利塞膦酸钠干预骨质疏松模型大鼠髁突软骨Bcl-2、Bax及Caspase3的表达

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.27.003

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (27): 3970-3976.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.27.003

• 骨及关节损伤动物模型 Animal models of bone and joint injuries • 上一篇下一篇

利塞膦酸钠干预骨质疏松模型大鼠髁突软骨Bcl-2、Bax及Caspase3的表达

周琦²，魏立²，江莉婷^1，3，李宁¹，高益鸣¹

1上海交通大学医学院附属瑞金医院口腔科，上海市 200025
2上海市伤骨科研究所，上海市 200025
3上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔修复科，上海市口腔医学重点实验室，上海市 200011

修回日期:2016-04-06 出版日期:2016-06-30 发布日期:2016-06-30
通讯作者: 高益鸣，主任医师，上海交通大学医学院附属瑞金医院口腔科，上海市 200025
作者简介:周琦，女，1980年生，浙江省慈溪市人，汉族，主管技师，主要从事软骨组织凋亡及相关蛋白表达的研究。并列第一作者：魏立，女，1982年生，上海市人，汉族，技师，主要从事软骨细胞凋亡及其信号通路的研究。
基金资助:
上海高校教师产学研践习计划

Effects of bisphosphonates on the expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in condylar cartilage of osteoporosis rats

Zhou Qi², Wei Li², Jiang Li-ting^1,3, Li Ning¹, Gao Yi-ming¹

1Department of Stomatology, Ruijin Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200025, China
2Shanghai Institute of Traumatology and Orthopaedics, Shanghai 200025, China
3Department of Prosthodontics, Ninth People’s Hospital Affiliated to School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai Key Laboratory of Stomatology, Shanghai 200011, China

Revised:2016-04-06 Online:2016-06-30 Published:2016-06-30
Contact: Gao Yi-ming, Chief physician, Department of Stomatology, Ruijin Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200025, China
About author:Zhou Qi, Technician- in-charge, Shanghai Institute of Traumatology and Orthopaedics, Shanghai 200025, China Wei Li, Technician, Shanghai Institute of Traumatology and Orthopaedics, Shanghai 200025, China Zhou Qi and Wei Li contributed equally to this paper.
Supported by:
the Plan Learning and Research Practice of University Teachers in Shanghai City

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
骨质疏松：是多种原因引起的一组骨病，以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病变。在多数骨质疏松中，骨组织的减少主要由于骨质吸收增多所致，以骨骼疼痛、易于骨折为特征。
二膦酸盐：是一类传统的骨吸收抑制剂，被广泛用于骨质疏松等骨代谢性疾病，在治疗骨质疏松时，二膦酸盐可减少高骨转换，对破骨细胞活性有直接抑制作用，引起这些细胞凋亡。

摘要
背景：二膦酸盐是一类传统的抗骨吸收药物，影响软骨组织的生长发育，目前大多数研究集中在其对长骨关节软骨的影响，而其对髁突软骨效应如何尚未完全清楚。
目的：观察第3代二膦酸盐类药物利塞膦酸钠对骨质疏松模型大鼠髁突软骨抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax、促凋亡蛋白Caspase3表达的影响。
方法：将30只雌性SD大鼠随机分为3组，假手术组术中暴露卵巢但不切除；模型组切除双侧卵巢，制备骨质疏松模型，并于造模前3 d皮下注射生理盐水2.4 μg/kg，1次/d，以后每隔3 d注射1次；治疗组切除双侧卵巢，制备骨质疏松模型，并于造模前3 d皮下注射利塞膦酸钠2.4 μg/kg，以后每隔3 d注射1次。造模后3个月取髁突软骨，观察细胞凋亡、Bcl-2、Bax及Caspase3的表达。
结果与结论：①髁突软骨细胞凋亡：假手术组<治疗组<模型组(P均< 0.05)。②Bcl-2表达：模型组较假手术组略降低，但差异无显著性意义，治疗组高于模型组(P < 0.05)。③Bax及Caspase3表达：模型组Bax及Caspase3表达高于假手术组(P均< 0.05)，治疗组Bax及Caspase3表达低于模型组(P均< 0.05)。结果表明利塞膦酸钠可通过改变骨质疏松大鼠髁突软骨内Bcl-2、Bax及Caspase3表达调控髁突软骨细胞的凋亡。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程
ORCID: 0000-0002-5502-3248(高益鸣)

