培养福氏志贺菌感染大鼠回肠组织病理学的特点

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.49.017

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (49): 7411-7417.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.49.017

• 消化系统损伤动物模型 Animal models of digestive damage • 上一篇下一篇

培养福氏志贺菌感染大鼠回肠组织病理学的特点

罗夙医1，王玺赟2，李劲涛3

昆明医科大学，1基础医学院病原生物学与免疫学系，22012级麻醉班， 3基础医学院神经科学研究所，云南省昆明市 650500

收稿日期:2016-09-02 出版日期:2016-11-30 发布日期:2016-11-30
通讯作者: 李劲涛，博士，副教授，硕士生导师，昆明医科大学基础医学院神经科学研究所，云南省昆明市 650500
作者简介:罗夙医，女，1983年生，云南省永善县人，2012年大理大学毕业，硕士，助教，主要从事微生物学教学及热带病学科研研究工作。
基金资助:
云南省科技厅-昆明医科大学联合专项科研基金面上项目(2015FB008)

Histopathological features of the rat ileum after Shigella flexneri infection

Luo Su-yi1, Wang Xi-yun2, Li Jin-tao3

1Department of Pathogen Biology and Immunology, School of Clinical Medicine, 2Department of Anesthesiology in 2012, 3Institute of Neuroscience, School of Clinical Medicine, Kunming Medical University, Kunming 650500, Yunnan Province, China

Received:2016-09-02 Online:2016-11-30 Published:2016-11-30
Contact: Li Jin-tao, M.D., Associate professor, Master’s supervisor, Institute of Neuroscience, School of Clinical Medicine, Kunming Medical University, Kunming 650500, Yunnan Province, China
About author:Luo Su-yi, Master, Teaching assistant, Department of Pathogen Biology and Immunology, School of Clinical Medicine, Kunming Medical University, Kunming 650500, Yunnan Province, China
Supported by:
the General Program of the Joint Research Foundation of Yunnan Provincial Ministry of Science and Technology-Kunming Medical University, No. 2015FB008

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
福氏志贺菌：福氏志贺菌(S.flexneri)属于人类细菌性痢疾病原菌，志贺菌属(Shigella)，俗称痢疾杆菌的一种。1989年由Shiga首先分离并以他命名。志贺菌属根据菌体O抗原分为四群40余血清型及亚型，即A、B、C、D四群。B群即福氏志贺菌，有13个血清型，各型之间有交叉反应。
病理学：是研究人体疾病发生的原因、发生机制、发展规律以及疾病过程中机体的形态结构、功能代谢变化和病变转归的一门基础医学科学。正因如此，病理学一直被视为是基础医学与临床医学之间的“桥梁学科”，充分表明了它在医学中不可替代的重要作用，这是由病理学的性质和任务所决定的。

摘要
背景：志贺氏菌属是引起细菌性痢疾的主要致病菌，细菌性痢疾是夏秋季节最常见的肠道传染病之一。
目的：分析福氏志贺菌感染大鼠回肠组织的病理学特征。
方法：同窝别清洁级SD雄性大鼠30只。随机分为非链霉素处理组、链霉素处理组、对照组，每组各10只。链霉素处理组50 g/L硫酸链霉素灌胃；非链霉素处理组用生理盐水灌胃；对照组不做任何处理。建立大鼠菌群紊乱模型后，非链霉素处理组、链霉素处理组用福氏志贺菌(9×108) CFU/mL灌胃建立大鼠痢疾模型，14 d后采用苏木精-伊红染色观察福氏志贺菌感染大鼠回肠组织的病理学特征。
结果与结论：①福氏志贺菌感染大鼠远端回肠和直肠出现典型的菌痢病变，表现为黏膜出血、水肿，中性粒细胞浸润，杯状细胞破坏、出血，并出现疾病特征性的假膜性炎：黏膜表层坏死，有大量纤维素渗出，后者与坏死组织、红细胞、白细胞等一起构成假膜；脱落后的肠黏膜，形成形状不一的溃疡，溃疡浅表，很少超过黏膜下层；②各组大鼠出现症状时间、福氏志贺菌攻击前后大鼠体温值及体质量差异无显著性意义(P > 0.05)；③结果说明，福氏志贺菌感染大鼠远端回肠和直肠租住出现菌痢典型的组织病理表现，可成功作为动物模型进行病因、发病机制和治疗等深入科研研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程
ORCID: 0000-0002-1661-9305(罗夙医)

