血管内皮生长因子165转染脐静脉内皮细胞与骨髓间充质干细胞共培养在血管形成中的作用

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.33.004

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (33): 5268-5273.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.33.004

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血管内皮生长因子165转染脐静脉内皮细胞与骨髓间充质干细胞共培养在血管形成中的作用

徐荣胜，何芸，李彪，先德彬，夏德林

西南医科大学附属口腔医院口腔颌面外科，四川省泸州市 646000

修回日期:2017-06-11 出版日期:2017-11-28 发布日期:2017-12-01
通讯作者: 夏德林，博士，教授，主任医师，硕士研究生导师，西南医科大学附属口腔医院口腔颌面外科，四川省泸州市 646000
作者简介:徐荣胜，男，1990年生，四川省泸州市人，汉族，西南医科大学在读硕士，医师，主要从事口腔颌面外科临床与基础研究。
基金资助:
国家自然科学基金(11702231)

Co-transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells and human umbilical vein endothelial cells transfected with vascular endothelial growth factor 165 gene promotes vascularization

Xu Rong-sheng, He Yun, Li Biao, Xian De-bin, Xia De-lin

Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Affiliated Stomatological Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China

Revised:2017-06-11 Online:2017-11-28 Published:2017-12-01
Contact: Xia De-lin, M.D., Professor, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Affiliated Stomatological Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
About author:Xu Rong-sheng, Studying for master’s degree, Physician, Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Affiliated Stomatological Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 11702231

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
种子细胞共培养：应用组织工程的方法再造组织和器官所用的各类细胞统称为种子细胞，利用组织工程技术修复组织缺损时，可应用多种细胞相互作用以起到更好的修复效果。特定的细胞共培养能更好地促进细胞及组织的生长发育。
血管形成：在局部组织缺损修复中具有重要作用，是保证组织工程骨修复成功的重要因素。其中参与血管形成的主要细胞是内皮细胞，通过内皮细胞的迁移、增殖、分化和结构重建形成新的毛细血管网。

摘要
背景：组织工程骨早期血管化是目前亟待解决的难题，细胞共培养以及添加生物活性因子来促进血管生成均是很好地促进早期血管化的方法。
目的：探讨人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)过表达血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor，VEGF165)后与小鼠骨髓间充质干细胞共培养在血管形成中的作用。
方法：腺病毒介导VEGF165转染HUVECs，并分离培养小鼠骨髓间充质干细胞，进行共培养。实验分组如下：①转染共培养组：AdVEGF165-HUVECs+骨髓间充质干细胞；②转染非共培养组：AdVEGF165-HUVECs；③空载体共培养组：AdGFP-HUVECs+骨髓间充质干细胞；④空载体组：AdGFP-HUVECs；⑤未转染共培养组：HUVECs+骨髓间充质干细胞；⑥空白对照组：HUVECs。采用CCK8法检测HUVECs的增殖能力，结晶紫染色检测HUVECs的迁移能力，Matrigel法检测HUVECs的血管形成能力。
结果与结论：①与空白对照组相比，转染共培养组、转染非共培养组、空载体共培养组、未转染共培养组的细胞增殖能力均明显增加(P < 0.05)；②与空白对照组相比，转染共培养组人脐静脉内皮细胞数量最多(P < 0.05)；③与空白对照组相比，转染共培养组形成的小管数目更多形成时间更早，更稳定(P < 0.05)；④结果表明，VEGF165转染HUVECs和骨髓间充质干细胞共同作为种子细胞能更好地促进早期血管生成。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-6404-4449(徐荣胜)

