附子理中汤及拆方干预脾阳虚模型大鼠

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.15.012

中国组织工程研究

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附子理中汤及拆方干预脾阳虚模型大鼠

唐汉庆，黄岑汉，黄赞松，黄秀峰

右江民族医学院，广西壮族自治区百色市 533000

收稿日期:2011-05-03 修回日期:2012-08-21 出版日期:2013-04-09 发布日期:2013-04-09
通讯作者: 黄岑汉，教授，右江民族医学院，广西壮族自治区百色市 533000hchgx@sina.com
作者简介:唐汉庆☆，男，1976年生，广西壮族自治区合浦县人，汉族，2010年北京中医药大学毕业，博士，副教授，主要从事中西医结合医学人类学的研究工作。 phdtanghanqing@163.com
基金资助:
广西高等学校优秀人才资助计划(广西教育厅：桂教人[2011]40号)。广西教育厅科研立项项目(201106LX443)。

Fuzi Lizhong Decoction and its disassembled prescriptions for rats with spleen-yang deficiency syndrome

Tang Han-qing, Huang Cen-han, Huang Zan-song, Huang Xiu-feng

Youjiang Medical university for Nationalities, Baise 533000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China

Received:2011-05-03 Revised:2012-08-21 Online:2013-04-09 Published:2013-04-09
Contact: Huang Cen-han, Professor, Youjiang Medical university for Nationalities, Baise 533000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China hchgx@sina.com
About author:Tang Han-qing☆, Doctor, Associate professor, Youjiang Medical university for Nationalities, Baise 533000, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China phdtanghanqing@163.com
Supported by:
the Program for Excellent Talents in Guangxi Higher Education Institutions. No. [2011]40*; Scientific Research Program of Guangxi Education Department, No. 201106LX443*

摘要/Abstract

摘要：

背景：中药复方多具有“双向调节”、“纠正偏性”从而恢复机体平衡的药效特点，实验拟采用附子理中汤及其拆方为干预药物，验证附子理中汤对脾阳虚证具有最佳的“温阳健脾”效果，为进一步了解附子理中汤多节点起效的机制提供基础资料。
目的：以转化医学思维为指导观察附子理中汤及拆方对脾阳虚模型大鼠的药效。
方法：采用肩胛间棕色脂肪切除术+高脂饲料喂养+隔日寒冷环境刺激的复合因素造模法制备脾阳虚Wistar大鼠模型，造模后第70天分别灌胃附子理中汤、理中汤和附子干姜汤；对照组不造模，喂饲普通饲料，测量各组大鼠体质量、肛温和肛温温度曲线下面积。
结果与结论：模型组大鼠体质量增长最慢，其余给药3组体质量增长较快，又以附子组增长最明显，与模型组比较，差异有显著性意义(P < 0.05)。模型组大鼠肛温均低于其余4组，与对照组比较，差异有显著性意义(P < 0.05)。附子组大鼠肛温升高明显，与模型组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。模型组大鼠的肛温温度曲线下面积低于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)。附子组、理中组、附姜组大鼠的肛温温度曲线下面积高于模型组，差异有显著性意义(P < 0.05或P < 0.01)。结果可见附子理中汤以及拆方理中汤和附子干姜汤均能纠正脾阳虚大鼠脾失健运导致体质量减少或增长缓慢和脾失温煦导致体温低的病理状态，以附子理中汤的效果较好。

关键词: 组织构建, 组织构建实验造模, 附子理中汤, 理中汤, 附子干姜汤, 脾阳虚证, 拆方, 模型, 动物, 实验研究, 中医学, 干预, 影响, 比较, 省级基金

Abstract:

BACKGROUND: Chinese herbal compounds mostly pose pharmacodynamic characteristics of “two-way adjustment” and “corrective bias” to restore the body’s balance. This experiment is proposed to verify the effect of Fuzi Lizhong Decoction and its disassembled prescription on deficiency of spleen-yang syndrome via warming yang and invigorating the spleen, further providing basic data for understanding the multi-node mechanism.
OBJECTIVE: To observe and evaluate the curative effects of Fuzi Lizhong Decoction and its disassembled prescription in the treatment of rats with spleen-yang deficiency syndrome under the conception of translational medicine.
METHODS: A model of deficiency of spleen-yang syndrome was made in Wistar rats through interscapular removal of brown fat and high fat diet under cold environment that changed every other day. After 70 days, the rat models were administered with Fuzi Lizhong Decoction, Lizhong Decoction and Fuzi Ganjiang Decoction, respectively. Another Wistar rats without modeling were used as controls that were fed with normal diet. Body mass, rectal temperature and area under rectal temperature curve were measured in all the groups.
RESULTS AND CONCLUSION: Body mass was increased slowest in the model group and fastest in the Fuzi Lizhong Decoction group (P < 0.05). The model group had lower rectal temperature than the other four groups and significantly differed from the control group in the rectal temperature (P < 0.05). There was a significant difference in the rectal temperature between the Fuzi Lizhong Decoction and model groups (P < 0.05). Area under rectal temperature curve in the model group was lower than that in the control group (P < 0.05). As compared with the models group, Fuzi Lizhong Decoction, Lizhong Decoction and Fuzi Ganjiang Decoction groups had the larger area under the rectal temperature curve (P < 0.05 or P < 0.01). Fuzi Lizhong Decoction, Lizhong Decoction and Fuzi Ganjiang Decoction can all improve the pathological conditions of rats with spleen-yang deficiency syndrome presenting with body mass reduction or slow growth and low temperature. Fuzi Lizhong Decoction has the best biologic effects among these three decoctions.

Key words: tissue construction, experimental modeling in tissue construction, Fuzi Lizhong Decoction, Lizhong Decoction, Fuzi Ganjiang Decoction, spleen-yang deficiency syndrome, disassembled prescription, model, animal, experimental study, traditional Chinese medicine, intervention, effect, comparison, provincial grants-supported paper

中图分类号:

R318

唐汉庆，黄岑汉，黄赞松，黄秀峰. 附子理中汤及拆方干预脾阳虚模型大鼠[J]. 中国组织工程研究, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.15.012.

Tang Han-qing, Huang Cen-han, Huang Zan-song, Huang Xiu-feng. Fuzi Lizhong Decoction and its disassembled prescriptions for rats with spleen-yang deficiency syndrome[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.15.012.

图/表（结果） 3

2.1 各组大鼠行为学观察结果实验过程中，对照组大鼠活动状态良好，毛发有光泽、没有脱落，四肢动作自如、灵活敏捷，觅食、食量正常，没有稀便。模型组大鼠好静懒动，毛发稀疏、枯槁，四肢动作迟缓无力，爬行困难，活动减少，食量减少，喜扎堆，大便不成形，肛门周围有污物。其余给药3组，活动状态较模型组好，毛发较光滑，觅食积极，四肢动作较敏捷，以附子组大鼠状态最好，没有出现稀便。

2.2 各组大鼠体质量测定结果见图1。

由图1可见，各组大鼠体质量随着时间均有所增加，其中以对照组增长的幅度最明显，模型组体质量增长最慢，其余给药3组体质量增长较快，又以附子组增长最明显，与模型组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。

2.3 各组大鼠肛温测定结果见图2。

由图2可见，在各个选取的时间点模型组大鼠肛温均低于其余4组，与对照组比较差异有显著性意义 (P < 0.05)。理中组和附姜组大鼠肛温有缓慢回升趋势，但与模型组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。附子组大鼠肛温升高明显，与模型组比较差异有显著性意义 (P < 0.05)，与对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。

2.4 各组大鼠肛温温度曲线下面积测定结果见表1。在各个选取的时间点，模型组大鼠的肛温温度曲线下面积与对照组比较，差异有显著性意义(P < 0.05)。在第79，86，93，100，107天，附子组大鼠的肛温温度曲线下面积与模型组比较，差异有显著性意义(P < 0.05或P < 0.01)。在第100、107天，理中组、附姜组大鼠的肛温温度曲线下面积与模型组比较，差异也有显著性意义(P < 0.05)。