关键词: 实验动物, 消化系统损伤与修复模型, 福氏志贺菌感染, 远端回肠, 直肠, 组织病理

Abstract:

BACKGROUND: Bacillary dysentery is one of the most common enteric infectious diseases in summer and autumn that is mainly caused by Shigella.
OBJECTIVE: To analyze the pathological features of the rat ileum after Shigella flexneri infection.
METHODS: Totally 30 male Sprague-Dawley rats were enrolled and equally randomized into three groups. Rats in non-streptomycin and streptomycin groups were firstly treated with normal saline and 50 g/L streptomycin sulphate via gastric lavage, and then given gastric lavage of 9×108 CFU/mL Shigella flexneri. Rats were given no any treatment as control group. 14 days later, morphological changes of the rat ileum were observed through hematoxylin-eosin staining.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) After Shigella flexneri infection, the rat distal ileum and rectum were characterized by mucosal edema and hemorrhage, neutrophilic granulocyte exudation, pseudomembrane formation and destruction of goblet cells with hemorrhage. There were obvious fibrin exudation on the necrotic mucosal surface that constituted the pseudomembrane with necrotic debris, leukocytes and erythrocytes. After mucosa defulvium, non-uniform and superficial ulcers were mainly visible at the mucosa. (2) The occurrence time of positive systems, temperature and body mass before and after Shigella flexneri infection showed no significant differences among rats (P > 0.05). (3) These results suggest that the rat distal ileum and rectum after Shigella flexneri infection present the characteristic morphological futures of bacillary dysentery; therefore, it can be used as the animal model to undergo in-depth research about the etiology, pathogenesis and treatment of bacillary dysentery.

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Key words: Shigella dysenteriae, Colon, Pathology, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

罗夙医，王玺赟，李劲涛. 培养福氏志贺菌感染大鼠回肠组织病理学的特点[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(49): 7411-7417.

Luo Su-yi, Wang Xi-yun, Li Jin-tao. Histopathological features of the rat ileum after Shigella flexneri infection[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(49): 7411-7417.

图/表（结果） 3

2.1 造模成功动物数量及过程实验选用大鼠30只，分为3组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。动物造模流程见图1。

2.2 模型创新性/材料、方法的改进既往研究中应用的模型通常采用豚鼠、新生小鼠、成年小鼠、猕猴、斑马鱼等动物。这些动物中，猕猴非常的昂贵，且饲养条件高。有的也易于获取及饲养，但是制作模型的方法非常的繁琐，多数模型需要手术的方法来复制，不需要手术方法复制的要么感染部位与临床不一致，要么感染途径和临床不一致，有的动物在建模过程中死亡。研究采用繁殖力强、饲养成本及动物购买成本较低的大鼠作为模型动物，以及通过灌胃建立模型，简化了操作，动物痛苦少，符合痢疾杆菌感染的途径^[16-17^，^25-26]。

2.3 模型更接近人类或临床实践/模型稳定性研究中30只SD大鼠随机分为3个组。在福氏志贺菌攻击后4d大鼠开始出现症状，到第7天除了个别大鼠外所有的大鼠都出现了症状。在病理切片中，大鼠回肠都出现了典型的痢疾病理表现，其重复性及稳定性较好。痢疾通过粪-口模式进行传播，研究建立的痢疾的大鼠模型，利用灌胃形式建立，更加符合人类痢疾传播的模式^[37]。研究成功的建立了SD大鼠的菌痢模型，不但提供了一个可用于研究痢疾发病机制、免疫原性和在大鼠痢疾攻击模型的经济、环保的模型，也为深入研究菌痢病因、发病机制、病理和有效治疗的奠定了坚实的基础。

