骨髓间充质干细胞移植联合龙鳖胶囊修复膝骨关节炎

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1541

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：
膝骨关节炎：是临床较常见的退行性关节疾病，随着年龄的增长其发病率增加，临床主要表现为活动障碍与关节疼痛。目前针对膝骨关节炎的治疗主要分为非手术治疗与手术治疗，非手术治疗包括药物治疗、理疗等，虽然这些方法能够暂时缓解膝骨关节炎的临床症状，或是在一定程度上阻滞病情的发展，但是受损的膝关节软骨难以获得完全修复；手术治疗主要包括马赛克整形、软骨下骨钻孔、软骨清理成形等，虽然具有一定的疗效，但是个体差异较大，不能从根本上解决软骨进行性损伤的问题。
Ⅱ型胶原：在胶原家族的众多成员中，Ⅱ型胶原主要分布于软骨、玻璃体内，许多软骨性疾病的发生发展都与Ⅱ型胶原的结构和功能异常密切相关。由软骨细胞分泌的Ⅱ型胶原，是细胞基质的重要组成成分，可以灵敏地反映软骨代谢情况，因此逐渐成为研究膝骨关节炎生物学标志物的重要指标。

摘要
背景：以往研究证实，龙鳖胶囊与骨髓间充质干细胞单独应用均对膝骨关节炎具有一定的治疗作用。
目的：观察龙鳖胶囊联合骨髓间充质干细胞移植修复膝骨关节炎的效果。
方法：将96只成年雄性SD大鼠随机分为4组，分别为造模组、药物组、干细胞组与药物+干细胞组，每组24只。4组均采用膝关节腔注射木瓜蛋白酶的方法复制骨关节炎模型，造模后第3天，干细胞组膝关节腔内注射0.1 mL骨髓间充质干细胞悬液，1次/周；药物组灌胃龙鳖胶囊水溶液0.937 5 g/kg，2次/周；药物+干细胞组膝关节腔内注射0.1 mL骨髓间充质干细胞，1次/周，同时灌胃龙鳖胶囊水溶液0.937 5 g/kg，2次/周，各组连续处理4周。造模前、造模后第3天及给药4周后，ELISA法检测血清白细胞介素1β与白细胞介素6水平；给药4周后，取大鼠右侧膝关节软骨标本，进行苏木精-伊红染色病理观察，同时RT-PCR、Western blot检测Ⅱ型胶原、Hur、XIAP基因及蛋白的表达。
结果与结论：①造模后第3天，各组白细胞介素1β、白细胞介素6水平均较造模前明显升高；给药4周后，造模组白细胞介素1β、白细胞介素6水平明显高于其他3组(P < 0.05)，药物组、干细胞组白细胞介素1β、白细胞介素6水平明显高于药物+干细胞组(P < 0.05)；②造模组关节软骨组织表面粗糙且破坏严重，裂隙较多，软骨细胞聚集分布且排列混乱；药物组、干细胞组均可见部分软骨修复，软骨组织表面较造模组平整，软骨细胞增多且分布较均匀，裂隙较造模组减少；药物+干细胞组关节软骨组织表面光滑平整，软骨细胞形态规则且排列均匀，无关节裂隙；③造模组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白和基因表达均低于其余3组(P < 0.05)；药物组、干细胞组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白和基因表达明显低于药物+干细胞组(P < 0.05)；④结果说明，龙鳖胶囊联合骨髓间充质干细胞移植修复膝骨关节炎的效果更优。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-5643-9683(陈鹏)

关键词: 膝骨关节炎, 骨髓间充质干细胞, 龙鳖胶囊, 白细胞介素1β, 白细胞介素6, Ⅱ型胶原, 干细胞移植

Abstract:

BACKGROUND: Previous studies have confirmed that Longbie capsule or bone marrow mesenchymal stem cells alone have a certain therapeutic effect on knee osteoarthritis.
OBJECTIVE: To observe whether Longbie capsule combined with bone marrow mesenchymal stem cell transplantation is better than the single use in the treatment of knee osteoarthritis.
METHODS: Ninety-six adult male Sprague-Dawley rats were randomly divided into four groups: model group, drug group, stem cell group and drug+stem cell group, with 24 rats in each group. Papain was injected into the knee joint cavity of each rat to duplicate the osteoarthritis model. On the 3^rd day after modeling, 0.1 mL of bone marrow mesenchymal stem cell suspension was injected into the knee joint cavity of the rats in the stem cell group, once a week; the water solution of Longbie capsule, 0.937 5 g/kg, was intragastrically injected into the rats in the drug group, twice a week; and the above-mentioned treatments were both performed in the drug+stem cell group. The treatment in each group lasted for 4 weeks. The levels of serum interleukin-1β and interleukin-6 were measured using ELISA before modeling, 3 days after modeling and 4 weeks after administration. Four weeks after administration, the cartilage samples were taken from the right knee joint of each rat for pathological observation with hematoxylin-eosin staining, and for detecting the expressions of collagen type II, Hur, XIAP protein and mRNA using RT-PCR and western blot, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: On the 3^rd day after modeling, the levels of interleukin-1β and interleukin-6 in each group were significantly higher than those before modeling. After 4 weeks of administration, the levels of interleukin-1β in the model group were significantly higher than those in the other three groups (P < 0.05); and the levels of interleukin-1β and interleukin-6 in the drug group and stem cell group were significantly higher than those in the drug+stem cell group (P < 0.05). (2) The surface of articular cartilage tissue in the model group was rough and severely damaged, there were many joint fissures, and the chondrocytes were aggregated and distributed in disorder. The damaged cartilage tissues were partially repaired in the drug group and stem cell group, with the smoother surface of cartilage tissue and fewer joint fissures than the model group, and there were also increased and evenly distributed chondrocytes in the former two groups. The surface of articular cartilage in the drug+stem cell group was smooth, and the chondrocytes were regular and uniformly arranged without joint fissures. (3) The expression of type II collagen, Hur, XIAP protein (or gene) in the model group was lower than that in the other three groups (P < 0.05), and the expression of type II collagen, Hur, and XIAP protein (or gene) in the drug group and stem cell group was lower than that in the drug+stem cell group (P < 0.05). These results indicate that Longbie capsule combined with bone marrow mesenchymal stem cell transplantation is superior to Longbie capsule or bone marrow mesenchymal stem cell transplantation used alone in the treatment of knee osteoarthritis.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Osteoarthritis, Knee, Bone Marrow, Mesenchymal Stem Cells, Interleukin-1beta, Interleukin-6, Collagen Type II, Tissue Engineering

中图分类号:

陈鹏，石小田，郭宇，邱勋永，王琰. 骨髓间充质干细胞移植联合龙鳖胶囊修复膝骨关节炎[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(5): 797-802.

Chen Peng, Shi Xiaotian, Guo Yu, Qiu Xunyong, Wang Yan. Longbie capsule combined with bone marrow mesenchymal stem cell transplantation for knee osteoarthritis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(5): 797-802.

图/表（结果） 5

2.1 骨髓间充质干细胞的培养与鉴定结果 细胞接种后24 h开始贴壁，呈圆形；48 h后，贴壁的细胞伸展为梭形、多角形，细胞排列不规则；7 d后，贴壁细胞逐渐增多，以圆形或梭形为主；第3代骨髓间充质干细胞主要为梭形，呈集落样生长，见图1A。成骨诱导21 d后，茜素红染色显示细胞外基质中可见红色钙化结节，见图1B；成脂诱导20 d后，油红O染色可见橘红色的脂滴，见图1C。

2.2 实验造模情况 96只SD大鼠均造模成功，造模后大鼠右侧膝关节活动受限，活动量有所减少，进食较差。造模前及造模后第3天，采用电子数显游标卡尺测定大鼠右侧膝关节直径，分别为(10.98±0.06) mm、(12.06±0.03) mm，可见造模后大鼠膝关节肿胀，并且造模前后膝关节直径比较差异有显著性意义(P < 0.05)。

