毛囊上皮细胞对Hedgehog信号的响应与短期毛发再生无关

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1779

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (25): 4044-4049.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1779

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毛囊上皮细胞对Hedgehog信号的响应与短期毛发再生无关

应沁心，陶一昕，杨青春，凌学剑，马钢

上海交通大学Bio-X研究院，遗传发育与精神神经疾病教育部重点实验室，上海市 200240

修回日期:2019-03-15 出版日期:2019-09-08 发布日期:2019-09-08
通讯作者: 马钢，副研究员，博士生导师，上海交通大学Bio-X研究院，遗传发育与精神神经疾病教育部重点实验室，上海市 200240
作者简介:应沁心，女，1994年生，浙江省宁波市人，上海交通大学在读硕士，主要从事皮肤与毛发的遗传学研究。
基金资助:
国家自然科学基金(31671504)，项目负责人：马钢；上海交通大学医工交叉项目(YG2016MS04)，项目参与人：马钢

Response to Hedgehog signaling in hair follicle epithelial cells is not associated with short-term hair regeneration

Ying Qinxin, Tao Yixin, Yang Qingchun, Ling Xuejian, Ma Gang

Bio-X Institutes, Key Laboratory for Genetics of Developmental and Neuropsychiatric Disorders, Ministry of Education, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China

Revised:2019-03-15 Online:2019-09-08 Published:2019-09-08
Contact: Ma Gang, Associate researcher, Doctoral supervisor, Bio-X Institutes, Key Laboratory for Genetics of Developmental and Neuropsychiatric Disorders, Ministry of Education, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China
About author:Ying Qinxin, Master candidate, Bio-X Institutes, Key Laboratory for Genetics of Developmental and Neuropsychiatric Disorders, Ministry of Education, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 31671504 (to MG); the Medicine-Engineering Cross-Project of Shanghai Jiao Tong University, No. YG2016MS04 (to MG)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
Hedgehog信号：Hedgehog信号通路对于多种组织的发育、动态平衡和修复起了重要的作用。在脊椎动物中，Hedgehog信号通路有3个配体：Shh、Ihh和Dhh。在没有Hedgehog配体存在的情况下，12次跨膜受体Ptch1定位在初级纤毛上，并抑制另一个12次跨膜受体Smo活性，而当Hedgehog配体和12次跨膜受体Ptch1结合后，Ptch1抑制Smo活性被解除，Smo和EVC-EVC2复合体结合并易位至初级纤毛中被完全激活，激活的Smo将Hedgehog信号传递而激活Gli蛋白。
毛囊上皮细胞：一般来说，毛囊周期分为生长期(anagen)、退行期(catagen)和静息期(telogen)。在生长期，毛囊上皮干细胞通过增殖和分化产生整个毛干(hair shaft，HS)；在退行期和静息期，毛囊上皮干细胞进入安静的准备期，并与下面的真皮间充质细胞相互作用，准备开始下一个生长期并形成新的毛干。

