RGD多肽修饰多孔钽可激活MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.3117

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (16): 2535-2540.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.3117

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RGD多肽修饰多孔钽可激活MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路

张辉1，王少华2，王茜3，王辉4，甘洪全5，崔逸爽3，李琪佳3，王志强5

唐山市第二医院，1关节一科，4手一科，河北省唐山市 063000；2天津市急救中心，天津市 300000；3华北理工大学医学实验研究中心，河北省唐山市 063210；5华北理工大学附属医院骨科，河北省唐山市 063000

收稿日期:2020-07-30 修回日期:2020-07-31 接受日期:2020-08-25 出版日期:2021-06-08 发布日期:2021-01-07
通讯作者: 王志强，教授，博士生导师，华北理工大学附属医院骨科，河北省唐山市 063000 王茜，副教授，硕士生导师，华北理工大学医学实验研究中心，河北省唐山市 063210
作者简介:张辉，男，1981年生，河北省唐山市人，汉族，博士，副主任医师，主要从事关节外科及骨组织工程研究。
基金资助:
国家科技部科技支撑课题资助项目(2012BAE06B03)，项目负责人：王志强；河北省科技支撑资助项目(16277776D)，项目负责人：李琪佳；河北省医学科学研究重点课题计划资助项目(20160225)，项目负责人：王志强；华北理工大学博士科研启动基金资助项目(28606299)，项目负责人：王茜；河北省卫计委资助课题(20180733)，项目负责人：王茜

Porous tantalum coated with RGD polypeptide can activate the integrin/focal adhesion kinase signaling pathway of MG63 cells

Zhang Hui1, Wang Shaohua2, Wang Qian3, Wang Hui4, Gan Hongquan5, Cui Yishuang3, Li Qijia3, Wang Zhiqiang5

1First Department of Joint Surgery, Second Hospital of Tangshan, Hebei Province, China; 2Tianjin Emergency Center, China; 3Medical Research Center, North China University of Science and Technology, Hebei Province, China; 4First Department of Hand Surgery, Second Hospital of Tangshan, Hebei Province, China; 5Department of Orthopedics, Affiliated Hospital of North China of Science and Technology, Hebei Province, China

Received:2020-07-30 Revised:2020-07-31 Accepted:2020-08-25 Online:2021-06-08 Published:2021-01-07
Contact: Wang Zhiqiang, Professor, Doctoral supervisor, Department of Orthopedics, Affiliated Hospital of North China of Science and Technology, Tangshan 063000, Hebei Province, China Wang Qian, Associate professor, Master’s supervisor, Medical Research Center, North China University of Science and Technology, Tangshan 063210, Hebei Province, China
About author:Zhang Hui, MD, Associate chief physician, First Department of Joint Surgery, Second Hospital of Tangshan, Tangshan 063000, Hebei Province, China
Supported by:
the Project supported by the Ministry of Science and Technology of China, No. 2012BAE06B03 (to WZQ); Hebei Province Science and Technology Support Project, No. 16277776D (to LQJ); Hebei Provincial Medical Research Project, No. 20160225 (to WZQ); the Project Supported by the Foundation of Doctoral Research of North China University of Science and Technology, No. 28606299 (to WQ); the Project Supported by Hebei Provincial Health and Family Planning Commission, No. 20180733 (to WQ)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
RGD多肽：是由甘氨酸、精氨酸及天冬氨酸组成的短肽序列，是目前应用最广泛最有效的促黏附多肽，对细胞生长、代谢起重要调节作用。在生物材料表面复合RGD多肽可以诱导成骨细胞整合素基因的表达，促进成骨细胞黏附在生物材料的表面并分化成熟，促进新骨形成。
整合素/黏着斑激酶信号通路：整合素可介导细胞与细胞外基质黏附，是一种重要的细胞表面受体，可通过细胞中黏着斑激酶等非受体酪氨酸激酶传递外信号到细胞内，并进一步激活细胞内信号通路(如Ras/MAPK、PI3K/Akt等)，介导细胞迁移、分化和基因表达。