关键词: 干细胞, 骨髓干细胞, 脐静脉内皮细胞, 血管内皮生长因子165, 骨髓间充质干细胞, 共培养, 血管形成, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Vascularized bone tissue engineering is a hotspot of current research and early vascularization of tissue-engineered bone also becomes an urgent problem to be solved. Addition of bioactive factors and cell co-culture method both contribute to promoting the early vascularization.
OBJECTIVE: To investigate the pro-angiogenic effect of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) transfected with vascular endothelial growth factor 165 (VEGF165) co-cultured with bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs).
METHODS: HUVECs were transfected with VEGF165 and then co-cultured with BMSCs which were purified from mouse femoral bone marrow. There were six groups in this experiment: (1) AdVEGF165-HUVECs+BMSCs, (2) AdVEGF165-HUVECs, (3) AdGFP-HUVECs+BMSCs, (4) AdGFP-HUVECs, (5) HUVECs+BMSCs, and (6) HUVECs (blank control). Cell counting kit-8 detection was applied to analyze the proliferative ability of HUVECs. The abilities of HUVECs migration and vascularization were then detected by crystal violet staining and matrigel determination, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the blank control group, the proliferation of HUVECs was significantly increased in the other groups except for AdGFP-HUVECs group (P < 0.05). Compared with the blank control group, the migration and vascularization abilities of HUVECs were significantly stronger in the group of AdVEGF-HUVECs+BMSCs (P < 0.05). To conclude, the co-culture of HUVECs transfected with VEGF165 and BMSCs could promote early vascularization effectively.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Bone Marrow, Mesenchymal Stem Cells, Umbilical Veins, Endothelial Cells, Vascular Endothelial Growth Factors, Transfection, Coculture Techniques, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

徐荣胜，何芸，李彪，先德彬，夏德林. 血管内皮生长因子165转染脐静脉内皮细胞与骨髓间充质干细胞共培养在血管形成中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(33): 5268-5273.

Xu Rong-sheng, He Yun, Li Biao, Xian De-bin, Xia De-lin. Co-transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells and human umbilical vein endothelial cells transfected with vascular endothelial growth factor 165 gene promotes vascularization[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(33): 5268-5273.

图/表（结果） 1

2.1 腺病毒转染结果及细胞生长曲线 荧光显微镜下可见pHBAd-MCMV-GFP-VEGF165-HUVECs组及pHBAd- MCMV-GFP-HUVECs组大部分细胞显示绿色荧光(图1)。

Ad-VEGF-HUVECs、Ad-GFP-HUVECs及HUVECs在不同时间点的增殖情况见图2，腺病毒转染后细胞数量逐渐增多，与空白对照组相比，无论是Ad-GFP还是Ad-VEGF，腺病毒转染组增殖数目差异无显著意义(P > 0.05)。

2.2 BMSCs形态 接种于培养皿后，镜下可见大量圆形大小不一的细胞悬浮于培养液中，24 h后细胞贴壁，呈多边形、梭形，培养14 d后细胞排列整齐，融合成片生长(图3A)。将细胞传代培养，可见细胞形态基本一致，呈梭形(图3B)。

2.3 HUVECs/BMSCs共培养后HUVECs增殖能力变化 随着时间的增加，各组细胞吸光度值均增加，与空白对照组相比，转染共培养组、转染非共培养组、空载体共培养组和未转染共培养组的吸光度值在各时间点均明显增加 (P < 0.05)。其中转染共培养组吸光度值增加最为明显，其他3组次之。而空载体组与空白对照组相比，在各时间点吸光度值差异无显著性意义(P > 0.05)，见图4。

2.4 HUVECs/BMSCs共培养后HUVECs迁移能力变化 转染共培养组HUVECs数量最多，其他3组次之，与空白对照组相比差异有显著性意义(P < 0.05)，而空载体组与空白对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05)，见图5。与空载体共培养组和未转染共培养组相比，转染共培养组HUVECs迁移能力均明显增强，差异有显著性意义(P < 0.05)。

2.5 HUVECs/BMSCs共培养后HUVECs成管能力变化 Matrigel基质中，3 h左右开始逐渐形成管腔结构，在培养18 h可见Matrigel基质中管腔样结构基本形成，之后管腔结构逐渐解聚，36-48 h后管腔样结构基本消失。转染共培养组比空白对照组形成的小管数目更多形成时间更早，更稳定(P < 0.05)。转染非共培养组、空载体共培养组和未转染共培养组次之。空载体组与空白对照组相比小管数量差异无显著性意义(P > 0.05)，见图6。

