磁性靶向纳米粒体外多模态成像及对肝星状细胞的靶向作用

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2206

中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (4): 566-571.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2206

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磁性靶向纳米粒体外多模态成像及对肝星状细胞的靶向作用

李璇¹，鲁敏²，李明星¹，敖梦^3，4，唐琳梅¹，曾祯¹，胡经纬¹，黄志强¹，宣吉晴¹

¹西南医科大学附属第一医院超声科；²重庆医科大学附属第三医院放射科；³重庆医科大学超声影像学研究所；⁴重庆医科大学附属第二医院超声科

收稿日期:2019-05-30 修回日期:2019-06-13 接受日期:2019-07-12 出版日期:2020-02-08 发布日期:2020-01-07
通讯作者: 宣吉晴，博士，主治医师，西南医科大学附属第一医院超声医学科，四川省泸州市 646000
作者简介:李璇，女，1994年生，四川省南充市人，西南医科大学附属医院在读硕士，执业医师，主要从事分子影像学研究。
基金资助:
国家自然科学基金青年基金(81501482)；重庆市科委基础学科与前沿技术研究项目(cstc2015jcyjA10045)；四川省医学科研青年创新课题(Q17081)；四川省泸州市应用基础研究项目(2018-JYJ-44)

In vitro multi-modal imaging of magnetic targeted nanoparticles and their targeting effect on hepatic stellate cells

Li Xuan¹, Lu Min², Li Mingxing¹, Ao Meng^{3, 4}, Tang Linmei¹, Zeng Zhen¹, Hu Jingwei¹, Huang Zhiqiang¹, Xuan Jiqing¹

¹Department of Ultrasound, The Affiliated Hospital of Southwest Medical University; ²Department of Radiology, The Third Affiliated Hospital of Chongqing Medical University; ³Institute of Ultrasound Imaging, Chongqing Medical University; ⁴Department of Ultrasound, The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University

Received:2019-05-30 Revised:2019-06-13 Accepted:2019-07-12 Online:2020-02-08 Published:2020-01-07
Contact: Xuan Jiqing, MD, Attending physician, Department of Ultrasound, The Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
About author:Li Xuan, Master candidate, Physician, Department of Ultrasound, The Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81501482; Basic Disciplines and Frontier Technology Research Project of Chongqing Science and Technology Commission, No. cstc2015jcyjA10045; Sichuan Medical Research Youth Innovation Project, No. Q17081; Sichuan Luzhou Applied Basic Research Project, No. 2018-JYJ-44

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
多模态成像：随着分子影像学的飞速发展，多模态成像改变了传统单一的成像方式，联合超声、CT、MRI、光声及SPECT等各自独特的成像优势，只使用一种对比剂即可获得多种模态增强显影，同时得到疾病的解剖学、分子学及功能学信息。这对疾病的诊断、受检者的健康及减少医疗资源浪费都有重要意义。
寻靶：通过对微泡外壳进行改建，将特异性配体结合或连接到微泡表面，这些微泡可通过血液循环聚到特定的病变组织上，并长时间停留于靶组织或靶器官，从而达到使病变组织在影像中得到特异性的标记增强或局部靶向治疗作用的目的。

背景：近来年，分子成像结合医学影像技术和靶向分子探针逐渐成为研究的热点，其相互结合能够在分子水平对靶组织进行观察，从而实现对疾病的发生、发展实时无创成像。

目的：制备载磁性颗粒靶向纳米粒探针，探讨其体外超声/CT/MRI成像效果，观察其体外对大鼠肝星状细胞的靶向能力。

方法：以高分子材料聚乳酸/羟基乙酸作为外壳、含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列环八肽作为配体，通过双步乳化法制备包载磁性颗粒和全氟辛溴烷的载磁性颗粒靶向纳米粒cRGD-PLGA-Fe₃O₄-PFOB，检测其理化性质。将载磁性颗粒靶向纳米粒以双蒸水稀释为不同质量浓度的混悬液，体外观察其超声、CT、MRI显影效果。通过碳二亚胺法连接精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列肽与载磁性颗粒靶向纳米粒，验证载磁性颗粒靶向纳米粒的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列连接情况和体外靶向能力。细胞毒性实验测定不同质量浓度载磁性颗粒靶向纳米粒对大鼠肝细胞BRL-3A的毒性作用。