关键词: 实验动物, 骨软骨损伤与修复动物模型, 二膦酸盐, 骨质疏松, 去卵巢, 下颌骨髁突软骨, TUNEL, Bcl-2, Bax, Caspase3

Abstract:

BACKGROUND: Bisphosphonates are a kind of traditional antiresorptive drugs, which may influence the growth and development of cartilage tissue. In recent years, there are many data describing how bisphosphonates affect joint cartilage of long bone, but their effects on condylar cartilage remain unclear.
OBJECTIVE: To clarify the effects of the third-generation bisphosphonate risedonate on the expression of Bcl-2 (anti-apoptotic), Bax (pro-apoptotic) and caspase-3 in the condylar cartilage of osteoporosis rats.
METHODS: Thirty female Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups. In the sham operation group, ovary was exposed but not resected. The model group received a bilateral ovariectomy to establish the models of osteoporosis, and then received saline solution treatment (2.4 μg/kg) subcutaneously every 3 days, once a day, from 3 days pre-surgery. The treatment group received a bilateral ovariectomy to establish the models of osteoporosis, and then received risedronate treatment (2.4 μg/kg) subcutaneously every 3 days from 3 days pre-surgery. Three months after the operation, the condylar cartilages of all animals were harvested. Apoptosis, the expression of Bcl-2, BAX and Caspase3 were observed.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The number of apoptotic cells in rat condylar cartilage and subcondylar region: the sham operation group < the treatment group < the model group (all P < 0.05). (2) Expression of Bcl-2: The trend of the model group was lower than that in the sham operation group, although there was no statistically significant difference between the two groups; Bcl-2 expression in the treatment group was statistically higher compared to the model group (P < 0.05). (3) Expression of Bax and Caspase-3: The expression levels of Bax and Caspase-3 were higher in the model group than in the sham operation group (all P < 0.05), while Bax and Caspase-3 expression was lower in the treatment group than that in the model group (all P < 0.05). The results suggested that bisphophonates can regulate apoptosis in condylar cartilage from osteoporosis rats by changing the expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

Key words: Bisphosphonates, Osteoporosis, Animals, Laboratory

中图分类号:

R318

周琦，魏立，江莉婷，李宁，高益鸣. 利塞膦酸钠干预骨质疏松模型大鼠髁突软骨Bcl-2、Bax及Caspase3的表达[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(27): 3970-3976.

Zhou Qi, Wei Li, Jiang Li-ting, Li Ning, Gao Yi-ming. Effects of bisphosphonates on the expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in condylar cartilage of osteoporosis rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(27): 3970-3976.

图/表（结果） 1

2.1 实验动物数量分析及造模成功的验证 30只大鼠均进入结果分析，无脱失值。与假手术组骨密度(406.89± 15.64) g/L相比，模型组骨密度(299.17±15.30) g/L明显降低(P < 0.05)，提示骨质疏松造模成功。

2.2 各组大鼠髁突软骨TUNEL染色结果 Ikeda等^[1]将髁突软骨分成4层：纤维层、增殖细胞层、软骨细胞层、肥大软骨细胞层。TUNEL染色显示，假手术组髁突软骨中凋亡细胞多位于软骨细胞层及肥大层，软骨下骨组织中也可见凋亡的骨细胞散在分布；模型组凋亡细胞可见于增殖层、软骨细胞层及肥大软骨细胞层，在软骨下骨骨细胞中的分布也增多；治疗组凋亡细胞散在分布于软骨细胞层与肥大层；模型组髁突软骨及软骨下骨凋亡细胞较假手术组显著增多(P < 0.01)，治疗组髁突软骨与软骨下骨凋亡细胞数较模型组减少( P < 0.05)，见图1。

