脂联素基因修饰脂肪干细胞移植治疗大鼠肾病综合征

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1588

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：
肾病综合征：是人类最常见的肾脏疾病之一，以大量蛋白尿、低蛋白血症、高血脂症为主要特征，常见原因可由原发性肾小球病(如原发性肾小球炎、肾小球局灶性硬化症等)、继发性肾炎(如狼疮性肾病、糖尿病性肾病等)以及继发感染(如细菌、病毒等)、循环系统疾病、药物中毒等引起。目前该病的治疗仍以激素为主，中药为辅。
基因转染：是将具有生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。核酸包括DNA (质粒和线性双链DNA)，反义寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究(基因表达调控、基因功能、信号转导和药物筛选)和基因治疗研究。

摘要
背景：脂联素基因表达在肾病综合征的发病过程中有着重要的作用，移植脂肪干细胞可以对肾病综合征大鼠起到一定的治疗效果。
目的：探讨脂联素基因转染脂肪干细胞移植对肾病综合征大鼠肾功能及凝血功能的改善作用。
方法：①在体外复苏培养脂肪干细胞并制备其细胞悬液，采用CM-Dil进行标记，取第3代脂肪干细胞进行脂联素基因电转染，Western blot检测转染第3天和第28天细胞中脂联素蛋白的相对表达水平；②从80只SD大鼠(北京维通利华动物实验技术有限公司提供)中随机取20只不予任何处理作为正常对照组，其余60只SD大鼠静脉内注射阿霉素建立肾病综合征大鼠模型，随机分为3组：模型组、脂肪干细胞组以及脂联素修饰脂肪干细胞组，正常对照组和模型组大鼠经尾静脉注射20 μL PBS，脂肪干细胞组、脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠经尾静脉注射20 μL转染空载质粒的脂肪干细胞悬液或脂联素修饰的脂肪干细胞悬液，1次/d，连续7 d；③移植4周后，全自动生化分析仪检测血清生化指标和凝血指标，苏木精-伊红染色观察肾组织病理变化，RT-PCR、Western blot检测肾组织中乙酰肝素酶及脂联素的表达。
结果与结论：①Western blot检测显示脂肪干细胞中脂联素高表达可持续28 d；②脂联素修饰脂肪干细胞组的病理改善明显优于脂肪干细胞组，脂肪干细胞组较模型组稍有改善；③脂肪干细胞组及脂联素修饰脂肪干细胞组的24 h尿蛋白定量及血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平均明显低于模型组(P < 0.05)，而血清总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平则明显高于模型组(P < 0.05)。脂联素修饰脂肪干细胞组各项生理生化指标均优于脂肪干细胞组，差异有显著性意义(P < 0.05)。脂肪干细胞组、脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠的血液高凝状态较模型组明显缓解，脂联素修饰脂肪干细胞组缓解更明显，各组间差异有显著性意义(P < 0.05)；④与模型组相比，脂肪干细胞组、脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠肾组织中乙酰肝素酶的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P < 0.05)，而脂联素表达水平明显升高(P < 0.05)。脂联素修饰脂肪干细胞组乙酰肝素酶和脂联素mRNA和蛋白表达水平均优于脂肪干细胞组(P < 0.05)；⑤结果表明，脂联素基因修饰的脂肪干细胞移植可以显著改善肾病综合征大鼠的肾功能、血液高凝状态及高脂血症，该作用可能与乙酰肝素酶和脂联素的表达水平有关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-4658-5812(田萌)

关键词: 肾病综合征, 脂联素, 基因修饰, 脂肪干细胞, 细胞移植, 肾功能, 凝血, 乙酰肝素酶

Abstract:

BACKGROUND: The expression of adiponectin gene plays an important role in the pathogenesis of nephrotic syndrome. Transplantation of adipose stem cells can has a certain therapeutic effect in rats with nephrotic syndrome.
OBJECTIVE: To investigate the effect of adiponectin gene-transfected adipose stem cell transplantation on renal function and coagulation function in rats with nephrotic syndrome.
METHODS: (1) Adipose stem cells were cultured in vitro and the cell suspension was prepared. CM-Dil was used as a marker. The third generation of adipose stem cells was used for electrotransfection using adiponectin gene. Western blot was used to detect the relative expression level of adiponectin in the cells at 3 and 28 days of transfection. (2) The random 20 of 80 Sprague-Dawley rats (provided by Beijing Vitone Lihua Animal Experimental Technology Co., Ltd., China) were taken as normal control group without any treatment, and the remaining 60 rats were intravenously injected with doxorubicin to establish nephrotic syndrome models. These rat models were randomized into three groups: model group, adipose stem cell group and adiponectin-transfected adipose stem cell group. Normal control group and model group rats were injected 20 μL of PBS via the tail vein, and rats in the adipose stem cell group and adiponectin-transfected adipose stem cell group were intravenously injected with 20 μL of adipose stem cell suspension and adiponectin-transfected adipose stem cell suspension, respectively, once a day, for 7 continuous days. (3) At 4 weeks after transplantation, a full-automatic biochemical analyzer was used to detect serum biochemical indicators and coagulation indicators, hematoxylin-eosin staining used to observe renal histopathological changes, RT-PCR and Western blue used to detect the expression of heparanase and adiponectin in the kidney tissue.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The high expression of adiponectin in adipose stem cells continued for 28 days. (2) The pathological improvement of adiponectin-transfected adipose stem cell group was superior to that of the adipose stem cell group, and the pathological manifestation in the adipose stem cell group was also slightly improved compared to the model group. (3) Serum levels of total cholesterol, triglyceride, low-density lipoprotein, creatinine, and 24-hour urea nitrogen level were significantly lower in the adipose stem cell group and adiponectin-transfected adipose stem cell group than in the model group (P < 0.05), while the serum levels of total protein, albumin, and high-density lipoprotein were significantly higher than the model group (P < 0.05). The physiological and biochemical indicators of adiponectin-transfected adipose stem cell group were superior to those of adipose stem cell group, and the difference was significant (P < 0.05). The hypercoagulant state of blood in the adipose stem cell group and adiponectin-transfected adipose stem cell group was significantly reduced compared to the model group, and this hypercoagulant state in adiponectin-transfected adipose stem cell group was significantly relieved (P < 0.05). (4) Compared with the model group, the expression levels of heparanase mRNA and protein in the kidney tissue of adipose stem cell group and adiponectin-transfected adipose stem cell group were significantly reduced (P < 0.05), and the expression level of adiponectin increased significantly (P < 0.05). The mRNA and protein expressions of heparanase and adiponectin in the adiponectin-transfected adipose stem cell group were on average superior to those in the adipose stem cell group (P < 0.05). To conclude, adiponectin-transfected adipose stem cell transplantation could significantly improve renal function, blood hypercoagulability and hyperlipidemia in rats with nephrotic syndrome. This effect may be related to the expression levels of heparanase and adiponectin.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Nephrosis, Adiponectin, Adipose Tissue, Stem Cells, Tissue Engineering

中图分类号:

田萌，韩鸿玲. 脂联素基因修饰脂肪干细胞移植治疗大鼠肾病综合征[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(5): 723-728.

Tian Meng, Han Hongling. Utilization of adiponectin-modified adipose stem cell transplantation in the rat with nephrotic syndrome[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(5): 723-728.

图/表（结果） 3

2.1 脂肪干细胞及CM-Dil标记效果 在细胞复苏6 h后即可见到有少量的脂肪干细胞贴壁，接种24 h后可见脂肪干细胞呈现出多角形或者长梭形的形态，镜下可见明显的团簇状，见图1A。CM-Dil标记的脂肪干细胞在荧光显微镜下呈现红色荧光，见图1B。

2.2 Western blot检测转染脂肪干细胞中脂联素蛋白的表达 见表1和图2。在转染后的第3天和第28天，空白组与对照组脂肪干细胞中脂联素的蛋白相对表达水平差异无显著性意义；与空白组和对照组相比，基因转染组脂肪干细胞中脂联素的蛋白相对表达水平显著提高，差异有显著性意义。