结果与结论：①载磁性颗粒靶向纳米粒分散度好，大小较均匀，单个纳米粒呈球形，数个黑色的铁颗粒分布于壳膜上，平均粒径为(221.5±60.3) nm，Fe₃O₄包封率为38%；②随着载磁性颗粒靶向纳米粒质量浓度的降低，样品的超声回声强度、CT值均逐渐降低；随着纳米粒中Fe₃O₄颗粒质量浓度的增加，MRI T2加权信号强度逐渐降低；③流式细胞仪检测显示，含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列环八肽与载磁性颗粒靶向纳米粒的连接率为94.13%；体外靶向实验显示，大部分载磁性颗粒靶向纳米粒聚集于大鼠肝星状细胞细胞HSC-T6周围；④不同质量浓度的载磁性颗粒靶向纳米粒对大鼠肝细胞BRL-3A活力无影响；⑤结果表明，载磁性颗粒靶向纳米粒探针不仅能作为多模态显像剂用于超声、CT、MRI，且在体外实验中对大鼠肝星状细胞有较强的靶向能力，对肝纤维化的早期诊断具有重大应用潜力。

ORCID: 0000-0001-8470-8548(李璇)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 纳米粒子, 靶向, 对比剂, 多模态成像, 肝纤维化, 肝星状细胞, 体外研究, 分子探针

Abstract:

BACKGROUND: In recent years, molecular imaging combined with medical imaging technology and targeted molecular probes have gradually become a research focus. The targeted tissues at the molecular level can be observed using molecular imaging, medical imaging technology, and targeted molecular probes in combination to realize non-invasive imaging of the occurrence and development of the diseases.

OBJECTIVE: To develop the magnetic targeted nanoparticle probes, observe the ultrasound/CT/MRI imaging properties in vitro, and investigate their targeting ability to rat hepatic stellate cells in vitro.

METHODS: Taking poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) polymer as the shell, cyclic arginine-glycine-aspartic acid (cRGD) octapeptide as the ligand, targeted magnetic nanoparticles with superparamagnetic Fe₃O₄ embedded in the shell and perfluorooctyl bromide(PFOB) loaded in the core were prepared by double emulsion evaporation method. The physical and chemical properties of the nanoparticles were detected. The ultrasound/CT/MRI multi-modal imaging properties of the nanoparticles at different concentrations diluted with double-distilled water were tested in vitro. Cyclic RGD peptide immobilization on PLGA-Fe₃O₄-PFOB NPs was completed through the amide condensation reaction. The conjugation efficiency of the cRGD on PLGA-Fe₃O₄-PFOB NPs and targeting ability of targeted magnetic nanoparticles in vitro were verified. Cytotoxicity experiments were used to measure the toxic effects of nanoparticles at different concentrations on BRL-3A cells in each group.

RESULTS AND CONCLUSION: The targeted magnetic nanoparticles with the average size of (221.5±60.3) nm were uniform in dispersion and size. The prepared individual nanoparticle was spherical with the superparamagnetic Fe₃O₄ scattered on the shell. The encapsulation rate of Fe₃O₄ was 38%. In vitro ultrasound imaging and CT imaging signal decreased gradually as the concentrations of the nanoparticle suspension decreased. The T2-weighted signal of MRI decreased gradually with the increase of the concentrations of magnetic particle Fe₃O₄. Flow cytometry results showed that 94.13% of the cRGD was bound to the nanoparticles. In vitro cell targeting experiments showed that compared to PLGA-Fe₃O₄-PFOB NPs, cRGD-PLGA-Fe₃O₄-PFOB NPs exhibited greater cell targeting and affinity efficiency to hepatic stellate cells. Cytotoxicity experiments results showed the nanoparticles had no significant influence on cell viability of the BRL-3A cells. These results suggest that targeted magnetic nanoprobe cannot only be used as a multi-modal imaging contrast agent for ultrasound/CT/MRI, but also exhibits a strong specific affinity to rat hepatic stellate cells in vitro. It has great potential for the early diagnosis of liver fibrosis.

