人体脱落乳牙牙髓干细胞复合纤维蛋白修复大鼠牙周骨缺损

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1660

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (13): 2061-2066.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1660

• 干细胞培养与分化 stem cell culture and differentiation • 上一篇下一篇

人体脱落乳牙牙髓干细胞复合纤维蛋白修复大鼠牙周骨缺损

徐丽¹，宋昊¹，康洁²，贾国涛³，陈超¹，王伟¹，王琰¹，张男¹，韩发彬¹

¹聊城大学/聊城市人民医院组织工程与再生医学研究所，山东省聊城市 252000；²聊城市人民医院儿童口腔科，山东省聊城市 252000；³聊城市人民医院病理科，山东省聊城市 252000

修回日期:2018-12-19 出版日期:2019-05-08 发布日期:2019-05-08
通讯作者: 张男，副研究员，聊城大学/聊城市人民医院组织工程与再生医学研究所，山东省聊城市252000；并列通讯作者：韩发彬，教授，聊城大学/聊城市人民医院组织工程与再生医学研究所，山东省聊城市252000
作者简介:徐丽，女，1991年生，山东省德州市人，汉族，2015年青岛科技大学毕业，硕士，研究实习员，主要从事干细胞研究。
基金资助:
国家自然科学基金青年项目(81800980)，项目负责人：张男；山东省引进国外智力项目(2016-39)，项目负责人：韩发彬；山东省医药卫生科技发展计划项目(2018WS422)：项目负责人：徐丽

Stem cells from human exfoliated teeth combined with fibrin facilitate bone regeneration in a rat periodontal bone defect model

Xu Li¹, Song Hao¹, Kang Jie², Jia Guotao³, Chen Chao¹, Wang Wei¹, Wang Yan¹, Zhang Nan¹, Han Fabin¹

¹Liaocheng University/Liaocheng People’s Hospital, Institute for Tissue Engineering and Regenerative Medicine, Liaocheng 252000, Shandong Province, China; ²Department of Pediatric Stomatology, Liaocheng People’s Hospital, Liaocheng 252000, Shandong Province, China; ³Department of Pathology, Liaocheng People’s Hospital, Liaocheng 252000, Shandong Province, China

Revised:2018-12-19 Online:2019-05-08 Published:2019-05-08
Contact: Zhang Nan, Associate researcher, Liaocheng University/Liaocheng People’s Hospital, Institute for Tissue Engineering and Regenerative Medicine, Liaocheng 252000, Shandong Province, China; Han Fabin, Professor, Liaocheng University/ Liaocheng People’s Hospital, Institute for Tissue Engineering and Regenerative Medicine, Liaocheng 252000, Shandong Province, China
About author:Xu Li, Master, Research intern, Liaocheng University/Liaocheng People’s Hospital, Institute for Tissue Engineering and Regenerative Medicine, Liaocheng 252000, Shandong Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China (Youth Program), No. 81800980 (to ZN); Shandong Province Introduced Foreign Intellectual Project, No. 2016-39 (to HFB); the Project of Medical and Health Technology Development Program in Shandong Province, No. 2018WS422 (to XL)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
人体脱落乳牙牙髓干细胞：通过选取6-8岁健康儿童的脱落乳牙牙髓，用原代培养方法提取的细胞，是近年来再生医学领域中极具应用潜力的种子细胞。人体脱落乳牙牙髓干细胞具有取材方便且没有伦理学障碍、增殖速度快、可塑性强、免疫排斥小以及多向分化潜能等诸多优点。此外还发现它具有较强的成骨诱导能力，在骨缺损修复中起重要作用。
牙周骨缺损：口腔颌面部是人体重要的功能器官，牙周骨是重要的组成部分，因为各种原因造成的牙周骨缺损是口腔颌面部常见疾病之一。目前牙周骨缺损通过牙周基础治疗难以取得理想的成果，组织工程学为治疗牙周骨缺损提供了思路。