2.3 各组髁突软骨及软骨下骨Bcl-2、Bax、Caspase3分布及表达情况 免疫组织化学染色结果显示，Bcl-2表达多位于各组髁突软骨增殖层、软骨细胞层中，肥大层亦可见其表达，免疫反应定位于细胞质中(图2)；Bax多位于各组髁突软骨细胞层、肥大层浅层及胞外基质中，棕黄色颗粒多定位于细胞质中(图2)；Caspase3表达可见于各组髁突软骨细胞层、肥大层浅层，多定位于细胞质中(图3)，胞核几乎不染色，在模型组增殖层亦可见Capase3表达。

模型组Bax蛋白表达较假手术组显著升高(P < 0.05)，治疗组Bax蛋白表达较模型组下调(P < 0.05)；模型组Bcl-2蛋白较假手术组略有增多，但差异无显著性意义；治疗组Bcl-2蛋白表达较模型组显著上调(P < 0.05)，且Bcl-2/Bax相对表达量比值较模型组显著升高(P < 0.05)；模型组Caspase3蛋白表达最显著(P < 0.05)，在软骨细胞层及肥大层显著表达，而在假手术组和治疗组仅可见少量表达，见图4。

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引言

髁突软骨作为重要的生长位点，不仅影响着下颌支长度，也影响着上下颌骨的位置关系，因此髁突软骨的生长发育对于整个下颌骨及咬合关系的建立有着重要作用^[1]。近些年，对于髁突生长调控的相关研究日益增多^[1]。二膦酸盐是一类传统的骨吸收抑制剂，被广泛用于骨质疏松等骨代谢性疾病，在治疗骨质疏松时，二膦酸盐可减少高骨转换，对破骨细胞活性有直接抑制作用，引起这些细胞凋亡^[2]。此外，正常骨骼稳态由破骨细胞介导的骨吸收和成骨细胞介导的新骨沉积相平衡而组成，当骨吸收速率减少时，骨体积及组织矿化水平增加，这会破坏关节软骨下骨骨改建^[3]，因此，二膦酸盐也调控着骨与软骨基质的合成，这使其不仅可用于治疗骨代谢性疾病，近年来也被用于在生长调控方面^[4]。

由于软骨组织没有血管支持，因此可对抗吸收与改建，尽管有时这种改建发生在病理状态，如过负荷或炎症。软骨的吸收由基质酶及破软骨细胞介导，后者与破骨细胞有相同的来源与形态，因此认为二膦酸盐影响软骨组织的生长发育，然而大多数研究集中在长骨的关节软骨上^[3-5]，而其对髁突软骨的效应又是如何？相关的研究知之甚少。

髁突软骨的发育依赖各类转录因子、生长因子、信号分子及其他发育相关的因子。在发育过程中，细胞增殖与细胞死亡之间的内稳态平衡是发育最基本的过程之一。程序性细胞死亡(如凋亡)在其中发挥了重要的作用。凋亡可见于哺乳动物生长发育过程的各个阶段，包括胚胎发育期、正常组织代谢及内环境稳态维持^[5]，形态学上表现为细胞核及胞浆的浓聚，凋亡小体的出现。凋亡主要有两种机制激活：其一为线粒体介导的内源性途径，其二为细胞膜上死亡信号受体介导的外源性信号通路，如肿瘤坏死因子受体超家族和Fas配基^[6-7]。凋亡的细胞死亡最终由一组Caspases蛋白完成，Caspases(半胱氨酸-包含天冬氨酸特异性蛋白酶)是一类具有切割蛋白作用的酶，导致细胞结构崩解，包括始动因子( Caspase2、8、9)和执行因子( Caspase 3、6、7)^[8]，一旦Caspase3被激活，细胞死亡将不可被逆转^[4]。

