深Ⅱ度烫伤创面局部应用神经生长因子-胰岛素凝胶后微血管密度及增殖细胞核抗原的变化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0847

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (22): 3506-3512.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0847

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深Ⅱ度烫伤创面局部应用神经生长因子-胰岛素凝胶后微血管密度及增殖细胞核抗原的变化

徐海涛¹，王敏²，向喜娟³

¹重庆医科大学附属永川医院骨科，重庆市 402160；²山东省淄博市中心医院烧伤科，山东省淄博市 255000；³重庆市永川区中医院眼科，重庆市 402160

收稿日期:2018-02-20 出版日期:2018-08-08 发布日期:2018-08-08
通讯作者: 向喜娟，重庆市永川区中医院眼科，重庆市 402160
作者简介:徐海涛，男，1987年生，山东省潍坊市人，硕士，主治医师，主要从事骨科研究。
基金资助:
重庆医科大学附属永川医院资助项目(YJLCX201540)

Topical usage of nerve growth factor-insulin gel on deep II scald wound increases microvessel density and proliferating cell nuclear antigen expression

Xu Hai-tao¹, Wang Min², Xiang Xi-juan³

¹Department of Orthopedics, Yongchuan Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 402160, China; ²Department of Burn, Central Hospital of Zibo, Zibo 255000, Shandong Province, China; ³Department of Ophthalmology, Yongchuan District Hospital of Traditional Chinese Medicine, Chongqing 402160, China

Received:2018-02-20 Online:2018-08-08 Published:2018-08-08
Contact: Xiang Xi-juan, Department of Ophthalmology, Yongchuan District Hospital of Traditional Chinese Medicine, Chongqing 402160, China
About author:Xu Hai-tao, Master, Attending physician, Department of Orthopedics, Yongchuan Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 402160, China
Supported by:
the Funded Project of Yongchuan Hospital Affiliated to Chongqing Medical University, No. YJLCX201540

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

神经生长因子：当机体受损伤时，神经生长因子是由损伤部位周围组织或细胞分泌的一种促进创面愈合因子，其可增加肉芽厚度，促进再上皮化进程，增强创面组织抗张力强度，促使新血管再生，参与创面修复各个过程并发挥了重要作用。

神经生长因子-胰岛素凝胶修复创面损伤：①烫伤创面血管再生能力下降，神经生长因子及其受体表达受抑制，补充外源性神经生长因子可激活血管内皮生长因子A表达，提高烫伤创面血管再生能力，从而抑制血管内皮细胞凋亡；②胰岛素局部应用可作为趋化因子直接对炎性细胞作用，加速创面愈合启动，增加表皮皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子表达，促进成纤维细胞和表皮干细胞增殖、迁移，增加血管内皮生长因子mRNA的合成，促进血管新生和肉芽组织生长；③胰岛素和神经生长因子的协同促进作用：胰岛素局部外用可以显著提高修复细胞的增殖能力，促进神经生长因子分泌，明显增强血管内皮细胞的增殖能力。

背景：国内外研究表明，神经生长因子可明显促进烫伤创面愈合，但对于糖尿病烫伤创面局部神经生长因子联合用药的报道较少。

目的：研究糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面局部应用神经生长因子-胰岛素凝胶后微血管密度及增殖细胞核抗原的变化。

方法：将75只Wistar 大鼠随机分为5组，正常对照组在大鼠背部制作深Ⅱ度烫伤模型，烫伤创面敷卡波姆980凝胶；其余4组均制作糖尿病模型，3 d后在大鼠背部制作深Ⅱ度烫伤模型，模型对照组烫伤创面敷卡波姆980凝胶，神经生长因子组、胰岛素组、联合组(此3组血糖正常)分别在烫伤创面敷含神经生长因子的卡波姆980凝胶、含胰岛素的卡波姆980凝胶及含神经生长因子-胰岛素的卡波姆980凝胶，各组每天换药1次，连续21 d。烫伤后3，7，11，15，21 d，检测各组大鼠创面愈合率及创面微血管密度及增殖细胞核抗原变化。