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引言

肿瘤、外伤、感染等原因造成的颌面部骨组织缺损是临床上的常见疾病，机体骨组织自身再生修复能力有限，骨缺损后的修复一直是一大难题^[1]。目前金属植入物或骨移植可用于骨缺损的修复^[2-3]。其中，组织工程骨被认为是最有潜能的骨缺损治疗方式，避免了通过手术从患者自体取骨而造成额外的创伤，克服了使用生物材料替代骨组织后不能达到生理性修复骨缺损等局限性^[4-5]。但是，用于修复大尺寸颌面部骨缺损时，组织工程骨中心部位不能及时地实现早期血管化，继而发生缺血坏死，导致修复失败。血管形成在这一过程中至关重要。参与血管形成的主要细胞是内皮细胞，通过内皮细胞的迁移、增殖、分化和结构重建形成新的毛细血管网^[6-7]。脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)广泛应用于组织工程学研究，并在血管形成中具有重要的作用^[8-9]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在生理性和病理性血管形成中均是重要的调节因子，能够增加毛细血管对大分子的渗透性，是目前已知诱导血管再生作用最强的生长因子^[10-11]。其中，VEGF165是主要的一种类型，但人工添加VEGF，其发挥活性的时间较短^[12]。

种子细胞的培养是组织工程的基本要素。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是来源于骨髓的多能干细胞，有很强的多向分化能力，是构建组织工程骨组织的良好种子细胞^[13]。利用组织工程技术修复组织缺损时，可应用多种细胞相互作用以起到更好的修复效果^[14]。特定的细胞共培养能更好地促进细胞及组织的生长发育^[15]。

实验通过腺病毒载体介导VEGF165转染HUVECs，然后与小鼠BMSCs共同作为组织工程的种子细胞进行体外共培养，观察HUVECs的迁移、增殖及早期成血管能力，为组织工程种子细胞的选择提供一种新的方案。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 体外细胞学实验。

1.2 时间及地点 实验于2015年1月至2016年6月在西南医科大学口腔医学院口颌面修复重建与再生实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 C57雄性小鼠10只，4周龄，体质量为20-35 g，由西南医科大学基础医学部实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK(川)2013-2017。

1.3.2 实验试剂和仪器 腺病毒过表达载体pHBAd- MCMV-GFP-VEGF165以及腺病毒空载体pHBAd- MCMV-GFP的包装构建(汉恒生物有限公司)；脐静脉内皮细胞(Sciencell公司)；DMEM培养基、胎牛血清(赛默飞世尔生物化学(北京)有限公司)；0.25%胰蛋白酶、L-2-磷酸抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、地塞米松、二甲基亚砜(Sigma公司，美国)；青霉素-链霉素溶液(Hyclone公司，美国)；OLYMPUS BX41显微镜(OLYMPUS公司，日本)；离心机、HF240A2恒温CO₂培养箱(Heraeus公司，德国)；DKB-2006型电热恒温水槽(上海精宏试验设备有限公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 腺病毒介导VEGF165转染HUVECs 在Genebank上查询VEGF165序列，构建VEGF165质粒并完成腺病毒过表达载体pHBAd-MCMV-GFP-VEGF165以及腺病毒空载体pHBAd-MCMV-GFP的包装构建。培养人胚肾细胞系293A细胞，病毒扩增前1 d将生长状态良好的293A细胞转移到10 cm培养皿中培养，当细胞长满至90%以上，将病毒加入人胚肾细胞系293A细胞培养液中进行病毒扩增，2 d后收集病毒。