Bcl-2家族蛋白在凋亡的线粒体通路中至关重要，其家族成员陆续被研究证实：包括抑制凋亡的蛋白(Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-2、Mcl-1)和促凋亡蛋白(Bax、Bik、Bad、Bcl-xs)。在bcl-2基因敲除小鼠可见长骨成骨细胞数量的增加，成骨细胞形态改变及胶原沉积错乱^[9]，而体外实验证实，Bcl-2蛋白过表达促进成骨细胞的黏附与分化，但会延缓骨矿化^[6]。目前大部分的研究集中在长骨的生长板及关节软骨的软骨膜内成骨过程^[10]，包括凋亡因子bcl-2、bax、hsp70、Caspase3的研究^[11-12]。在骨质疏松状态下及二膦酸盐药物治疗期间，髁突软骨相关的促凋亡、抑凋亡因子的研究尚未见报道。因此，实验采用切除双侧卵巢诱导绝经后骨质疏松大鼠模型，通过TUNEL染色观察髁突软骨与软骨下骨的细胞凋亡情况，以及免疫组化观察髁突软骨内抗凋亡(Bcl-2)和促凋亡(Bax)蛋白、Caspase3在不同状态下髁突软骨内的分布以及表达情况，探究二膦酸盐对去势骨质疏松大鼠髁突软骨凋亡的影响。

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材料方法

1.1 造模动物及材料

实验动物：选用6月龄雌性SD大鼠30只，体质量290-320 g，购自中科院上海斯莱克实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK(沪)2012-0002，使用许可证号：SYXK(沪)2011-0113。实验过程中对动物的处置参照国家科学技术部2006年发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。

试剂与仪器：利塞膦酸钠( Procter & Gamble, P&G，美国)；TUNEL试剂盒( Roche，德国)；Bcl-2抗体、Bax抗体( abcam，美国)；Caspase3抗体( millipore，美国)；microCT( GE Locus SP，美国)；光学显微镜( Carl Zeiss，Germany)。

1.2 造模及干预方法 实验动物自由饮水，标准块状饲料适应性喂养1周。将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组，每组10只。模型组、治疗组腹腔注射2.5%戊巴比妥钠(40 mg/kg)进行麻醉，取背侧髂嵴顶部上方、腰椎骶嵴肌两侧行2 cm纵行切口，分离两侧椎旁肌肉组织，切开腹膜，暴露双侧卵巢，于两侧卵巢和子宫交界处分别用丝线结扎并将卵巢切除，治疗组造模前3 d皮下注射利塞膦酸钠2.4 μg/kg，1次/d，以后每隔3 d注射1次^[13]，模型组造模前3 d皮下注射等量生理盐水，以后每隔3 d注射1次；假手术组手术操作同上，但仅切除卵巢周围部分脂肪组织，不切除卵巢，随后逐层缝合肌肉皮肤。各组动物于术后3个月取材。实验条件为室温维持在22 ℃，相对湿度40%，并严格保持12 h：12 h昼夜循环规律，饲养周期为12周^[14]。

1.3 造模成功标准 处死动物后，取右侧股骨用microCT测量骨矿物质密度。

1.4 主要观察指标

髁突软骨常规组织切片的制备：取各组髁突软骨新鲜标本，在40 g/L多聚甲醛固定24-48 h，钙螯和剂10% EDTA-Na2盐脱钙二三周，待标本能用大头针刺入即可。脱钙后，将标本一起放入组织盒流水冲洗6-8 h，常规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡透蜡，常规石蜡包埋，取各时间阶段软骨蜡块作矢状方向连续切片，切片厚 5 μm，贴片，37 ℃烘烤4 h后干燥备用。

Bcl-2、Bax及Caspase3免疫组化染色：采用ABC法检测，石蜡切片脱蜡至水，微波修复抗原，体积分数3%H₂O₂室温20 min阻断内源性过氧化酶。滴加一抗 4 ℃孵育过夜，一抗稀释比例Bcl-2 1∶100，Bax 1∶100，Caspase3 1∶200，阴性对照以PBS代替一抗。滴加生物素标记的二抗室温孵育1 h，滴加辣根酶标记的链酶亲和素，DAB显色，苏木精衬染。