结果与结论：①联合组烫伤不同时间点的创面愈合率、微血管密度及增殖细胞核抗原表达均高于其余4组 (P < 0.05)；②苏木精-伊红染色显示，烫伤后1 d，各组表现为不同程度的组织结构破坏、血管扩张、炎性细胞浸润；烫伤后3 d后可见少量新生毛细血管，联合组最为明显；烫伤后7-11 d，各组毛细血管及炎性细胞逐渐增加；烫伤后15 d，联合组再上皮化明显，新生胶原纤维排列整齐，神经生长因子组、胰岛素组比正常对照组、模型对照组新生血管数量增多，但胶原纤维排列紊乱；烫伤后21 d，联合组创面被上皮细胞覆盖，胶原纤维排列整齐；其他组均有不同程度的上皮化，正常对照组、模型对照组不及神经生长因子组、胰岛素组；③结果表明，糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面局部应用神经生长因子-胰岛素凝胶，可增加微血管密度及增殖细胞核抗原的表达，利于创面愈合。

ORCID: 0000-0002-5865-8839(向喜娟)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 神经生长因子, 胰岛素, 糖尿病, 烫伤创面, 生物材料, 敷料, 凝胶基质

Abstract:

BACKGROUND: Researches have shown that nerve growth factor can promote wound healing, but there are few reports on the topical application of nerve growth factor combined with medication on diabetic scald wound.

OBJECTIVE: To explore the changes of microvessel density and proliferating cell nuclear antigen expression after topical application of nerve growth factor-insulin gel on deep II scald wound in diabetic rats.

METHODS: Seventy-five Wistar rats were randomly divided into five groups. Deep II scald models were made on the back of rats in normal control group followed by topical application of Carbopol 980. Diabetic models and deep II scald models were both made in the remaining rats with an interval of 3 days. Then, the rats in the latter four groups were subjected to topical application of Carbopol 980 alone, or Carbopol 980 containing nerve growth factor, insulin and combination of nerve growth factor and insulin, respectively. The wound in each rat was redressed once a day, for 21 consecutive days. Wound healing rate, microvessel density and proliferating cell nuclear antigen expression in rats were detected at 3, 7, 11, 15, 21 days after scald.

RESULTS AND CONCLUSION: Wound healing rate, microvessel density and proliferating cell nuclear antigen expression were higher in the combination group than the other four groups at different time after scald (P < 0.05). Results from hematoxylin-eosin staining showed that different structure damages, angiectasis and inflammatory cell infiltration were observed in different groups at 1 day after scald. A small amount of new capillaries were visible in each group, especially in the combination group at 3 days after scald. The number of capillary vessels and inflammatory cells increased gradually at 7-11 days after scald. Marked re-epithelialization and regular arrangement of collagen fibers were observed in the combination group at 15 days after scald. Meanwhile, compared with the normal control group and model group, the number of new vessels was increased in the nerve growth factor and insulin groups, but collagen fibers arranged disorderly. The wound in the combination group was covered with epithelial cells and collagen fibers arranged orderly at 21 days after scald, while there are different levels of epithelization in the other four groups. Higher level of epithelization was found in the nerve growth factor and insulin groups than the normal control and model groups. To conclude, topical application of nerve growth factor-insulin gel on deep II scald wound can promote wound healing by increasing microvessel density and proliferating cell nuclear antigen expression.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

Key words: Gels, Biological Dressings, Insulin, Nerve Growth Factor, Diabetes Mellitus

中图分类号:

R318

徐海涛，王敏，向喜娟. 深Ⅱ度烫伤创面局部应用神经生长因子-胰岛素凝胶后微血管密度及增殖细胞核抗原的变化[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(22): 3506-3512.

Xu Hai-tao, Wang Min, Xiang Xi-juan. Topical usage of nerve growth factor-insulin gel on deep II scald wound increases microvessel density and proliferating cell nuclear antigen expression[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(22): 3506-3512.

