重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙人工骨用于绵羊腰椎椎体间的融合

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.26.014

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (26): 4178-4184.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.26.014

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重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙人工骨用于绵羊腰椎椎体间的融合

刘海龙¹，陈亮²，顾勇²，王春增²，刘跃洪¹

¹德阳市人民医院，四川省德阳市 618000；²苏州大学附属第一医院，江苏省苏州市 215000

收稿日期:2017-06-26 出版日期:2017-09-18 发布日期:2017-09-28
通讯作者: 陈亮，主任医师，教授，博士生导师，苏州大学附属第一医院，江苏省苏州市 215000
作者简介:刘海龙，男，1980年生，四川省人，汉族，2014年苏州大学毕业，硕士，主治医师，主要从事脊柱外科研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81071450，81371930)

Lumbar interbody fusion with porous biphasic calcium phosphate enhanced by recombinant human bone morphogenetic protein-2/silk fibroin sustained-release microsphere in a sheep model

Liu Hai-long¹, Chen Liang², Gu Yong², Wang Chun-zeng², Liu Yue-hong¹

¹People’s Hospital of Deyang City, Deyang 618000, Sichuan Province, China; ²the First Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215000, Jiangsu Province, China

Received:2017-06-26 Online:2017-09-18 Published:2017-09-28
Contact: Chen Liang, Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, the First Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215000, Jiangsu Province, China
About author:Liu Hai-long, Master, Attending physician, People’s Hospital of Deyang City, Deyang 618000, Sichuan Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81071450, 81371930

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

双相磷酸钙：是由β-磷酸三钙和羟基磷灰石按比例4∶6(比例同人体骨骼)双相平衡优化组成，兼具β-磷酸三钙良好的生物降解性和羟基磷灰石优异的力学特性，具有优良的生物相容性、力学性能以及骨传导性。加入制孔剂后，双相磷酸钙可形成多孔三维结构，有利于成骨细胞的扩散和增殖。双相磷酸钙具有一定的机械强度，但受孔隙率的影响较大，孔隙率越大，材料强度越小，而孔隙率是材料实现快速骨长入及降解的重要因素。丝素蛋白与双相磷酸钙复合，可显著改善双相磷酸钙的脆性，使双相磷酸钙/丝素蛋白复合材料具有更优良的生物力学性能，从而获得满意的孔隙率及孔径。

丝素蛋白：是由蚕丝提取的天然高分子纤维蛋白，与自然骨中的Ⅰ型胶原相似。细胞在羟基磷灰石上能够很好的黏附、扩散和增殖，而活性不受影响。羟基磷灰石降解产物由氨基酸组成，易被人体吸收，但不产生炎症反应。丝素蛋白具有良好的吸附和缓释功能，可以延缓药物的释放速度，是很好的药物缓释剂。Vassilis等用三维多孔丝素蛋白支架吸附重组人骨形态发生蛋白，1周后仍有25%的蛋白存留于支架上，对重组人骨形态发生蛋白的活性不产生影响，该复合物可促进骨髓基质干细胞向成骨性细胞分化，并且有很强的促颅骨修复能力，表明了丝素蛋白是重组人骨形态发生蛋白良好的缓释载体。但物理吸附方式负载重组人骨形态发生蛋白，负载后持续释放的时间短。而合成包裹方式负载重组人骨形态发生蛋白，不仅在早期可获得释放峰值，而且后期仍能持续释放，持续发挥诱导成骨作用。

背景：作者既往已研究重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙的孔隙率、孔径、机械强度、体外生物活性、异位成骨活性等，需要通过建立可靠的动物模型来验证其生物安全性和可行性，并对复合材料的成骨能力进一步评估，为该骨移植材料用于脊柱融合提供进一步的实验数据。

目的：在绵羊腰椎间融合模型中验证重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙的成骨效果，探讨其应用于椎体间融合的可能性。