TUNEL染色：即末端脱氧核苷酸(TdT)介导的dUTP-X切口末端标记(terminal deoxyribonucleotidyl transferase-mediated dUTP-X nick end labeling, TUNEL)，石蜡组织切片用PBS冲洗2次，使样品周围区域变干。加入50 μL TUNEL反应混和液于样品上(注意：阴性对照加入50 μL标记溶液，确保TUNEL反应混和液均匀分布于单层细胞上，避免蒸发丢失)。在湿盒暗室中加盖孵育60 min，37 ℃(孵育时样品上应覆盖Parafilm石蜡封口膜或盖片)。用PBS冲洗3次，可在样品上加入1滴PBS，于荧光显微镜下观察，激发光波长450-500 nm，在515-565 nm(绿色)范围类检测。使样品周围区域变干，加入50 μL转化-POD于样品上(注意：确保转化- POD溶液均匀分布于单层细胞上，避免蒸发丢失)。在湿盒中孵育30 min，37 ℃(孵育时样品上应覆盖Parafilm石蜡封口膜或盖片)。用PBS冲洗3次，加入50-100 μL DAB底物或POD替代底物，于15-25 ℃孵育10 min，用PBS冲洗3次，用玻璃盖玻片封固(用PBS/甘油)，光镜下检查。

1.5 统计学分析 显微镜图像采集后，用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行图像分析，参照Ikeda等^[1]的测量方法，免疫组织化学图像以髁突顶软骨(中区)内阳性信号强度的累积吸光度为参数，分别对各组软骨中区、后区、软骨下骨进行半定量测量。所有数据采用均数±标准误表示，用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，两组间比较采用独立样本t 检验，多组间比较用单因素方差分析( ANOVA)，P < 0.05表示差异有显著性意义。

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讨论

髁突软骨表层被覆着纤维间充质组织，位于纤维层中的成纤维细胞样细胞分化为增殖层中的软骨细胞并不断增殖，分化为肥大层中的肥大软骨细胞，以及分泌软骨基质，参与了髁突软骨膜内骨化的过程^[15-16]，当软骨钙化基质被吸收，肥大层大部分基质崩解，为后续血管侵入提供了空间。此后，骨髓干细胞分化为成骨细胞，在肥大层下方成骨^[17-18]，这些过程受到多种因素调控，如机械刺激、全身激素水平及各类生长因子。

绝经后的骨质疏松会引起大量骨细胞凋亡，导致骨丧失，随着二膦酸盐药物应用于临床，在治疗骨质疏松防止骨质流失方面取得了显着效果^[19-20]。不同的二膦酸盐药物有许多相似的效应，如提高骨矿化密度、减少破骨细胞活性、减少骨细胞凋亡。在动物学模型中，去卵巢大鼠能够很好地模拟人类绝经后骨质疏松状态，如骨转换的增加，表现为骨吸收大于骨形成，松质骨量较皮质骨更显著的减少及对药物治疗产生与人类似的骨骼效应，因此被广泛使用^[7]。实验选用6月龄雌性SD大鼠，去卵巢3个月后microCT证实发生骨质疏松，与既往研究结果一致。

然而研究表明，二膦酸盐药物对于矿化区域有骨位点特异性改变^[8]，对胫骨、股骨的皮质骨及松质骨、下颌骨髁突有着区域性矿化差异^[3]。

3.1 二膦酸盐对髁突软骨细胞凋亡的影响 无论是生理性还是病理性状态下的细胞死亡都分为3种方式：凋亡、细胞自吞噬死亡、坏死。与坏死方式不同，凋亡或自吞噬过程的死亡，其细胞质膜是完整的，细胞体可以无炎症地完全被清除^[21]，在凋亡过程中，会激活一些DNA内切酶，此后核小体DNA降解，形成含100-200 bp碱基对的DNA片段，在凝胶电泳中能够观察到细胞凋亡特有的梯状条带，此时，暴露的DNA末端可利用TUNEL方法检测到，这就是TUNEL检测细胞凋亡的原理^[22]。TUNEL阳性细胞与凋亡细胞数量及细胞从死亡位点清除所需要的时间有关。

高骨改建速率会增加骨细胞的凋亡，研究发现当雌激素水平下降，在去卵巢术后2周即可见骨细胞凋亡显著增加^[23-26]，药物对Caspase活性的抑制被认为不仅防止了凋亡骨细胞的增加，也防止去卵巢引起的骨膜内骨吸收增加^[22]。实验显示，假手术组髁突软骨中凋亡细胞多位于软骨细胞层及肥大层，软骨下骨组织中也可见凋亡的骨细胞散在分布，模型组髁突软骨及软骨下骨凋亡细胞较假手术组显著增多，而治疗组髁突软骨与软骨下骨凋亡细胞数较模型组减少，提示了雌激素水平下降，骨转换速率增加，增加了髁突软骨细胞及软骨下骨骨细胞的凋亡，而高剂量利塞膦酸钠的短期使用，可部分对抗髁突软骨细胞及软骨下骨骨细胞的凋亡。