在感染HUVECs之前，通过感染实验确定感染复数。感染复数=3，10，30，50。感染复数对应病毒体积的换算：转染时细胞数(以传代计数细胞数×2计算)×感染复数=病毒个数；加入的病毒体积=病毒个数/病毒滴度。实验需要检测腺病毒过表达载体pHBAd-MCMV-GFP-VEGF165以及腺病毒空载体pHBAd-MCMV-GFP的感染复数；预先检测病毒滴度为10¹⁰ PFU/mL，HUVECs计数为10⁵则需要加入的病毒体积为0.066，0.22，0.66，1.1 μL。分别将稀释的各浓度病毒液加入24孔板中，2 h后换液放入37 ℃培养箱继续培养，48 h后观察细胞中荧光表达情况，确定HUVECs的最适感染复数值。

感染实验分为以下3组并做好标记：①实验组：pHBAd-MCMV-GFP-VEGF165-HUVECs；②空载体组：pHBAd-MCMV-GFP-HUVECs；③空白对照组：加入无血清培养液培养HUVECs。取最适感染复数感染HUVECs，以1×10⁸L^-1的细胞浓度将HUVECs种植于24孔板。次日，分别将最适感染复数时腺病毒量按转染分组加入HUVECs，荧光显微镜下观察荧光表达量，并分别在1，2，3，4，5，6 d时进行计数，每次取3孔同组细胞计算平均值，描绘生长曲线后观察细胞生长状况。

1.4.2 小鼠BMSCs的分离及培养 取小鼠四肢股骨，去除长骨两端，暴露骨髓腔，肝素冲洗将骨髓腔内细胞冲出到试管内，过滤除去组织块，反复吹打成单细胞悬液，1 500 r/min离心5 min，弃上清，将细胞重悬后接种到培养瓶，备用。接种后6-8天，待细胞融合约85%时进行传代。去除培养基，PBS清洗3次，加胰蛋白酶消化细胞，细胞形态变圆后终止消化，重悬，1 500 r/min离心5 min；去除上清液，用培养基吹打重悬；以1×10⁴/cm³密度接种于新的培养瓶，置入37 ℃、体积分数为5% CO₂培养箱内进行培养。在显微镜下观察细胞形态，并行成骨诱导和茜素红染色鉴定细胞为BMSCs。

1.4.3 HUVECs/BMSCs共培养 取第3代或第4代BMSCs，将培养细胞分为6组：①转染共培养组：AdVEGF165-HUVECs+BMSCs；②转染非共培养组：AdVEGF165-HUVECs；③空载体共培养组：AdGFP- HUVECs+BMSCs；④空载体组：AdGFP-HUVECs；⑤未转染共培养组：HUVECs+BMSCs；⑥空白对照组：HUVECs。采用Millipore公司的0.4 μm transwell系统进行细胞共培养，将各组中的HUVECs以1×10⁸ L^-1的细胞浓度分别接种0.4 μm transwell的下层24孔板中，BMSCs以1×10⁸ L^-1的细胞浓度接种于上层Transwell小室中，小室放入24孔板后置于37 ℃培养箱。

1.4.4 HUVECs/BMSCs共培养增殖实验 将上述共培养细胞培养一定时间并按照0，24，48，72，96 h 5个时间点消化下层细胞后转入96孔板；向每孔加入10 μL CCK8溶液，培养箱内孵育4 h后测定450 nm处的吸光度值；取3个孔的平均值，以时间为横轴、吸光度值为纵轴绘制生长曲线。

1.4.5 HUVECs/BMSCs共培养迁移实验 采用Millipore公司的8 μm transwell系统进行细胞的共培养，24 h后取出HUVECs，用棉签擦去膜上方表面的HUVECs，紧贴上室边缘剪切下渗透膜，置于40 g/L多聚甲醛固定20 min，PBS漂洗，采用0.1%结晶紫在室温下进行染色30 min，PBS冲洗3次，镜下观察拍照，通过检测穿过微孔滤膜的细胞数量来评估细胞的迁移能力，每组重复3次，Image-Pro Plus软件计数。