摘要
背景：口腔颌面部是人体的重要器官，牙周骨因感染、外伤等原因造成的缺损是口腔颌面部常见疾病之一。近年来组织工程学的迅速发展为牙周骨缺损的治疗带来了希望。
目的：探讨人体脱落乳牙牙髓干细胞复合纤维蛋白对牙周骨缺损的修复作用。
方法：分离和培养人体脱落乳牙牙髓干细胞，并对其进行成骨定向诱导分化2周。选取72只SD大鼠(购买于南京大学-南京生物医药研究院)，随机分为3组：在磨牙下缘制备4 mm×5 mm×1 mm(宽×长×深)的牙周骨缺损模型，分别移植PBS、纤维蛋白、乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物，于术后1，2，4，6周处死大鼠并分离牙周组织标本，进行组织形态学分析评价骨修复效果。
结果与结论：①乳牙牙髓干细胞在体外具有明显的成骨分化能力，蛋白免疫印迹实验分析成骨分化标记物Alp和Runx2有明显升高；②在移植后2周和4周，苏木精-伊红染色显示乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组新骨形成百分比显著高于PBS组、纤维蛋白组；③免疫组化染色显示乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组成骨相关标记物Alp、Runx2、Ocn的表达显著高于PBS组、纤维蛋白组；④结果表明，移植的乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物能够明显促进大鼠牙周骨缺损的修复和再生，为利用组织工程法修复人体牙周组织缺损提供了实验依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-9719-8225(徐丽)

关键词: 人体脱落乳牙, 牙髓干细胞, 纤维蛋白, 牙周骨缺损, 成骨分化, 成骨标记物, 牙周组织重建, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Oral and maxillofacial organs are important organs in the human body. Periodontal bone defects caused by infection and trauma are one of the common oral and maxillofacial diseases. The rapid development of tissue engineering in recent years has brought hope to the treatment of periodontal bone defects.
OBJECTIVE: To explore the repairing ability of stem cells from human exfoliated teeth (SHEDs) combined with fibrin in a rat periodontal bone defect model.
METHODS: We isolated and cultured SHEDs, and then induced these cells to differentiate into osteogenic cells in vitro for 2 weeks. Seventy-two Sprague-Dawley rats (purchased from the Nanjing Biomedical Research Institute of Nanjing University in China) were used to generate the periodontal bone defect model. The bone defect of 5 mm×4 mm×1 mm (length×width×depth) was made at the lower edge of the molar. These rat models were randomly divided into three groups, and PBS, fibrin and SHEDs+fibrin were implanted into the defect area. Animals were sacrificed at 1, 2, 4, 6 weeks after surgery, and the periodontal samples were isolated and analyzed histomorphologically.
RESULTS AND CONCLUSION: SHEDs had substantial osteogenic ability and western blot analysis showed that the expression of Runx2 and Alp was increased prominently after osteogenic induction in vitro. Hematoxylin-eosin staining showed that the percentage of newly formed bone in the SHEDs+fibrin group was significantly greater than that in the fribrin and PBS groups respectively at 2 and 4 weeks after transplantation. Immunohistochemical findings revealed that the expression of Runx2, Alp, Ocn in the SHEDs+fibrin group was improved significantly as compared with the fibrin and PBS groups. In conclusion, the transplantation of SHEDs promotes the repair and regeneration of the periodontal bone defect in rats, providing experimental evidence for human periodontal tissue repair with tissue engineering methods.

Key words: Tooth, Deciduous, Dental Pulp, Stem Cells, Fibrin, Tissue Engineering

中图分类号:

徐丽，宋昊，康洁，贾国涛，陈超，王伟，王琰，张男，韩发彬. 人体脱落乳牙牙髓干细胞复合纤维蛋白修复大鼠牙周骨缺损[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(13): 2061-2066.