图/表（结果） 12

2.1 实验动物数量分析 75只大鼠均进入结果分析。

2.2 神经生长因子-胰岛素凝胶性状神经生长因子-胰岛素凝胶呈清亮透明的果冻状(图1)，延展性、保湿性良好，方便使用、易于清洗。

2.3 神经生长因子-胰岛素凝胶体外药物释放实验

2.3.1 神经生长因子、胰岛素标准曲线及回归方程神经生长因子：y=0.004 4x+0.120 7，胰岛素：y=0.001x+0.002 6，标准曲线见图2。

2.3.2 神经生长因子-胰岛素凝胶体外药物释放检测神经生长因子及胰岛素在各时相点的释药时间均超过24 h，而且制备初期、15 d、30 d的累积释药百分率相差不大，表明制备的凝胶剂稳定性良好，具体见表1，2。

2.4 各组创面观察初始建立的烫伤模型创面呈灰白色，质地硬；伤后24 h，烫伤边缘与周围正常组织界限清楚，边界明显发红、水肿(图3)；经不同凝胶制剂局部外用后，各组烫伤创面随着时间逐渐缩小，联合组在同一观察时相点缩小更为明显。伤后3 d，各组创面均可见不同程度的红肿及炎性渗出，创面未见明显缩小。伤后7 d，除糖尿病对照组外，其余各组创面无明显红肿、渗出，均形成痂皮，而联合组创面干燥、边缘收缩明显，痂皮与基底紧密相连。伤后11 d，各组创面干燥、无红肿，神经生长因子、胰岛素组、联合组可见新生上皮组织移行，以联合组最为显著。伤后15 d，正常对照组、糖尿病对照组也见明显新生上皮移行，而联合组大部分创面痂皮脱落、已愈合。伤后21 d，联合组创面无明显瘢痕形成、完全愈合，而神经生长因子、胰岛素组大部分创面愈合，正常对照组、糖尿病对照组仅部分创面愈合。

2.5 各组创面愈合率经不同用药方式治疗后，各组创面随时间延长而逐渐缩小，联合组创面愈合率最高，明显高于胰岛素组、神经生长因子组。烫伤后7，11，15，21 d创面愈合率：联合组>神经生长因子组>胰岛素组>正常对照组>糖尿病对照组，联合组与其余各组比较差异均有显著性意义(P < 0.05)，见表3。

2.6 各组创面组织学观察糖尿病大鼠烫伤后创面组织苏木精-伊红染色后，观察创面符合深Ⅱ度烫伤，损伤深度可达真皮深层(图4)。烫伤后1 d，各组表现为不同程度的组织结构破坏、血管扩张、炎性细胞浸润；烫伤后3 d可见少量新生毛细血管，联合组最为明显。烫伤后7-11 d，各组毛细血管及炎性细胞逐渐增加。烫伤后15 d，联合组再上皮化明显，新生胶原纤维排列整齐，毛细血管管径大致相同；胰岛素组、神经生长因子组比正常对照组、糖尿病对照组的新生血管数量增多，但胶原纤维排列紊乱，毛细血管管径不一。烫伤后21 d，联合组创面被上皮细胞覆盖，胶原纤维排列整齐；其他各组均有不同程度的上皮化，但正常对照组、糖尿病对照组不及胰岛素组、神经生长因子组，见图5。

2.7 各组创面微血管密度检测各组创面CD34在烫伤后3 d均呈阳性表达，阳性细胞随着时间逐渐增多，其中联合组与其他各组分别于11，15 d时达高峰(图6)。联合组微血管密度在不同时相点最高，糖尿病对照组最低，联合组、糖尿病对照组不同时相点比较或与其他组比较均有显著差异(P < 0.05)，见表4。

2.8 各组创面增殖细胞核抗原检测糖尿病大鼠各组创面的增殖细胞核抗原在烫伤后3 d均呈阳性表达，阳性细胞随着时间逐渐增多，神经生长因子组、胰岛素组、联合组及正常对照组、糖尿病对照组分别于15，21 d达高峰(图7)。联合组增殖细胞核抗原在不同时相点最高，糖尿病对照组最低，联合组、糖尿病对照组不同时相点比较或与其他组比较均有差异(P < 0.05)，见表5。