方法：将16只健康的成年绵羊建立L_1/2、L_3/4和L_5/6的椎体间融合模型，每只动物的L_1/2、L_3/4和_L5/6中随机植入自体髂骨、重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙、重组人骨形态发生蛋白2缓释微球增强型多孔双相磷酸钙、重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球中的3种。

结果与结论：植入后12周和24周新型人工骨重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙的融合率与自体髂骨类似，均明显优于其他组。结果说明重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙人工骨能够在模型动物体内获得了与自体髂骨相似的腰椎融合效果，通过对其性能的进一步改良与验证可望运用于医学实践。

ORCID: 0000-0002-7449-1004(陈亮)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 生物材料, 骨生物材料, 丝素蛋白, 微球, 缓释, 重组人骨形态发生蛋白2, 双相磷酸钙, 脊柱融合术, 羊, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: The authors have studied the porosity, pore size, mechanical strength, in vitro biological activity, ectopic osteogenic activity of porous biphasic calcium phosphate enhanced by recombinant bone morphogenetic protein-2/silk fibroin sustained-release microsphere (BCP/rBMP-2/SF). However, further investigation on the osteogenic ability of the composite bone graft material is warranted based on a reliable animal model, which will provide experimental data for the clinical application of the composite material in the spinal fusion.

OBJECTIVE: To investigate the osteogenic efficacy of BCP/rBMP-2/SF in a sheep lumbar interbody fusion model.

METHODS: Sixteen healthy adult sheep were divided into two groups randomly. All sheep were operated on the left extraperitoneal approach and intervertebral discs of L_1/2, L_3/4, and L_5/6 were exposed respectively. Three of the following four materials were randomly implanted into the L_1/2, L_3/4, and L_5/6 of each animal: autologous iliac, BCP/rhBMP-2/SF, BCP/rhBMP-2 or BCP/SF.

RESULTS AND CONCLUSION: The group of BCP/SF/rhBMP-2 achieved a similar fusion rate compared with the group of autologous iliac at 12 and 24 weeks after operation, and they were significantly better than the other two groups. These findings indicate that the novel new artificial bone, BCP/rhBMP-2/SF, can obtain similar lumbar fusion results compared with the autologous iliac. It is expected to be applied to clinical practice in the future by further improving its properties.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

Key words: Calcium Phosphates, Silk, Bone Morphogenetic Proteins

中图分类号:

R318

刘海龙，陈亮，顾勇，王春增，刘跃洪. 重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙人工骨用于绵羊腰椎椎体间的融合[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(26): 4178-4184.

Liu Hai-long, Chen Liang, Gu Yong, Wang Chun-zeng, Liu Yue-hong.

Lumbar interbody fusion with porous biphasic calcium phosphate enhanced by recombinant human bone morphogenetic protein-2/silk fibroin sustained-release microsphere in a sheep model

[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(26): 4178-4184.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析各组动物均在术后2.0-3.0 h内清醒，并开始进食、饮水，4-6 h后逐渐站立行走，其中1只动物在植入后第5天出现纳食减退、精神萎靡，对症处理后症状无明显缓解，于植入后第7天死亡，考虑与术后肠麻痹有关，死亡动物随后给予补充。

2.2 大体情况除死亡动物外各实验动物术后恢复顺利，未出现严重术后并发症。

2.3 材料整体情况

植入后12周：BCP/SF/rhBMP-2组材料降解良好，融合区已有较多的软骨样及骨样组织形成，部分标本椎体间已有骨性连接(图2A)；BCP/rhBMP-2组材料降解良好，融合区有新生的骨样和纤维结缔组织，1例椎体前方有大块异位骨形成，但椎体间未形成连续的骨性连接(图2B)；BCP/SF组材料降解明显欠佳，纤维结缔组织增生，椎体间无骨性连接(图2C)。