2.3 各组大鼠血清生化指标、凝血指标和24 h尿蛋白含量变化 见表2。模型组大鼠的24 h尿蛋白定量及血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平与正常组比较均明显升高(P < 0.05)，血清总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平则明显降低(P < 0.01)。脂肪干细胞组及脂联素修饰脂肪干细胞组的24 h尿蛋白定量及血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平均明显低于模型组(P < 0.05)，而血清总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平则明显高于模型组(P < 0.05)。脂联素修饰脂肪干细胞组各项生理生化指标均优于脂肪干细胞组，差异有显著性意义(P < 0.05)。脂肪干细胞组、脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠的血液高凝状态较模型组明显缓解，脂联素修饰脂肪干细胞组缓解更明显，各组间差异有显著性意义(P < 0.05)。

2.4 各组大鼠肾组织形态学变化 见图3。正常对照组有明显清晰的正常肾小管结构，而模型组肾小管结构破坏较为严重；脂肪干细胞组可见少量的炎性细胞浸润但肾小管结构较为正常；脂联素修饰脂肪干细胞组相对于脂肪干细胞组炎性细胞浸润明显减轻，肾小管结构较为正常。

2.5 荧光显微镜观察CM-Dil标记的脂肪干细胞的存活和分布情况 见图4。脂肪干细胞组[(46.58±4.69)个/高倍视野]和脂联素修饰脂肪干细胞组[(98.52±9.42)个/高倍视野]肾脏区域中可见较多的CM-Dil标记阳性细胞，脂联素修饰脂肪干细胞组肾组织中阳性标记细胞数量明显多于脂肪干细胞组，正常对照组和模型组未见CM-Dil标记阳性细胞存在。

2.6 各组大鼠肾组织乙酰肝素酶及脂联素mRNA和蛋白的相对表达水平 见表3和图5。模型组乙酰肝素酶mRNA和蛋白表达较正常对照组明显增加(P < 0.05)，脂肪干细胞组和脂联素修饰脂肪干细胞组乙酰肝素酶mRNA和蛋白表达较模型组减少(P < 0.05)；脂联素修饰脂肪干细胞组乙酰肝素酶mRNA和蛋白相对表达量较脂肪干细胞组进一步减少(P < 0.05)。

模型组脂联素mRNA和蛋白表达较正常对照组明显减少(P < 0.05)，脂肪干细胞组和脂联素修饰脂肪干细胞组脂联素mRNA和蛋白表达较模型组增加(P < 0.05)；脂联素修饰脂肪干细胞组脂联素mRNA和蛋白相对表达量较脂肪干细胞组进一步增加(P < 0.05)。

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引言

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2017年5月至2018年1月在天津医科大学总医院实验动物中心完成。

1.3 材料

1.3.1 实验细胞 冻存鼠脂肪干细胞购买自中国医学科学院。

1.3.2 实验试剂 胰蛋白酶(美国Sigma公司)；DMEM培养基、胎牛血清和PBS(Hyclone公司)；Trizol试剂盒(Invitrogen公司)；细胞培养箱(Heraeus Sepatech 公司)。

1.3.3 实验动物 成年SD大鼠80只，雌雄各半，体质量200-250 g，由北京维通利华动物实验技术有限公司提供，生产许可证号：SCXK(京)2012-0001，实验动物使用许可证号：SYXK(津)2014-0002。大鼠均饲养于25 ℃，湿度60%-70%的SPF环境下，自由饮水和采食。

1.4 实验方法

1.4.1 体外复苏培养脂肪干细胞及CM-Dil标记 将液氮冻存的脂肪干细胞，放于37 ℃恒温水浴箱30 s快速复苏。待到冻存的细胞悬液完全融化之后经过3次稀释、离心、弃上清、洗涤细胞等步骤，然后用完全培养液重悬细胞并将其浓度调整为1×10⁹ L^-1，在细胞培养箱中培养7 d，再次进行离心、弃上清、洗涤等步骤，将细胞浓度调整为1×10⁹ L^-1，对其进行CM-Dil荧光标记：向细胞悬液中加入5 μL CM-Dil，在细胞培养箱中孵育25 min，重复此操作2次后显微镜下观察细胞形态和细胞标记情况。