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引言

材料方法

设计：随机对照动物实验。
时间及地点：实验于 2011年1至5月在右江民族医学院动物实验中心完成。
材料：
实验动物：新出生24 h内清洁级Wistar大鼠9窝，每窝10-12只，体质量(5.7±0.7) g，由中国医学科学院实验动物研究所提供，雌雄兼用。每天光照6 h，通风良好，环境温度28 ℃(动物适宜环境温度)，湿度45%。
药物：实验所用单味药由本校药理实验室提供并鉴定。附子为毛茛科植物乌头(Aconitum carm ichaeli Debx.)的子根；党参为桔梗科植物党参[Codonopsis pilosula (franch.) Nannf.]
干燥的根；白术为菊科植物白术(A tractylodes macrocephala Koidz.)的干燥根；干姜为姜科
植物姜(Zingiber officinale Rosc.)的干燥根茎；甘草为乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)的根。
主要仪器：电子分析天平(AE160型，Mettler公司，瑞士)；生物机能实验系统及其温度传感器(BL-420E+，成都泰盟科技有限公司)；标准温度计(上海医用仪表厂)。
实验方法：
药物制备：
附子理中汤：根据2005版《中国药典》要求，炮附子、党参、白术、干姜、炙甘草按照3∶5∶4∶3∶2的比例，诸药分开均先经蒸馏水浸泡30 min，炮附子先煎1 h，后纳入其余诸药，煎煮2次(40 min/次)，期间将2次药液纱布过滤，合并，水浴加热浓缩至含生药量为 2 g/mL浓度的药液，贮存于4 ℃冰箱内备用。
理中汤：党参、白术、干姜、炙甘草按照5∶4∶ 3∶2的比例，制备过程免去炮附子一项，其余同附子理中汤的制备。
附子干姜汤：附子、干姜按照1∶1比例，其余同附子理中汤的制备。
动物分组方法：按体质量均衡原则，取中间体质量分为5组，每组16只。

肩胛间棕色脂肪组织切除术：大鼠以10%水合氯醛按 3 mL/kg腹腔注射麻醉，俯卧位，背部肩胛骨间备皮，碘伏、乙醇消毒皮肤，铺消毒孔巾，在肩胛骨中间切开皮肤，往背部切约4 cm切口，钝性分离皮肤、皮肤下组织和肌肉，找到棕色脂肪组织(其组织细胞内含有大量血红蛋白和高水平的血红素卟啉，细胞呈棕色)并分离，7号线缝合，碘伏、乙醇消毒皮肤切口。无菌纱布覆盖切口并包扎牢固，送回动物房喂养。
行为学观察：分别于第70，77，84，91，98，105天观察各组大鼠的活动状况、毛色、光泽等，并测量各组大鼠的体质量。
肛温的测定：借鉴参考文献[6]的方法。于第72，79，86，93，100，107天，大鼠乙醚麻醉，仰卧固定，取少量甘油润滑温度传感器探头，肛门内(25 mm)连接BL-420E+生物机能实验系统换能器，观察并记录大鼠肛温变化。
主要观察指标：体质量、肛温和肛温温度曲线下面积(Graph-Pad Prism version 4.0统计软件计算)。
统计学分析：各组数据以x(_)±s表示，SPSS 13.0软件包进行统计学分析，实验数据符合正态分布，方差齐者则用t 检验；方差不齐者则用t’ 检验。实验数据如有偏态，则用参比差值法。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

2008年发布的《中医药创新发展规划纲要(2006-2020年)》指出中医药发展要继承、创新，走现代化和国际化道路[7]，有研究提出“组分中药学”的设想思路，即建立病证结合的动物模型及客观评价指标，采用中药化学以及现代药理学等研究方法，对中药组分间不同配比与药理效应的关系进行研究，验证方剂提取物的有效性[8]，这是一种渗透了转化医学理念的设想，中医学“医药不分家”，其治疗学遵循着“临床-典籍-临床”的双向模式，蕴含着转化医学的思想内涵，以转化医学思维为指导，对经方、名方进行研究，将推动中医的国际化进程[9]。顺次设想思路，实验首先制备脾阳虚的动物模型，以此作为先导。

