骨向分化从而刺激骨再生。而转化生长因子β3对成骨细胞的增殖和矿化能力国内外至今尚无相关报道。所以作者选择0.1-100 μg/L质量浓度的转化生长因子β3，首先探索对成骨细胞的增殖和矿化能力比较适宜的浓度区间，实验结果显示在10-100 μg/L范围内，转化生长因子β3能有效促进成骨细胞的增殖和成骨矿化能力，其中10 μg/L的转化生长因子β3效果最佳。有学者证实0.5-5 μg/L 浓度范围内转化生长因子β1在细胞培养的前期可促进在金属钽多孔状结构中培养的成骨样细胞的增殖[11]，其中5 μg/L的作用最明显，而10 μg/L的转化生长因子β1 反而抑制其增殖。
成骨标志蛋白有碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白、Runx-2、骨钙素、BSP、Osx和骨桥蛋白等[22]，此次研究选取其中具有代表性且与成骨细胞关系较为密切的成骨指标作为检测对象，探讨转化生长因子β3对成骨细胞表达标志基因的影响。碱性磷酸酶是成骨细胞分化的早期指标，此次实验结果显示10-100 μg/L质量浓度的转化生长因子β3能够提高成骨细胞表达的碱性磷酸酶活性并且10 μg/L转化生长因子β3的作用较明显。Ⅰ型胶原蛋白是骨基质的重要组成部分，胶原蛋白1A1是Ⅰ型胶原蛋白亚型中与成骨密切相关的蛋白，也是成骨细胞重要的特异性基因[10，23]。骨钙素在成骨细胞分化晚期开始活跃，其表达升高说明成骨细胞开始进入矿化期[22]。Runx-2又称核心结合因子Cbfα1，是成骨分化和骨形成过程中的重要调节因子[24]，出现在成骨分化的早期，可激活、启动下游包括碱性磷酸酶、骨钙素和Ⅰ型胶原蛋白等基因的转录和表达，在尚未成熟的成骨细胞中表达最高而随着成骨细胞的成熟其表达下降[25-26]。此次研究RT-qPCR结果显示10-100 μg/L浓度范围的转化生长因子β3均能提高成骨细胞表达上述基因，胶原蛋白1A1、Runx-2基因在第7天时的相对表达量高于14 d，说明10-100 μg/L浓度范围的转化生长因子β3在成骨早期就提高上述基因的表达；而100 μg/L 转化生长因子β3组骨钙素基因表达量第7天最高，14 d时10-100 μg/L浓度范围的转化生长因子β3组骨钙素表达量最高，表明转化生长因子β3在10-100 μg/L浓度范围内可促进成骨细胞进入矿化期。成骨过程的环节分为3部分：首先是细胞增殖，基质成熟而后就是细胞外基质的矿化从而形成矿化结节，这是成骨形成的最终环节[8，22]。此次研究茜素红染色结果显示10-100 μg/L浓度范围的转化生长因子β3对成骨细胞的矿化能力均有促进作用，其中10 μg/L 转化生长因子β3组形成的矿化结节较对照组明显而且结节大。以上结果均表明成骨细胞的成骨能力在转化生长因子β3质量浓度为10-
100 μg/L范围内时较佳。
转化生长因子β特异性受体Ⅰ和Ⅱ(T-βRI，T-βRII)是转化生长因子β3的特异性受体，转化生长因子β3表面的受体磷酸化后与细胞核内的Smad蛋白结合(Smad家族中Smad2和 Smad3 是转化生长因子β3的特异受体结合蛋白)从而完成目的基因的表达[2，27-28]，转化生长因子β信号通路包括转化生长因子β-Smad依赖和转化生长因子β-Smad不依赖的通路[28]。在转化生长因子β3诱导的成骨细胞矿化过程中是否有Smad通路的参与及其具体机制有待进一步研究。此次研究结果显示在转化生长因子β3质量浓度为10-100 μg/L范围内均对成骨细胞成骨有促进作用，其中10 μg/L 转化生长因子β3促进成骨能力较强，而中间浓度的转化生长因子β3是否会有促进峰值或者在此浓度范围内是否会有先促进后抑制作用及其具体界限和机制需要后期深入进行体内和体外实验进一步探讨。
综上所述，10-100 μg/L浓度范围的转化生长因子β3对成骨细胞的增殖和成骨具有一定的促进作用，其中转化生长因子β3质量浓度为10 μg/L时效果比较理想。通过实验为成骨细胞和转化生长因子β3联合应用解决颌面部骨组织缺损，加速其成骨过程提供了崭新的视角和一定的理论基础。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

转化生长因子β3对成骨细胞增殖和成骨能力的影响

Effect of transforming growth factor-beta3 on the proliferation and osteogenic capability of osteoblasts

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