3.2 二膦酸盐对髁突软骨凋亡调控的可能信号途径 凋亡过程可以由不同的途径激活：一种是通过细胞色素C从线粒体释放的内源性途径，一种是通过死亡受体的配基激活的外源性途径^[27]。在这些途径中，抑凋亡蛋白Bcl-2及Bcl-XL抑制细胞色素C从线粒体释放，而促凋亡蛋白Bax、Bak、Bid促细胞色素C从线粒体释放，释放的细胞色素C与dATP连接到凋亡蛋白酶激活受体形成复合体共同激活Caspase家族蛋白，完成整个凋亡过程^[28]，既往研究表明，Bcl-2、Bax^[27]、Caspases3等蛋白介导的凋亡，在正常髁突软骨或者颞下颌关节紊乱等病理性疾病时发挥了重要作用^[5]。

髁突软骨主要有软骨细胞及胞外基质组成，胞外基质包括蛋白聚糖、Ⅰ型、Ⅱ型胶原在内的胶原纤维^[10]。细胞凋亡参与了下颌髁突软骨发育的重要过程，维持软骨内环境的稳定。软骨细胞增殖与凋亡信号的平衡，协调了软骨生长及适应性改建。Rundle等^[29]在比较Bax基因敲除以及野生型小鼠股骨骨折愈合过程时发现，Bax缺失的骨折端肥大软骨层以及前肥大软骨细胞、肥大软骨细胞增多，表明促凋亡基因Bax在调控软骨细胞增殖及凋亡有重要作用，并且可能通过PI3K-Akt信号通路及Caspases的激活来介导软骨细胞的凋亡。

实验免疫组织化学结果显示，无论是正常成年大鼠还是骨质疏松状态下的大鼠，其髁突软骨均检测到了Bcl-2、Bax及Caspase3的表达：Bcl-2在各组髁突软骨增殖层、软骨细胞层中表达最强烈，肥大层表达减少，而TUNEL阳性细胞多位于肥大层，提示Bcl-2蛋白与细胞生存及其特殊性功能有关。与此相对应，作者发现各组Bax蛋白的表达主要位于软骨细胞层与肥大层，在骨质疏松等病理状态下，Bcl-2及Bax表达的改变提示这些蛋白参与调控髁突软骨细胞的生存与凋亡过程。

通常认为Caspase3可以通过受体介导的外源性信号通路被Caspase 8激活，亦可通过内源性信号通路被Caspase 9等其他因子激活^[4]。

在实验中发现，正常成年雌性大鼠髁突软骨仅表达少量的Caspase3蛋白，而一旦雌激素水平下降，发生骨质疏松后，模型组较假手术组Bcl-2蛋白表达下调，Bax蛋白上调，从而Bcl-2/Bax比值较假手术组下降，而Caspase3蛋白表达显著增加，并伴随髁突软骨以及软骨下骨凋亡细胞的增多，当给予利塞膦酸钠3个月后，治疗组较模型组Bcl-2表达显著上调，Bax表达上调，从而Bcl-2/Bax比值较模型组显著升高，Caspase3蛋白表达下调，凋亡细胞也相应减少，提示二膦酸盐药物治疗后，通过Bcl-2/Bax及Caspase3信号途径参与了骨质疏松状态下髁突软骨细胞凋亡的调控。此外，不同剂量二膦酸盐在不同生理病理状态下的大鼠可能会产生不同的效应，且细胞凋亡可能伴随着不同信号途径同时存在，因此相应的后续研究还有待进一步开展。中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

利塞膦酸钠干预骨质疏松模型大鼠髁突软骨Bcl-2、Bax及Caspase3的表达

Effects of bisphosphonates on the expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in condylar cartilage of osteoporosis rats

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