2.4 大鼠症状观察所有处理组在攻击后第4天开始陆

续出现症状，第7天除个别大鼠外几乎所有大鼠都出现症状。表现为粪质较稀，其肛门处较湿润，被稀便覆盖。大鼠精神较往常萎靡，不再活跃，饮食变化不是太大，比对照组饮水量有所增加。

2.5 福氏志贺菌攻击大鼠前后体温、体质量观察各处理组大鼠在福氏痢疾杆菌攻击前后体温和体质量值经SPSS 17.0配对t 检验，其差异无显著性意义(P > 0.05)，见表1，2。

2.6 福氏志贺菌攻击大鼠后各组肠病理切片链霉素处理组，非链霉素处理组的大鼠远端结肠及直肠都出现典型的痢疾病变黏膜出血、水肿，中性粒细胞浸润，杯状细胞破坏、出血，出现本病特征性的假膜性炎(见图2，3)。脱落后的肠黏膜，形成形状不一的溃疡，溃疡浅表，很少超过黏膜下层。镜下可见，黏膜表层坏死，有大量纤维素渗出，后者与坏死组织、红细胞、白细胞等一起构成假膜。说明SD大鼠的痢疾模型建立成功。而正常对

照组，远端回肠和直肠肠黏膜组织粉红，未见炎性渗出、出血级脱落坏死组织，亦未见假膜形成的征象(见图4)。

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引言

志贺菌属(shigella)俗称痢疾杆菌，是一类具有高度的传染性及严重危害性的革兰阴性，无荚膜，无芽胞，无动力，兼性厌氧的短小杆状肠道致病菌。志贺菌属细菌有O、K两种抗原，根据生化及0抗原的差异可分为4个血清群：A 群为痢疾志贺菌(Shigella Santeria，有10个血清型；B群为福氏志贺菌(Shigella flexneri)，有13个血清型或亚型；C群为鲍氏志贺菌(Shigella boydii)，有18个血清型；D群为宋内志贺菌(Shigella sonnei)，只有1个血清型。大多数发展中国家以福氏志贺菌感染为主，占到60%。较其他的痢疾菌群更易流行。而在发达国家则以宋内志贺菌感染为主，占77%，福氏志贺菌仅占16%。

志贺氏菌属是引起细菌性痢疾的主要致病菌，细菌性痢疾是夏秋季节最常见的肠道传染病之一。痢疾杆菌的感染主要包括以下几个过程：①痢疾杆菌通过微皱褶细胞进入结肠黏膜；②定植的巨噬细胞吞噬痢疾杆菌后会发生凋亡，释放炎症因子，损害肠黏膜；③痢疾杆菌通过侵袭邻近的肠道上皮细胞，并在其内增殖、扩散，而导致黏膜损伤^[1-3]；④出现发热、脱水和便血等临床症状。菌痢的发病机制主要与志贺菌编码毒力蛋白的质粒有关，它编码合成的毒力质粒蛋白(Ipa)B、C、D 对志贺菌侵入肠上皮细胞至关重要^[4]。消除毒力质粒后志贺菌的致病力也随之消失。至今菌痢仍是一个主要的公共性卫生问题，年发病率很高，是发展中国家的重要的传染病之一。据统计发展中国家每年细菌性痢疾的发病例数为1.632亿左右，而其中69%的患者为5岁以下儿童^[5-6]。痢疾杆菌具有高度的感染性，100个菌体即可引起疾病，而其他肠道致病菌如伤寒至少需要1万个菌。其营养要求不高，在适宜的温度下在水及食物中可大量繁殖，极易引起水源及食物型的爆发流行。其中，中毒性菌痢的死亡率极高，每年全球约有60万人死于中毒性痢疾，而且某些地区患者数仍在增多。痢疾的危害远大于此，由于抗生素的滥用，临床上多耐药菌株的愈来愈多，这些多重耐药性均由耐药性质粒(R因子)所引起，R因子可使痢疾杆菌产生或加强破坏抗菌药物的酶系。其具有自主复制能力，并可在体内外或细菌种内或种外进行传递。由于细菌能够接受和传递耐药性基因，使其获得了同时对多种不同抗菌药物的耐药性，减少对抗菌药物联合应用的疗效，使痢疾的危害更加严重^[7-10]。