植入后24周：BCP/SF/rhBMP-2人工骨组可见材料降解良好，部分标本仅少量材料核残留，以材料核为中心，周围完整的骨组织已形成，椎体间骨性融合(图2D)；BCP/rhBMP-2组可见材料降解良好，纤维结缔组织及骨样组织增生，椎体间有骨性结构形成，未连接(图2E)；BCP/SF组仍可见白色材料残留，纤维结缔组织增生，椎体间未见骨性连接(图2F)。

2.4 手触检测结果植入后12，24周时，BCP/SF/ rhBMP-2组与自体髂骨组融合率接近，BCP/rhBMP组及BCP/SF组融合率接近。植入后随时间的延长，各组融合率有所提升，但差异无显著性意义(P > 0.05；表2)。

2.5 CT三维重建结果

植入后12周：2例BCP/SF/rhBMP-2人工骨组冠状面及矢状面重建均可见到，椎体间有骨性连接；BCP/rhBMP-2组冠状面及矢状面重建均可见到椎体间新生的骨性组织，1例形成骨性连接；BCP/SF组，冠状面及矢状面重建均未见到椎体间新生的骨性组织；2例自体髂骨组冠状面及矢状面重建均可见椎体间已有骨性连接(图3a)。

植入后24周：3例BCP/SF/rhBMP-2人工骨组冠状面及矢状面重建均可见到，椎体间有骨性连接；BCP/rhBMP-2组冠状面及矢状面重建均可见到椎体间有骨性结构，不连续，1例椎体前方有异位骨形成，1例形成骨性连接；BCP/SF组，冠状面及矢状面重建均可见到椎间少量新生骨组织，1例形成骨性连接；4例自体髂骨组冠状面及矢状面重建均可见椎间已有骨性连接(图3b)。植入后12和24周BCP/SF/ rhBMP-2及髂骨组的影像学评分优于其他2组；BCP/SF/ rhBMP-2植入后24周的影像学评分高于12周(表3)。

2.6 组织学变化植入后12，24周BCP/SF/rhBMP-2及髂骨组的组织学评分优于其他2组；BCP/SF/rhBMP-2植入后24周的组织学评分高于12周(图4；表4)。

2.7 非破坏性生物力学测试结果植入后BCP/SF/ rhBMP-2与自体髂骨融合强度里相当，且优于其他2组。BCP/rhBMP的融合强度均优于BCP/ SF；而BCP/SF组与正常对照组融合强度接近。BCP/SF/rhBMP-2植入后24周的融合强度优于12周(表5)。

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引言

脊柱融合已成为治疗脊椎不稳、退行性脊椎疾病、脊柱畸形和其他脊椎疾病的常用方法^[1]，随着脊柱融合理念和技术的改善，融合成功率明显提高，但是假关节形成及融合失败屡有发生，虽然有许多可供临床选用的骨移植材料，但融合效果仍不理想^[2-3]。影响脊柱融合率的因素很多，植骨材料是其中重要因素，自体骨是脊椎融合的“金标准”，但其不良并发症可达30%，这限制了其临床应用^[4]。而异种骨或同种异体骨存在疾病传播风险和免疫排斥反应，融合率低，愈合时间长，与受体骨不能完全相融，限制了它们的应用^[5]。

目前使用的骨移植材料都有无法克服的缺陷，组织工程骨受到关注^[6]。带有活性成骨因子的人工骨是主要研究方向，骨形态发生蛋白2是目前仅有的能独立诱导成骨的活性蛋白^[7]，2002年被美国食品与药品监督管理局批准用于成人脊柱融合，有取代自体骨“金标准”的趋势^[8]。但骨形态发生蛋白易被组织液或血液稀释或被各种蛋白酶分解，有效浓度维持的时间很短，导致其骨诱导作用不能持续发挥，因此不能被单独使用。目前临床应用的载体多为明胶海绵，但其不是骨形态发生蛋白2的理想载体^[9]，明胶海绵载体易过早吸收，且不能起到填充和支架作用。复合载体是骨形态发生蛋白2更佳的载体^[10]。作者既往研究已成功制备重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2，rhBMP-2)/丝素蛋白(silk fibrion，SF)缓释微球增强型多孔双相磷酸钙(biphasic calcium phosphate，BCP)复合材料，并研究了其孔隙率、孔径、机械强度、体外生物活性、异位成骨活性等^[11]，BCP/SF/rhBMP-2是按BCP∶SF/rhBMP-2=1 g∶30 mg的比例超生混合而成，由β-磷酸钙与羟基磷灰石按比例4∶6(比例同人体骨骼)双相复合组成，孔隙率78.83%，孔径为(293.25±42.77) μm，与人体松质骨相似，抗压缩变形能力> 30 MPa，优于松质骨，可以诱导粘附、生长在其表面的细胞向成骨方向分化，对细胞的增殖生长无影响，有良好的生物相容性。本实验拟通过动物模型来验证其生物安全性和有效性。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点实验于2015年9月至2016年3月在江苏省太湖实验动物中心完成。