Xu Li, Song Hao, Kang Jie, Jia Guotao, Chen Chao, Wang Wei, Wang Yan, Zhang Nan, Han Fabin. Stem cells from human exfoliated teeth combined with fibrin facilitate bone regeneration in a rat periodontal bone defect model[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(13): 2061-2066.

图/表（结果） 2

2.1 脱落乳牙牙髓干细胞形态和成骨诱导活性 从儿童乳牙中分离出牙髓干细胞并诱导分化为成骨细胞。茜素红染色结果显示牙髓干细胞在成骨诱导2周后能够形成明显的钙化结节。蛋白免疫印迹显示，Runx2、Alp蛋白表达分别比未处理对照组增加8.8倍和4.5倍，见图1。

2.2 实验动物数量分析 72只雄性SD大鼠均进入结果分析。

2.3 牙周骨缺损模型制备和乳牙牙髓干细胞移植 在牙周骨上构建了5 mm×4 mm×1 mm(长×宽×深)的缺损。将15 μL纤维蛋白原溶液和含有2×10⁶个牙髓干细胞的25 μL凝血酶溶液同时注射到缺损区域，约1 min后，液体变成凝胶，缝合肌肉层和皮肤层，见图2。

2.4 新骨组织形态学分析 为了检测牙周骨缺损的新骨再生，术后1，2，4，6周获得大鼠牙周骨。用苏木精-伊红染色和组织形态学测量法分析大鼠骨缺损区域，见图3。第1周时，3组新骨形成百分比差异无显著性意义；第2，4周时，乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组新骨形成百分比显著高于PBS组、纤维蛋白组；第6周时，各组愈合程度都比较好，新骨形成百分比差异无显著性意义。

2.5 通过Runx2，Alp和Ocn免疫组织化学染色评价乳牙牙髓干细胞对骨再生的作用 在第1周和第2周，与PBS组、纤维蛋白组相比，乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组Runx2阳性表达显著增强(P < 0.01)，见图4。在第4周，Runx2阳性表达显著下降，3组间差异无显著性意义。Runx2是成骨早期标志物，在第6周各组阳性细胞表达量很少。

在第1周和第4周，与PBS组、纤维蛋白组相比，乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组中Alp阳性表达显著增强 (P < 0.05)，见图5。在第2周，乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组的Alp表达高于PBS组，但乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组和纤维蛋白组之间差异无显著性意义。Alp是成骨早期标志物，在第6周各组阳性细胞表达量很少。

随着时间的推移，成骨标记物Ocn的表达水平逐渐升高。在第2周时，3组间差异无显著性意义(P > 0.05)，在第4周和第6周，乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组的Ocn表达显著高于其他2组(P < 0.05)，见图6。Ocn是成骨晚期标志物，在第1周时各组阳性细胞表达量很少。

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引言

口腔颌面部结构复杂，是人体显露在外部的重要功能器官。牙周骨因感染、外伤等原因造成的缺损是口腔颌面部常见疾病之一^[1]，牙周骨缺损的修复治疗是目前研究的重点^[2]。近年来组织工程学的迅速发展为治疗牙周骨缺损提供了新思路^[3]。

间充质干细胞是一种未分化细胞，来源于发育早期的中胚层和外胚层，具有自我复制及更新能力，并且在一定条件下能向骨、软骨、脂肪和肌肉等组织细胞分化^[4]。人体脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated teeth，SHEDs)是间充质干细胞的一种，体外研究表明乳牙干细胞能够分化为成骨细胞、肝细胞、脂肪细胞、神经细胞、软骨细胞、肌细胞和成牙本质细胞等^[5-10]。将人体脱落乳牙牙髓干细胞移植到免疫功能低下小鼠的皮下组织，能够在小鼠体内产生大量的骨组织，这表明其具有骨再生的潜力^[6^，^11]。研究表明，将人体脱落乳牙牙髓干细胞移植到猪下颌骨缺损模型中，能够促进骨组织的再生和修复^[12]。人体脱落乳牙牙髓干细胞在牙周骨缺损中的修复作用却鲜有报道，因此该研究将人体脱落乳牙牙髓干细胞移植到大鼠牙周骨缺损模型中，观察其治疗修复作用。