Key words: nanoparticles, target, contrast agent, multi-modal imaging, liver fibrosis, hepatic stellate cells, in vitro, molecular probes

中图分类号:

李璇, 鲁敏, 李明星, 敖梦, 唐琳梅, 曾祯, 胡经纬, 黄志强, 宣吉晴. 磁性靶向纳米粒体外多模态成像及对肝星状细胞的靶向作用[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(4): 566-571.

Li Xuan, Lu Min, Li Mingxing, Ao Meng, Tang Linmei, Zeng Zhen, Hu Jingwei, Huang Zhiqiang, Xuan Jiqing. In vitro multi-modal imaging of magnetic targeted nanoparticles and their targeting effect on hepatic stellate cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2020, 24(4): 566-571.

图/表（结果） 7

2.1 PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒的表征结果实验所制备的PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒呈棕黄色乳液。光学显微镜显示纳米粒分散度好，大小较均匀，见图1A。透射电镜显示单个纳米粒呈球形，数个黑色的铁颗粒分布于壳膜上，见图1B。扫描电镜显示纳米粒大小较均一，见图1C。马尔文粒径分析仪显示纳米粒平均粒径为(221.5±60.3) nm，见图1D，电位为(-9.3±4.3) mV。原子吸收光谱法检测Fe₃O₄包封率为38%。

2.2 PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒体外多模态成像

2.2.1 体外超声成像纳米粒组显示为点状强回声，双蒸水表现为无回声，且随纳米粒质量浓度的降低，回声强度呈下降趋势，见图2。50，25，12.5，6.25 g/L纳米粒及双蒸水感兴趣区域的回声强度值分别为(82.82±3.95)，(66.07± 4.15)，(32.17±3.71)，(11.57±1.56)，(2.43±0.75) dB，组间比较差异均有显著性意义(P < 0.05)。

2.2.2 体外CT成像应用GE ADW4.4软件测量50，25，12.5，6.25 g/L的纳米粒及双蒸水感兴趣区域的CT值分别为(130.55±5.37)，(43.93±3.50)，(24.47±1.65)，(11.24±0.96)，(2.492±0.87) HU。随纳米粒质量浓度的降低，显像效果递减，CT值呈下降趋势，见图3，且不同质量浓度纳米粒CT值比较差异均有显著性意义(P < 0.05)。

2.2.3 体外MRI成像随着纳米粒中铁颗粒质量浓度的增加，T2加权信号强度逐渐降低，表明实验所制备的纳米粒具有负性强化效果，见图4。含铁量0，75，150，300，600，1 200 mg/L的纳米粒混悬液MR T2平均信号强度值为 2 644.20±105.56，2 136.32±34.10，1 625.317±38.47，591.73±10.94，388.95±12.56，229.45±7.90，组间比较差异均显著性意义(P < 0.05)。

2.3 靶向纳米粒cRGD连接情况和体外寻靶能力

2.3.1 靶向纳米粒cRGD连接情况流式细胞仪显示不带有FITC标记的PLGA-Fe₃O₄-PFOB非靶向纳米粒组的荧光发生率为2.47%，见图5A，远远低于带FITC标记的cRGD- PLGA-Fe₃O₄-PFOB靶向纳组94.13%，见图5B，表明环八肽cRGD肽与纳米粒的连接率达94.13%。激光共聚焦显示靶向纳米粒经尼罗红标记呈红色荧光，见图5C，环八肽cRGD经FITC标记呈绿色荧光，见图5D，红色荧光与绿色荧光在融合通道下呈黄色荧光，见图5E，表明纳米粒与环八肽cRGD已成功连接。

2.3.2 靶向纳米粒体外寻靶能力激光共聚焦显示尼罗红染色的纳米粒呈红色荧光，细胞核染料DAPY标记的细胞核呈蓝色荧光，肝星状细胞HSC-T6+靶向纳米粒组细胞周围有大量纳米粒围绕，其红色荧光远多于肝星状细胞HSC-T6+非靶向纳米粒组和肝细胞BRL-3A+靶向纳米组，见图6。