1.4.6 HUVECs/BMSCs共培养成管实验 制备Matrigel胶，并铺入96孔板，调整HUVECs浓度为4×10⁸ L^-1，共培养组加入BMSCs，使BMSCs与HUVECs比例为1∶1，每孔100 μL，每组细胞各3孔并做标记，37℃温箱培养3，18，36，48 h时在镜下观察小管形成并照相，。

1.5 主要观察指标 ①CCK8法检测HUVECs的增殖能力；②结晶紫染色检测HUVECs的迁移能力；③Matrigel法检测HUVECs的血管形成能力。

1.6 统计学分析 所得数据均用x(_)±s表示，使用SPSS17.0进行实验数据分析，组间比较采用t 检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

实验通过腺病毒载体介导VEGF165转染HUVECs与小鼠BMSCs共同作为组织工程的种子细胞进行体外共培养，来探讨其在血管形成中的作用。骨发生发育和骨重建的过程需要足够的氧气、养分和生长因子等必需物质，这些物质的持续供给依赖于局部良好的微循环系统，而作为高度血管化的组织，骨再生也依赖于血管化的发生，组织工程骨修复骨缺损的基础依然是它的血管化^[16-17]。Goldstein等^[18]研究发现，在血管系统建立以前，活性细胞可以通过扩散作用从周围的组织中获取养分、氧气和生长因子，但这种依赖单纯的扩散模式获取有效物质的有效半径仅约200 μm。Volkmer等^[19]研究表明，进行体外培养的组织如果体积大小超过1 mm×1 mm×1 mm，其组织体系内存活的细胞会呈现出“边集”现象，表现为构建的组织模型中活性细胞多分布在边缘区域，位于中心区域的细胞则出现不同程度的坏死。因此，可以说早期血管化直接影响骨缺损治疗的成败^[20]。基于早期血管化的重要性，在选择组织工程骨种子细胞时可采用多种技术结合的方法，将血管内皮细胞经过转染细胞因子基因预处理后与成骨细胞共同作为骨组织工程的种子细胞^[21]。

VEGF是目前已知的促血管再生最强的生长因子^[22]，具有调节内皮细胞生长、分化和凋亡等生理过程的作用^[23]。以往研究发现，在正常氧分压下VEGF165的生物半衰期为30-45 min，在低氧环境下为6-8 h。因此，直接应用VEGF弥散作用过强，且花费较高。如能将VEGF基因转导至内皮细胞与成骨细胞联合培养，使其既能保持局部VEGF高浓度活性，促进组织工程骨血管化，又能促进成骨细胞的增殖活性并增强组织工程骨修复骨缺损的能力^[24]。应用转基因技术来弥补外源性VEGF局部应用时的缺陷具有极大的优势，因此作者选择VEGF修饰HUVECs的方式，使VEGF在组织工程骨移植处局部持续稳定的高表达。实验结果显示腺病毒转染对细胞的增殖无明显影响，说明腺病毒转染后细胞仍然生长良好。值得注意的是VEGF165的高表达，使HUVECs迁移能力和成血管能力均明显增强，并且VEGF165在HUVECs中的高表达是稳定的。这说明VEFG165在HUVECs中的高表达可促进细胞的相关生物活性升高，从而有利于早期血管的形成。

在骨形成过程中成骨细胞和内皮细胞之间是相互作用的。内皮细胞可分泌胰岛素样生长因子、前列腺素、集落刺激因子等来促进骨细胞的增殖、分化、骨组织生长。如转化生长因子β能促间充质干细胞招募和增殖，另外它还可以调节成骨细胞的分化^[25]。内皮细胞所分泌的上述细胞因子可通过诱导成骨细胞表达VEGF或直接促进VEGF的高表达来进一步促进成骨细胞与血管内皮细胞之间的相互作用^[26]。Villars等^[27]将人内皮细胞与骨髓间充质干细胞直接和间接接触混合培养，碱性磷酸酶活性检查结果提示直接法强于间接法，证明二者之间不仅靠细胞因子弥散的相互作用而且涉及细胞间膜蛋白作用。因此，实验进一步将HUVECs和BMSCs共培养来探讨内皮细胞体外成血管能力的变化。相比较于HUVECs对照组，即使没有VEGF165的高表达，共培养后内皮细胞的增殖能力、迁移能力和成管能力均显著增强(P < 0.05)，说明与BMSCs共培养可促进内皮细胞的血管形成能力。当VEGF165过表达后与BMSCs共培养，内皮细胞的血管形成能力进一步增强(P < 0.05)，说明VEGF165高表达和与BMSCs共培养具有协同促进作用。