1.3 材料 18-24个月成年绵羊16只，雌雄不限，体质量40-45 kg，由江苏省太湖实验动物中心提供，动物许可证号SCXK(苏)2012-0005。rhBMP-2由上海瑞邦生物材料有限公司提供。SF和BCP粉末由苏州大学材料工程学院提供。

1.4 方法

1.4.1 生物材料的制备

BCP/SF/rhBMP-2人工骨的制备：参照Gu等^[12]的方法制备。超声波按SF/rhBMP-2微球：BCP粉末=30 mg∶1 g混匀后，加入无菌PBS(0.4 mL/g)混匀，加晶体NaCl，填入直径0.7 cm、长1.2 cm的模具中，得柱状人工骨，放入恒温干燥箱(37 ℃)，脱盐，然后再次放入恒温干燥箱 (37 ℃)，最后得到直径0.7 cm、长1.2 cm的人工材料 BCP/SF/rhBMP-2(图1)。-20 ℃保存备用。

BCP/SF的制备：经超声波将SF和BCP粉末按 30 mg∶1 g混匀，按照参照Gu等^[12]的方法制得BCP/SF。-20 ℃保存备用。

BCP/rhBMP-2的制备：将BCP与SF按1 g∶2 mL的比例浸入含有7.5 mg/LrhBMP的PBS中，恒温干燥箱(37 ℃)内干燥得到BCP/rhBMP-2。-20 ℃保存备用。

自体髂骨：术中适度向髂骨延长切口，暴露髂结节，骨膜剥离其适度推离结节上软组织，去除结节上方皮质骨，用内径0.7 cm的环钻沿髂骨板取松质骨柱长约1.5 cm，取出后统一修整为长1.2 cm。

1.4.2 脊柱融合动物模型的建立与修复适应性圈养1周后，参照Gu等^[12]的方法建立羊前路腰椎椎间融合模型，体积分数10%水合氯醛静脉内麻醉成功后，常规安尔碘消毒后，从左侧肋脊角处开始紧贴L₁椎体横突尖端，沿各腰椎横突尖至髂骨，取长约20 cm的纵行切口。依次切开皮肤、皮下、深筋膜，从竖脊肌外缘暴露横突，沿肌肉间隙进，将腹膜及腹腔内脏器推向腹侧，分别暴露L_1/2、L_3/4和L_5/6间隙，用骨膜剥离器推离椎间隙上肌肉组织，避免分离神经根和结扎腰椎节段动脉影响术后融合椎体血运。用限深电钻于椎间隙正中制备直径8 mm、深12 mm的材料移植床，每只动物的L_1/2、L_3/4和L_5/6中随机植入自体髂骨、BCP/SF/rhBMP-2、BCP/rhBMP-2、BCP/SF中的3种。植入量以材料刚好填满植骨床为度；充分止血，逐层逢合恢复各层解剖关系。碘伏辅料覆盖伤口，妥善包扎固定。术后单独饲养14 d。观察动物的进食、行动及伤口愈合情况。