摘要
背景：Hedgehog信号通路对于多种组织的发育、动态平衡以及修复起了重要的作用，前人的研究强调了Hedgehog信号对于毛发模式形成是至关重要的。
目的：探究Hedgehog信号在成年后的毛囊上皮动态平衡中发挥的作用。
方法：Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2小鼠、Smo^fl/fl小鼠与K14-CreER小鼠均来自The Jackson Laboratory，实验经上海交通大学实验动物伦理与使用委员会批准，批准号为1602028。①首先利用Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2小鼠特异地标记Lgr5⁺细胞亚群，确认了在Lgr5⁺毛囊上皮干细胞/前体细胞中多个Hedgehog信号通路成员高度富集表达。而后用Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2小鼠与Smo^fl/fl小鼠交配得到了Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2; Smo^fl/fl小鼠；在刚进入第二轮长静息期的P49天进行背部剃毛，接着用他莫昔芬诱导Hedgehog信号通路的介导蛋白Smo敲除，观察在Lgr5⁺细胞中敲除Smo对毛发再生速度的影响；之后实验在P50-54天他莫昔芬诱导Smo敲除后1周进行脱毛，进一步评估bulge上皮干细胞在突变小鼠的功能是否有变化；②用K14-CreER小鼠与Smo^fl/fl小鼠交配以得到K14-CreER; Smo^fl/fl小鼠，同上实验方法，在毛囊整个上皮细胞这一更大范围内用他莫昔芬诱导敲除Smo，观察是否有毛发再生障碍及毛囊Bulge干细胞功能障碍。
结果与结论：Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2; Smo^fl/fl小鼠模型及K14-CreER; Smo^fl/fl小鼠模型中均没有观测到明显的毛发再生障碍，毛囊Bulge干细胞也没有受到影响。说明Lgr5⁺细胞群和整个毛囊上皮对于Hedgehog信号通路的响应与毛囊静息期向生长期转换以及短期的毛发再生无关，且与bulge上皮干细胞的维持也无关。这一发现强调了组织发育和动态平衡之间的不同分子机制，为人们更加准确地理解毛囊再生和组织生长的机制提供了重要依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0003-3199-6317(应沁心)

关键词: Hedgehog信号, Lgr5+细胞, bulge上皮干细胞, 静息期-生长期转换, 毛发再生, Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2小鼠, Smofl/fl小鼠, K14-CreER小鼠, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Hedgehog signaling plays a vital role in development, homeostasis and tissue repair of multiple tissues. Previous studies underscore that Hedgehog signaling is essential for hair morphogenesis.
OBJECTIVE: To explore the role of Hedgehog signaling in adult epidermal homeostasis.
METHODS: Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T², Smo^fl/fl and K14-CreER mice were purchased from The Jackson Laboratory. This study was approved by the Laboratory Animal Ethics and Use Committee of Shanghai Jiao Tong University with the approval No. 1602028. First, Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2 mice were used to specifically label Lgr5⁺ cell subsets, confirming several Hedgehog signaling components were enriched in Lgr5⁺ hair follicle epidermal stem cells/precursor cells. Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2 mice then copulated with Smo^fl/flmice. Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2;Smo^fl/fl mice were obtained and shaved of their fur at P49 days of the second telogen period, followed by tamoxifen-induced Hedgehog signaling pathway-mediated Smo knockout. We observed the effect of Smo knockout on hair regeneration rate in Lgr5⁺ cells. In the following experiments, tamoxifen was used to induce Smo knockout on P50-54 days, and the mice were shaved of their fur the mice at 1 week after Smo knockout. We further evaluated the functional changes of bulge epithelial stem cells in mutant mice. (2) K14-CreER mice copulated with Smo^fl/fl to produce K14-CreER;Smo^fl/^fl mice. Tamoxifen, as described above, was used to delete Smo in hair follicle epithelial basal cells. We observed whether hair loss disorder and hair follicle Bulge stem cell dysfunction occur.
RESULTS AND CONCLUSION: No hair loss disorder was detected in Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2;Smo^fl/fl and K14-CreER;Smo^fl/fl mouse models, and hair follicle Bulge stem cells were not affected. It is indicated that the responsiveness to Hedgehog signaling in Lgr5⁺ cells and hair follicle epithelial cells is independent of hair follicle telogen-to-anagen transition and short-term hair regeneration as well as the maintenance of Bulge epithelial stem cells. This finding highlights the different molecular mechanisms of tissue development and homeostasis, and provides an important basis for a more accurate understanding of the mechanisms of hair follicle regeneration and tissue growth.

Key words: Hedgehog signaling, Lgr5+ cells, Bulge epithelial stem cells, telogen-to-anagen transition, hair regeneration, Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2 mice, Smofl/fl mice, K14-CreER mice, National Natural Science Foundation of China

中图分类号:

R496
Q71

应沁心，陶一昕，杨青春，凌学剑，马钢. 毛囊上皮细胞对Hedgehog信号的响应与短期毛发再生无关[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(25): 4044-4049.