结论：无论是转染VEGF165基因还是与BMSCs共培养均有利于HUVECs扩增与血管形成，且将转染VEGF165后的内皮细胞与BMSCs共培养能进一步提高内皮细胞血管形成能力，两种处理方法相结合对促进内皮细胞体外成血管能力具有协同作用，能更优化组织工程骨种子细胞的选择，更好地促进早期血管生成。

血管内皮生长因子165转染脐静脉内皮细胞与骨髓间充质干细胞共培养在血管形成中的作用

Co-transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells and human umbilical vein endothelial cells transfected with vascular endothelial growth factor 165 gene promotes vascularization

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[1]	王景, 熊山, 曹金, 冯林伟, 王信. 白细胞介素3在骨代谢中的作用及机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1260-1265.
[2]	肖豪, 刘静, 周君. 脉冲电磁场治疗绝经后骨质疏松症的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1266-1271.
[3]	安维政, 何萧, 任帅, 刘建宇. 肌源干细胞在周围神经再生中的潜力[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1130-1136.
[4]	范一鸣, 刘方煜, 张洪宇, 李帅, 王岩松. 脊髓损伤后室管膜区内源性神经干细胞反应的系列问题[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1137-1142.
[5]	侯婧瑛, 郭天柱, 于萌蕾, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理通过激活MALAT1靶向抑制miR-195促进骨髓间充质干细胞的生存和血管形成[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1005-1011.
[6]	周颖, 张幻, 廖松, 胡凡琦, 易静, 刘玉斌, 靳继德. 去铁胺联合干扰素γ预处理对人牙髓干细胞的免疫调节作用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1012-1019.
[7]	梁学振, 杨曦, 李嘉程, 骆帝, 许波, 李刚. 补肾活血胶囊介导Hedgehog信号通路调控大鼠骨髓间充质干细胞成骨成脂分化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1020-1026.
[8]	王继芳, 鲍祯, 乔亚红. miR-206调控小细胞肺癌干细胞EVI1基因表达及细胞生物学行为[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1027-1031.
[9]	刘峰, 彭宇环, 罗良平, 吴本清. 植物源性碱性成纤维细胞生长因子维持人胚胎干细胞的生长与分化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1032-1037.
[10]	闻丹丹, 李强, 沈才齐, 纪哲, 金培生. 外用红色诺卡氏菌细胞壁骨架提高脂肪间充质干细胞活性修复糖尿病创面[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1038-1044.
[11]	朱兵兵, 邓江华, 陈晶晶, 慕晓玲. 白细胞介素8受体可提高脐带间充质干细胞迁移和向损伤内皮的黏附[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1045-1050.
[12]	罗小玲, 张丽, 杨茂桦, 徐洁, 徐晓梅. 柚皮素干预人牙周膜干细胞的成骨分化能力[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1051-1056.
[13]	熊挺淋, 应梦慧, 张丽莎, 张晓刚, 杨燕. 诱导多能干细胞分化的心肌细胞电生理特点[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1063-1067.
[14]	王新民, 刘飞, 许杰, 白玉玺, 吕剑. 髓芯减压联合牙髓干细胞治疗兔早期激素性股骨头坏死[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1074-1079.
[15]	房晓磊, 冷军, 张晨, 刘会敏, 郭文. 间充质干细胞不同移植途径治疗缺血性脑卒中疗效差异的系统评价[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1085-1092.