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引言

材料方法

1.1 设计对比观察动物实验。

1.2 时间及地点实验于2015年1至10月在甘肃省中医学院动物实验中心(现甘肃中医药大学科研实验中心)完成。

1.3 材料

实验动物：2月龄SPF级雄性Wistar大鼠75只，由甘肃省中医学院动物实验中心提供，体质量(250±40) g，合格证编号：0001160。

实验主要试剂：卡波姆 980(天力源生物科技有限公司，青岛)；神经生长因子(生物制品研究所惠赠，兰州)；链脲佐菌素、胰岛素标准品(Sigma公司，美国)；低精蛋白锌胰岛素注射液(万邦生化医药股份有限公司，江苏)；CD34、增殖细胞核抗原免疫组织化学染色试剂盒、神经生长因子ELISA 试剂盒(博士德生物工程有限公司，武汉)。

1.4 实验方法

1.4.1 实验动物分组采用随机化分组表完全随机设计，将75只Wistar 雄性大鼠随机分为5组，15只/组，分别为正常对照组、糖尿病对照组、胰岛素组、神经生长因子组、联合组。

1.4.2 凝胶的制备取丙三醇9.4 g、蒸馏水30 mL，混合均匀后加入卡波姆0.6 g；待上述混合液充分溶胀后，再将胰岛素1 600 U、神经生长因子8 000 U加入，并滴入三乙醇胺，维持pH值在6.0-6.5之间；此溶液逐渐变为半固体状，观察神经生长因子-胰岛素凝胶性状。按同法同试剂比例制备胰岛素凝胶、神经生长因子凝胶及空白卡波姆凝胶。

1.4.3 神经生长因子、胰岛素标准曲线及回归方程的建立采用酶联免疫吸附法及紫外分光光度法^[4-5]，绘制标准曲线，建立回归方程。具体方法如下：配置15.625，31.25，62.5，125，250，500 ng/L的神经生长因子溶液，根据神经生长因子ELISA试剂盒说明，采用酶联免疫吸附法，检测不同质量浓度神经生长因子溶液在580 nm波长处的吸光度值(A)，绘制曲线、建立方程。将胰岛素12.5 mg与 0.01 mol/L盐酸混合，获得0.5 g/L标准液，量取3.0，2.5，2.0，1.5，1.0，0.5，0.2 mL标准液，分别与0.01 mol/L盐酸混合，制备出150，125，100，75，50，25，10 mg/L的标准液，空白液为0.01 mol/L盐酸，按照紫外分光光度法，检测不同质量浓度标准液在276 nm波长处的A值，绘制曲线、建立方程。

1.4.4 神经生长因子-胰岛素凝胶体外药物释放实验取神经生长因子-胰岛素凝胶，分别测定制备初期、15 d、30 d的药物释放量，并将其值带入对应方程式，计算药物累计释放率。将2.0 g神经生长因子-胰岛素凝胶、2 mL释放介质放入透析袋内，再将其置于盛有200 mL释放介质的容器内；然后将装有神经生长因子-胰岛素凝胶的容器放在磁力搅拌器上，设置转速、温度，每6 h检测容器内释放介质的药物释放量(检测完一次后，需将原释放介质倒掉，然后倒入等量新鲜释放介质)，直到无法检测出药物释放为止。

1.4.5 动物模型建立及分组干预根据参考文献[6]建立方法，取糖尿病对照组、胰岛素组、神经生长因子组、联合组大鼠，制备糖尿病模型。造模前1 d检测大鼠空腹血糖值均在3.0-5.0 mmol/L范围之内，4组大鼠禁食24 h后，一次性腹腔注射55 mg/kg链脲佐菌素，而正常对照组腹腔注射相同剂量的柠檬酸缓冲液。3 d后取大鼠尾静脉血液行血糖检测，造模成功标准为随机血糖≥16.7 mmol/L。造模未成功的大鼠3 d后需补充注射链脲佐菌素10-15 mg/kg。

糖尿病大鼠模型制备后3 d，制备深Ⅱ度烫伤模型。将5组大鼠背部脱毛，深度麻醉状态下，将背部置于85 ℃恒温水浴箱中保持8 s，造成深Ⅱ度烫伤，创面为体表面积的10%；糖尿病对照组烫伤创面敷空白卡波姆980凝胶，神经生长因子组、胰岛素组、联合组分别在烫伤创面敷神经生长因子凝胶、含胰岛素凝胶及神经生长因子-胰岛素凝胶，5组大鼠伤后每天定时换药1次，连续治疗21 d。每天 8：00检测大鼠空腹血糖，根据检测血糖值及时调整胰岛素用量，使神经生长因子组、胰岛素组、联合组分血糖值控制在正常范围之内。