1.4.2 脂联素基因转染脂肪干细胞 将处于生长旺盛状态的脂肪干细胞分为3组，分别为不进行任何转染的空白组、转染空载质粒的对照组、转染脂联素基因质粒的基因修饰组。将3组细胞经胰蛋白酶消化后，用HeBS液(140 mmol/L NaCl，5 mmol/L KCl，0.75 mmol/L Na₂HPO₄，6 mmol/L Glucose，25 mmol/L Hepes)重悬、计数，调整细胞浓度至5×10⁹ L^-1，每次取200 μL细胞悬液加入电击杯中，分别加入生理盐水、4 μg空载质粒或脂联素基因质粒进行电击转染，电击后在室温下放置2 min，然后分别将其加入到3份含2 mL完全培养液的6孔细胞培养板和96孔细胞培养板中，置于细胞培养箱培养。脂联素序列F：5'-CGC GGA TGC TGT TGC TGG GAG CTG TT-3'；R：5'-CCG GAG CTC TCA GTT GGT GTC ATG GTA GAG-3'。转染后3 d收获细胞，放入37 ℃、体积分数为5%CO₂饱和湿度培养箱中常规培养3 d进行下列实验。

1.4.3 Western blot检测脂肪干细胞中脂联素蛋白的表达 在转染后的第3天和第28天，采用Western blot检测脂肪干细胞中脂联素蛋白的表达水平。将细胞裂解并稀释至相同的蛋白浓度，100 ℃煮沸5 min使蛋白变性。每组取蛋白40 μg，10%SDS-PAGE凝胶电泳(70 V，30 min；100 V，90 min)；转膜(200 mA，3 h)至PVDF膜；5%脱脂牛奶室温封闭2 h(或4 ℃过夜)；一抗(1∶500)室温孵育2 h(或4 ℃过夜)；TPBS洗涤3次，PBS洗涤1次；加入HRP标记的二抗(1∶5 000)，PBS洗涤后用化学发光试剂显影，扫描图像并半定量分析，测定脂联素蛋白相对表达水平，以GAPDH为内参。

1.4.4 肾病综合征模型建立及细胞移植 从80只SD大鼠中随机选取20只大鼠不进行任何处理作为正常组，剩余的60只大鼠一次性尾静脉注射6.5 mg/kg阿霉素建立肾病综合征模型。将60只模型大鼠随机分为肾病综合征模型组、脂肪干细胞组、脂联素修饰脂肪干细胞组，每组20只。造模后1周，正常组和肾病综合征模型组大鼠经尾静脉注射20 μL PBS，1次/d，连续7 d；脂肪干细胞组大鼠经尾静脉注射20 μL CM-Dil标记的转染空载质粒的脂肪干细胞悬液(细胞浓度为2×10⁸ L^-1)，1次/d，连续7 d；脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠经尾静脉注射20 μL CM-Dil标记的脂联素修饰的脂肪干细胞悬液(细胞浓度为2×10⁸ L^-1)，1次/d，连续7 d。

1.4.5 全自动生化分析仪检测生化及凝血指标 细胞移植4周后，从大鼠尾静脉采血，利用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及凝血指标变化。

1.4.6 三氯乙酸法检测24 h尿蛋白含量 细胞移植4周后，将3组大鼠放置在清洁的代谢笼中，收集24 h尿液，利用三氯乙酸可使蛋白变性沉淀的特性，采用三氯乙酸法测定大鼠24 h尿蛋白含量。