背景：在材料表面复合RGD多肽可诱导成骨细胞整合素基因的表达，促进成骨细胞黏附在生物材料的表面并分化成熟，促进新骨形成。
目的：分析RGD多肽修饰国产多孔钽后对MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路的影响。
方法：制备RGD多肽修饰的多孔钽材料。将MG63细胞分别接种于多孔钽、RGD多肽修饰的多孔钽材料表面，以单纯培养的MG63细胞为空白组，培养1，3，5，7 d时，采用CCK-8法检测细胞增殖；培养1，3，5 d时，倒置显微镜下观察细胞生长状态；培养3，5 d时，扫描电镜观察细胞黏附；培养5 d时，采用Western-blot与RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、整合素β1与黏着斑激酶表达。
结果与结论：①RGD修饰组培养3，5，7 d的细胞增殖快于多孔钽组、空白组(P < 0.05)，多孔钽组各时间点细胞增殖与空白组比较差异无显著性意义(P > 0.05)；②倒置显微镜显示，培养1 d时，多孔钽组、RGD修饰组细胞贴附在材料边缘，细胞数量随着培养时间的延长逐渐增加，其中RGD修饰组细胞数量及密集程度优于多孔钽组；③扫描电镜显示，培养3 d时，多孔钽组、RGD修饰组材料表面均可见细胞黏附生长，细胞在材料孔壁及孔隙内黏附生长，伸出伪足嵌入孔洞内；5 d时，细胞分泌大量细胞外基质，细胞通过基质相互连接并逐渐覆盖材料表面，其中RGD修饰组细胞生长状态、基质分泌及细胞覆盖面积优于多孔钽组；④Western-blot检测显示，RGD修饰组Ⅰ型胶原、整合素β1蛋白表达高于多孔钽组、空白组(P < 0.05)，多孔钽组Ⅰ型胶原、整合素β1、黏着斑激酶蛋白表达高于空白组(P < 0.05)；⑤RT-PCR检测显示，RGD修饰组Ⅰ型胶原、整合素β1与黏着斑激酶 mRNA表达高于多孔钽组、空白组(P < 0.05)，并且多孔钽组高于空白组(P < 0.05)；⑥结果表明，RGD多肽修饰多孔钽后可上调细胞膜上Ⅰ型胶原、整合素β1表达激活整合素/黏着斑激酶信号通路，促进细胞黏附、生长。

https://orcid.org/0000-0001-8647-4300 (张辉)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 骨, 材料, 蛋白质, 信号通路, RGD多肽, 多孔钽, MG63细胞, Ⅰ型胶原, 整合素, 黏着斑激酶

Abstract: BACKGROUND: The compounding of RGD polypeptide on the surface of the material can induce the expression of osteoblast integrin gene, promote the adhesion of osteoblasts to the surface of biomaterials and differentiate into mature cells, and promote the formation of new bone.
OBJECTIVE: To analyze the effect of domestic porous tantalum modified by RGD polypeptide on integrin/focal adhesion kinase signaling pathway in MG63 cells.
METHODS: Porous tantalum material modified by RGD polypeptide was prepared. MG63 cells were inoculated on the surface of porous tantalum and porous tantalum materials modified with RGD polypeptide. MG63 cells cultured alone were used as the blank group. When cultured for 1, 3, 5, and 7 days, the cell proliferation was detected by the CCK-8 method. At 1, 3, and 5 days, the cell growth status was observed under an inverted microscope. At 3, 5 days of culture, cell adhesion was observed with scanning electron microscope. At 5 days of culture, RT-PCR and western blot assay were used to detect type I collagen and integrin β1 and focal adhesion kinase expression.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The cell proliferation of the RGD modified group cultured at 3, 5, and 7 days was faster than that of the porous tantalum group and the blank group (P < 0.05). There was no significant difference in cell proliferation between the porous tantalum group and the blank group at each time point (P > 0.05). (2) Observation by an inverted phase contrast microscope showed that the cells of the porous tantalum group and the RGD modified group were attached to the edge of the material when cultured for 1 day, and the number of cells gradually increased with the extension of the culture time. The number and density of cells in the RGD modified group were better than that of the porous tantalum group. (3) Observation by scanning electron microscope showed that cells adhered to the surface of the porous tantalum group and RGD modified group after 3 days of culture. The cells adhered to the material pore walls and pores, and protruded pseudopods into the pores. When cultured for 5 days, the cells secreted a large amount of extracellular matrix, and the cells were connected to each other through the matrix and gradually covered the surface of the material. The cell growth state, matrix secretion and cell coverage area of the RGD modified group were better than those of the porous tantalum group. (4) Western blot detection results showed that the expressions of type I collagen and integrin β1 protein in the RGD modified group were higher than those in the porous tantalum group and the blank group (P < 0.05). The expression levels of type I collagen, integrin β1, and focal adhesion kinase protein in the porous tantalum group were higher than those in the blank group (P < 0.05). (5) RT-PCR detection showed that the expressions of type I collagen, integrin β1, and focal adhesion kinase mRNA in the RGD modified group were higher than those of the porous tantalum group and the blank group (P < 0.05), and the expression of the porous tantalum group was higher than that of the blank group (P < 0.05). (6) The results showed that porous tantalum modified with RGD polypeptide can up-regulate the expression of type I collagen and integrin β1 on the cell membrane, activate the integrin/focal adhesion kinase signaling pathway, and promote cell adhesion and growth.