1.5 主要观察指标

创面观察：烫伤模型建立后，每天观察并记录各组烫伤创面渗出、红肿、痂壳脱落、上皮形成等情况；并于烫伤当天及烫伤后3，7，11，15，21 d对烫伤创面拍照，按透明膜描记称量法测定烫伤创面未愈面积^[7]，计算创面愈合率。

组织学观察：对5组大鼠烫伤创面于烫伤后3，7，11，15，21 d取材，每组每个时间点3只，固定，常规石蜡切片、脱蜡、苏木精-伊红染色，观察炎细胞趋化及血管化、上皮化程度。

微血管密度检测：参照CD34免疫组织化学染色试剂盒说明书，光学显微镜下观察烫伤后各组免疫组化切片，观察血管内皮细胞、孤立的棕黄色血管内皮细胞或细胞簇，高倍镜下随机选取6个视野，按Pareek等^[8]的方法计数微血管密度，并取其平均值。

增殖细胞核抗原检测：参照增殖细胞核抗原试剂盒说明，各组切片在光学显微镜下观察，阳性表达为细胞内出现棕黄色或棕褐色颗粒。高倍镜下随机选取6个视野，计数阳性细胞数/100个，结果取其平均值。

1.6 统计学分析采用SPSS 17.0统计学软件进行分析，计量资料以x(_)±s表示，组间比较采用t 检验；以P < 0.05为差异有统计学意义。两两比较采用SNK检验；检验水准α= 0.05。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

创面修复是一个复杂的生物学过程，其涉及创面炎性反应、新生血管再生、肉芽组织增生及再上皮化，且参与调控的细胞因子有许多^[9-10]。而在炎性反应、细胞增殖、血管形成、组织重新塑性等过程中有许多影响创面愈合的因素，导致创面愈合困难，主要包括组织损伤、创面感染、血供不良，以及一些疾病如糖尿病、心血管疾病等。而在难愈创面的众多因素中，糖尿病合并烧烫伤是目前医学界的重点和难题^[11-14]，这主要与其日渐增高的发生率、治疗手段的局限性及治疗困难相关，中国的烧伤治疗水平虽然一直处于国际前列，但对于烧烫伤患者，尤其是合并糖尿病导致创面修复困难问题，目前临床上仍缺乏有效的治疗手段。

胰岛素是降低血糖的惟一激素，目前在临床上主要用于治疗糖尿病，但随着科研人员的深入研究发现，胰岛素除降低血糖外还对难愈创面的修复起着重要作用，也越来越被人们重视。研究表明，糖尿病大鼠血糖值与局部皮肤组织的含糖量呈正相关，而且从创面愈合时间快慢观察，局部含糖量低的创面明显快于含糖量高的创面^[15]，且局部外用胰岛素可降低局部组织血糖浓度^[16]。因此局部组织血糖控制对创面愈合至关重要。许多文献报道胰岛素可促进伤口愈合，能够降低烫伤患者感染率，提高治疗效果^[17-18]。大量实验证明，糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面难以愈合，主要表现在创面容易被细菌感染，局部坏死组织延迟脱落，局部肉芽组织形成不良及上皮化明显延迟等方面。此次实验糖尿病大鼠烫伤创面未发生感染，这主要与实验在SPF实验室进行有关，但糖尿病对照组创面肉芽组织增生缓慢且颜色暗红、坏死组织延迟脱落，伤后各时相点的上皮化速度及创面愈合时间明显低于其他各组，烫伤创面难以愈合的原因有以下几点：①糖尿病大鼠局部皮肤组织含糖量高，从而抑制了血管内皮细胞的增殖，减弱了细胞间接触，增加了细胞凋亡，同时降低了血管内皮生长因子的表达，导致新生血管形成延迟^[19]；②糖尿病大鼠晚期糖基化终末产物蓄积，致炎性反应延长，从而抑制了胶原组织的合成^[20]；③烫伤创面微循环障碍，致使局部组织血供不良，导致神经营养障碍，创面修复困难^[21-22]。