1.4.7 苏木精-伊红染色观察肾组织病理形态变化 细胞移植4周后，每组随机取5只大鼠给予水合氯醛注射麻醉处死，取出双侧肾脏，用体积分数为10%甲醛溶液固定后制备肾组织切片，分别进行梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡包埋等步骤，用切片机切成5-8 μm厚的薄片。将薄片烫平，再贴到载玻片上，放入45 ℃恒温箱中烘干，梯度乙醇脱水，二甲苯脱蜡，树胶封固，进行苏木精-伊红染色，显微镜下观察各组大鼠肾脏组织形态变化。

1.4.8 荧光显微镜观察CM-Dil标记的脂肪干细胞的存活和分布 细胞移植4周后，每组选取5只大鼠，取出肾脏组织，制作冰冻切片并进行DAPI染色。显微镜下随机选取每张冰冻切片的3个视野进行拍照记录；假设每张照片的总亮度为1，每张照片选取一个光亮度点，利用ACDsee5.0软件确定其坐标值。在图像中随机选取8个视野，计数每个视野中CM-Dil标记的阳性细胞数。

1.4.9 RT-PCR、Western blot检测各组肾组织中乙酰肝素酶、脂联素mRNA和蛋白的相对表达水平 细胞移植4周后，每组选取5只大鼠，取出大鼠肾脏，采用RT-PCR法和Western blot法检测肾组织中乙酰肝素酶、脂联素的mRNA和蛋白相对表达水平。每个实验重复3次。

通过Oligo 7.36 Demo软件设计引物，乙酰肝素酶上游引物：5'-TTC GAT CCC AAG AAG GAA TCA TAC-3'，下游引物：5'-GTA GTG ATG CCA TGT AAC TGA ATC-3'，扩增片段585 bp；脂联素上游引物：5'-ATC TGA TTA CAC CAA AAG T-3'；下游引物：5'-TCA GTT GGT ATC ATG GTA G-3'，扩增片段长度767 bp；内参GAPDH上游引物：5'-ATC TGG CAC CAC ACC TTC TAC AAT GAG CTG CG-3'，下游引物：5'-CGT CAT ACT CCT GCT TGC TGA TCC ACA TCT GC-3'，扩增片段838 bp。PCR反应条件：93 ℃变性1 min，54 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，共32个循环，最后72 ℃延伸6 min。提取细胞RNA并反转录为cDNA，进行RT-PCR反应，以GAPDH基因作为内参，测定乙酰肝素酶和脂联素的mRNA相对表达水平。

根据BCA试剂盒说明书提取并测定肾脏组织蛋白浓度，每组取蛋白40 μg，10%SDS-PAGE凝胶电泳(70 V，30 min；100 V，90 min)；转膜(200 mA，3 h)至PVDF膜；5%脱脂牛奶室温封闭2 h(或4 ℃过夜)；一抗(1∶500)室温孵育2 h(或4 ℃过夜)；TPBS洗涤3次，PBS洗涤1次；加入HRP标记的二抗，PBS洗涤后进行蛋白免疫印迹反应，扫描图像并半定量分析，Western blot法测定各组肾脏组织中乙酰肝素酶和脂联素蛋白相对表达水平。

1.5 主要观察指标 ①脂肪干细胞形态及CM-Dil标记效果；②各组大鼠血清生化指标、凝血指标和24 h尿蛋白含量变化；③各组大鼠肾组织形态学变化；④CM-Dil标记的脂肪干细胞的存活和分布情况；⑤各组大鼠肾组织乙酰肝素酶及脂联素mRNA和蛋白的相对表达水平。

1.6 统计学分析 采用SPSS 18.0进行统计学分析，实验数据以x(_)±s表示，多组间均数采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-Q检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

肾病综合征会导致患者肾小球滤过和重吸收功能障碍，进而引起血液中蛋白质大量滤过进入尿液以及高血脂症等，此外还会引发严重的炎症反应^[16]。高大维等^[17]通过将羊膜间充质干细胞移植到肾病综合征模型大鼠体内显著缓解了大鼠体内的物质代谢障碍、炎症反应以及血液高凝状态。脂联素可以提高患者胰岛素的敏感性，调节机体内糖和脂肪的代谢平衡，缓解炎症反应和氧化应激等^[18-20]。在发生肾病综合征后，体内的脂联素水平显著升高，此系机体的自我保护机制激发从而引起患者肾脏病变缓解^[21-22]。