有了理想的种子细胞，还需要合适的支架使细胞能在其上附着并快速生长增殖^[13]。纤维蛋白是一种应用广泛的可注射性生物支架，由人工提取动物或人血液中的相关成分制成，可以为种子细胞增殖、分化提供三维环境，同时能够携带蛋白因子，起缓释作用^[14-15]。纤维蛋白能够促进间充质干细胞的成骨分化，因此可以作为骨修复移植的支架材料^[14-16]。

实验将人体脱落乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物移植到大鼠牙周骨缺损模型，探讨其对牙周骨缺损的修复治疗作用，为人体脱落乳牙牙髓干细胞在牙周骨缺损修复中的应用提供实验依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2016年2月至2018年4月在聊城市人民医院干细胞与再生医学实验室完成。

1.3 材料 在无菌条件下用灭菌拔髓针拔取健康儿童脱落乳牙牙髓。采集标本之前已获得儿童与家属的知情同意，均由聊城市人民医院儿童口腔科提供。

实验动物：72只6周龄雄性SD大鼠，体质量200-250 g，购买于南京大学-南京生物医药研究院，由聊城市人民医院SPF实验动物中心饲养，该实验经聊城市人民医院伦理委员会批准。

实验主要试剂与仪器：DMEM、胎牛血清、青霉素、链霉素(Gibco公司)；维生素D3、多聚甲醛、茜素红、3，3'-二氨基联苯胺盐酸盐(Sigma?Aldrich公司)；倒置荧光显微镜(Nikon公司)；聚偏二氟乙烯膜(PVDF)(0.45 μm，Milipore公司)；蛋白检测系统(Bio-Rad公司)；外用冻干人纤维蛋白粘合剂(上海莱士血液制品股份有限公司)；Alp、Runx2、OCN一抗(Abcam公司)；β-actin一抗、山羊抗兔IgG二抗(Santa Cruz Biotechnology公司)；苏木精-伊红染色试剂盒(碧云天)；Image Pro Plus 6软件(Silver Spring公司)；猪抗兔辣根过氧化物酶二抗(Dako公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 乳牙牙髓干细胞培养和成骨分化 在无菌条件下，收集6-8岁儿童脱落乳牙牙髓，用牙钻从牙冠打开牙髓腔，用灭菌的拔髓针拔取牙髓，立即放入DMEM/F12培养基中送达实验室，参照文献[17]方法培养牙髓干细胞，将培养的第2代乳牙牙髓干细胞在成骨分化培养基中培养2周，每周换液2次。成骨细胞分化培养基组成：DMEM培养基、体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL链霉素、100 nmol/L地塞米松、10 mmol/L β-磷酸甘油、50 μmol/L L-抗坏血酸-2-磷酸盐和50 nmol/L维生素D3。2周后采用茜素红染色观察钙化结节形成情况，细胞用40 g/L多聚甲醛固定，40 mmol/L茜素红染色(pH 4.2)，在室温下放置5-10 min，倒置荧光显微镜观察细胞并进行拍照。

1.4.2 蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测Alp和Runx2的表达 用RIPA缓冲液从成骨诱导细胞中提取总蛋白，采用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度。取总蛋白20 μg，进行10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后电转移到聚偏二氟乙烯膜上，用TBST+10%脱脂奶粉封闭2 h，加入一抗Alp(1∶1 000)、Runx2(1∶1 000)和β-actin(1∶2 000) 4 ℃孵育过夜，加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗，室温孵育一两个小时。使用图像分析软件(版本1.6 NIH)，以目的条带的灰度值与内参β-actin条带的灰度值比值来确定目的蛋白的相对表达水平。