如前所述，虽然痢疾感染可以被抗生素治疗，但是痢疾的耐药，尤其是多重耐药正越来越严重，发展合适的疫苗不失为一个好的解决办法。目前，尚无合适的痢疾疫苗可以使用，缺乏合适的动物模型重现人类的志贺菌病是发展疫苗的一个严重的阻碍^[11]。已报道模型包括：小鼠、豚鼠、兔子、斑马鱼、恒河短尾猿、中国猕猴，甚至在人体身上也进行过尝试^[12]。痢疾的小鼠肺部模型，由于其感染的部位与临床上感染部位不同，且随后而来的支气管炎和致死性的肺炎而使其受到限制^[13-15]。Fernandez用鼻饲的方式新生鼠痢疾模型，其症状只是持续在新生鼠出生后4-7 d^[16-18]。豚鼠的肠炎模型通过灌肠复制，其操作也同样复杂。经典的豚鼠角膜炎模型的感染部位和小鼠痢疾肺部模型一样不在结肠部位^[19-21]。兔子肠袢模型操作十分的繁复也让它的应用受到了限制^[22-23]。非人灵长类猕猴对痢疾杆菌天然的敏感，可以作为很好的疫苗临床前评价模型，但是其高昂的费用及伦理问题使其的使用受到限制^[24-25]。斑马鱼幼鱼模型显然并不适合用于疫苗的研制，但是它在研究免疫系统功能及发展以及其与细菌相互作用上有突出的优势^[26]。

大鼠已广泛的应用于缺血再关注损伤、慢性胰腺炎等疾病^[27-28]，而关于痢疾的大鼠模型只有2两次报道都缺乏病理方面的研究^[29-31]。研究致力于设计一个用培养的福氏志贺菌液灌胃法建立的大鼠动物模型，研究其远端回肠及直肠的组织病理特点，可用于研究痢疾发病机理、病原菌免疫原性、有效治疗策略等，为临床菌痢的有效治疗开辟乐观的前景。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

材料方法

1.1 造模动物及材料

实验动物：同窝别清洁级SD雄性大鼠30只(No.53004100000104)，6-8周龄，体质量170-200 g，大鼠及饲料购自昆明医科大学实验动物中心。实验动物饲养于二级动物实验室，给予12 h光照及12 h黑夜交替。饲养1周以适应实验条件。每5只大鼠一个鼠笼，供给无菌水。大鼠随机分为非链霉素处理组、链霉素处理组、对照组，每组各10只。避免雄性大鼠群养打闹死伤，造成数据丢失，将每组10只大鼠分开饲养(5只1笼)。灌胃前饲养1周以适应环境。

实验材料：福氏痢疾杆菌2a 2457T 由军科院王恒梁博士馈赠并由本室保存。TSA培养基、TSB培养基均按操作说明由本实验室制备。

1.2 大鼠痢疾感染模型建立前菌群失调症状的产生链霉素处理组50 g/L硫酸链霉素灌胃；非链霉素处理组：用生理盐水灌胃；对照组：不做任何处理。灌胃前给予大鼠10%水合氯醛腹腔注射麻醉(3 mL/kg)处理时间每日1次^[33]，共3 d。凡有体质量减轻、毛发竖立、食量下降、活动减少、反应不灵活和/或大便形状改变均算发病^[30]。链霉素处理组在链霉素灌胃的第2日陆续出现菌群失调的症状，到第5日除了所有实验组大鼠都出现菌群了菌群失调的症状。

1.3 大鼠痢疾感染模型的建立

1.3.1 福氏志贺菌的培养及大鼠灌胃液配置 ①从-70 ℃冰箱取出保存的福氏志贺菌菌种，在室温下复苏30 min；②于生物安全柜内，无菌操作下，用接种环挑取菌种，分区划线接种于刚果红TSB固体培养基中，置于37 ℃隔水恒温培养箱中培养24 h；③24 h后，于生物安全柜内，用无菌镊子夹取灭菌牙签，挑取一个红色的菌落于500 mL的TSA液体培养基中。37 ℃，180 r/min恒温振荡培养24 h；④将培养好的菌液放入50 mL离心管4 000 r/min离心收集菌体沉淀；⑤用生理盐水将福氏痢疾杆菌浓度调制为(9×10⁸) CFU/mL。