脂联素是近年来发现的由脂肪组织特异性分泌的激素，研究结果表明脂联素作为目前惟一发现的对人体有保护性作用的脂源性细胞因子，对于脂联素的研究近年已成为热点，它是一种具有广泛生物学效应的脂肪细胞因子。

已有文献报道，脂联素在妊娠期糖尿病患者的胎盘中表达下降，且这类患者胎盘的滋养细胞增殖明显^[23]，并且研究证实它与糖脂代谢有关^[24]，在抗炎、抗动脉粥样硬化和抗纤维化等过程起着重要作用。研究发现随着2型糖尿病患者疾病程度越来越严重，尤其是当出现糖尿病肾病时，脂联素与肾小球过滤水平均明显降低^[25]。2型糖尿病患者常常出现脂肪代谢异常，而脂联素是脂肪细胞分泌的重要因子^[26-27]，糖尿病肾病作为常见又严重的微血管并发症^[28]，脂联素如何影响肾脏功能，值得进一步深究。干细胞移植治疗范围广泛，有很大的应用前景，但是移植后细胞的具体作用机制及定向分化等有待进一步研究。该研究将脂联素基因转染到脂肪干细胞内，然后移植到肾病综合征模型大鼠体内，观察其对肾病综合征大鼠的治疗作用。

研究结果显示，脂联素基因修饰脂肪干细胞中持续高表达脂联素蛋白，据此可知基因转染成功且为脂肪干细胞移植提供依据和条件。在脂肪干细胞移植4周后，脂肪干细胞组和脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠肾脏中可见到较多的CM-Dil染色阳性细胞，由此可知脂肪干细胞移植成功且定植分布于肾脏损伤部位。血液生化指标结果显示，模型组大鼠的24 h尿蛋白定量及血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平与正常组比较均明显升高，血清总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平则明显降低，这是由于肾脏滤过和重吸收功能发生障碍后，引起血蛋白滤过进入尿液和脂肪代谢障碍。在移植脂肪干细胞之后，脂肪干细胞组及脂联素修饰脂肪干细胞组的生化指标得到了一定程度的缓解，且脂联素修饰脂肪干细胞组缓解作用更为显著。由此推测，脂联素基因转染的脂肪干细胞移植可以明显减少蛋白尿，调节机体营养物质代谢和免疫反应等。肾脏组织的病理学形态变化显示，脂联素基因修饰的脂肪干细胞移植可以显著改善肾脏形态学，缓解肾小管的病变和炎症反应。

肾病综合征的重要病变之一是肾小球屏障作用的缺失，而肾小球电荷屏障障碍是引发尿蛋白阳性的重要原因^[29]。硫酸肝素蛋白聚糖是肾小球基膜上的主要成分，该成分的分解会严重破坏肾小球基膜的完整和功能。乙酰肝素酶可以识别并且水解肾小球基膜的这一主要成分，引起电荷屏障的破坏^[30-31]。模型组大鼠肾脏组织中乙酰肝素酶的mRNA和蛋白表达水平显著升高，肾病综合征的发生已经引起了肾小球结构和功能的破坏。在移植脂联素基因修饰的脂肪干细胞之后，乙酰肝素酶的表达水平显著下降，由此可知其促进了肾小球基膜损伤的修复。脂联素修饰脂肪干细胞组中脂联素表达水平明显提高，提示脂联素修饰脂肪干细胞移植显著促进了机体蛋白和脂肪的代谢平衡，提高了机体的免疫力，缓解了炎症反应和肾脏的结构破坏。

综上所述，脂联素基因修饰的脂肪干细胞移植可以显著缓解肾病综合征大鼠的炎症反应和病理学变化，改善机体的蛋白和脂肪代谢。该作用可能与乙酰肝素酶和脂联素的表达水平有关，值得进一步探讨研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程