Ying Qinxin, Tao Yixin, Yang Qingchun, Ling Xuejian, Ma Gang. Response to Hedgehog signaling in hair follicle epithelial cells is not associated with short-term hair regeneration[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(25): 4044-4049.

图/表（结果） 2

2.1 Lgr5⁺细胞中高表达Hedgehog信号通路成员 为了回答在Lgr5⁺细胞亚群中的Hedgehog信号对于毛发再生是否必要，利用Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2小鼠特异地标记Lgr5⁺细胞亚群^[19]。首先需要确认Hedgehog信号在Lgr5⁺细胞亚群中的表达情况，因此将6个月大、毛囊处于静息期的对照和Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2小鼠的皮肤角化细胞进行流式分选，发现Lgr5⁺细胞亚群占总角化细胞的0.68%左右(图1A)。通过和总的皮肤角化细胞相比，Lgr5⁺细胞亚群更丰富地表达bulge上皮干细胞标记物：CD34、Lgr5、Tcf3、Tcf4、Lhx2以及K15(图1B)，这暗示着Lgr5⁺细胞具有bulge上皮干细胞的一些特性。另外，相对于总的皮肤角化细胞，Lgr5⁺细胞亚群更丰富地表达Hedgehog信号通路受体Ptch1和Smo，以及Hedgehog信号普适的下游靶基因Gli1、Gli2，但是另外2个Hedgehog靶基因Cyclin D1略上调而Cyclin D2却下调(图1B)。上述结果和前人的报道是一致的^[19]，因而验证了在Lgr5⁺细胞亚群中具有高Hedgehog信号活性。

2.2 Lgr5⁺细胞对于Hedgehog信号的响应并不影响毛囊静息期-生长期转换 在验证了利用Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2小鼠特异地标记Lgr5⁺细胞亚群的可靠性后^[19]，实验获得Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2;Smo^fl/fl小鼠，以在Lgr5⁺细胞亚群中可诱导地敲除Smo，选用母鼠进行接下来所有的实验，以避免激素对于毛发周期的扰动。首先，去观察自然的毛发周期。在刚进入第二轮长静息期的P49天，进行背部剃毛而后连续5 d用他莫昔芬诱导Smo敲除(图2A)。出乎意料的是，在Lgr5⁺细胞中敲除Smo并不能扰动自然的毛发再生速度(图2B)。为了进一步评估sHG和bulge上皮干细胞在突变小鼠的功能，实验在P50-54天他莫昔芬诱导Smo敲除后1周进行脱毛(图2C)，发现与对照小鼠相比，Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2; Smo^fl/fl小鼠脱毛诱导的静息期-生长期的转换没有差异(图2D)。追踪到脱毛后的16 d也没有发现任何毛发再生过程中的异常(图2E)。脱毛后12 d的皮肤切片苏木精-伊红染色显示Lgr5- EGFP-Ires-CreERT2; Smo^fl/fl小鼠毛囊进入晚期生长期，也与对照没有明显的差异(图2F)。在他莫昔芬诱导Smo敲除13 d后，Lgr5以及bulge上皮干细胞的标记物K15和CD34的表达与对照相比没有差异(图3)。上述结果说明Lgr5⁺细胞对于Hedgehog信号的响应对于毛囊静息期-生长期转换并不是必须的，并且对于bulge上皮干细胞的维持也不是必须的。

2.3 毛囊上皮基底层细胞对于Hedgehog信号的响应与毛囊静息期-生长期转换无关 上部Bulge上皮干细胞因接收到了感觉神经来源的Shh也显示出Hedgehog信号活性^[14]，而这些细胞不表达Lgr5^[19]，作者推测是否是上部Bulge上皮干细胞或其他Lgr5^-的上皮细胞群在Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2; Smo^fl/fl小鼠中代偿并贡献于毛发再生，而使Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2; Smo^fl/fl小鼠并没有出现毛囊静息期-生长期转换的异常。为此，在更大的细胞群中，即整个毛囊上皮基底层来敲除Smo。实验利用了K14-CreER; Smo^fl/fl小鼠模型，在刚进入第二轮长静息期的P49天，进行背部剃毛而后连续5 d他莫昔芬诱导，实验结果显示K14-CreER; Smo^fl/fl小鼠的毛发修复速度和对照也没有显著差异(图4A)。而在P50-54他莫昔芬诱导Smo敲除后1周进行脱毛，也没有发现K14-CreER; Smo^fl/fl小鼠在脱毛诱导的静息期-生长期的转换过程中有异常(图4B)。上述结果说明毛囊上皮基底层细胞对于Hedgehog信号的响应与毛囊静息期-生长期转换无关。