2.3 细胞移植后大鼠存活情况 细胞移植后，干细胞组与药物+干细胞组大鼠全部存活。

2.4 细胞因子水平 造模前，4组间的白细胞介素1β、白细胞介素6水平比较差异均无显著性意义(P > 0.05)。造模后第3天，各组白细胞介素1β、白细胞介素6水平均较造模前明显升高，差异有显著性意义(P < 0.05)，各组之间比较差异无显著性意义(P > 0.05)。

给药4周后，各组白细胞介素1β水平依然明显高于造模前(P < 0.05)，造模组白细胞介素1β水平明显高于药物组、干细胞组及药物+干细胞组(P < 0.05)，药物组、干细胞组白细胞介素1β水平明显高于药物+干细胞组(P < 0.05)，并且干细胞组白细胞介素1β水平高于药物组(P < 0.05)，见表2。

给药4周后，造模组、药物组、干细胞组白细胞介素6水平依然明显高于造模前(P < 0.05)，但药物+干细胞组与造模前比较差异无显著性意义；造模组白细胞介素6水平明显高于药物组、干细胞组及药物+干细胞组(P < 0.05)，药物组、干细胞组白细胞介素6水平明显高于药物+干细胞组(P < 0.05)，干细胞组白细胞介素6水平稍高于药物组，但差异无显著性意义(P > 0.05)，见表3。

2.5 组织病理变化 给药4周后的膝关节软骨组织苏木精-伊红染色显示，造模组关节软骨组织表面粗糙且破坏严重，裂隙较多，软骨细胞聚集分布且排列混乱，可见纤维增生；药物组、干细胞组均可见部分软骨修复，软骨组织表面较造模组平整，软骨细胞增多且分布较均匀，裂隙较造模组减少，两组之间差异不明显；药物+干细胞组关节软骨组织表面光滑平整，软骨细胞形态规则且排列均匀，无关节裂隙，见图2。

给药4周后，各组Mankin评分见图3。结果显示，药物组、干细胞组、药物+干细胞组Mankin评分均明显低于造模组(P < 0.05)，并且药物+干细胞组Mankin评分明显低于药物组、干细胞组(P < 0.05)，药物组与干细胞组Mankin评分比较差异无显著性意义(P > 0.05)。

2.6 膝关节软骨组织相关蛋白表达 给药4周，造模组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白表达均低于其余3组，差异均有显著性意义(P < 0.05)；与药物组、干细胞组比较，药物+干细胞组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白表达明显升高，差异均有显著性意义(P < 0.05)；药物组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白表达与干细胞组比较差异均无显著性意义(P > 0.05)，见图4。

2.7 膝关节软骨组织相关基因表达 给药4周，造模组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP基因表达均低于其余3组，差异均有显著性意义(P < 0.05)；与药物组、干细胞组比较，药物+干细胞组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP基因表达明显升高，差异均有显著性意义(P < 0.05)；药物组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP基因表达与干细胞组比较差异均无显著性意义(P > 0.05)，见图5，与Western blot检测结果相一致。

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引言

膝骨关节炎是临床较常见的退行性关节疾病，随着年龄的增长其发病率增加，临床主要表现为活动障碍与关节疼痛，严重影响了患者生活质量。目前针对膝骨关节炎的治疗主要分为非手术治疗与手术治疗^[1-2]，非手术治疗包括药物治疗、理疗等，虽然这些方法能够暂时缓解膝骨关节炎的临床症状，或是在一定程度上阻滞病情的发展，但是受损的膝关节软骨难以获得完全修复；手术治疗主要包括马赛克整形、软骨下骨钻孔、软骨清理成形等，虽然具有一定的疗效，但是个体差异较大，不能从根本上解决软骨进行性损伤的问题。因此，人们一直致力于追求完全修复膝关节软骨的理想治疗方法。