现代创伤修复概念认为，神经生长因子在创面修复过程中起着不可忽视的作用，它是当机体受损伤时由损伤部位周围组织或细胞分泌的一种促进创面愈合因子，可增加肉芽厚度，促进再上皮化进程，增强创面组织抗张力强度，促使新血管再生，参与创面的修复各个过程并发挥了重要作用。研究表明局部应用神经生长因子对难愈创面修复有明显促进作用，可趋化炎症细胞，促进创面血管新生^[23-24]。曾勇等^[25]用小剂量胰岛素对烫伤大鼠局部外用，观察创面愈合发现，在创面愈合速度上局部胰岛素治疗组明显高于对照组，而且前者能显著提高修复细胞的增殖能力，且局部外用更安全、有效。

前期实验也证实，胰岛素^[26]、神经生长因子单独或联合应用均可显著促进烫伤创面愈合^[23^，^27]，但将其直接应用于烫伤创面存留时间短，因为其为多肽本质原因易被蛋白酶分解，所以在治疗烫伤创面时需多次用药，耗时耗力。此次研究选取的卡波姆980凝胶缓释系统^[28]，对药物缓释时间达24 h以上，30 d内稳定性良好，并且具有良好的保湿性能及延展性能，造价低廉，方便使用。

创面愈合过程中有丰富的新生血管再生，由于大多数 CD34细胞是毛细血管内皮细胞的祖细胞^[29]，且CD34表达多呈阳性，故将抗CD34抗体用来标记毛细血管内皮细胞^[30]，并计算出微血管密度。增殖细胞核抗原可促进细胞增殖，并在细胞生长期大量表达，故将其作为评价细胞增殖状态的指标^[31-32]。动物实验观察创面显示烫伤后3 d，CD34、增殖细胞核抗原均呈阳性表达，且随着时间延长阳性细胞逐渐增多，但联合组大鼠创面修复在各时相点均领先于其他各组，表明含神经生长因子-胰岛素的凝胶局部外用对创面愈合有协同作用。

此次研究结果显示，联合组创面修复早、愈合快，在各观测时相点，联合组创面愈合率、微血管密度及增殖细胞核抗原检测结果明显高于其他组，表明神经生长因子和胰岛素联合应用对创面愈合有协同作用，且贯穿始终。此次实验利用烫伤创面组织中神经生长因子含量不足的条件，局部外用神经生长因子可促进血管再生和再上皮化，初步证实外用含一定浓度神经生长因子-胰岛素的凝胶，对创面微血管密度及增殖细胞核抗原的表达有明显促进作用。根据以上结果，可以认为糖尿病大鼠深Ⅱ读烫伤创面局部应用神经生长因子-胰岛素凝胶后微血管密度及增殖细胞核抗原的变化机制有以下3方面：①烫伤创面血管再生能力下降，神经生长因子及其受体表达受抑制，补充外源性神经生长因子可激活血管内皮生长因子A表达，提高烫伤创面血管再生能力，从而抑制血管内皮细胞凋亡^[33-34]；②胰岛素局部应用可作为趋化因子直接对炎性细胞作用，加速创面愈合启动，增加表皮皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子表达，促进成纤维细胞和表皮干细胞增殖、迁移，增加血管内皮生长因子mRNA的合成，促进血管新生和肉芽组织生长^[35-37]；③胰岛素和神经生长因子的协同促进作用：胰岛素局部外用可以显著提高修复细胞的增殖能力，促进神经生长因子分泌，明显增强血管内皮细胞的增殖能力^[38-39]。

综上所述，糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面局部应用神经生长因子-胰岛素凝胶可增加微血管密度及增殖细胞核抗原的表达，利于创面愈合，此次实验解决了药物持续性释放问题，但未能验证复合凝胶最佳浓度配比，仍有待进一步研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

深Ⅱ度烫伤创面局部应用神经生长因子-胰岛素凝胶后微血管密度及增殖细胞核抗原的变化

Topical usage of nerve growth factor-insulin gel on deep II scald wound increases microvessel density and proliferating cell nuclear antigen expression

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