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引言

Hehog信号通路对于多种组织的发育、动态平衡和修复起了重要的作用^[1-2]。在脊椎动物中，Hedgehog信号通路有3个配体：Shh、Ihh和Dhh。在没有Hedgehog配体存在的情况下，12次跨膜受体Ptch1定位在初级纤毛上，并抑制另一个12次跨膜受体Smo活性，而当Hedgehog配体和12次跨膜受体Ptch1结合后，Ptch1抑制Smo活性被解除，Smo和EVC-EVC2复合体结合并易位至初级纤毛中被完全激活，激活的Smo将Hedgehog信号传递而激活Gli蛋白^[1]。在脊椎动物中Gli蛋白有3个成员：Gli1、Gli2、Gli3^[3]。Gli2是Hedgehog信号通路主要的激活蛋白^[4]，而Gli3是其主要的抑制蛋白^[5-6]，Gli1处在Gli2和Gli3的下游^[4，7]，且可能行使着将Hedgehog信号放大的作用^[4，8]。Gli1和Ptch1本身在多种组织中又是Hedgehog信号的靶基因^[9]。

Hedgehog信号通路在毛发模式形成中起了非常重要的作用，Shh^-/-和Gli2^-/-小鼠的毛囊发育停滞在阶段一或阶段二，并且毛囊发生的数量下降^[10-11]。具体的分子机制是上皮的Shh维持了DC(dermal condensates)的细胞身份和/或维持了DC/DP(dermal papilla)的成熟，并激活DC/DP Noggin的表达，而Noggin的表达又激活上皮的Shh，形成一个正反馈^[12]，利用K14-Cre; Smo^fl/fl小鼠模型在上皮中条件性敲除Smo后，会造成毛囊分化异常、毛囊上皮增生、异位毛囊形成以及slow cycling细胞的丢失^[13]。

在成年后，Hedgehog信号活性存在于静息期毛囊的DP和离感觉神经非常近的bulge上部细胞^[14]，在生长期Ⅲ的毛囊中，Hedgehog信号活性存在于bulge和matrix细胞中，到生长期Ⅴ，Hedgehog信号活性主要存在于matrix细胞中^[15]。多项证据显示Hedgehog信号可能与毛发再生有关，将Hedgehog蛋白单抗处理成年小鼠皮肤后，毛发再生受阻^[16]，而将Hedgehog信号激活剂涂抹在毛囊静息期小鼠皮肤上能刺激毛囊从静息期到生长期的转换^[17]。在生长期Ⅱ或Ⅲ期，毛囊TAC(transit amplifying cells)细胞中的Shh对于bulge上皮干细胞的增殖是必须的，且维持DP发射信号激活HG细胞的能力^[18]。前述的利用Hedgehog蛋白单抗/激活剂可以抑制/刺激毛发再生的结果并不能解释清楚：是哪一群细胞针对Hedgehog信号的响应对于毛发再生是充分且必要的。首先已经知道成年小鼠毛发生理性再生，即从静息期到生长期转化主要起始于Lgr5⁺的HG细胞，又称为Lgr5⁺毛囊上皮干细胞/前体细胞^[18]。而有研究显示Hedgehog信号活性在Lgr5⁺毛囊上皮干细胞/前体细胞的细胞亚群中高度富集^[19]。作者因此推测，在Lgr5⁺细胞亚群中的Hedgehog信号对于毛发再生是必要的。故在此次研究中，在静息期毛囊的Lgr5⁺细胞亚群中特异地敲除Smo，发现在Lgr5⁺细胞亚群针对Hedgehog信号的响应对于毛发再生不是必须的，且对于bulge上皮干细胞的维持不是必须的。进一步扩大范围，在成年的整个静息期毛囊上皮基底层中敲除Smo后也没有观测到毛囊从静息期-生长期转换的缺陷，这说明成年后的静息期毛囊上皮针对Hedgehog信号的响应对于毛囊再生也不是必须的。本研究首次系统地阐明了Lgr5⁺细胞亚群乃至整个毛囊上皮针对Hedgehog信号的响应对于短期毛发再生不是必须的，强调了毛囊模式形成和成年毛囊再生背后的分子机制是不同的，这为人们更加准确地理解毛囊再生和组织生长的机制提供重要依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 同笼小鼠对照实验。