近20多年来，骨髓间充质干细胞在膝骨关节炎治疗中展示了良好的前景。例如，张钟元等^[3]对53例膝骨关节炎患者进行关节镜清理联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗，治疗后2年随访资料证实，关节镜清理联合自体骨髓间充质细胞移植可有效促进关节软骨的修复，延缓膝骨关节炎病程进展。张春琪^[4]对10例早期膝骨性关节炎患者进行自体骨髓间充质干细胞治疗，治疗后3个月随访资料证实，膝关节腔内注射骨髓间充质干细胞能减轻疼痛、肿胀、僵硬等症状，有助于提高膝关节功能。

补肾活血中药在骨伤科治疗中发挥着重要作用^[5-7]，并且研究证实其可促进骨髓间充质干细胞的增殖与分化^[8-9]。龙鳖胶囊是补肾活血中药中的一种，近10多年来应用于临床治疗膝骨关节炎取得了较好的疗效。基于以上研究，作者假设龙鳖胶囊联合骨髓间充质干细胞移植修复膝骨关节炎可取得更好的效果。该研究通过建立膝骨关节炎模型，对比龙鳖胶囊、骨髓间充质干细胞移植及两者联合治疗膝骨关节炎的效果。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2016年12月至2017年6月在海南医学院完成。

1.3 材料

1.3.1 药物 龙鳖胶囊购自广东省中医院制剂中心，批号为粤药制字z20071030，其主要成分主要有巴戟天、仙茅、菟丝子、全蝎、蜈蚣、蕲蛇、土鳖虫、丹参、制川乌、北芪等。

1.3.2 实验试剂与仪器 木瓜蛋白酶(上海鼓臣生物技术有限公司)；低糖DMEM培养液(杭州吉诺生物医药技术有限公司)；胎牛血清(北京沃卡威生物技术有限公司)；ELISA检测试剂盒(上海邦奕生物科技有限公司)；成骨细胞诱导培养液、成脂细胞诱导培养液(无锡英纽瑞生物医药科技有限公司)；Ⅱ型胶原、Hur、XIAP抗体(北京义翘神州科技有限公司)；倒置显微镜(XDS-800C，上海蔡康光学仪器有限公司)；电泳仪和凝胶成像仪(赛默飞世尔科技有限公司)；Potent ECL Kit试剂盒(杭州联科生物技术股份有限公司)；RT-PCR试剂盒(北京奥维亚生物技术有限公司)。

1.3.3 实验动物 成年雄性SD大鼠104只，体质量(230±19) g，SPF级，给予普通饲料饲养，其中96只用于制作骨关节炎模型，8只用于分离培养骨髓间充质干细胞，均由海南医学院实验动物中心提供。实验中对动物的处置严格遵循动物伦理学标准进行。

1.4 实验方法

1.4.1 分离培养及鉴定骨髓间充质干细胞 取8只SD大鼠，采用10%水合氯醛(3.5 mL/g)腹腔注射麻醉，浸泡于体积分数75%乙醇中5 min；无菌条件下取双侧股骨及胫骨，以无菌PBS反复冲洗干净；剪开干骺端，采用含体积分数10%胎牛血清和1%双抗的低糖DMEM培养液冲洗骨髓腔，制备细胞悬液，1 000 r/min离心5 min，弃上清，以1×10⁹ L^-1的细胞浓度接种于培养瓶内，置于体积分数5%CO₂、37 ℃、95%饱和湿度的孵育箱中孵育。倒置显微镜下观察细胞生长情况，当细胞铺满瓶底80%时，0.25%胰酶消化，1∶3传代。取第3代细胞进行动物实验。

取第3代骨髓间充质干细胞，进行成骨与成脂诱导分化^[10-11]，鉴定干细胞特征。

1.4.2 实验动物分组 依据随机数字表法将96只SD大鼠分为4组，分别为造模组、药物组、干细胞组与药物+干细胞组，每组24只。

1.4.3 造模方法 采用膝关节腔注射木瓜蛋白酶的方法复制骨关节炎模型^[9]。取4组大鼠，采用10%水合氯醛(3.5 mL/g)腹腔注射麻醉，碘伏消毒右侧膝关节3次，以1 mL注射器行膝关节穿刺，将0.2 mL木瓜蛋白酶生理盐水溶液注入每肢膝关节腔内，共注射3次，注射时间为第1，4，7天。造模前及造模后第3天，采用电子数显游标卡尺测定大鼠右侧膝关节直径，判定造模是否成功。