Key words: bone, material, protein, signal pathway, RGD polypeptide, porous tantalum, MG63 cell, type I collagen, integrin, focal adhesion kinase

中图分类号:

张辉, 王少华, 王茜, 王辉, 甘洪全, 崔逸爽, 李琪佳, 王志强. RGD多肽修饰多孔钽可激活MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(16): 2535-2540.

Zhang Hui, Wang Shaohua, Wang Qian, Wang Hui, Gan Hongquan, Cui Yishuang, Li Qijia, Wang Zhiqiang. Porous tantalum coated with RGD polypeptide can activate the integrin/focal adhesion kinase signaling pathway of MG63 cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(16): 2535-2540.

图/表（结果） 10

2.1 材料大体观察结果多孔钽支架材料为圆盘状，深灰色，直径约为15 mm，厚度约为2 mm，材料表面粗糙不平，可见海绵状微孔结构(图1)；经RGD修饰后材料外观无明显变化。

2.2 修饰前后多孔钽扫描电镜观察结果扫描电镜观察可见，多孔钽材料表面及断面均匀分布着孔径为400-600 μm的孔隙结构，孔隙间相互连通，孔隙内存在50-200 μm的微孔结构(图2A)；RGD多肽修饰后，材料表面存在薄厚均匀分布的斑点状涂层(图2B)。

2.3 细胞形态观察 MG63细胞连续培养3 d，倒置显微镜下观察细胞生长状态，培养第1天，细胞贴壁，形状多呈长梭形(图3A)；第2天，细胞增殖加快，数目增多，形态趋于一致，多呈长梭形及多角星状(图3B)；第3天，细胞逐渐聚集、融合，并铺满瓶底(图3C)。

2.4 CCK-8法检测材料对细胞增殖的影响各组MG63细胞的A值均随培养时间延长而升高，第1-3天细胞生长较缓慢；第3-5天，细胞生长加快，数量增多，第5天细胞数目最多；第5-7天时细胞生长稳定，见图4。RGD修饰组培养3，5，7 d的细胞增殖快于多孔钽组、空白组(P < 0.05)，多孔钽组各时间点细胞增殖与空白组比较差异无显著性意义(P ﹥0.05)，见表2。

2.5 倒置相差显微镜下细胞材料复合培养观察细胞与材料复合培养1 d时，两组细胞均贴附在材料边缘；培养到第3天时，材料边缘细胞数量增多，RGD修饰组细胞数量高于多孔钽组；培养到第5天时，细胞增殖速度加快，融合成片，RGD修饰组细胞数量及密集程度均优于多孔钽组，见图5。

2.6 扫描电镜下细胞材料复合物形貌观察复合培养第3天时，两组材料表面均可见细胞黏附生长，细胞在材料孔壁及孔隙内黏附生长，伸出伪足嵌入孔洞内；第5天时，细胞分泌大量细胞外基质，细胞通过基质相互连接并逐渐覆盖材料表面，RGD修饰组细胞生长状态优于多孔钽组，基质分泌及细胞覆盖面积明显多于多孔钽，见图6。