2.4 细胞毒性实验结果 20，10，5，2.5，1.25，0.625，0.312 5 g/L纳米粒与大鼠BRL-3A细胞作用后，细胞活力分别为(88.69±2.71)%，(88.68±4.17)%，(100.01±7.65)%，(89.93±5.16)%，(98.23±6.77)%，(92.29±4.95)%，(96.18±8.23)%，组间比较差异无显著性意义(F=1.87，P > 0.05)。

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引言

材料方法

1.1 设计观察性实验。

1.2 时间及地点实验于2018年3月至2019年2月在重庆医科大学超声影像学研究所完成。

1.3 材料 PLGA-COOH，聚合比50∶50，分子质量 12 000 kD，购自济南岱罡，见表1；FITC标记环八肽cRGD (序列为C*GRGDSPC*，中国强耀生物有限公司)；油酸修饰超顺磁氧化铁纳米粒颗粒(主要成分Fe₃O₄，Ocean Nano Tech)；PFOB(Perfluorooctyl Bromide，日本TCI公司)；二氯甲烷、异丙醇(重庆川东化工集团)；聚乙烯醇(Sigma公司)；2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物(MES)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)(Sigma公司)；CCK-8细胞增殖检测试剂盒(上海东仁化学科技有限公司)；大鼠肝细胞株BRL-3A(重庆金喜鹊科技发展有限公司)；大鼠肝星状细胞细胞株HSC-T6(武汉普诺赛生命科技有限公司细胞库)。

主要仪器：声振仪(Sonics＆Materials，美国)；光学显微镜(IX71，Olympus，日本)；马尔文粒径分析仪(Zeta SIZER 3000HS，Malvern，英国)；透射电镜(H-7600，Hitachi，日本)；扫描电镜(JEM-7800F，JEOL，日本)；激光共聚焦显微镜(AIR，Nikon，日本)；流式细胞仪(FACS-calibur，美国)；CT扫描仪(Light speet vct，GE，美国)；MR扫描仪(Discovery 750 3.0T，GE，美国)；光声成像系统(Vevo LAZR，VisualSonics Inc，加拿大)；DFY型超声图像定量分析诊断仪(重庆医科大学超声影像学研究所)。

1.4 实验方法

1.4.1 制备cRGD肽修饰的载磁性颗粒和PFOB靶向纳米粒制备过程全程避光。精密称取50 mg PLGA-COOH，将其溶于2 mL二氯甲烷中，振荡数秒使其充分溶解。另吸取60 µL Fe₃O₄加入上述溶液，待其充分混匀后，再加入 30 µL PFOB震荡数秒。用声振仪在冰浴条件下充分乳化上述溶液(功率100 W，总时间3 min，占空比5 s∶5 s)。再加入5%聚乙烯醇溶液5 mL，以相同条件再次声振。再加入2%异丙醇溶液10 mL，加入小磁珠，冰浴条件下搅拌过夜，经过多次离心(13 610×g离心5 min)后洗涤，得到PLGA-Fe₃O₄-PFOB非靶向纳米粒。在上述步骤中将适量尼罗红染料溶于二氯甲烷中可得到红色荧光标记的PLGA-Fe₃O₄-PFOB非靶向纳米粒。

以适量MES缓冲液(0.1 mol/L，pH值5.5)重悬PLGA- Fe₃O₄-PFOB非靶向纳米粒，待其充分活化。精密称取适量EDC和NHS(摩尔比PLGA∶EDC=1∶10，EDC∶NHS质量比=1∶3)，向上述溶液中先加入EDC，冰浴振荡半小时后加入NHS，再冰浴振荡半小时后多次离心、洗涤。取适量MES缓冲液(0.1 mol/L，pH值8.0)重悬上述溶液，待其充分活化。精密称取适量cRGD(摩尔比cRGD∶PLGA=1∶1)溶于上述溶液，冰浴条件下摇床振荡孵育12 h。多次离心、洗涤后，得到cRGD-PLGA-Fe₃O₄-PFOB靶向纳米粒。

1.4.2 PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒的表征采用光学显微镜观察纳米粒的大致大小及分散性；采用透射电镜及扫描电镜观察纳米粒表面及内部结构；采用马尔文粒径分析仪检测纳米粒的粒径及表面电位；原子吸收光谱法检测铁含量。