3.1 脾阳虚动物模型的制备借用在以往研究中的经验积累[10-18]，实验采用棕色脂肪切除术+高脂饲料喂养+隔日寒冷环境刺激的复合因素造模法，和目前其他的脾阳虚动物模型造模法相比，有一定的新颖性，但仍然需要更多的实验研究验证这一造模法的确切效果。

3.2 采用附子理中汤及其拆方作为反证药物，观察各组分中药的药效学脾阳虚为里虚寒证，根据辨证论治原则，“寒者热之”为正治之法，实验以附子理中汤及其拆方理中汤、附子干姜汤为组分中药进行干预，观察其对模型大鼠的肛温、体质量等药效学影响。

3.2.1 各组大鼠肛温和肛温温度曲线下面积的变化肛温温度曲线下面积是以0℃为基点，体温值为纵坐标，时间为横坐标，是体温值曲线与横坐标间的面积，代表实验时间内产热总效应，客观反映了动物的产热能力[19]。实验观察到肛温和产热体温曲线下面积的变化趋势基本上是一致的。表现为：①对模型组动物，其肛温随着时间有下降的趋势，而肛温温度曲线下面积与此变化方向一致。②对于给药的3组，肛温有缓慢回升趋势，而又以附子组回升的幅度明显，与模型组比较，差异有显著性意义(P < 0.05)。反映在肛温温度曲线下面积，变化趋势基本一致，给药的3组中，其面积逐渐增加，在第100，107天，理中组、附姜组分别与模型组比较，差异有显著性意义(P < 0.05)；其中又以附子组面积增加显著，且从第79天起效，与理中组、附姜组比较，起效时间点提前；与模型组比较，差异有显著性意义 (P < 0.05或P < 0.01)，接近对照组(P > 0.05)。

实验观察到模型组大鼠肛温和产热体温曲线下面积随着时间有下降的趋势，据推测这可能由于脾阳虚是个慢性病变的过程，病程日久可能累及全身，造成全身代谢功能减退而产热衰减导致体温(肛温)下降。但也不排除随着时间的继续推移，由于脾阳虚证的自限性，其体温(肛温)会保持在某个水平的可能。

通过以上观察，在恢复脾阳虚模型大鼠的体温（肛温）功效方面，附子组和理中组、附姜组比较，以附子组功效明显，说明附子理中汤最大限度增强了脾阳虚大鼠的产热能力，改善了脾阳虚里寒的状态，是其“温阳”作用的体现。

3.2.2 各组大鼠体质量的变化实验观察到，各组大鼠体质量随着时间均有所增加，但增加的幅度不同，模型组大鼠增长最慢，其余给药3组体质量增长较快，且以附子组的增长最明显，与对照组比较，差异无显著性意义(P > 0.05)。说明脾阳虚大鼠，由于脾失健运，消化吸收功能下降，表现为体质量增长幅度下降，给予健脾或运脾中药后，体质量增加，实验采用的附子理中汤以及拆方理中汤和附子干姜汤均能改善脾阳虚大鼠脾失健运病理状态，以附子理中汤的效果较好。

3.3 小结 ①脾阳虚大鼠有能量代谢衰减的表现，体温(肛温)和肛温温度曲线下面积降低或减小，体质量恢复慢。②实验采用附子理中汤、理中汤和附子干姜汤作为干预药物，结果表明这些药物具有温阳健脾功效，能够恢复模型大鼠的能量代谢和正常消化吸收功能[20]。③附子理中汤以及拆方理中汤和附子干姜汤对脾阳虚模型大鼠的温阳健脾功效有差别，以附子理中汤的功效最为明显，反证“附子理中汤-脾阳虚证”方证对应的正确，说明附子理中汤历经多年实践检验，不失为配伍严谨、疗效确凿的名方，拆方或随意更改其配方则使其疗效降低。④实验仅通过观察模型大鼠的体质量和温度改变特征来比较附子理中汤以及拆方的药效，属于最基础的工作，展望下一步，应当是以转化中药学的思维，研究附子理中汤各个有效组分的药物动力学，在此基础上，阐明附子理中汤多节点起效的机制。

附子理中汤及拆方干预脾阳虚模型大鼠

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