1.3.2 大鼠灌胃建立了菌群失调模型后，非链霉素处理组、链霉素处理组，以每只9×10⁸CFU/mL的福氏志贺菌1 mL的量，用16号灌胃针于每日上午8时，于大鼠空腹状态10%水合氯醛腹腔注射麻醉后(3 mL/kg)给大鼠灌胃，共4 d^[31-33]。

1.3.3 造模成功检测标准攻击后的动物，每天定时观察2次粪便性质、体温、呼吸频率的改变，饮食摄取的改变和其他任何不正常的行为。体温在通过红外线体温计法，分别于攻击后头7 d，然后第14天测量^[30]。大鼠从第4天开始出现细菌性痢疾的症状，到第7天几乎所有经福氏志贺菌攻击的大鼠均出现了细菌性痢疾的症状，视为造模成功^[33]。

1.4 组织病理学检查操作待出现症状之后，大鼠禁食24 h，自由进水。准备下一步病理切片实验。

1.4.1 大鼠肠段获取 ①14 d后，10%水合氯醛大鼠腹腔注射后(3 mL/kg)将大鼠离颈处死，称质量^[34]；②将大鼠泡入体积分数75%乙醇中1 min消毒；③将消完毒的大鼠放入解剖盘剖开大鼠腹部，剪取大鼠的远端回肠，将剪取的肠断从中剖开。用回形针固定于硬纸板。做好标记后放入装有10%甲醛溶液的容器中固定至少7 h，备用；④在剪取肠断的同时，剪取大鼠的脾脏及胸腺并称质量、记录。

1.4.2 苏木精-伊红染色及石蜡切片制作

取材与固定：①从已固定过的大鼠远端结肠及直肠上切取下组织块(厚度约0.5 cm)；②投入体积分数10%甲醛溶液中，防止细胞死后自溶或细菌分解组织，保持细胞原来的形态结构，以便观察。

脱水并透明：①用高浓度乙醇作为脱水剂，乙醇梯度由低到高分别为体积分数50%，75%，80%， 95%，逐渐脱去组织块中的水分；②将脱完水的组织块置于透明剂二甲苯中透明，用二甲苯替换出组织块中的乙醇。

浸蜡包埋：①通过二甲苯透明后的组织块放入溶化的石蜡中，该容器需要在溶蜡箱中保温，石蜡完全浸透组织块后再进行包埋；②将已融化的石蜡倒进制备好的容器，在石蜡凝固之前立即夹取已浸透石蜡的组织块放入容器。待包埋好的组织块冷却凝固变硬成块。

切片和贴片：①将包埋变硬的蜡块固定于切片机上切成薄片，厚度一般为5-8 μm；②将切下发皱的薄片放到加热好的水中烫平后贴到载玻片上，放入50 ℃恒温箱中烘干。

脱蜡及苏木精-伊红染色：染色前切片中的石蜡用二甲苯除去，再经由梯度体积分数为95%，80%，75%的乙醇，从高浓度至低浓度除去二甲苯(因二甲苯溶于乙醇)，再放入蒸馏水漂去乙醇。①将在蒸馏水中漂洗后的切片放入苏木精水溶液中染色，时间5 min；②苏木精染色的切片放入酸水中数秒再放入氨水中数秒，进行分色；③分好色的切片用自来水冲洗1 h后放入蒸馏水中片刻；④在体积分数70%的乙醇中脱水10 min后再放入体积分数90%的乙醇中脱水10 min；⑤脱水后的切片放入伊红染色液2.0-3.0 min。

脱水及透明：纯乙醇脱去染色后切片中的水分后再用二甲苯使切片透明。

封固：将加拿大树胶滴在已透明的切片并盖上盖玻片进行封固。树胶变干之后贴上识别标笺。

1.5 主要观察指标大鼠回肠上皮黏膜损害，细胞浸润(淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞)，显著的组织损害(坏死、水肿、腺窝改变脓肿、溃疡形成)，杯状细胞损害^[35-36]。