1.4.3 PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒体外多模态成像

体外超声成像：将PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒以双蒸水稀释为不同质量浓度的混悬液(50，25，12.5，6.25 g/L)，并以双蒸水作为对照组，使用光声仪B模式进行扫描，探头频率为13-21 MHz。扫描参数：显像深度为3.5 cm，机械指数为0.1。应用DFY型超声图像定量分析仪测量各组样品的回声强度值并比较。

体外CT成像：将PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒以双蒸水稀释为不同质量浓度的混悬液(50，25，12.5，6.25 g/L)，并以双蒸水作为对照组，置于头颅线圈中，使用CT扫描仪进行扫描。扫描参数：管电流180 mA，管电压110 kV，层厚0.625 mm。应用GE ADW4.4软件测量各组样品的CT值并进行比较。

体外MRI成像：将PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒以双蒸水稀释为不同质量浓度含铁量的混悬液(1 200，600，300，150，75，0 mg/L)，进行MRI显像。扫描参数：TE 15 ms，TR 250 ms，矩阵256×192 mm，层厚4.0 mm。应用GE ADW4.5软件测量各组样品的T2值并进行比较。

1.4.4 靶向纳米粒cRGD连接情况和体外寻靶实验

纳米粒与cRGD结合力的检测：将带FITC标记的cRGD-PLGA-Fe₃O₄-PFOB靶向纳米粒作为实验组，不带有荧光染料的PLGA-Fe₃O₄-PFOB非靶向纳米粒作为对照组，采用流式细胞仪测定靶向和非靶向纳米粒与cRGD的连接率。将加入尼罗红染料获得的带有红色荧光标记的cRGD-PLGA-Fe₃O₄-PFOB靶向纳米粒稀释至适宜浓度，采用激光共聚焦显微镜检测该纳米粒与cRGD连接情况。

靶向纳米粒体外寻靶实验：实验分为大鼠肝星状细胞细胞株HSC-T6+靶向纳米粒组，大鼠肝星状细胞HSC-T6+非靶向纳米粒组，大鼠肝细胞BRL-3A+靶向纳米组。体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6及大鼠肝细胞BRL-3A，取对数生长期细胞，用细胞计数板计数，将细胞稀释为1×10⁴/孔，接种细胞于共聚焦培养皿中培养24 h。加入经尼罗红标记染色的纳米粒与细胞孵育20 min后PBS反复冲洗。加入40 g/L多聚甲醛1 mL固定细胞，PBS冲洗后加入DAPY进行细胞核染色，PBS多次冲洗。采用激光共聚焦显微镜观测3组纳米粒与细胞的结合情况。

1.4.5 细胞毒性实验体外培养大鼠肝细胞BRL-3A，取对数生长期细胞，用细胞计数板计数，将细胞稀释为5×10³/孔，接种细胞于96孔培养板中培育24 h。分别向各组BRL-3A细胞培养液中加入不同质量浓度的cRGD-PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒(20，10，5，2.5，1.25，0.625，0.3125 g/L)共同孵育24 h后，向各孔加入100 µL CCK-8混合1-4 h后，采用酶标仪测定450 nm处的吸光度(A)值。细胞活力=(A_实验组-A_空白)/ (A_对照-A_空白)×100%，空白组不含细胞与纳米粒。

1.5 主要观察指标磁性颗粒靶向纳米粒探针的体外超声/CT/MRI成像效果，以及其体外对大鼠肝星状细胞的靶向能力。

1.6 统计学分析采用SPSS 17.0软件，计量资料以x(_)±s表示，多组均数间比较采用单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

肝纤维化发生发展的显著特征是多种细胞外基质的沉积与再生结节的出现，其继发于各种创伤愈合反应后^[11-14]。肝纤维化发病机制的关键因素是肝星状细胞的活化、增生和转化为肌成纤维细胞，而后者能合成并分泌大量细胞外基质^[15-18]。由于肝星状细胞表面的整合素α_vβ₃能识别配体上的RGD序列，因而RGD配体具有一定的肝星状细胞靶向性。相较于线形RGD，环形多肽C＊GRGDSPC＊被证实与整合素α_vβ₃的结合更稳定，能与肝星状细胞表面的Ⅵ型胶原受体结合，因而环八肽cRGD具有特异的HSC靶向能力^[19-20]。活化肝星状细胞中的整合素受体α_vβ₃表达水平上调，并随着肝纤维化的加重，整合素α_vβ₃受体的表达进一步增加^[21-23]。因此cRGD修饰的纳米粒可与肝星状细胞相结合，利用其靶向性和多模态成像特性，有望对肝纤维化进行早期诊断及对肝纤维化的程度分级评估。