1.2 时间及地点 实验于2018年在上海交通大学Bio-X研究院完成。

1.3 材料 Lgr5-EGFP-Ires-CreER^T2小鼠、Smo^fl/fl小鼠、K14-CreERT2小鼠均来自The Jackson Laboratory，实验方案经上海交通大学实验动物伦理与使用委员会批准，批准号为1602028。

他莫昔芬(Sigma)；Trizol和SuperScript第一条链合成试剂盒(Invitrogen)；FastStart Universal SYBR Green Master Mix (Rox)试剂(Roche)；免疫组化抗体：GFP (Abcam, rabbit 1∶400)，K15(ThermoFisher Scientific, mouse 1∶50)，CD34(eBioscience, rat 1∶50)；细胞分选仪器：FACSAria II cell sorter (BD Biosciences)；Real-time PCR仪器：ABI 7500 Fast Real-Time PCR System

1.4 方法

1.4.1 小鼠模型和小鼠他莫昔芬给药 用Lgr5-EGFP- Ires-CreER^T2小鼠与Smo^fl/fl小鼠交配以得到Lgr5-EGFP- Ires-CreERT2; Smo^fl/fl小鼠^[19-20]，其为实验组，Smo^fl/fl小鼠为对照组。用K14-CreER小鼠与Smo^fl/fl小鼠交配以得到K14-CreER; Smo^fl/fl小鼠^[20-21]，其为实验组，Smo^fl/fl小鼠为对照组。实验小鼠饲养于SPF级鼠房中，所有的动物实验都经上海交通大学IACUC批准，并遵照实验动物管理条例的规定。将他莫昔芬粉剂加入至玉米油中，终质量浓度为20 g/L，放于37 ℃摇床20 min左右直至他莫昔芬完全溶解，每只成年小鼠每天腹腔注射100 μL药液，连续注射5 d。

1.4.2 小鼠脱毛模型的建立 将质量比为1∶1的石蜡和松香固体混合，加热后稍冷却后涂抹于毛囊处于第二轮静息期的母鼠背部，再冷却后用镊子小心撕去混合物黏住的毛发，已达到脱毛的效果。

1.4.3 组织学分析 P50-54天小鼠背部皮肤取材后4% PFA 4 ℃固定过夜，乙醇梯度脱水后用二甲苯透明，石蜡61 ℃浸蜡后包埋，10-12 μm石蜡切片后进行标准的苏木精-伊红染色操作。免疫组化实验所用的一抗信息：GFP (Abcam，rabbit 1∶400)， K15(ThermoFisher Scientific，mouse 1∶50)，CD34(eBioscience，rat 1∶50)。

1.4.4 流式分选 背部皮肤处于静息期的小鼠皮肤取材后，按照前人文献报道的方法制备皮肤上皮细胞单悬液^[22]。利用FACSAria II cell sorter(BD Biosciences)进行流式分选，70 µm喷嘴，sheath pressure为482.6 kPa。上样前加入终浓度为10 mg/L的DAPI，以3 000 events/s左右的速率进行分选。分选后的细胞落入用4%BSA过夜4 ℃包被的RNase free 2 mL EP管，EP管分选前底部放入少许PBS溶液，1 000 r/min 4 ℃离心5 min，弃去上清，加入1 mL Trizol裂解，吹打数下后进行RNA抽提。