1.6 统计学分析利用SPSS软件17.0对数据进行处理。福氏志贺菌攻击大鼠前后体温、体质量及链霉素处理或不处理后福氏志贺菌攻击大鼠后出现症状的时间值用配对t 检验进行处理。检验水准，α=0.05。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

讨论

痢疾志贺菌是引起细菌性痢疾或志贺菌病的重要病原菌。其自然宿主仅限于人类和灵长类动物，通过粪口途径传播。痢疾杆菌通过污染的食物和水而存活，极低的剂量即可导致感染(10-100个活菌)。志贺菌病开始于消化道的急性感染，紧接着细菌入侵结肠黏膜，导致肠痉挛、发热、腹泻等症状。志贺菌病是个全球性的感染性疾病，尤其在缺乏卫生设施以及清洁水源的地方传播十分迅速^[38]。本病急性期一般数日即愈，少数患者病情迁延不愈，发展成为慢性菌痢，可以反复发作。广泛的使用安全有效的志贺菌疫苗长期以来一直被认为是抵御自然发生的痢疾感染的令人满意的策略。发展安全有效的疫苗一直是高度公众健康的首要问题。在痢疾给人类带来巨大危害，抗生素治疗乏力并且现有疫苗不可用的前提下，研究致力于设计建立一个可用于研究痢疾发病机制、免疫原性和在大鼠痢疾攻击模型中的保护力的大鼠动物模型。该模型造模方法规范，按照国际惯例给予动物灌胃的方式进行造模，并在造模时给予动物麻醉^[39]。

但研究中，攻击的痢疾杆菌的量为9×10⁹CFU，虽比以往常用的量有所增加(在小鼠模型中采用5×10⁹CFU，猕猴或恒河短尾猿仅需要1或2×10¹¹ CFU即能引出典型的临床症状)，大部分实验鼠未出现粘液脓血便的临床表现，只是表现为粪质较稀，精神萎靡，无发热但进水增多。在攻击剂量及性别差异上需要做进一步的研究。与大鼠非痢疾杆菌的天然宿主且肠比较短，在肠派伊尔淋巴结中繁殖的细菌数量有限，其释放的毒素未能引起相应的临床症状有关。研究中，链霉素处理组比未用链霉素处理而直接用菌株攻击的大鼠提前出现症状的时间，差异无显著性意义(P > 0.05)，未表现出链霉素进行处理后发生菌群失调的大鼠更易感染细菌性痢疾的结果。同时也说明，不经过菌群失调处理同样也能攻击诱导出相同的病理学改变及临床症状。

之前的研究用从急性细菌性痢疾患者鉴定的人类细菌性痢疾直肠病理组织学特征评估模型^[40]。主要的人类典型的志贺菌病组织学特征显示显著的肠上皮黏膜损害，细胞浸润(淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞)，显著的组织损害(坏死、水肿、腺窝改变、溃疡形成)，杯状细胞损害以及水样腹泻。志贺菌病患者直肠活组织检查显示上皮增生、组织破坏。本研究中大鼠模型也出现了同样的病理改变。在研究中，30只SD大鼠随机分为3个组。在福氏志贺菌攻击后四天大鼠开始出现症状，到第7天除了个别大鼠外所有的大鼠都出现了症状。在病理切片中，大鼠回肠都出现了典型的痢疾病理表现，其重复性及稳定性较好。痢疾通过粪-口模式进行传播，研究建立的痢疾的大鼠模型，利用灌胃形式建立，更加符合人类痢疾传播的模式^[38]。研究成功的建立了SD大鼠的菌痢模型，不但提供了一个可用于研究痢疾发病机制、免疫原性和在大鼠痢疾攻击模型的经济、环保的模型，也为深入研究菌痢病因、发病机制、病理和有效治疗的奠定了坚实的基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

培养福氏志贺菌感染大鼠回肠组织病理学的特点

Histopathological features of the rat ileum after Shigella flexneri infection

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