1.4.3 取材植入后12，24周时，各取8只实验动物静脉内注射过量麻醉药物处死，取脊柱L₁_-₆节段行相关检测。

1.4.4 大体观察观察椎体完整性、融合节段有无骨桥形成、炎症反应。手触法判断标本是否融合^[13]，每个标本均通过实验相关以外的2位不同骨科医师进行单盲评测，评测方式：屈伸、侧屈、旋转活动融合间盘的近远端椎体。融合标准判定标准：融合节段出现任何方向上的活动，即判定为未融合；2名检查者中有1人评判为未融合，则判定为未融合，否则判定为融合。

1.4.5 影像学检查植入后12，24周时，行腰椎三维CT重建。结合手触实验，根据2种影像学上均观察到连接上下终板的连续骨桥判定为融合，否则判断不融合^[14]。结果采取单盲的方式由两名骨科医师和两名影像学专科医师采用4分分级标准对影像学结果进行评分^[15]：0分没有骨形成；1分有骨形成但没有骨桥形成；2分单侧骨桥形成；3分双骨桥或较大骨桥形成。取4人的影像学平均评分为融合的影像学评分值。

1.4.6 非破坏性生物力学测试按Lysack等^[16]的方法进行生物力学测试，将标本分别用手锯分解成L_1/2、L_3/4和L_5/63个节段，另外每个时间点还包括6个正常的脊柱节段作为对照，用于生物力学检查。仅保留椎体部分，将测试节段的头、尾端椎体两端用聚甲基丙烯酸甲酯进行标准化包埋，用于生物力学检查。测试时将头端椎体固定于生物力学试验机(MTS 858 Mini Bionix II)上，测试节段位于测试装置的正中央位置，尾端椎体不固定，依次对尾端椎体施加前屈、后伸、左、右侧屈以及左右旋转力矩，记录应力-位移数据。每次测试进行5次负荷加载循环，每次循环后停顿 30 s，以利蠕变的恢复。测试参数设定为探头恒定速度为1.0 (°)/s施加的最大力矩达5 N•m时停止测试^[17]，每次测试前不施加任何预负荷。各自由端的瞬间位移被记录，连续读取5次读数，取平均值用于数据分析。

1.4.7 组织学检查各组切片经苏木精-伊红染色后，于显微镜下观察并采用Smucker等^[18]的方法进行评分(表1)。评分≥8并且与手触实验相吻合的判定为融合。

1.5 主要观察指标不同材料的融合率、融合强度及诱导成骨能力。

1.6 统计学分析数据采用x(_)±s表示，对融合率的比较采用卡方分析，对同一时间点不同材料影像学评分，组织学评分以及融合强度的比较采用方差分析，同种材料不同时间点的比较采用配对设计t 检验，应用SPSS 17.0软件(SPSS公司)进行统计学处理，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

作者既往已对BCP/SF/rhBMP-2的释放动力学、孔隙率、孔径、机械强度以及BCP/SF/rhBMP-2体外的生物活性进行了研究^[10]，证实将它作为组织工程骨是可能的。实验是在羊腰椎融合模型中进一步综合评估其生物活性和持续诱导成骨能力，为该材料的进一步研究提供更为可靠的数据。实验通过绵羊前路腰椎椎体间融合模型验证了BCP/SF/rhBMP-2的成骨作用。