1.4.5 RNA抽提和Real-time PCR 此次研究使用Invitrogen的Trizol试剂进行RNA的抽提，和Invitrogen公司的SuperScript第一条链合成试剂盒进行RNA反转录。Real-time PCR使用的是Roche公司的FastStart Universal SYBR Green Master Mix(Rox)试剂，在ABI 7500 Fast Real-Time PCR System机器上进行反应，涉及到的Real-time PCR引物序列均参照前人文献的报道^[19]，β-actin作为内参，每个样本3个技术重复，统计分析采用GraphPad Prism 5软件，数据显示的是平均值。

1.5 主要观察指标 免疫荧光信号、流式分选信号、real-time PCR结果、小鼠毛发生长速度。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

在毛囊模式形成的过程中，Hedgehog信号调控了毛囊的向下生长，以及毛囊发生的数量^[10-11]，而Hedgehog信号对毛囊模式形成中上皮细胞正常分化的维持也起了重要的作用^[13]。尽管毛囊模式形成和成年后毛发再生过程共享了许多重要的信号通路^[23-28]，但是从此次实验的小鼠模型中来看似乎并不是这样：Lgr5⁺细胞群和整个毛囊上皮对于Hedgehog信号通路的响应与毛囊静息期向生长期转换以及短期的毛发再生无关。这一发现强调了在研究成年的组织器官动态平衡过程中使用可诱导的条件敲除小鼠模型的重要性。

有研究报道利用K15-CrePR; Shh^fl/fl小鼠将TAC细胞中的SHH蛋白敲除，造成了毛囊bulge干细胞和HG激活型干细胞的增殖障碍，继而导致毛囊起始延迟^[18]。而Sox9-CreER; Smo^fl/fl小鼠则观察到在Sox9⁺ bulge干细胞和HG细胞中敲除Smo只是影响了毛囊bulge干细胞的增殖活性，而HG细胞增殖没有受到影响，这样，毛囊起始和再生也是正常的，只是在随后毛发生长过程中发现matrix细胞增殖下调，毛发生长变短^[18]。作者认为Bulge干细胞受到来自TAC细胞的SHH蛋白的直接调控，而HG细胞并不直接受SHH信号的直接调控。此次研究使用的Lgr5-EGFP-Ires- CreERT2; Smo^fl/fl小鼠模型中也没有观测到明显的毛发再生障碍，毛囊Bulge干细胞也没有受到影响。LGR5比Sox9更特异地标记HG细胞和少量Bulge干细胞，因此这一结果更明确地说明尽管HG细胞是毛囊起始与再生的第一反应细胞群，但是该细胞群是否响应Hedgehog信号并不影响毛囊起始与再生。这一结果不免让人疑惑，HG细胞有Hedgehog信号配体和受体的富集，那么它们的作用是什么呢？是否有可能如Clever所推测的可能用于HG细胞的干性维持？这还需要更多的实验进一步验证。另外，作者进一步探讨了是否其他上皮细胞通过Hedgehog信号影响毛囊起始与再生，通过利用K14-CreER; Smo^fl/fl小鼠模型，在毛囊整个上皮细胞这一更大范围内敲除Smo，结果也没有观测到明显的毛发再生障碍，这充分说明毛囊上皮细胞对Hedgehog信号的响应对于毛囊起始与再生并不重要。

综上所述，Lgr5⁺细胞群和整个毛囊上皮对于Hedgehog信号通路的响应与毛囊静息期向生长期转换以及短期的毛发再生无关，且与bulge上皮干细胞的维持也无关。这为人们更加准确地理解毛囊再生和组织生长的机制提供重要依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

毛囊上皮细胞对Hedgehog信号的响应与短期毛发再生无关

Response to Hedgehog signaling in hair follicle epithelial cells is not associated with short-term hair regeneration

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