2.7 Western-blot法检测结果各组细胞中的Ⅰ型胶原、整合素β1和黏着斑激酶蛋白表达，见图7。所得条带经Image-Pro Plus图像分析系统进行半定量分析，结果显示，RGD修饰组MG63细胞中Ⅰ型胶原、整合素β1蛋白表达高于其他两组 (P < 0.05)，多孔钽组Ⅰ型胶原、整合素β1与和黏着斑激酶蛋白表达高于空白组(P < 0.05)，见表3。

2.8 RT-PCR法检测结果将空白组mRNA表达设定为1，对各组目的基因相对表达量进行分析，结果显示，RGD修饰组Ⅰ型胶原、整合素β1和黏着斑激酶mRNA表达高于其他两组(P < 0.05)，多孔钽组Ⅰ型胶原、整合素β1和黏着斑激酶mRNA表达高于空白组(P < 0.05)，见表4。

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引言

材料方法

1.1 设计体外对比观察实验。
1.2 时间及地点实验于2017年1月至2018年12月在华北理工大学医学实验研究中心完成。
1.3 材料人成骨MG63细胞(中国协和细胞库)；国产多孔钽(直径15 mm，厚度2 mm，孔隙率75%-85%，孔径400-600 μm，重庆润泽医疗器械有限公司)；RGD多肽[肽序：C(RGDfK)-Acp-Acp-Acp-巯基丙酸，相对分子质量1 030，纯度98.78%，上海淘普生化有限公司]；α-MEM培养、10%胎牛血清(Biolegend，美国)；0.25%胰蛋白酶(北京庄盟国际生物基因科技有限公司)；超净化工作台(上海一恒科学仪器有限公司)；二氧化碳细胞培养箱(PHILIPS，荷兰)；TS100倒置相差显微镜(Nikon，日本)；S-4800扫描电镜(Thermo，美国)；CCK-8试剂盒(苏州赛业生物科技有限公司)；兔抗人黏着斑激酶抗体、兔抗人ITGB1抗体、兔抗人Ⅰ型胶原抗体(Abcam，美国)；山羊抗兔抗体(北京中杉金桥有限公司)； SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液、超敏ECL化学发光试剂盒(北京庄盟国际生物基因科技有限公司)；PCR引物序列设计与合成(Invitrogen，美国)；M-MLV反转录试剂盒(Abcam，美国)。
1.4 实验方法
1.4.1 材料处理纯水、无水乙醇、丙酮依次超声清洗多孔钽15 min，去离子水漂洗，高温高压后备用。将材料浸泡在浓度为100 µmol/L的RGD多肽PBS中[18-20]，室温下振动反应24 h，PBS冲洗后自然干燥，紫外线照射消毒后备用。扫描电镜观察材料微观结构。
1.4.2 细胞培养在37 ℃、体积分数5%CO2的细胞培养箱中培养MG63细胞，倒置显微镜下观察细胞生长及增殖状态，隔日换液，细胞贴壁80%-90%时传代。
1.4.3 实验分组将消毒灭菌后的多孔钽、RGD修饰多孔钽材料置于无菌6孔板各孔内，滴加完全培养基2 mL浸湿材料，37 ℃条件下浸湿24 h弃去废液。选取生长情况较好的MG63细胞，制备细胞浓度1×109 L-1的单细胞悬液，分别滴加300 µL接种至各孔内，每孔滴加2 mL培养基，细胞培养箱培养2 h，材料翻面，按照上面方法接种MG63细胞继续培养[21]。以单纯培养的MG63细胞为空白组。
1.4.4 CCK-8法检测细胞增殖培养1，3，5，7 d时，取培养基进行CCK-8检测，酶标仪检测各组样本吸光度(A值)，根据时间和吸光度平均值制作细胞增殖曲线。
1.4.5 扫描电镜观察细胞形态与黏附培养3，5 d时，取出细胞/材料复合物，PBS清洗后，采用25 g/L的戊二醛固定4 h，梯度乙醇脱水，干燥，喷金，扫描电镜观察细胞在材料上的形态特征及黏附生长状态。
1.4.6 Western-blot检测培养5 d时，采用Western-blot法检测Ⅰ型胶原、整合素β1和黏着斑激酶蛋白表达。按照总蛋白提取试剂盒说明书分别提取各组MG63细胞总蛋白，按照说明书对各组细胞总蛋白浓度进行测定，根据SDS-PAGE凝胶配制试剂盒配制凝胶进行电泳，转膜，封闭，杂交，显色后置于荧光成像仪中，成像采集照片。Image J 图像分析软件分析条带，目的蛋白与内参GAPDH光密度值对比。