1.4.3 脱落乳牙牙髓干细胞与纤维蛋白复合 按照说明书分别配制纤维蛋白原溶液(40 g/L)和凝血酶溶液(450 U/mL)。将2×10⁶个脱落乳牙牙髓干细胞与15 μL凝血酶溶液混合，吸入注射器中，将15 μL纤维蛋白原溶液吸入另一注射器中，在骨缺损部位同时注入并混匀，2.0-3.0 min形成凝胶，即为纤维蛋白和脱落乳牙牙髓干细胞的移植复合物。

1.4.4 动物分组设计及牙周骨缺损模型的制备^[18] SD 大鼠72只，随机分为3组：PBS组、纤维蛋白组、乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组，每组24只。大鼠腹腔注射10%水合氯醛(4 mL/kg)进行麻醉，无菌条件下脱毛备皮，切开一侧牙周骨下缘皮肤，分离筋膜及肌肉直达磨牙区牙槽骨骨面，用低速球钻在牙周骨前1 mm和牙槽骨嵴后1 mm切一个2 cm长度的外切口制备牙周缺损创面(长5 mm×宽4 mm×深1 mm)，用生理盐水持续低速冲洗牙缺损周围。造模后即刻，将40 μL PBS、40 μL纤维蛋白(15 μL凝血酶溶液+15 μL纤维蛋白原溶液+10 μL PBS)、40 μL脱落乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物(15 μL凝血酶溶液+15 μL纤维蛋白原溶液+10 μL人体脱落乳牙牙髓干细胞)注入牙槽骨缺损区域，待3 min后胶原凝固成胶冻状，复位咬肌，分层缝合肌肉和皮肤。术后每日碘伏消毒直至皮肤切口愈合，肌注1.6×10⁵ U青霉素钠3 d，防止感染发生。术后正常饮食。

1.4.5 标本采集及组织学分析 在术后1，2，4，6周，每个时间点每组取6只大鼠。所有大鼠用10%水合氯醛(4 mL/kg)麻醉，用150 mL生理盐水和300 mL 40 g/L多聚甲醛固定灌注，切除右牙周骨并用40 g/L多聚甲醛固定24 h，加入10%乙二胺四乙酸进行脱钙，在室温下放置4周，脱钙液每周替换2次。骨组织脱钙完成后，用梯度乙醇脱水，石蜡包埋2 h，切成3 μm厚切片，放入62 ℃烤箱，20 min后进行苏木精-伊红染色或2 h后进行免疫组化染色。

苏木精-伊红染色分析大鼠牙周缺损区域组织形态，倒置显微镜下拍照，用Pro Plus 6软件分析图像，计算新骨形成百分比。新骨形成百分比(%)=新生骨面积/总缺损面积×100%。

免疫组化染色分析乳牙牙髓干细胞对骨再生的作用，石蜡切片用二甲苯脱蜡和梯度乙醇脱水，用含有PBS的体积分数为3%H₂O₂浸洗10 min去除内源性过氧化物酶，在含有1%牛血清白蛋白的PBS中孵育30 min阻止非特异性染色，滴加一抗为Alp(1∶1 000)、Runx2(1∶1 000)、Ocn (1∶500)，在室温下孵育2 h。对照组用不加一抗的正常兔血清孵育。滴加猪抗兔辣根过氧化物酶标记的二抗(1∶100)，在室温下孵育15 min，滴加DAB显色，自来水冲洗5 min，苏木精复染30 s。倒置显微镜进行拍照，用Image Pro Plus 6软件测量Alp、Runx2、Ocn阳性表达的积分吸光度。

1.5 主要观察指标 ①脱落乳牙牙髓干细胞形态和成骨诱导活性；②苏木精-伊红染色分析新生骨小梁占骨缺损总面积的比值；③免疫组化染色分析各组成骨标记物Runx2、Alp、Ocn的表达量。