1.4.4 实验分组处理 判定造模成功后，干细胞组膝关节腔内注射0.1 mL骨髓间充质干细胞，细胞浓度为5×10⁹ L^-1，1次/周；药物组灌胃龙鳖胶囊水溶液0.937 5 g/kg，2次/周；药物+干细胞组膝关节腔内注射0.1 mL骨髓间充质干细胞，细胞浓度为5×10⁹L^-1，1次/周，同时灌胃龙鳖胶囊水溶液0.937 5 g/kg，2次/周。各组连续处理4周。

1.5 主要观察指标

1.5.1 ELISA法检测细胞因子水平 造模前、造模后第3天及给药4周后，每个时间点每组随机取8只大鼠，麻醉状态下腹主动脉取血，室温放置2 h，1 000×g离心20 min，取上清，采用ELISA法检测白细胞介素1β与白细胞介素6水平，严格按照试剂盒说明书操作。

1.5.2 苏木精-伊红染色观察组织病理变化 给药后4周，取大鼠右侧膝关节软骨标本，置入多聚甲醛中固定24 h，然后以10%EDTA脱钙4周，梯度丙酮脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片(切片厚度5 μm)，脱蜡入水处理，常规苏木精-伊红染色，二甲苯透明，中性树胶封固，显微镜下观察关节软骨组织形态。根据软骨组织结构、软骨细胞数量及潮线完整性进行Mankin评分，具体评分标准：①软骨组织结构：关节面光滑完整，0分；关节面粗糙，有小裂隙，1分；关节面裂隙深达移行层，2分；裂隙深达辐射层，3分；裂隙深达钙化层，4分；软骨层脱落，5分；②软骨细胞数量：细胞数量正常，0分；细胞数量弥散性增多，1分；出现大量簇集样细胞团，2分；细胞数量明显减少，3分；③潮线完整性：完整，0分；多重潮线，1分；软骨下血管侵入潮线，2分。总分越低修复效果越好。

1.5.3 Western blot检测相关蛋白表达 给药后4周，取大鼠右侧膝关节软骨标本，加入组织裂解液，冰上匀浆，4 ℃1 200 r/min离心15 min，提取总蛋白质约300 μg，进行蛋白质定量检测、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳、将蛋白质转移到PVDF膜、膜的封闭和抗体孵育，检测Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白的表达，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.5.4 RT-PCR检测相关基因表达 给药后4周，取大鼠右侧膝关节软骨标本约10 mg，采用Trizol法提取总RNA，严格按照Promega公司试剂盒说明书进行扩增：95 ℃预变性2 min，将PCR反应溶液置于Real-time PCR仪上进入40个PCR反应，95 ℃预热1 min后，95 ℃ 15 s变性，60 ℃ 1 min退火延伸。结果采用2^-ΔΔCt法计算。实验重复3次。各引物序列，见表1^[12]。

1.6 统计学分析 采用SPSS 21.0软件包建立数据库及统计分析，两组间比较采用t 检验，多组间比较采用方差分析及两两比较LSD-t 检验，检验水平α=0.05。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