1.4.7 RT-PCR检测培养5 d时，采用RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、整合素β1和黏着斑激酶 mRNA表达。按照Trizol RNA提取方法分别提取各组MG63细胞总RNA，合成cDNA；NCBI Gene数据库查询人Ⅰ型胶原、整合素β1、黏着斑激酶基因序列，内参基因选定GAPDH，Primer 5.0软件设计引物，由Invitrogen公司合成。各基因PCR引物序列见表1。

按照试剂盒说明进行PCR扩增，反应条件如下：95 ℃下预变性2 min，变性15 s，56 ℃退火25 s，72 ℃延伸20 s，40个循环，72 ℃延伸5 min。采用Rotor-Gene 6.0.14软件，通过相对定量方法Comparative Delta-delta Ct分析结果。Ⅰ型胶原、整合素β1和黏着斑激酶的mRNA表达量均以GAPDH的mRNA表达量为标准。
1.5 主要观察指标修饰前后多孔钽材料表面的细胞增殖、黏附及细胞内Ⅰ型胶原、整合素β1和黏着斑激酶表达。
1.6 统计学分析采用SPSS 17.0统计软件分析数据，计量数据应用x±s表示，应用单因素方差分析实验数据，P < 0.05表示差异有显著性意义。

讨论

目前骨缺损尤其是大段骨缺损的治疗多需要适宜的骨移植材料，临床上自体或同种异体骨移植仍是“金标准”，但二次手术、供骨量有限、术后感染都限制了其应用[22-23]。不锈钢、钛、镍等金属材料弹性模量过高、摩擦系数过低，易造成植入物术后松动甚至滑脱[24-25]。具有高孔隙及良好的生物相容性、力学性能和骨传导性的材料最为理想[26]。多孔钽金属不但摩擦系数大、孔隙率高且弹性模量与人松质骨相似，得到人们越来越多的关注[27]。重庆润泽医疗器械有限公司提供的多孔钽材料孔隙率可达65%-85%，大体观察可见蜂窝状孔隙结构，扫描电镜观察可见材料表面及内部有直径为20-50 μm微粒，微粒间形成微孔结构，交联成网。MG63细胞与多孔钽复合培养后，细胞在材料表面及内部黏附生长，并随时间延长分泌大量细胞外基质，逐步覆盖材料表面。CCK-8检测显示，RGD修饰后多孔钽上的细胞生长状态与空白组比较无明显差异，证实多孔钽生物相容性良好，可为细胞生长和营养物质的传递提供足够的空间和环境，可作为骨缺损支架修饰材料使用，与前期工作结果一致[28]。
虽然多孔钽具有良好的性能，但作为惰性生物材料其对骨细胞生长、骨组织结合等方面作用较单一。采用活性因子对材料进行修饰可提高材料生物活性，促进骨长入，加速骨结合[29-31]。RGD多肽是短肽序列，可作为特异性配体与细胞表面某些整合素结合，参与细胞与材料的黏附[10]。RGD多肽可被细胞表面整合素识别并与之结合，促进与细胞外基质的黏附，调节细胞微环境，影响细胞生长 [32-33]。实验选用课题组前期工作100 µmol/L的RGD多肽修饰材料对多孔钽进行活化处理[34]，之后与MG63细胞复合培养，CCK-8检测发现RGD修饰组细胞生长增殖明显高于与其他两组(P < 0.05)，而多孔钽组与空白组比较无明显差异，说明多孔钽经过RGD多肽修饰后材料生物活性增加，对细胞的生长增殖有促进作用。