1.6 统计学分析 所有数据采用SPSS 24.0软件进行分析，数据以x(_)±s表示。独立样本t 检验统计显著性，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

为了研究乳牙牙髓干细胞在牙周组织再生中的应用，实验将乳牙牙髓干细胞联合纤维蛋白用于体内移植研究。乳牙牙髓干细胞作为组织工程的种子细胞有诸多优点。第一，每个孩子在其成长发育过程中必将经历乳恒牙交替阶段，其乳牙自然脱落，这也就使得乳牙牙髓干细胞的获得既安全又广泛，容易收集且没有伦理学障碍^[7]；第二，乳牙牙髓干细胞具有离成熟细胞近、可塑性强、高度增殖能力和较强的多向分化能力，其中包括成骨分化能力^[19]；第三，从组织发育角度上来说，牙髓干细胞与牙周骨都来自于神经嵴细胞，因此乳牙牙髓干细胞可以作为颌面骨组织修复的种子细胞；第四，乳牙牙髓干细胞增殖能力极强，可在短时间内增殖到移植需要的细胞数量^[20]；第五，以往研究表明乳牙牙髓干细胞具有一定的免疫抑制能力，将乳牙牙髓干细胞移植到牙周骨缺损部位能够促进骨再生但不会产生免疫反应^[21-22]。该研究在体外诱导乳牙牙髓干细胞进行成骨分化，2周后有明显的钙化结节产生，茜素红S染色为阳性，骨形成相关基因Alp和Runx2的表达在成骨诱导后也有显著提高。这些结果表明乳牙牙髓干细胞可以作为骨组织修复的种子细胞。

理想的骨组织修复支架材料既可以固定乳牙牙髓干细胞在缺损部位，又能促进乳牙牙髓干细胞的成骨分化。纤维蛋白是由纤维蛋白原与凝血酶混合后形成的胶冻状凝块，与天然的凝血反应类似^[23-24]。以往研究表明，纤维蛋白能够作为成骨细胞的载体且有促进骨生成的能力^[25-26]。该研究利用纤维蛋白作为乳牙牙髓干细胞的细胞载体构建乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物，移植到大鼠牙周骨缺损模型中，观察其促进骨修复的作用。

成骨细胞是人体骨组织的重要组成成分，也是参与骨形成的主要功能细胞，在骨的生长发育及骨量维持方面起重要作用。成骨细胞的生长发育分为3个阶段：增殖与基质形成，成熟和矿化。在这3个阶段中成骨相关基因在各自时空中调控表达。Alp作为成骨分化的重要标记基因，在成骨分化的早期阶段由干细胞或成骨前体细胞表达^[27-30]。Runx2是成骨分化特异的转录因子，能够在成骨分化早期表达，进而调控其他成骨相关基因的表达^[31-33]。免疫组化表明乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组在1周时Alp和Runx2的表达显著高于纤维蛋白组和PBS组，这表明乳牙牙髓干细胞在早期能够促进骨分化和骨形成。Ocn是最丰富的非胶原骨基质蛋白，通常作为骨形成晚期的特异标记物^[34-37]。在移植后4周和6周，乳牙牙髓干细胞-纤维蛋白复合物组中Ocn的表达显著高于纤维蛋白组和PBS组，这表明乳牙牙髓干细胞能够在骨形成晚期促进缺损部位的骨发育。

总之，移植的乳牙牙髓干细胞及纤维蛋白能够明显促进大鼠牙周骨缺损的修复和再生。乳牙牙髓干细胞可以作为牙周骨缺损修复的种子细胞，具有广阔的研究价值和临床应用前景。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

人体脱落乳牙牙髓干细胞复合纤维蛋白修复大鼠牙周骨缺损

Stem cells from human exfoliated teeth combined with fibrin facilitate bone regeneration in a rat periodontal bone defect model

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