随着分子影像学的飞速发展，多功能分子探针不仅改变了传统单一的成像方式，联合超声、CT、MRI、光声及SPECT等各自独特的成像优势，在分子水平直观反映体内生理和病理变化，还可在分子成像系统监控下到达靶组织，获取靶组织的各种信息，为各种疾病的早期诊断及治疗奠定了新策略^[24-25]。液态氟碳纳米乳剂不仅可穿过血管内皮间隙聚集在靶组织，还具有较强的反射和背向散射性能，可用于超声显像^[26]。不同于气体全反射成像的超声微泡对比剂，液态氟碳纳米乳剂成像原理为聚集显影，当其聚集于组织、器官表面时，液态氟碳与水之间将会形成局部声阻抗差异，从而实现局部组织的信号增强。且液态氟碳纳米乳剂可以穿过血管内皮细胞到达靶组织，故其携带药物到达靶组织的能力优于微泡对比剂。因分子中含有氟和溴原子，PFOB具备了不被射线穿透的特性，可实现CT增强显像^[27]。作为一种MR阴性对比剂，超顺磁性氧化铁可实现增强MR负性显影。另有研究表明超顺磁性氧化铁可以吸附激光，在激光的照射下微粒温度升高，粒径随之增大，产生光声信号，经过一系列处理，辐射后的光声信号可用于光声学成像^[28]。作者发现超顺磁性氧化铁具有潜在光声成像效果，但达到明显成像效果所需浓度较高，其体内清除率及远期安全性有待进一步研究。同时，以微米级以下颗粒形式存在的超顺磁性氧化铁，可作为一种潜在的空化核，在较强超声作用下能增强超声的空化效应^[29]。因此包载磁性颗粒和PFOB的纳米粒具有多模态显像功能。

cRGD-PLGA-Fe₃O₄-PFOB纳米粒是一种新型材料，其粒径小、稳定性好、毒性低、靶向性好。实验制备的纳米粒呈棕色乳液，大小较均一，透射电镜及原子吸收光谱显示成功包载了超顺磁性氧化铁。由于纳米粒粒径小于血管内皮间隙，可随血液循环到达特定病变组织，从而达到靶向血管外显影。将纳米粒在4 ℃条件下存放7 d以内仍可保持较好的分散性且粒径无明显改变，稳定性好。细胞毒性实验结果表明在一定质量浓度范围内，纳米粒生物安全性好，各组细胞活力无差异。体外寻靶向实验中发现，肝星状细胞HSC-T6+靶向纳米粒组其红色荧光远多于肝星状细胞HSC-T6+非靶向纳米粒组和肝细胞BRL-3A+靶向纳米粒组，但后两组细胞周围仍有少量红色荧光，可能与胞吞机制有关，但直接渗透作用不能被排除^[30-31]。利用穿膜肽的转运功能将纳米粒导入细胞，为在分子水平诊断及治疗疾病提供了有效手段。

实验成功制备了一种以PLGA为载体、载体上修饰了cRGD、包载了磁性颗粒和PFOB的靶向纳米粒，该纳米探针能够体外超声、CT、MRI三模态成像，且能够主动靶向肝星状细胞，从而实现对早期肝纤维化的程度分级评估。然而，实验对于穿模肽携带大分子物质入胞的机制研究尚有不足，将在后续实验中进一步探讨；同时，对于其体内成像效果和体内靶向能力及携载药物对肝纤维化进的治疗效果尚需后期实验进一步确认。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

磁性靶向纳米粒体外多模态成像及对肝星状细胞的靶向作用

In vitro multi-modal imaging of magnetic targeted nanoparticles and their targeting effect on hepatic stellate cells

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