细胞因子作为人体内的一种免疫调节因子，在人体各种功能中发挥了重要作用。在膝骨关节炎发病过程中，软骨细胞异常分泌一些炎症细胞因子，其可被释放至细胞外基质，破坏基质细胞内代谢平衡，抑制软骨细胞生成，加速软骨细胞的凋亡^[13-14]。研究发现，膝骨关节炎患者血清白细胞介素1β与白细胞介素6较健康人群明显升高^[15-16]。在膝骨关节炎发病与发展中，白细胞介素1β通过介导多种炎症反应与免疫调节，诱发软骨细胞凋亡与细胞外基质降解，在关节软骨破坏初始阶段起了很大作用^[17-18]；白细胞介素6可增加滑膜组织的炎症反应，加重局部组织炎性水肿与炎症细胞浸润，促进破骨样细胞形成，破坏软骨的细胞与降解^[19]。该研究结果显示，造模后第3天，造模组白细胞介素1β、白细胞介素6水平均较造模前明显升高(P < 0.05)，提示造模后大鼠体内白细胞介素1β、白细胞介素6水平异常升高；经过龙鳖胶囊、骨髓间充质干细胞移植治疗后，膝骨关节炎大鼠血清白细胞介素1β、白细胞介素6水平均有所下降，获得了与以往研究一致的结果^[12]，并且二者联合干预组降低效果最显著。目前已经证实骨髓间充质干细胞在体内具有分化产生软骨细胞的能力，其分化为软骨细胞后仍可以拥有相同的免疫特征，通过抑制炎症因子的产生，防止软骨的再次破坏，当细胞被植入到关节软骨缺损可以发挥修复作用。另外研究表明龙鳖胶囊含药血清能有效减少滑液来源间充质干细胞上清液中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的水平^[20]，还有其主要成分巴戟天、菟丝子等含药血清具有促进骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的作用。以上可以解释说明龙鳖胶囊与骨髓间充质干细胞移植可能通过降低炎症细胞因子白细胞介素1β、白细胞介素6水平发挥保护关节软骨的作用，其中二者联合应用的效果更佳。

膝骨关节炎的病理以软骨基质降解和软骨退变为特征，其中最关键的是软骨细胞功能的改变^[21]。该研究病理观察结果显示，造模组关节软骨组织表面粗糙且破坏严重，裂隙较多，软骨细胞聚集分布且排列混乱，可见纤维增生；药物组、干细胞组均可见部分软骨修复，软骨组织表面较造模组平整，软骨细胞增多且分布较均匀，裂隙较造模组减少，两组之间差异不明显；药物+干细胞组关节软骨组织表面光滑平整，软骨细胞形态规则且排列均匀，无关节裂隙。龙鳖胶囊与骨髓间充质干细胞共同作用改变关节软骨微环境诱导分化为软骨细胞，促进软骨细胞增生，从而达到关节软骨治疗与修复的目的，二者联合应用的效果优于单独应用。

关节软骨细胞凋亡是膝骨关节炎发病的重要原因与致病机制^[22-23]。XIAP作为凋亡抑制蛋白家族的成员，参与调控细胞凋亡，是调控细胞凋亡的重要环节^[24-25]。有研究证明，Hur可增加内源性XIAP的表达，提高细胞内XIAP的浓度与稳定性，抑制细胞凋亡^[26-27]。由软骨细胞分泌的Ⅱ型胶原，是细胞基质的重要组成成分，可以灵敏地反映软骨代谢情况，因此逐渐成为研究膝骨关节炎生物学标志物的重要指标^[28]。该研究从蛋白与基因水平分别检测了Ⅱ型胶原、Hur、XIAP表达情况，结果显示：药物组、干细胞组、药物+干细胞组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白或基因表达均明显高于造模组(P < 0.05)，并且药物+干细胞组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白或基因表达明显高于药物组、干细胞组(P < 0.05)。由此作者推断，龙鳖胶囊与骨髓间充质干细胞移植均可有效提高软骨细胞Ⅱ型胶原、Hur、XIAP表达水平，修复受损软骨细胞，抑制软骨细胞凋亡，同时二者联合应用的效果优于单独应用。

综上所述，龙鳖胶囊与骨髓间充质干细胞移植对膝骨关节炎均有一定的治疗作用，二者联合治疗的效果优于单独应用，其发挥修复作用的机制可能与降低炎症细胞因子白细胞介素1β与白细胞介素6水平、上调Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白或基因表达有关。由于实验周期较短，对于不同炎症细胞因子之间的相互作用，以及龙鳖胶囊、骨髓间充质干细胞移植与抗软骨细胞凋亡及软骨基质分泌的关系还有待后续进一步的论证与完善。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程