同时RGD多肽广泛存在于骨桥蛋白、纤连蛋白、玻连蛋白、胶原蛋白等细胞外基质蛋白中[10]，所以实验选取特定的细胞外基质蛋白Ⅰ型胶原、整合素β1及介导细胞信号传递的重要因子黏着斑激酶进行检测。Ⅰ型胶原是骨组织中细胞外基质的重要组成成分，参与形成、维持细胞骨架结构，同时参与运输储存生长因子，在组织发育过程中发挥重要作用[35]。Ⅰ型胶原可与特异性受体整合素结合，传递和连接细胞间信号，促进成骨细胞成熟[36]。整合素是分布在细胞表面和细胞外基质内的细胞黏附因子，可通过细胞外基质蛋白激活整合素，完成由外到内的信号传导过程[37-39]。黏着斑激酶在细胞信号传递过程中也发挥重要作用，黏着斑激酶定位在整合素的黏附位点，能调节整合素介导的细胞信号通路，被细胞外基质蛋白-整合素刺激后可磷酸化，进一步影响多条信号通路完成细胞内外信号的进出[17]。Ⅰ型胶原、整合素β1及黏着斑激酶因子的表达可反映细胞黏附、生长、分化状态，为此实验检测以上因子蛋白及基因的表达，探讨RGD多肽修饰多孔钽后对MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路的影响。
此次实验结果显示，RGD修饰组MG63细胞中Ⅰ型胶原、整合素β1蛋白表达高于其他两组(P < 0.05)，提示多孔钽经RGD多肽修饰后其表面生物活性增加，可促进黏附蛋白表达。同时扫描电镜发现，RGD修饰组细胞生长状态优于多孔钽组，基质分泌及材料覆盖面积明显高于多孔钽组，也证实了RGD多肽可促进细胞在多孔钽上黏附生长。Ⅰ型胶原与整合素β1不但与细胞黏附生长有关，也可介导细胞信号传导激活黏着斑激酶，此次实验中RGD修饰组黏着斑激酶的蛋白表达虽有增多趋势，但与其他两组比较差异不明显，可能蛋白检测不够敏感，为此进一步检测了各因子的基因表达。与蛋白表达相比，基因表达更敏感、准确。实验采用荧光定量PCR法检测3组MG63细胞中的Ⅰ型胶原、整合素β1和黏着斑激酶的mRNA表达，结果显示RGD修饰组以上因子的mRNA表达与其他两组比较均显著上调(P < 0.05)。分析在实验过程中，RGD多肽促进细胞黏附，直接上调Ⅰ型胶原、整合素β1的表达，而黏着斑激酶通过整合素级联反应被激活之后继续传导细胞信号，由于黏着斑激酶是受整合素β1影响，可能反应较Ⅰ型胶原、整合素β1弱，因此在蛋白表达中检测差异不明显，但基因检测较蛋白敏感，在基因检测中可见黏着斑激酶基因表达明显升高。提示RGD多肽修饰后可直接促进Ⅰ型胶原、整合素β1表达，进而级联反应激活黏着斑激酶信号通路，促进细胞黏附、生长、分化、增殖等过程。有研究发现采用RGD多肽修饰聚乳酸聚乙醇酸共聚物仿生支架材料后复合培养骨髓间充质干细胞，细胞骨架黏附蛋白的表达明显升高，与此次实验结果一致[40]。但此次实验仅针对Ⅰ型胶原、整合素β1及黏着斑激酶蛋白及mRNA进行了检测，对细胞内外信号转导方式及是否通过影响PI3K/Akt、Ras/MAPK等信号通路未进行检测，在后续工作中将继续深入研究。
综上所述，MG63细胞在多孔钽上生长增殖良好，证明国产多孔钽具有良好的生物相容性；RGD多肽修饰多孔钽后可上调细胞内Ⅰ型胶原、整合素β1的表达，进而激活黏着斑激酶细胞信号通路，促进细胞黏附生长。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

RGD多肽修饰多孔钽可激活MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路

Porous tantalum coated with RGD polypeptide can activate the integrin/focal adhesion kinase signaling pathway of MG63 cells

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