理论上大多数 rhBMP-2 应该在1个月内释放。由于BCP/SF/rhBMP-2是多孔支架，血液与体液随孔隙容易进入材料内部，使部分未完全包裹BMP首先释放，在材料周围形成了一个相对较高的rhBMP-2浓度梯度，rhBMP-2能独立诱导成骨，刺激材料降解及成骨，有利于成骨^[19]；随材料的降解，材料内部的SF/rhBMP-2微球暴露，微球的大小对体外释放动力学有显著影响^[20-23]，较小直径的微球因骨形态发生蛋白多分散在微球的表面能更快更容易释放骨形态发生蛋白，较大的微球的骨形态发生蛋白更多的是被包裹，而且较大的微球内还可能包裹多个较小的微球，释放较慢^[24-28]，材料降解过程中不同直径的微球释放速度与时像不同，随材料降解，rhBMP-2在局部始终维持较高的浓度，不断刺激形成新骨，新骨的形成是伴随着新生血管长入材料，这反过来又进一步促进材料的降解，形成新骨，形成一个良性循环，材料降解分散，有利于血管，组织和骨细胞的生长，进一步加速材料的降解，为新骨形成提供了空间。实验中大体标本和组织学检查均证实BCP/SF/rhBMP-2降解较其他对照组更好且与新骨的生成相匹配，而BCP/SF与BCP/ rhBMP-2组在组织学检查中均可见材料脱钙后明显的空白区，在组织学检查中BCP/SF/rhBMP-2组编织骨形成更满意的结果相符合；另外，BCP降解后其产物钙离子和磷酸根离子沉积到SF纤维上，对骨基质起钙化作用，此过程和骨基质钙化过程类似，可促进新骨生成^[29]。

BCP/rhBMP-2中rhBMP很快释放，在材料周围短时间内形成了一个相对较高的rhBMP-2浓度梯度，能发挥一定的成骨作用，但rhBMP-2很快被稀释或降解，难以持续成骨，虽然BCP降解后钙离子和磷酸根离子沉积到SF纤维上，可促进新骨生成，但这种作用是有限的。而单纯的BCP/SF组降解较慢，具有骨传导性，但诱导成骨的能力较弱，植入后6个月还能清楚的见到未降解的材料颗粒，残余材料也阻碍了成骨细胞增殖的空间，因此成骨能力最为有限。

材料降解速率与新骨的形成相匹配非常重要，rhBMP-2/SF微球不仅增加了BCP的性能，也加速材料降解，为骨细胞的长入提供了足够的空间，被释放的rhBMP-2同时具有促进新骨形成和材料降解的双重作用。虽然BCP/SF/rhBMP-2组在植入后24周的融合率有提高，但植入后不同时间点各组融合率差异无显著性意义。植入后影像学及组织学评估以及生物力学测试，BCP/SF/rhBMP-2和自体髂骨组优于BCP/rhBMP-2组和BCP/SF组，表现出融合区融合质量持续提高，这可能是我们的样本量较少，能够获得的信息量太少的原因。

美国食品和药物管理局批准用于人体椎间融合的rhBMP-2的浓度为1.5 g/L，剂量为3-9 mg/间隙。rhBMP-2的剂量需求具有种属差异性^[30]，羊腰椎椎间融合中rhBMP-2适宜剂量仍不明确，需要进一步研究。

另外植入后BCP/rhBMP-2有1例出现椎前异位成骨，而BCP/SF/rhBMP-2与其他组未出现，说明SF微球可能可以防止rhBMP-2过度释放，减低rhBMP-2引起异位成骨的风险。这个现象提示在使用rhBMP-2进行脊柱融合时，把释放剂量和范围限制在一定程度内，避免进入椎管内可能是一种更安全的处理，这正是SF/rhBMP-2微球所表现出来的特性之一，但相关结论需进一步研究。

综上，BCP/SF/rhBMP-2具有骨传导和骨诱导作用，降解和成骨能力相匹配，能够在模型动物体内获得了与自体髂骨相似的腰椎融合效果，通过对其性能的进一步改良可望运用于医学实践。此外，文章未对不同BMP剂量的融合效果进行比较，未能体现BMP剂量对于融合的影响关系；丝素微球BMP的包埋率需进一步提高，以提高药物的利用率；实验样本量偏少，对于融合率的统计信息量偏少。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

重组人骨形态发生蛋白2/丝素蛋白缓释微球增强型多孔双相磷酸钙人工骨用于绵羊腰椎椎体间的融合

Lumbar interbody fusion with porous biphasic calcium phosphate enhanced by recombinant human bone morphogenetic protein-2/silk fibroin sustained-release microsphere in a sheep model

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